CN102630645B - 一种高浓度淡水小球藻培养ss型褶皱臂尾轮虫的方法 - Google Patents
一种高浓度淡水小球藻培养ss型褶皱臂尾轮虫的方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种高浓度淡水小球藻培养ss型褶皱臂尾轮虫的方法，包括以下步骤：培养容器消毒处理；培养基的配制；将驯化的轮虫接种到培养基中，保持培养基的温度为28～32℃，pH为7～9，溶解氧DO大于8ppm，盐度为1.5～2.0％，并向培养基内持续供应高密度淡水小球藻，当轮虫的密度达到10000个/mL以上时，收集轮虫。本发明中轮虫的每天生长率达到2～10倍，接种24小时后的密度可达到平均10000-15000个体/mL，用20升高浓度小球藻培养出30亿轮虫，产卵率为30～40％。轮虫的培养非常方便，可以得到较纯的超微轮虫种。
Description
技术领域
本发明属于轮虫培养技术领域，尤其是涉及一种高浓度淡水小球藻培养ss型(超微轮虫)褶皱臂尾轮虫的方法。
背景技术
轮虫是一群微小的多细胞动物，种类多，广泛分布于淡水、半咸水和海水中，对环境适应性强，营养丰富，干物质中蛋白质含量57％、脂肪20％、钙1.8％、磷15％，且其大小、形状适口，容易被鱼、虾、蟹幼体消化吸收，是鱼、虾、蟹幼体理想的动物性饵料。
轮虫在水产动物种苗生产中作为活饵料的应用，大大促进了水产动物种苗生产的发展，尤其是近几年来，随着水产动物种苗的培育密度不断提高，作为优质活饵料，轮虫的需求量也就越来越大，因此能否持续生产轮虫，已成为水产动物种苗生产不可短缺的环节。目前生产性的轮虫培育，一般的培养密度只有200个/mL左右，由于培育水体相对较大，环境条件较难控制，不仅占用了较多的水体，也造成生产成本的提高，因此如何培养高密度的轮虫成为亟待解决的问题。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种高密度淡水小球藻培养ss型褶皱臂尾轮虫的方法。
本发明的技术方案是一种高浓度淡水小球藻培养ss型褶皱臂尾轮虫的方法，包括以下步骤：
(1)、培养容器消毒处理
对培养容器的器壁进行消毒处理，消毒后用海水冲洗干净；
(2)、培养基的配制
将经过过滤和消毒的纯净海水与淡水混合，配制成盐度为1.5～2.0％，调节pH值到7～9，然后过滤并用紫外线照射后得到培养基；
(3)、轮虫的接种与培养
将驯化的轮虫接种到培养基中，保持培养基的温度为28～32℃，pH为7～9，溶解氧DO大于8ppm，盐度为1.5～2.0％，并向培养基内持续供应高密度淡水小球藻，当轮虫的密度达到10000个/mL以上时，收集轮虫。本发明使用纳米气石向培养基内通入纯氧，保持溶解氧DO大于8。
优选，步骤(1)中采用6％的次氯酸钠溶液对培养容器进行消毒处理。
优选，步骤(2)中，将经过过滤和消毒的纯净海水与淡水混合，配制成盐度为1.6％，调节pH值到7，然后过滤并用紫外线照射后得到培养基。
优选，步骤(2)中用碳酸氢钠调节培养基的pH，且培养基的过滤分为两个阶段，第一阶段采用沙滤的过滤，第二阶段采用5μm的滤布过滤。
优选，步骤(3)中用于接种的轮虫为驯化的轮虫，从自然界25℃水温养殖水域中收集褶皱臂尾轮虫，放置在所述经过处理过的培养基中，接种密度为500个/mL，每天将温度调高1℃，7天后温度升高到32℃，驯化过程完成，自然界的褶皱臂尾轮虫一般情况下，随着自然温度的升高体型逐渐变小，用这一方法得到ss型褶皱臂尾轮虫。
优选，步骤(3)中，将轮虫接种到30℃的培养基中，且轮虫的接种密度为5000个体/mL，光照强度为2000LUX。
优选，步骤(3)中用蠕动泵向培养基内持续供应高密度淡水小球藻。
优选，步骤(3)中，高密度淡水小球藻向培养基内的加入量为21mL小球藻/亿轮虫/小时。
