JP2002500868A - 稚魚に不可欠な栄養素で生飼料を栄養強化する方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 稚魚に不可欠な栄養素で生飼料を栄養強化する方法 【解決手段】 基本的に高度な不飽和化脂肪酸、ビタミン、アミノ酸、カロチノイドおよび色素を用いて、魚用飼料および稚魚用生餌、特に、アルテミア・ナウプリおよびロティファーを栄養強化させる方法。生餌に、海洋性藻類の油の抽出物の廃棄流から得られる高度に不飽和化された脂肪酸の乾燥石鹸粉を摂取／吸収させる。生餌は、約２．０対１．０より大きいドコサヘキサエン酸対エイコサペンタエン酸のドコサヘキサエン酸獲得比で非常に栄養強化させることができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の分野】

本発明は、必須アミノ酸、ビタミンおよび高度に不飽和化された脂肪酸を含む
、稚魚に必須の栄養を有するロティファー（Ｒｏｔｉｆｅｒｓ）、アルテミア（
Ａｒｔｅｍｉａ）、コポポーダ（ｃｏｐｏｐｏｄｓ）および他の生餌飼料を含め
た、魚用飼料の栄養強化に関する。本発明は、さらに、魚を処理するのに使用さ
れる抗生物質または他の薬剤の生物封入に関する。

【０００２】

【発明の背景】

魚およびエビの養殖の迅速な拡大は、タイ科アメリカチヌ属の魚（ｓｅａ ｂ
ｒｅａｍ）、スズキ科の魚（ｓｅａ ｂａｓｓ）、ボラ科の魚（ｍｕｌｌｅｔ）
、オヒョウおよび米国大西洋岸のスズキ（ｓｔｒｉｐｅｄ ｂａｓｓ）のような
稚魚を育てる上での持続性のある困難によって緩慢にされてきた。魚は、発育の
稚魚段階の間じゅう生餌を必要とする。稚魚に受け入れられるために、餌は、適
切な寸法、形状で、そして口に合う必要がある。生餌は、さらに、許容しうる価
格および品質で入手可能であるべきであり、市販規模での養殖に馴染みやすく、
そして稚魚育成タンクの混入のような魚の孵化場に対する他の問題が存在しない
べきでもある。他の型の生餌も、飼料として使用されたが、稚魚用の魚の孵化場
の好ましい生餌としては、ロティファー、アルテミア・ナウプリおよびコポポー
ダが挙げられる。アルテミアについての問題は、アルテミアが孵化し、そして引
き続いて、栄養組成のアルテミアが卵を産む前に、栄養組成のアルテミアが、栄
養組成のアルテミアの卵によって決定されことである。さらに、市販で入手可能
なアルテミアの卵の品質は、需要が増大するため低下している。アルテミアにつ
ては、孵化直後およびナウプリが成長の機会を有する前に、稚魚にナウプリが与
えられる。

【０００３】 エネルギーおよびタンパク質の必要性に加えて、海洋性稚魚も、必須脂肪酸と
して高度に不飽和化された脂肪酸（ＨＵＦＡ）を必要とする。自然界では、海洋
性稚魚は、コペポダイテスおよび海洋性藻類からＨＵＦＡの必要物を得る。高度
に不飽和化された脂肪酸の群の中で、海洋性稚魚は、必須脂肪酸としてエイコサ
ペンタエン酸（ＥＰＡ）よりさらにドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）を必要とする
。ある種の魚も、必須脂肪酸としてアラキドン酸（ＡＲＡ）を必要としうる。Ｈ
ＵＰＡ用いたアルテミアの栄養強化は、微細粒子飼料、およびｎ−３ＨＵＦＡエ
ステルでのエマルジョンを用いた栄養強化技術を用いるか、またはｎ−３ＨＵＦ
Ａでの藻類種を用いることが報告されている。これらの微細粒子食餌およびエマ
ルジョンについての問題は、ＨＵＦＡで微細粒子を栄養強化させるのに使用され
る魚油の費用が高いことである。別の問題は、油滴が、種々の栄養素を油滴に付
与するのに容量が限定されていること、および必須アミノ酸のような水溶性栄養
素を担持するのに総体的に不適切でありうることである。

【０００４】 藻類を用いたアルテミア・ナウプリの栄養強化は、多くの問題を示す。１つの
問題は、その藻類が稚魚育成ダンクを汚すことに寄与する可能性がある。Ｃ．Ｍ
．Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ−Ｃｒｕｚら、１９９５年稚魚および甲殻類稚魚養殖シン
ポジウム、５１１−５１４頁を参照し、そして参照してここに組込まれる。そし
てそれにより、脂質エマルジョンでのロティファーの栄養強化は、稚魚育成タン
クの細菌叢に影響を及ぼしうる、ロティファーに関連した細菌の数が増大するよ
うになることが報告されている。

【０００５】 Ｊ．Ｏ．Ｅｕｊｅｍｏらは、１９９５年稚魚および甲殻類稚魚養殖シンポジウ
ム（Ｌａｒｖｉ ‘９５ Ｆｉｓｈ ａｎｄ Ｓｈｅｌｌｆｉｓｈ Ｌａｒｖｉ
ｃｕｌｔｕｒｅ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ）、１０９−１１０頁で、「ドコサヘキサ
エン酸（ＤＨＡ）は、生存、成長および着色の成功を含めた海洋性のヒレのある
魚の稚魚の生理学上の機能にとってエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）よりいっそ
う重要であるが、しかし、他の生飼料と対照に、ＤＨＡを有するアルテミアの栄
養強化は、栄養強化における後者の脂肪酸の固有の代謝のために困難である。他
のものと同様にこれらの問題は、ＤＨＡを用いて生飼料の栄養強化を阻止した。
」ことを報告している。

【０００６】

【発明の目的および概要】

本発明の目的は、ＨＵＦＡでアルテミアおよび他の生餌を栄養強化する方法を
提供し、ＤＨＡ対ＥＰＡの比を増大させ、そして栄養強化したアルテミアまたは
他の生餌を生産することである。

【０００７】 本発明の他の目的は、ロティファー、アルテミアおよび他の生餌を栄養強化す
るのにＨＵＦＡ石鹸粉を使用することである。

【０００８】 本発明のさらに別の目的は、必須アミノ酸、薬剤、ビタミンおよび他の栄養素
を封入するのにＨＵＦＡ石鹸粉を使用することである。

【０００９】 本発明のさらに別の目的は、稚魚用の微細粒子食餌に飼料添加物としてＨＵＦ
Ａ石鹸粉を使用することである。

【００１０】 本発明の別の目的は、廃棄流から回収されるＨＵＦＡを活用することである。

【００１１】 本発明のさらに別の目的は、稚魚に与えるための餌の中に薬剤、ビタミン、カ
ロチノイド、色素および必須アミノ酸を生物封入するためのベヒクルとしてＨＵ
ＦＡ含有石鹸粉を使用することである。

