CN104936978B - 多肽多孔质体及其制造方法 - Google Patents

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Abstract

本发明的多肽多孔质体为来自蛛丝蛋白质的多肽多孔质体，所述多肽含有非水溶性多肽，表观密度为0.1g/cm3以下。该多肽多孔质体的制造方法包括：将所述多肽溶解于选自DMSO、DMF及其中加入有无机盐的溶液中的至少一种溶剂，得到多肽的溶液的溶液生成工序；通过将所述溶液生成工序中生成的溶液替换为水溶性溶剂而得到多肽凝胶的工序；将所述多肽凝胶进行干燥的工序。由此，提供水分吸收性优异的多肽多孔质体，同时提供对生物体的适用优异的多肽多孔质体及其制造方法。

Description

多肽多孔质体及其制造方法
技术领域
本发明涉及一种以来自蛛丝蛋白质的多肽为原料的多肽多孔质体及其制造方法。
背景技术
多肽水凝胶在人工软骨等生物体材料等中被使用。在专利文献1中提出了一种将丝素蛋白溶解于聚乙二醇等的吸湿聚合物的水凝胶或发泡体。在专利文献2中公开有一种以蜘蛛丝为原料、进行光交联的凝胶。
现有技术文献
专利文献
专利文献1:日本特表2007-515391号公报
专利文献2:日本特表2008-506409号公报
发明内容
发明所要解决的课题
但是，现有法中所提出的溶剂的尿素水溶液，其溶解蛛丝蛋白质的力弱，胍水溶液或六氟异丙醇(HFIP)等价格昂贵，且溶剂残存时，难以适用于生物体。另外，关于现有的丝素蛋白的发泡体，水分吸收性不清楚。
本发明为了解决上述现有的问题，提供一种水分吸收性优异的多肽多孔质体，另外，提供一种对生物体的适用优异的多肽多孔质体及其制造方法。
用于解决课题的技术方案
本发明的多肽多孔质体为来自蛛丝蛋白质的多肽多孔质体，其特征在于，所述多肽含有非水溶性多肽，表观密度为0.1g/cm3以下。
本发明的多肽多孔质体的制造方法的特征在于，包括：使来自蛛丝蛋白质的多肽溶解于选自由下述(A)～(C)构成的组中的至少一种溶解用溶剂而得到多肽的溶液的溶液生成工序；通过将所述溶液生成工序中生成的溶液替换为水溶性溶剂而得到多肽凝胶的工序；和将所述多肽凝胶进行干燥的工序。
(A)二甲基亚砜
(B)在二甲基亚砜中加入有无机盐的溶液
(C)在N,N-二甲基甲酰胺中加入有无机盐的溶液
予以说明，在此所说的“使多肽溶解于溶解用溶剂”包含使多肽完全溶解于溶解用溶剂、和通过使多肽的微粒分散于溶解用溶剂中而成为使多肽的微粒实质上溶解于溶解用溶剂的形态这两者。以下，在相同的意义中使用。
发明效果
本发明在制作多肽溶液时使用特定的溶剂，通过替换为水溶性溶剂而取得多肽凝胶并进行干燥，由此可以制造几乎不含有残存溶剂或残存溶液非常少的多肽多孔质体，由此，可以提供对生物体的适用优异的多肽多孔质体。另外，本发明的多肽多孔质体通过表观密度充分地缩小而内部的空隙量增大，因此，发挥高的水分吸收性。该多孔质体也称为干凝胶(xerogel)，为在固相的骨架中具有空隙的网眼结构体。此外，本发明中使用的溶剂为在丙烯酸系纤维或聚酰亚胺的制造中所使用的溶剂，也具有成本廉价的优点。
附图说明
图1是本发明的一实施例的多肽多孔质体的光学照片。
图2是本发明的一实施例的多肽多孔质体的扫描型电子显微镜(SEM)的倍率70的照片。
图3是本发明的一实施例的多肽多孔质体的扫描型电子显微镜(SEM)的倍率200的照片。
图4是本发明的一实施例的多肽多孔质体的扫描型电子显微镜(SEM)的倍率1,000的照片。
具体实施方式
本发明的蛋白质使用来自蛛丝蛋白质的多肽。来自蛛丝蛋白质的多肽只要是来自天然型蛛丝蛋白质或类似的多肽即可，没有特别限定。例如包含天然型蛛丝蛋白质的变异体、类似体或衍生物等。从坚韧性优异的观点出发，上述重组蛛丝蛋白质优选为来自蜘蛛的大壶状腺中产生的大吐丝管牵引丝蛋白质的重组蛛丝蛋白质。作为上述大吐丝管牵引丝蛋白质，可列举来自美国络新妇蛛(Nephila clavipes)的大壶状腺丝蛋白MaSp1或MaSp2、来自十字圆蛛(Araneus diadematus)的ADF3或ADF4等。
另外，上述重组蛛丝蛋白质可以为来自蜘蛛的小壶状腺中所产生的小吐丝管牵引丝的重组蛛丝蛋白质。作为上述小吐丝管牵引丝蛋白质，可列举来自美国络新妇蛛(Nephila clavipes)的小壶状腺丝蛋白MiSp1或MiSp2。