优选，步骤(3)中所用的高密度淡水小球藻的pH值为5.8～6.5，维生素B12大于等于1mg/L，细胞浓度大于等于100亿个/L，湿重大于等于44％。本发明用的高密度淡水小球藻购于韩国大象集团。
优选，步骤(3)中，当培养基内轮虫的密度达到15000个/mL以上时，收集轮虫。
本发明采用的轮虫密度的测量方法为从培养基中取100μl轮虫5次，在解剖镜下分别计数；计算五次平均值作为轮虫的培养密度，根据培养密度，调节高密度淡水小球藻的投喂量。
本发明的优点及效果：本发明中轮虫的每天生长率达到2～10倍，接种24小时后的密度可达到平均10000-15000个体/mL，用20升高浓度小球藻培养出30亿轮虫，产卵率为30～40％。轮虫的培养非常方便，可以得到较纯的超微轮虫种。
具体实施方式
为了理解本发明，下面通过具体的实施例对本发明作进一步说明。
实施例一
(1)、培养容器消毒处理
培养容器采用2000升的培养桶，用6％的次氯酸钠溶液对桶壁进行消毒处理，消毒后用海水冲洗干净；
(2)、培养基的配制
将经过过滤和消毒的纯净海水，纯净海水盐度为3.1％，温度为27℃，加入淡水混合，配制成盐度为1.5％，调节pH值到7，然后经沙滤及滤布分别过滤并用紫外线照射消毒后得到培养基，放入蓄水池备用；
(3)、轮虫的驯化
将玻璃钢孵化桶内放入100升培养基，然后，从自然界25℃水温养殖水域中收集褶皱臂尾轮虫，放置在上述培养基中，直接加入20mL高密度小球藻。接种密度为500个/mL。放入硬质棉，用来吸附培养基中的轮虫代谢物，以及饵料废渣，每天将硬质棉取出后清洗四次，每天将培养基的温度提高1℃。具体操作如下：
前3天用不间断每天投入100mL高浓度淡水小球藻。每天更换20升培养基，保持培养基体积在100升。
第4天开始对轮虫计数。水温为29℃，轮虫的密度为952个/mL。自动投饵仪投喂小球藻的量改为300mL/天，更换30升培养基。
第5天对轮虫计数。水温调到30℃，轮虫的密度为1200个/mL。自动投饵仪投喂小球藻的量改为360mL/天，更换培养基30升。
第6天对轮虫计数。水温调到31℃，轮虫的密度为1950个/mL。投喂小球藻的量改为600mL/天，更换培养基30升。
第7天对轮虫计数。水温调到32℃，轮虫的密度为4100个/mL。投喂小球藻的量改为1200mL/天，更换培养基30升。这时要使用纳米气石通入纯氧，DO值要保持在10ppm以上。
第8天对轮虫计数。水温调到33℃，轮虫的密度为10250个/mL。使用纳米气石通入纯氧，更换培养基50升，投喂小球藻的量改为2400mL/天。经过8天的驯化，轮虫的体长由100-500μm变为100-250μm。驯化过程完成，得到ss型褶皱臂尾轮虫。
(4)、轮虫的接种及培养
将200升培养基加入到培养桶内，放入多块硬质棉准备吸附残渣及轮虫代谢物，将水温调至28℃，将上述驯化的轮虫接种到培养基中，用纳米气石通入纯氧，接种密度为5000个体/mL，保持培养基的温度为28℃，pH为7，用纳米气石通入纯氧，溶解氧DO保持在10ppm，光照强度2000LUX，盐度为1.5％。并用蠕动泵向培养基内持续供应高密度淡水小球藻，加入量为21mL小球藻/亿轮虫/小时。
(5)轮虫的收集
24小时后轮虫的密度为12110个/mL，排出100L培养基，并收集排出100L培养基内的轮虫，再将新的100L培养基加入培养桶内。每天清洗4次硬质棉。
实施例二
(1)、培养容器消毒处理
培养容器采用2000升的培养桶，用6％的次氯酸钠溶液对桶壁进行消毒处理，消毒后用海水冲洗干净；
(2)、培养基的配制
将经过过滤和消毒的纯净海水，纯净海水盐度为3.1％，温度为27℃，加入淡水混合，配制成盐度为1.6％，调节pH值到8.2，然后经沙滤及滤布分别过滤并用紫外线照射消毒后得到培养基，放入蓄水池备用；