【００１２】 本発明によって達成された本発明のこれらのおよび他の目的は、以降に記述さ
れる。

【００１３】 要するに、我々は、アルテミアおよび他の生餌が、ＨＵＦＡで栄養強化される
こと、およびＤＨＡ対ＥＰＡの比は、ＨＵＦＡを含有する乾燥した石鹸粉で生餌
を給餌することによって増加されることを知見した。この手段で、我々は、ＨＵ
ＦＡで生餌を栄養強化することに関連した先行技術の問題を回避した。生餌が、
十分量の所望の脂肪酸を摂取または吸収した後、その後その餌を稚魚に給餌する
。

【００１４】 ＨＵＦＡ石鹸粉で栄養強化できる生餌は、アルテミア・ナウプリ、ロティファ
ーおよびコペポーダが挙げられる。栄養強化後、生餌は、一般に、約１：１より
大きなドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）対エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）の比を
示す。好ましくは、ＤＨＡ対ＥＰＡの比は、約１．５対１．０より大きく、そし
てさらにいっそう好ましくは、ＤＨＡ対ＥＰＡの比は、餌の栄養強化の後、約２
．０対１．０より大きい。

【００１５】 ＨＵＦＡを用いた生餌の栄養強化は、魚および藻類の油のアルカリ洗浄の間に
抽出された脂質から製造することができる高度に不飽和化された脂肪酸の石鹸粉
で生餌を給餌することによって容易に達成することができる。アルカリ洗浄は、
得られた油から遊離脂肪酸およびリン脂質を除去し、そして通常、廃棄材料とし
て廃棄される。水性アルカリ溶液として、高度に不飽和化された脂肪酸石鹸は、
海洋性藻類から得られるマーテック（Ｍａｒｔｅｋ）の多価不飽和脂肪酸抽出法
の副産物として、メリーランド州コロンビアのマーテック・バイオサイエンス（
Ｍａｒｔｅｋ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）から得ることもできる。これらの脂肪酸
は、マーテックによる藻類油のウインタレーションおよびアルカリ作業、または
粗魚油のウインタレーションおよびアルカリ洗浄の間じゅう抽出される。

【００１６】 その石鹸での正常な対イオンは、通常ナトリウムであるが、しかしカリウムお
よびカルシウムのような他の対イオンも、これらの対イオンの混合物と同様に使
用することができる。カルシウムは、カルシウム石鹸が、水に非常に不溶性であ
り、そして稚魚は骨の発育にカルシウムを必要とするので、好ましい対イオンで
ある。対イオンの選択は、対イオンの存在下で脂肪酸を吸収する生餌の能力と同
様に稚魚の必要性によっても決定されうる。

【００１７】 高度に不飽和化された脂肪酸石鹸粉は、約１対１、好ましくは約１．５対１．
０より大きいドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）対エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）
の比を示し、そして約２．０対１．０以上の比が最も好ましい。

【００１８】 その石鹸の脂肪酸組成物は、変化させることができるが、しかし、約８から約
１６％のＣ１４：０、約０．７５から約２．５０％のＣ１６：１ω７、約９から
約１３％のＣ１６：０、約７．５から約１０．５％のＣ１８：２ω６、約３０か
ら５５％のＣ１８：１ω９、約０．０１％から約２．５％のＣ１８：１ω７、約
２から約４．５％のＣ２０：４および約８．５から約２８％のＣ２２：６ω３を
含むのが好ましい。しかし、石鹸の組成物は、稚魚種の栄養上の必要性によって
変化させることができることを重要視すべきである。

【００１９】 脂肪酸石鹸の水性アルカリ溶液を乾燥させ、そして通常の噴霧乾燥工程によっ
て石鹸粉に変換させることができる。水和粒子の寸法は、変化させることができ
るが、約１０ミクロンより大きくなく、好ましくは約７．５ミクロン未満、そし
て最も好ましくは、約１ミクロンから約５ミクロンまでの範囲内の粒子寸法であ
る。あらゆる従来の対イオンを使用することができるが、ナトリウムおよびカリ
ウムが好ましく、そして最も好ましくは、カルシウムである。カルシウムは、石
鹸のカルシウム塩が、水になおいっそう不溶性であるので、そしてカルシウムが
骨の形成に必要とされるので好ましい。薬剤、ビタミン、カロチノイドおよび／
または色素は、通常、噴霧乾燥工程の前に水性石鹸溶液に添加されるが、しかし
、薬剤、ビタミン、アミノ酸、カロチノイドおよび／または色素は、乾燥後、石
鹸粉に添加させることもできた。組込むことができる薬剤としては、抗生物質、
抗菌剤、および他の適切な薬剤が挙げられる。ビタミンとしては、ビタミンＡ、
Ｂ_１２、Ｅ、Ｄおよびアスコルビン酸の脂肪酸誘導体が挙げられる。

【００２０】 メチオニン、システイン、および他の必須アミノ酸のようなアミノ酸は、噴霧
乾燥工程の前に脂肪酸に添加させることができる。カロチノイドおよび色素とし
ては、α−カロチン、β−カロチン、カンタキサンチン、アスタキサンチン、ア
スタキサンチン・モノまたはジエステル、ドサデキサンチン（ｄｏｓａｄｅｘａ
ｎｔｈｉｎ）、ヨードキサンチン、ゼアキサンチンおよびキサントフィルが挙げ
られる。好ましくは、カロチノイドは、遊離形態であり、そして脂肪酸でエステ
ル化させない。

【００２１】 石鹸粉に薬剤、ビタミン、カロチノイドおよび色素を添加すると、生餌が、稚
魚にこれらの剤を与える際に生物封入物として作用するようになる。特に、ロテ
ィファー、アルテミア・ナウプリおよびコペポーダのような生飼料は、稚魚にと
ってのこれらの飼料の嗜好性を増大させるのでこの役割に好ましい。乾燥石鹸粉
は、人工魚用飼料と混合させるか、または人工微細粒子状食餌の一部として稚魚
に直接給餌することができる。乾燥または半湿潤魚用飼料にアミノ酸を含む乾燥
石鹸粉を添加することは、アミノ酸が水溶解性であるのでアミノ酸で魚用飼料を
栄養強化する二、三の方法の内の１つである。この方法で、高度に不飽和化され
た脂肪酸および必須アミノ酸の両方は、他の水溶性化合物と同様に、栄養強化し
た魚用飼料を介して魚に与えることができる。

【００２２】

【好ましい実施形態の説明】

Ａ．ＨＵＦＡ−石鹸粉を製造する方法 マーテック・ディーエイチアスコ（Ｍａｒｔｅｋ ＤＨＡｓｃｏ）およびエイ
アールアスコ（ＡＲＡｓｃｏ）の油のアルカリ洗浄（石鹸）およびウインタレー
ションの固形廃棄物は、約７５％の水であることが分かり、表１に示されるとお
り以下の一般脂質組成を示した。

【００２３】 表 １

【表１】

【００２４】 ｐＨ４．０で、石鹸を冷アセトンで洗浄したときに、リン脂質および脂肪酸を
封入し、そして回収することができた。元の材料およびアセトン洗浄後に得られ
た材料の脂肪酸含量は、表２に示される。しかし、回収は定量的ではなく、そし
てその石鹸のみを栄養強化に使用した。

【００２５】 表 ２

【表２】

【００２６】 アルテミア・ナウプリの栄養強化を試験するために、ディーエイチアスコ油と
混合したアセトン洗浄石鹸のエマルジョン（８．４ｇディーエイチアスコ油と１
．６ｇ石鹸）を、メンハーデン（ニシン科の魚の一種）の油（ザパタ（Ｚａｐａ
ｔａ））のエマルジョン（０．７５ｇの石鹸および２．２５ｇのメンハーデン油
）と比較した。

【００２７】 これらのエマルジョンの脂肪酸含量は、表３に示される。

【００２８】 表 ３

【表３】

【００２９】 Ｂ．ＨＵＦＡ栄養強化した石鹸粉を用いて生餌を栄養強化する方法 アルテミアを、以下の方法によって栄養強化した。 １．２４時間、２６℃で、２６ｐｐｔ水性塩濃度を示す１リットル容器中でアル
テミアを孵化させる。 ２．未孵化の卵から新たに孵化したナウプリを分離し、そしてタンクにそのナウ
プリを入れる。 ３．次の１８から２４時間で、そのナウプリを三齢ナウプリ段階に進める。 ４．１０ｇの所望の脂質をブレンダーに入れ、２００から３００ｍｌの培養水を
加え、そして１分間その混合液を乳化させる。 ５．次の１２−２４時間、そのナウプリに、リットル溶液当たり０．１グラムの
エマルジョンの濃度でそのエマルジョンを吸収／摂取させる。 ６．栄養強化したナウプリを収集し、そして流水下で簡便に洗浄する。 ７．稚魚タンクに栄養強化したアルテミアを添加する。

【００３０】 なにか栄養強化が起こったかについて確かめるために３時間および６時間後に
、そのナウプリを試験した。表４では、乳化石鹸で処理した後のそのナウプリの
脂肪酸組成（脂質の重量含有率で）が要約される。観察されるとおり、ＤＨＡで
のナウプリの際立った栄養強化が起こる。

【００３１】 表 ４ 時間の関数としてのナウプリの脂肪酸組成^＊

【表４】

【００３２】 不運にも、表４に報告されるエマルジョンは、約６時間照射後に、アルテミア
に対して毒性があることも知見された。

【００３３】 驚くべきことに、乾燥石鹸は、ナウプリに給餌されるか、またはナウプリと同
じタンクに入れられるときに毒性がなかった。したがって、エマルジョンの毒性
効果を避けるために、粉末乾燥石鹸を、ナウプリの栄養強化のために使用した。
栄養強化の効果を比較するために、ＨＵＦＡ石鹸のエチルエステルを製造し、そ
して３％Ｔｗｅｅｎ−８０を添加し、続いて激しく曝気することによって乳化さ
せた。乾燥ＨＵＦＡ石鹸およびＨＵＦＡ石鹸のエチルエステルを、アルテミア・
ナウプリで１ｇ／リットルの濃度に別々に懸濁させ、そして２４時間かけて比較
した。その結果は、表５に示される。エチルエステルエマルジョンまたはＨＵＦ
Ａ石鹸中の両方でアルテミアは、栄養強化の２４時間かけてなんら際立った死亡
率がなかったことを示した。

【００３４】 表 ５

【表５】

【００３５】 表５に見られるとおり、乾燥石鹸を用いて２４時間栄養強化プログラムを受け
たナウプリは、エチルエステルエマルジョンに比較して、考慮すべき栄養強化し
たＤＨＡ濃度を生じた。さらに、石鹸は、２４時間の栄養強化期間をかけて、エ
チルエステルエマルジョンに比較した顕著に改善されたＤＨＡ／ＥＰＡ比の栄養
強化を示した。

【００３６】 その実験は、三回繰返された。図１−３で示される以下の結果が、乾燥脂肪酸
石鹸を用いて総脂質栄養強化について得られた。図１では、本発明のエチルエス
テルエマルジョンを与えたナウプリおよび対照群と比較して、本発明のＨＵＦＡ
石鹸粉を与えたナウプリについての時間に関して総脂肪酸の含有率としてＤＨＡ
が示される。図１から明らかであるとおり、ＨＵＦＡ石鹸を与えたアルテミア・
ナウプリは、ＨＵＦＡ石鹸のエチルエステルを与えたナウプリに比較したときに
、総脂肪酸の含有率としてそれらのＤＨＡ濃度をいっそう迅速に増加させ、そし
て高い総濃度のＤＨＡを獲得した。図２では、３つの群のナウプリについて時間
の関しての総脂肪酸の含有率としてＥＰＡが示され、そして図３では、３つの群
のナウプリについて時間に関しての総脂肪酸の含有率としてアラキドン酸（ＡＲ
Ａ）が示される。そのナウプリのＥＰＡおよびアラキドン酸組成が、増加したＤ
ＨＡ濃度として変化しないことが観察された。

【００３７】 アルテミア・ナウプリのための正常な乾燥石鹸供餌手段は、以下のとおりであ
る。 １．２４時間、２６℃で、２６ｐｐｔ水性塩濃度を示す１リットル容器中でアル
テミアを孵化させる。 ２．未孵化の卵から新たに孵化したナウプリを分離し、そしてタンクにそのナウ
プリを入れる。 ３．次の６から８時間で、そのナウプリを三齢ナウプリ段階に進める。 ４．タンクの表面に乾燥石鹸粉を添加する。 ５．次の１２−２４時間、そのナウプリに、所望の濃度でそのエマルジョンを吸
収／摂取させる。 ６．栄養強化したナウプリを収集し、そして流水下で簡便に洗浄する。 ７．稚魚タンクに栄養強化したアルテミアを添加する。

【００３８】 二齢（第二のナウプリの段階）のアルテミア・ナウプリを栄養強化する効果は
、同様に、一連の実験で栄養強化効率について、ＤＨＡリン脂質（ＰＬ）および
ＤＨＡナトリウム塩（ＤＨＡ−Ｎａ）の使用法を比較する。

【００３９】 完全にランダム化した設計で、そして３組の実験的作業で３回の重複で、栄養
強化食餌を使用した。栄養強化効率における食物ＤＨＡ富ＰＬおよびＤＨＡ−Ｎ
ａ塩の混合した効果を、２組の実験で評価した。第一組では、様々の比率のＤＨ
Ａ−Ｎａ塩（１０、２０、または３０％）およびＤＨＡ富リン脂質（ＤＨＡ−富
トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）およびオリーブ油の栄養強化食餌を使用して
、総脂肪酸の３２±２％に食物濃度を調整した、表６）を示した。第二の組の実
験では、等量のエチル−エステル−ＤＨＡまたはＤＨＡ−Ｎａ（総脂質の３０％
）を、総脂肪酸（３０％ＤＨＡ−ＴＡＧおよび相補量のオリーブ油を、トリアシ
ルグリセロールの源として使用した、表６）の２１±１％の一定のＤＨＡ濃度で
、様々の比率（総脂質の１０、２０、または４０％）の大豆レシチンと混合した
。

【００４０】 脂質分画送出形態の関数としてＤＨＡの吸収効率を、第三組の実験で評価した
。栄養強化脂質のトリアシルグリセロール、リン脂質またはナトリウム塩分画で
のみＤＨＡの濃度（総脂肪酸の０−１３．２１％）が増加することを示す食餌を
配合させた。食餌を、類似の非ＤＨＡ含有分画（例えば、オリーブ油、大豆レシ
チンおよびオレイン酸ナトリウム塩）で、等量のこれらの３つの脂質分画を含む
ように調整した。