(3)、轮虫的驯化
同实施例一的步骤(3)。
(4)、轮虫的接种及培养
将200升培养基加入到培养桶内，放入多块硬质棉准备吸附残渣及轮虫代谢物，将水温调至30℃，将上述驯化的轮虫接种到培养基中，用纳米气石通入纯氧，接种密度为5000个体/mL，保持培养基的温度为30℃，pH为8，用纳米气石通入纯氧，溶解氧DO保持在9ppm，光照强度2000LUX，盐度为1.6％。并用蠕动泵向培养基内持续供应高密度淡水小球藻，加入量为21mL小球藻/亿轮虫/小时。
(5)轮虫的收集
24小时后，排出100L培养基，并收集排出100L培养基内的轮虫，再将新的100L培养基加入培养桶内。每天清洗4次硬质棉。
实施例三
(1)、培养容器消毒处理
培养容器采用2000升的培养桶，用6％的次氯酸钠溶液对桶壁进行消毒处理，消毒后用海水冲洗干净；
(2)、培养基的配制
将经过过滤和消毒的纯净海水，纯净海水盐度为3.1％，温度为27℃，加入淡水混合，配制成盐度为2.0％，调节pH值到9，然后经沙滤及滤布分别过滤并用紫外线照射消毒后得到培养基，放入蓄水池备用；
(3)、轮虫的驯化
同实施例一的步骤(3)。
(4)、轮虫的接种及培养
将200升培养基加入到培养桶内，放入多块硬质棉准备吸附残渣及轮虫代谢物，将水温调至32℃，将上述驯化的轮虫接种到培养基中，用纳米气石通入纯氧，接种密度为5000个体/mL，保持培养基的温度为32℃，pH为9，用纳米气石通入纯氧，溶解氧DO保持在8ppm，光照强度2000LUX，盐度为2.0％。并蠕动泵向培养基内持续供应高密度淡水小球藻，加入量为21mL小球藻/亿轮虫/小时。
(5)轮虫的收集
24小时后，排出100L培养基，并收集排出100L培养基内的轮虫，再将新的100L培养基加入培养桶内。每天清洗4次硬质棉。
上述实施例中采用的高密度小球藻均采购于韩国大象集团，且高密度淡水小球藻的pH值等于6，维生素B12大于等于1mg/L，细胞浓度大于等于120g/L，湿重大于等于44％
以上对本发明的一个实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施例，不能被认为用于限定本发明的实施范围。凡依本发明申请范围所作的均等变化与改进等，均应仍归属于本发明的专利涵盖范围之内。
Claims (1)
1.一种高浓度淡水小球藻培养ss型褶皱臂尾轮虫的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）、培养容器消毒处理
采用6%的次氯酸钠溶液对培养容器进行消毒处理；消毒后用海水冲洗干净；
（2）、培养基的配制
将经过过滤和消毒的纯净海水与淡水混合，配制成盐度为1.6%，用碳酸氢钠调节pH值到7，然后通过两个阶段过滤，第一阶段采用沙滤的过滤，第二阶段采用5μm的滤布过滤；并用紫外线照射后得到培养基；
（3）、轮虫的接种与培养
从自然界25℃水温养殖水域中收集褶皱臂尾轮虫，放置在所述经过处理过的培养基中，接种密度为500个/mL，每天将温度调高1℃，7天后温度升高到32℃，驯化过程完成；将驯化的轮虫接种到培养基中，接种密度为5000个体/mL，光照强度为2000LUX，保持培养基的温度为30℃，pH为7～9，溶解氧DO大于8ppm，盐度为1.5～2.0%，并用蠕动泵向培养基内持续供应高密度淡水小球藻，高密度淡水小球藻向培养基内的加入量为21mL小球藻/亿轮虫/小时，所用的高密度淡水小球藻的pH值为5.8～6.5，维生素B12大于等于1mg/L，细胞浓度大于等于100亿个/L，湿重大于等于44%；当轮虫的密度达到10000个/mL以上时，收集轮虫。
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