【００４１】 全ての食餌を、２％ポリオキシエチレンソルビタンモノオレート（ＴＷＥＥＮ
８０、米国ミズーリー州（ＭＯ、ＵＳＡ）のシグマ（Ｓｉｇｍａ））と共に添加
し、そして３回の重複で二齢段階のアルテミア・ナウプリに給餌した。２８−３
０℃で、２０ｐｐｔの人工海水（２００，０００）ナウプリ／リットルで栄養強
化条件を確立させ、激しい通気および蛍光灯による一定の照射を備えた。０．３
ｇの栄養強化脂質の２つの等しい部分を、新鮮な水と混合し、１５秒間均質化さ
せ、そして０および８時間の後期二齢段階のときにアルテミア・ナウプリに給餌
した。

【００４２】 給餌前、および給餌の８および１６時間後で、アルテミアの長さ、重さおよび
生存性を記録した。アルテミア・ナウプリのサンプルを、０、８および１６時間
目に、各々の容器から取出し、蒸留水で洗浄し、紙タオルで乾燥させ、試験管に
入れ、そしてすぐにドライアイス上で冷凍させた。サンプルを、４８時間凍結乾
燥させ、そして後の分析のために−８０℃で保持した。凍結乾燥アルテミアの三
重の群の１００個の個体毎を、乾燥重量決定のために０．１μｇの最近傍まで秤
量した。

【００４３】 （Ｆｏｌｃｈら、Ｊ．Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２２６巻
、４９７−５０９頁（１９５７年）、参照してここに組込まれる）の方法に従っ
て、三回重複のサンプルから総脂質を抽出させた。脂質重量を重量計で測定し、
そしてアルテミアのパーセント乾燥重量として表された。栄養強化アルテミア・
ナウプリの脂質クラスを、クロマロッド−ＳＩＩＩで分離し、そしてＨＰ３３９
０Ａインテグレーターを具備したイアトロスキャンＴＨ−１０ＴＬＣ／ＦＩＤ分
析装置（イアトロン・ラボラトリーズ、インク．（Ｉａｔｒｏｎ Ｌａｂｏｒａ
ｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）、日本、東京）で定量した。クロマロッドを、最初に
１：１クロロホルム：メタノールで二回焦点合せさせて、狭いバンドのサンプル
脂質を生じ、そしてヘキサン：ジエチル−エーテル：蟻酸（８５：１５：０．１
）を含む溶媒系で４５分間展開させた。公知量のＬ−α−ホスファチジルコリン
、トリパルミチン、オレイン酸、オレイン酸コレステリルおよびコレステロール
（全て、米国ミズーリー州のシグマ（Ｓｉｇｍａ）から得られた）の標準曲線（
第一の桁）を、各脂質クラスについて作成し、そして定量に使用した。

【００４４】 参照してここに組込まれるＭｏｒｒｉｓｏｎおよびＡｍｉｔｈ、Ｊ．Ｌｉｐｉ
ｄ Ｒｅｓ．５巻、６００−６０８頁（１９６４年）によって、総脂質抽出物か
ら、脂肪酸メチルエステル（ＦＡＭＥ）を製造した。脂質抽出物を、メタノール
中の飽和ＫＯＨで鹸化させ、そして１２％ＢＦ_３／メタノールでメチル化させた
。炎イオン化検出器および０．２５μｍフィルム厚を示す３０ｍ×０．２５ｍｍ
ＩＤキャピラリーカラム（ＤＢ５、ジェイ・アンド・ダブリュー・サイエンティ
フィック（Ｊ＆Ｗ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、米国カリフォルニア州フォルソン
）を具備したヒューレット・パッカード５８９０Ａガスクロマトグラフィーを用
いて、脂肪酸メチルエステルを分析した。担体ガスは、１９ｐｓｉのカラム圧で
ヘリウムであった。注入装置および検出器の温度は、３００℃であり、そしてオ
ーブンの温度は、２０分間、３５℃から１８０℃まで、２分間、１８０℃から２
３５℃まで、そして２０分間、２３５℃から２７５℃までの当初温度からプログ
ラム化された。２つの内部標準Ｃ１９：０およびＣ２１：０は、定量用の各サン
プルに添加し、そしてその脂肪酸メチルエステルの積分ピーク面積を、公知標準
を示す組成物によって同定した。

【００４５】 分散量の分析（ＡＮＯＶＡ、Ｓｔａｔｖｉｅｗ４．５、１９９５）を使用して
、生存の長さ、重量、脂質、脂質クラスおよび脂肪酸含有率の処理手段の間およ
び、の範囲内の差異を測定した。含有率のデータを、分析前にアークシン・トラ
ンスフォーメーションによって常態にした。その手段の間の顕著な差異が検出さ
れたときに、ダンカン（ｄｕｎｃａｎ）の多重範囲試験を使用した。９５％の顕
著な濃度（Ｐ＜０．０５）を、どこまでも使用した。

【００４６】 表 ６ 栄養強化飼料の組成（総脂質の含有率（％））

【表６】

【００４７】 アルテミア・ナウプリは、二齢段階で長さ６２４．３±１０．０μｍから、食
物処理（Ｐ＞０．０５）に関係なく栄養強化の１６時間後、９１１．１±１２．
６μｍまで増加した。二齢アルテミア・ナウプリの平均重量は、２．１０±０．
０８μｇ乾燥重量であり、そして任意の食物処理（２．０５±０．１３μｇ乾燥
重量、Ｐ＞０．０５）での栄養強化の１６時間後、際立って変化はしなかった。
栄養強化の１６時間後の生存率は、７４．０±７．８％であり、そして栄養強化
飼料中のＰＬまたは脂肪酸ナトリウム塩濃度（それぞれ、３０％および４０％の
高濃度でさえ）によって際立って影響されはしなかった（Ｐ＞０．０５）。給餌
実験の始め（二齢段階）に、アルテミア・ナウプリは、１６．２８±０．１５％
（乾燥重量）の脂質を含み、そしてそれは、飢餓の１６時間後、１３．８１±０
．４１％に減少した。全食物脂質は、ＰＬまたは脂肪酸ナトリウム塩含量に関係
なく、アルテミア・ナウプリによって有効に吸収され（Ｐ＞０．０５）、そして
それは、栄養強化の１６時間後、２４．３±０．６％乾燥重量まで脂質含量で際
立った増加を伴った。

【００４８】 栄養強化脂質は、アルテミア脂質中のＴＡＧとしておおかた蓄積された一方で
、アルテミアのＰＬ含量は、食物ＰＬ変化に対応せず、そして４７．６９±７．
７４ｍｇ／ｇ（乾燥重量）で一定に残った（Ｐ＞０．０５）。さらに、等しい脂
質含量で、アルテミア中のＰＬ：ＴＡＧ比は、ＰＬ分画中の食物変化によっても
影響を及ぼされた（Ｐ＞０．０５、表２）。しかし、あらゆるＰＬ食物レベルで
、３０％ＤＨＡ−Ｎａの食物封入は、３０％ＥＥ−ＤＨＡの食物封入と比較した
場合、アルテミア脂質中に明らかに高い（Ｐ＜０．０５）ＰＬ：ＴＡＧ比と関連
した（それぞれ、０．３３±０．０２および０．２４±０．０１、表７）。

【００４９】 栄養強化したアルテミア・ナウプリによる１６時間での食物ＤＨＡの吸収は、
エチルエステル形態のものに比べたとき、脂質が、そのナトリウム塩形態で送出
された場合、明らかに高い（Ｐ＜０．０５）（それぞれ、３０．９７±４．８２
ｍｇ／ｇ乾燥重量および２３．７６±３．０６ｍｇ／ｇ乾燥重量）。さらに、ア
ルテミアによるＤＨＡ吸収は、２０％食物ＰＬで最大であり、そして高または低
食物濃度で実質的に減少した（表７）。選択的に、１０％ＰＬおよび１０％ＳＳ
−ＤＨＡの混合物も、栄養強化したアルテミア・ナウプリ中でのＤＨＡの最大（
Ｐ＜０．０５）吸収の結果を生じた（図４）。図４では、二齢段階にある１６時
間栄養強化したアルテミア・ナウプリによるＤＨＡ吸収での食物ＰＬおよびＤＨ
Ａナトリウム塩（ＤＨＡ−Ｎａ）濃度の影響が記述されている。食物分画の含有
率は、総食物脂質のものである。同じ上付きを共有する棒線は、有為な差異はな
い（Ｐ＞０．０５）。値は、３回の重複について平均±ｓ．ｅ．（標準誤差）で
ある。しかし、２０％食物ＰＬおよび３０％ＤＨＡ−Ｎａの組合せは、ＰＬおよ
びＤＨＡ−ＮａまたはＥＥ−ＤＨＡのあらゆる他の組合せと比較して、栄養強化
アルテミア・ナウプリにおける最高（Ｐ＜０．０５）のＤＨＡ：ＥＰＡ比を生じ
た（図５）。図５では、二齢段階にある１６時間栄養強化したアルテミア・ナウ
プリにおけるＤＨＡ：ＥＰＡ比での３０％エチルエステルＤＨＡ（ＥＥ−ＤＨＡ
）または３０％ＤＨＡナトリウム塩（ＤＨＡ−ＮＡ）濃度での食物ＰＬの影響が
記述されている。食物分画の含有率は、総食物脂質のものである。同じ上付きを
共有する棒線は、有為な差異はない（Ｐ＞０．０５）。値は、３回の重複につい
て平均±ｓ．ｅ．である。

【００５０】 表 ７ アルテミア中のＰＬ−ＴＡＧ比およびＤＨＡ吸収における ３０％エチルエステルＤＨＡ（ＥＥ−ＤＨＡ）または ３０％ナトリウム塩ＤＨＡ（ＤＨＡ−Ｎａ）での 様々の比率の食物ＰＬの影響

【表７】

【００５１】 −食物分画の含有率は、総食物脂質のものである。 −同じ上付きを共有する各カラムでの値は、有為な差異はない（Ｐ＞０．０５）
。値は、３回の重複で平均±ｓ．ｅ．である。

【００５２】 二齢段階のアルテミア・ナウプリでのＥＰＡ含量は、８．１４±０．４２ｍｇ
／ｇ乾燥重量であり、そして１６時間の飢餓の後、７．２０±０．６１ｍｇ／ｇ
乾燥重量にわずかに減少した。一方、ＥＰＡ含量は、ＰＬまたはＤＨＡ−Ｎａ食
物濃度によるなんらの顕著な影響なしに、１６時間のＤＨＡ栄養強化の後に１３
．８２±０．２３ｍｇ／ｇ乾燥重量にほぼ二倍になった（Ｐ＞０．０５）。食物
脂質は、ＥＰＡに欠けていた（総脂肪酸の０．５％未満）から、ＥＰＡ含量での
増加は、栄養強化アルテミアにおけるＤＨＡ代謝およびレトロコンバージョンか
ら生じた。追加のＥＰＡは、レトロコンバージョンされたＤＨＡからおもに由来
したが、その２つの濃度の間の相関はなんら観察されなかった（Ｒ^２＝０．３２
）。図５では、食物ＰＬおよびナトリウム塩ＤＨＡ含量の関数として、栄養強化
されたアルテミア中のＤＨＡ：ＥＰＡ比が示される。高い食物濃度のＰＬ（総脂
質の４０％）は、栄養強化したアルテミア中の低いＤＨＡ：ＥＰＡ比で明らかに
ＤＨＡ吸収の結果に影響を及ぼす。それにもかかわらず、アルテミア中のＤＨＡ
：ＥＰＡ比は、３０％エチルエステルＤＨＡにより、３０％ナトリウム塩ＤＨＡ
に関連した１０−２０％ＰＬで給餌したときに明らかに高かった（Ｐ＜０．０５
）。

【００５３】 図６では、その食物分画送出形態の関数として、８時間栄養強化したアルテミ
ア・ナウプリの中性（開放シンボル）および極性脂質（閉鎖シンボル）でのＤＨ
Ａ吸収が記述されている。その時点で１つの食物分画（トリアシルグリセロール
（ＴＡＧ）、エチルエステル（ＥＥ）またはリン脂質（ＰＬ）分画）のみで濃度
を増加させながら、ＤＨＡを送出した。値は、３回の重複で平均±ｓ．ｅ．であ
る。

【００５４】 ＰＬまたはＴＡＧ脂質形態にあるＤＨＡを送出すると、未エステル化形態に比
べて、栄養強化したアルテミアによってその吸収が改善される（図６）。栄養強
化の８時間後、ＤＨＡは、アルテミア脂質の中性分画におもに蓄積した。さらに
、他の食物分画中のＤＨＡを送出する食物ＰＬリン脂質として送出されるときに
、アルテミア極性脂質のみに組込まれたＤＨＡは、アルテミア中性脂質への組込
みを生じた。さらに、ＤＨＡでのアルテミア中性脂質の栄養強化の効率は、食物
ＰＬまたはＴＡＧ形態で送出されるときに最高であり（食物ＤＨＡの４３％、Ｒ ^２ ＝０．９９）、そして未エステル化ＤＨＡとして送出されるときに、食物ＤＨ
Ａの２８％（Ｒ^２＝０．８９）に実質的に減少された。さらに、食物ＤＨＡ（Ｒ ^２ ＝０．９１）の７％は、他の食物分画で送出されるときに、食物ＤＨＡのわず
か７．５ｇ％（Ｒ^２＝０．９５）に比べて、ＰＬ分画中で送出されたときに、ア
ルテミア極性分画中に蓄積された。

【００５５】 成熟ロティファーを、本発明の予め記述されたＨＵＦＡ石鹸粉で処理した。表
８および９に示される濃度で石鹸粉をそれぞれのタンクに添加することによって
、ロティファーを処理した。石鹸粉を用いたこの処理の脂肪酸栄養強化も、表８
および９に示される。表８では、処理の４時間後の脂肪酸栄養強化が示され、そ
して表９には、処理の８時間後の栄養強化が示され、そしてその後、ロティファ
ーを収集し、そして分析した。ｎ−３からｎ−６多価不飽和脂肪酸の優れた比が
得られた。栄養強化期間が４時間から８時間まで延長されたとき、成熟ロティフ
ァーは、２２：５ｎ３脂肪酸を２０：５ｎ３脂肪酸に変換していたことは注目す
べきであり、したがって、栄養強化期間を注意深く観察することが重要でありう
る。

【００５６】 表 ８ ４時間の栄養強化（ｍｇ／ｇＤＢＷロティファー）の要約 処理

【表８】

【００５７】 表 ９ ８時間の栄養強化（ｍｇ／ｇＤＢＷロティファー）の要約 処理

【表９】

【００５８】 ＤＨＡで栄養強化した藻類を給餌することの影響も試験された。

【００５９】 従属栄養的に成長した全クロレラ・エスピー．（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ ｓｐ．
）およびテトラセルミス（Ｔｅｔｒａｓｅｌｍｉｓｓ）ペースト、全細胞および
破砕細胞、並びにクリプテコジニウム・エスピー．（Ｃｒｙｐｔｅｃｏｄｉｎｉ
ｕｍ ｓｐ．）藻類の脱脂乾燥生物飼料は、マーテック・バイオサイ社（Ｍａｒ
ｔｅｋ ＢｉｏＳｃｉ Ｉｎｃ．）から得られた。全材料は、ＤＨＡ油生産工程
から得たＤＨＡ−ＰＬ分画と混合される前に凍結乾燥した。栄養強化した食餌は
、ＤＨＡ−ＰＬのみ、または３：１、２：１または１：１混合（乾燥重量を基本
）のＨＤＡ−ＰＬを、凍結乾燥藻類（クロレラ・エスピー．、テトラセルミスお
よび脱脂したクリプテコジニウム・エスピー．生物飼料）の内の各々と共にを含
有した。全ての栄養強化混合物を、水で均質化させ、そして全化合物の混合を最
高に確保するためにもう一度凍結乾燥させた。

【００６０】 アルテミアおよびロティファーを養殖し、そして脂質を、先に記述した方法に
よって分析した。

【００６１】 １６時間の栄養強化の後に、担体型（生物飼料、クロレラ・エスピー．および
テトラセルミス）の際立った影響（Ｐ＞０．０５）なしに、アルテミアの７５％
以上が生存した。しかし、２５％ＤＨＡ−ＰＬを有する担体の任意の型の７５％
の混合比率は、全ての他の混合比率でわずか７５−７９％に比較して、９４．６
±１．１％の最高の生存率を生じた。６３．７±１．４％の最低の生存率は、ア
ルテミアに、全クリプテコジニウム・エスピー．細胞を給餌させたときに得られ
た。高度に消化でき、そして栄養的にバランスのとれた７５％混合食餌が、最大
の生存率を生じる一方で、ほとんど消化されていない全無傷の細胞の藻類で給餌
されたアルテミアは飢餓状態であるので、これらの生存の結果は、おそらく、食
餌の栄養価に影響を及ぼす。

【００６２】 全ての型の担体混合物（生物飼料、クロレラ・エスピー．およびテトラセルミ
ス）は、１６時間栄養強化したアルテミア（２３．９−２７．６％乾燥重量）中
の脂質含量を増加させる上で等しく効果的であった（ｐ＞０．０５）。ＤＨＡ−
ＰＬと任意の担体の２５−５０％の混合比率は、７５％混合濃度より、またはＤ
ＨＡ−ＰＬ（担体なし）食餌より脂質含量を増加させる上で明らかにさらに効果
的であった（ｐ＜０．０５）。これは、ＤＨＡ−ＰＬのみの食餌が、アルテミア
栄養強化用の有効な食餌ではないことを示唆する一方で、生物飼料および微細藻
類のような担体とこの材料の適切な混合は、その嗜好性および栄養強化効率の両
方を際立って改善させることができたであろう。全細胞または破砕細胞の藻類で
のアルテミアの栄養強化は、ＤＨＡ−ＰＬのみの食餌より、または混合食餌のい
ずれよりも脂質含量を増加させる上で明らかに効果的でなかった（ｐ＞０．０５
）。しかし、破砕細胞の食餌は、全細胞食餌よりわずかによく成し遂げ（１９．
１％対１７．０％乾燥重量）、そしてそれによりアルテミア・ナウプリは、全細
胞クリプテコジニウムエスピー．藻類の大型粒子サイズ（＞４０μＭ）を、摂取
し、そして有効に消化することができないことが示される。

【００６３】 生物飼料、クロレラ・エスピー．およびテトラセルミス担体は、食物ＤＨＡを
アルテミアに送出する（２０−３０ｍｇ／ｇ乾燥重量）上でＤＨＡ−ＰＬと同様
に有効であった（Ｐ＞０．０５）。全細胞および破砕細胞の藻類は、最低の効率
であった（７．８−１０．５ｍｇ／ｇ乾燥重量）。ＤＨＡ−ＰＬと任意の担体の
２５−５０％の食物比率は、ＤＨＡ−ＰＬのみの食餌または７５％混合食餌（１
３−１６．１ｍｇ／ｇ乾燥重量）よりＤＨＡをアルテミアに送出する（２６．２
−２８．０ｍｇ／ｇ乾燥重量、Ｐ＜０．０５）上で明らかによかった。

【００６４】 表１０で、体重の含有率として脂質の量は、給餌材料の関数として試験した。

【００６５】 表１０ 脂質（％ｄｗ）

【表１０】

【００６６】 表１１ 総ＦＡの含有率（％）としてのＤＨＡ

【表１１】

【００６７】 生存のロティファーは、栄養強化食餌の濃度に非常に敏感であった。０．１ｇ
／栄養強化濃度のリットルで、わずか４９．７％のロティファーが、担体型およ
び含有率に独立に、８時間の栄養強化後に生存する（Ｐ＞０．０５）。０．０５
ｇ／リットルまで減少した栄養強化レベルは、生存率が明らかによいことに関連
した（８０．９％、Ｐ＜０．０５）。生存率は、ロティファーを全細胞または破
砕細胞の藻類で給餌したときも高かった（８１．７−８９．９％）。

【００６８】 減少した栄養強化レベル（０．１ｇ／リットルから０．０５ｇ／リットルまで
）は、脂質含量での明らかな減少と関係しなかった（約２０％乾燥重量、Ｐ＞０
．０５）。ＤＨＡ−ＰＬとの２５−７５％混合比率での全ての担体型（生物飼料
、クロレラ・エスピー．およびテトラセルミス）は、８時間栄養強化したロティ
ファー中の脂質含量（２１．１−２２．５％乾燥重量）を増加させる上で等しく
有効であった。無傷の全細胞藻類は、ロディファー中の脂質含量（１０．７±１
．３％乾燥重量）を増加させる上で最低の能率の食餌であったが、しかし、破砕
細胞藻類の食餌でロティファーを給餌することは、明らかに改善された脂質吸収
に関連した（１６．３±０．９％乾燥重量、Ｐ＜０．０５）。

【００６９】 ０．０５−０．１ｇ／リットル食物レベルでのロティファー栄養強化は、食物
脂質の類似の吸収を起すが、ＤＨＡ蓄積は、高栄養強化レベル（０．０５ｇ／リ
ットルで１２．０±１．１ｍｇ／ｇ乾燥重量に比較して、０．１ｇ／リットルで
２８．０±１．４ｍｇ／ｇ乾燥重量）で２倍より大きかった。ＤＨＡ−ＰＬのみ
の食餌を含む、任意の混合濃度（０−７５％）での全ての型の担体は、食物ＤＨ
Ａをロティファーに送出するのに等しく有効であった（Ｐ＞０．０５）。全細胞
藻類は、ＤＨＡをロティファーに送出する上で最低の能率の食餌であった（わず
か６．０±１．４ｍｇ／ｇ乾燥重量）。しかし、破砕細胞藻類は、ロティファー
へのＤＨＡ送出にとって非常に効果的であった（２３．６±２．１ｍｇ／ｇ乾燥
重量）。栄養強化したロティファーでのこのＤＨＡレベルは、他の有効なＤＨＡ
−ＰＬ基材食餌によって得られるレベルに類似した（Ｐ＞０．０５）。アルテミ
アでの高い相関に比べて、ロティファー中の脂質およびＤＨＡ含量の間の観察さ
れた低い相関は、ロティファーが、食物ＤＨＡを吸収する上で非常に有効であり
、そしてさらに、それ（食物ＤＨＡ）を、アルテミアよりさらに低い比率で異化
することを示唆する可能性がある。

【００７０】 表１２ ロティファーの生存（８時間）

【表１２】

【００７１】 表１３ ８時間栄養強化したロティファー中のＤＨＡ（総ＦＡの含有率（％））

【表１３】

【００７２】 本発明のある種の現在好ましい実施形態はここに特に記述されるが、本発明が
ここに示され、そして記述される種々の実施形態の変動および修飾が、本発明の
概念および範囲から逸脱せずに行うことができることに付きものであることは当
業者に明らかである。したがって、付随の請求項および法律の適正規則によって
要求される範囲のみに限定されることが意図される。

【図面の簡単な説明】

【図１】 図１は、石鹸粉のエチルエステルエマルジョンおよび未処理の対照と比較して
、本発明の石鹸粉でアルテミア・ナウプリを処理する時間に関しての効果を示す
グラフである。そのグラフは、ゼロ、６、１２および２４時間での総脂肪酸の含
有率としてＤＨＡの栄養増強を示す。誤差棒線は、測定の標準誤差を示す。

【図２】 図２は、石鹸粉のエチルエステルエマルジョンおよび未処理の対照と比較して
、本発明の石鹸粉でアルテミア・ナウプリを処理する時間に関しての効果を示す
グラフである。その図は、ゼロ、６、１２および２４時間での総脂肪酸の含有率
としてＥＰＡの含有率を示す。誤差棒線は、測定の標準誤差を示す。

【図３】 図３は、石鹸粉のエチルエステルエマルジョンおよび未処理の対照と比較して
、本発明の石鹸粉でアルテミア・ナウプリを処理する時間に関しての効果を示す
グラフである。その図は、ゼロ、６、１２および２４時間での総脂肪酸の含有率
としてアラキドン酸（ＡＲＡ）の含有率を示す。誤差棒線は、測定の標準誤差を
示す。

【図４】 図４は、ＤＨＡナトリウム塩の含有率として二齢アルテミア・ナウプリのＤＨ
Ａ栄養強化を示すグラフである。

【図５】 図５は、１６時間栄養強化した二齢アルテミア・ナウプリで、ＤＨＡ：ＥＰＡ
Ａ比で３０％エチルエステルＤＨＡ（ＥＥ−ＤＨＡ）または３０％ＤＨＡナトリ
ウム塩（ＤＨＡ−Ｎａ）濃度での食物リン脂質の効果を示すグラフである。

【図６】 図６は、中性の極性食物脂質からのＤＨＡの吸収を示すグラフである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ) ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ， ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，Ｄ Ｋ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ， ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，Ｌ Ｕ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ， ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，Ｕ Ｇ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ Ｆターム(参考） 2B005 GA01 GA02 GA05 LA01 MA01 MA03 MB01 MB06 MB07 2B150 AA08 AB03 DA02 DA37 DA43 DD01 DE01

Claims (32)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 高度に不飽和化された脂肪酸石鹸粉を生餌に与えることを特
   徴とする海洋性稚魚の生餌中のドコサヘキサエン酸対エイコサペンタエン酸の比
   を増加させる方法。
2. 【請求項２】 生餌に、約１部のドコサヘキサエン酸対１部のエイコサペン
   タエン酸より大きな高度に不飽和化された脂肪酸比を示す脂肪酸を含む、高度に
   不飽和化された脂肪酸石鹸粉を生餌に与えることを特徴とする稚魚の生餌中のド
   コサヘキサエン酸対エイコサペンタエン酸の比を増加させる方法。
3. 【請求項３】 高度に不飽和化された脂肪酸石鹸粉が、以下の脂肪酸、約８
   ％から約１６％のＣ１４：０、約０．７５％から約２．５０％のＣ１６：１ω７
   、約９％から約１３％のＣ１６：０、約７．５から１０．５％のＣ１８：２ω６
   、約３０から５５％のＣ１８：１ω９、約０．０１％から約２．５％のＣ１８：
   １ω７、約２％から約４．５％のＣ２０：４および約８．５から約２８％のＣ２
   ２：６ω３を含む請求項１に記載の方法。
4. 【請求項４】 脂肪酸の対イオンが、ナトリウム、カリウム、カルシウムお
   よびそれらの混合物から選択される請求項１に記載の方法。
5. 【請求項５】 生餌が、アルテミア・ナウプリ、コペポーダおよびロティフ
   ァーに関係する請求項１に記載の方法。
6. 【請求項６】 生餌が、アルテミア・ナウプリである請求項５に記載の方法
   。
7. 【請求項７】 アルテミア・ナウプリが、二齢のナウプリの段階にある請求
   項６に記載の方法。
8. 【請求項８】 抗生物質、ビタミン、必須アミノ酸、カロチノイド、色素ま
   たはそれらの混合物が、乾燥石鹸粉に組込まれる請求項１に記載の方法。
9. 【請求項９】 栄養強化後に、生餌を、稚魚に給餌する請求項１に記載の方
   法。
10. 【請求項１０】 石鹸粉の粒子寸法が、約１０ミクロン未満である請求項２
    に記載の方法。
11. 【請求項１１】 石鹸粉の粒子寸法が、約７．５ミクロン未満である請求項
    １０に記載の方法。
12. 【請求項１２】 石鹸粉の粒子寸法が、約１ミクロンから約５ミクロンまで
    である請求項１１に記載の方法。
13. 【請求項１３】 アルテミアを孵化させ、その後、ナウプリに、第二のナウ
    プリ段階に進めさせ、ドコサヘキサエン酸で栄養強化した石鹸粉をナウプリに添
    加し、そしてドコサヘキサエン酸対エイコサペンタエン酸の比が約１．０対１よ
    り大きくなるまで、そのナウプリに、石鹸粉を吸収または摂取させることを特徴
    とする工程によって製造される、高度に不飽和化された脂肪酸で栄養強化された
    アルテミア・ナウプリ。
14. 【請求項１４】 ドコサヘキサエン酸対エイコサペンタエン酸の比が、約１
    ．５対１より大きい請求項１３に記載のアルテミア・ナウプリ。
15. 【請求項１５】 ドコサヘキサエン酸対エイコサペンタエン酸の比が、約２
    ．０対１より大きい請求項１３に記載のアルテミア・ナウプリ。
16. 【請求項１６】 石鹸粉が、以下の脂肪酸、約８から約１６％のＣ１４：０
    、約０．７５％から約２．５０％のＣ１６：１ω７、約９％から約１３％のＣ１
    ６：０、約７．５から１０．５％のＣ１８：２ω６、約３０から５５％のＣ１８
    ：１ω９、約０．０１％から約２．５％のＣ１８：１ω７、約２％から約４．５
    ％のＣ２０：４および約８．５から約２８％のＣ２２：６ω３を含み、高度に不
    飽和化された脂肪酸石鹸粉が、以下の脂肪酸、約８から約１６％のＣ１４：０、
    約０．７５％から約２．５０％のＣ１６：１ω７、約９％から約１３％のＣ１６
    ：０、約７．５から１０．５％のＣ１８：２ω６、約３０から５５％のＣ１８：
    １ω９、約０．０１％から約２．５％のＣ１８：１ω７、約２％から約４．５％
    のＣ２０：４および約８．５から約２８％のＣ２２：６ω３を含む請求項１３に
    記載のアルテミア・ナウプリ。
17. 【請求項１７】 アルテミアを孵化させ、 アルテミアに、第二のナウプリ段階に進めさせ、 高度に不飽和化された脂肪酸を含む乾燥石鹸粉を添加し、 栄養強化が得られる場合、所望の濃度まで、アルテミアに、石鹸粉を摂取また
    は吸収させる段階を特徴とする高度に不飽和化された脂肪酸でアルテミア・ナウ
    プリを栄養強化する方法。
18. 【請求項１８】 約１．０対１より大きいドコサヘキサエン酸対エイコサペ
    ンタエン酸の比である時点まで栄養強化を継続させる請求項１７に記載のアルテ
    ミア・ナウプリを栄養強化させる方法。
19. 【請求項１９】 約１．５対１より大きいドコサヘキサエン酸対エイコサペ
    ンタエン酸の比である時点まで栄養強化を継続させる請求項１７に記載のアルテ
    ミア・ナウプリを栄養強化させる方法。
20. 【請求項２０】 約２．０対１より大きいドコサヘキサエン酸対エイコサペ
    ンタエン酸の比である時点まで栄養強化を継続させる請求項１７に記載のアルテ
    ミア・ナウプリを栄養強化させる方法。
21. 【請求項２１】 高度に不飽和化させた脂肪酸石鹸粉が、以下の脂肪酸、約
    ８％から約１６％のＣ１４：０、約０．７５％から約２．５０％のＣ１６：１ω
    ７、約９％から約１３％のＣ１６：０、約７．５から１０．５％のＣ１８：２ω
    ６、約３０から５５％のＣ１８：１ω９、約０．０１％から約２．５％のＣ１８
    ：１ω７、約２％から約４．５％のＣ２０：４および約８．５から約２８％のＣ
    ２２：６ω３を含み、高度に不飽和化された脂肪酸石鹸粉は、以下の脂肪酸、約
    ８から約１６％のＣ１４：０、約０．７５％から約２．５０％のＣ１６：１ω７
    、約９％から約１３％のＣ１６：０、約７．５から１０．５％のＣ１８：２ω６
    、約３０から５５％のＣ１８：１ω９、約０．０１％から約２．５％のＣ１８：
    １ω７、約２％から約４．５％のＣ２０：４および約８．５から約２８％のＣ２
    ２：６ω３を含む請求項１７に記載のアルテミア・ナウプリを栄養強化させる方
    法。
22. 【請求項２２】 高度に不飽和化された脂肪酸中で栄養強化された石鹸粉を
    、ロティファーに与え、そしてドコサヘキサエン酸対エイコサペンタエン酸の比
    が、約１．０対１．０より大きくなるまで、そのロティファーに、石鹸粉を吸収
    または摂取させ、 ドコサヘキサエン酸の実質的代謝が起こる前にロティファーを収穫することを
    特徴とする高度に不飽和化された脂肪酸中のロティファーを栄養強化する方法。
23. 【請求項２３】 ドコサヘキサエン酸対エイコサペンタエン酸の比が、約１
    ．５対１．０より大きい請求項２２に記載の方法。
24. 【請求項２４】 ドコサヘキサエン酸対エイコサペンタエン酸の比が、約２
    ．０対１．０より大きい請求項２２に記載の方法。
25. 【請求項２５】 石鹸粉が、抗生物質、ビタミン、必須アミノ酸、カロチノ
    イド、色素およびそれらの混合物を含む請求項２２に記載の方法。
26. 【請求項２６】 方法が、さらに、ロティファーを稚魚に給餌することを特
    徴とする請求項２２に記載の方法。
27. 【請求項２７】 石鹸粉が、以下の脂肪酸、約８から約１６％のＣ１４：０
    、約０．７５％から約２．５０％のＣ１６：１ω７、約９％から約１３％のＣ１
    ６：０、約７．５から１０．５％のＣ１８：２ω６、約３０から５５％のＣ１８
    ：１ω９、約０．０１％から約２．５％のＣ１８：１ω７、約２％から約４．５
    ％のＣ２０：４および約８．５から約２８％のＣ２２：６ω３を含み、高度に不
    飽和化された脂肪酸石鹸粉は、以下の脂肪酸、約８から約１６％のＣ１４：０、
    約０．７５％から約２．５０％のＣ１６：１ω７、約９％から約１３％のＣ１６
    ：０、約７．５から１０．５％のＣ１８：２ω６、約３０から５５％のＣ１８：
    １ω９、約０．０１％から約２．５％のＣ１８：１ω７、約２％から約４．５％
    のＣ２０：４および約８．５から約２８％のＣ２２：６ω３を含む請求項２５に
    記載の方法。
28. 【請求項２８】 高度に不飽和化された脂肪酸を含む石鹸粉を魚用飼料に添
    加する工程によって、魚用飼料中の高度に不飽和化された脂肪酸の量を増加させ
    る方法。
29. 【請求項２９】 高度に不飽和化された脂肪酸石鹸粉が、以下の脂肪酸、約
    ８から約１６％のＣ１４：０、約０．７５％から約２．５０％のＣ１６：１ω７
    、約９％から約１３％のＣ１６：０、約７．５から１０．５％のＣ１８：２ω６
    、約３０から５５％のＣ１８：１ω９、約０．０１％から約２．５％のＣ１８：
    １ω７、約２％から約４．５％のＣ２０：４および約８．５から約２８％のＣ２
    ２：６ω３を含む請求項２８に記載の方法。
30. 【請求項３０】 アルテミア・ナウプリが、第三のナウプリ段階にある請求
    項６に記載の方法。
31. 【請求項３１】 ナウプリを、第三のナウプリ段階に進めさせる請求項１３
    に記載のアルテミア・ナウプリ。
32. 【請求項３２】 アルテミアを、第三のナウプリ段階に進めさせる請求項１
    ７に記載の方法。