此外，上述重组蛛丝蛋白质可以为来自蜘蛛的鞭毛状腺(flagelliform gland)中所产生的横丝蛋白质的重组蛛丝蛋白质。作为上述横丝蛋白质，可列举例如来自美国络新妇蛛(Nephila clavipes)的鞭毛状丝蛋白质(flagelliform silk protein)等。
作为来自所述大吐丝管牵引丝蛋白质的多肽，可列举含有式1：REP1-REP2(1)所示的氨基酸序列的单元2个以上、优选4个以上、更优选6个以上的多肽。予以说明，在来自所述大吐丝管牵引丝蛋白质的组多肽中，式(1)：REP1-REP2(1)所示的氨基酸序列的单元可以相同，也可以不同。上述式(1)中，REP1是指聚丙氨酸。在所述REP1中，连续排列的丙氨酸优选为2残基以上，更优选为3残基以上，进一步优选为4残基以上，特别优选为5残基以上。另外，在所述REP1中，连续排列的丙氨酸优选为20残基以下，更优选为16残基以下，进一步优选为14残基以下，特别优选为12残基以下。上述式(1)中，REP2为由10～200残基的氨基酸构成的氨基酸序列，所述氨基酸序列中所含的甘氨酸、丝氨酸、谷氨酰胺、脯氨酸及丙氨酸的总计残基数相对于氨基酸残基数整体为40％以上，优选为50％以上，更优选为60％以上。
在大吐丝管牵引丝中，所述REP1相当于在纤维内形成结晶β片材的结晶区域，所述REP2相当于在纤维内更具有柔软性、且大部分欠缺有规则的结构的无定型区域。而且，所述[REP1-REP2]相当于由结晶区域和无定型区域构成的重复区域(重复序列)，为牵引丝蛋白质的特征的序列。
作为含有上述式1：REP1-REP2(1)所示的氨基酸序列的单元2个以上的多肽，可列举例如具有序列号1、序列号2、序列号3及序列号4中的任一序列号所示的氨基酸序列的来自ADF3的重组蛛丝蛋白质。序列号1所示的氨基酸序列相当于在从NCBI数据库中获得的ADF3的部分的氨基酸序列(NCBI的基因库的登录号：AAC47010、GI：1263287)的N末端附加有由起始密码子、His10标签及HRV3C蛋白酶(Human rhinovirus 3C蛋白酶)识别位点构成的氨基酸序列(序列号5)的氨基酸序列的从第1残基至第631残基的氨基酸序列。序列号2所示的氨基酸序列为在N末端附加有由起始密码子、His10标签及HRV3C蛋白酶(Humanrhinovirus3C蛋白酶)识别位点构成的氨基酸序列(序列号5)的ADF3的氨基酸序列(NCBI的基因库的登录号：AAC47010、GI：1263287)中，使第1～13号的重复区域以成为大约2倍的方式增加，同时以在第1154号氨基酸残基上终止的方式使翻译变异的氨基酸序列。序列号3所示的氨基酸序列为在从NCBI数据库中获得的ADF3的部分的氨基酸序列(NCBI的基因库的登录号：AAC47010、GI：1263287)的N末端附加有由起始密码子、His10标签及HRV3C蛋白酶(Human rhinovirus 3C蛋白酶)识别位点构成的氨基酸序列(序列号5)的氨基酸序列。序列号4所示的氨基酸序列为在N末端附加有由起始密码子、His10标签及HRV3C蛋白酶(Humanrhinovirus 3C蛋白酶)识别位点构成的氨基酸序列(序列号5)的ADF3的氨基酸序列(NCBI的基因库的登录号：AAC47010、GI：1263287)中，使第1～13号的重复区域以成为大约2倍的方式增加的氨基酸序列。另外，作为含有上述式1：REP1-REP2(1)所示的氨基酸序列的单元2个以上的多肽，可以使用包含在序列号1、序列号2、序列号3及序列号4中的任一序列号所示的氨基酸序列中1个或多个的氨基酸被替换、缺失、插入和/或附加的氨基酸序列、且具有由结晶区域和无定型区域构成的重复区域的多肽。
本发明中，“1个或多个”是指例如1～40个、1～35个、1～30个、1～25个、1～20个、1～15个、1～10个、或1个或数个。另外，本发明中，“1个或数个”是指1～9个、1～8个、1～7个、1～6个、1～5个、1～4个、1～3个、1～2个、或1个。
作为来自上述小吐丝管牵引丝蛋白质的重组蛛丝蛋白质，可列举含有式2：REP3(2)所示的氨基酸序列的多肽。在上述式2中，REP3是指由(Gly-Gly-Z)m(Gly-Ala)l(A)r构成的氨基酸序列，Z是指任意一个氨基酸，特别优选为选自由Ala、Tyr及Gln构成的组中的一个氨基酸。另外，m优选为1～4，l优选为0～4，r优选为1～6。
在蛛丝中，小吐丝管牵引丝从蜘蛛的巢穴的中心卷绕成螺旋状，作为巢穴的增强材料使用，或作为包住捕捉的猎获物的丝被利用。已知有与大吐丝管牵引丝相比时，拉伸强度差，但伸缩性高。其认为是因为，在小吐丝管牵引丝中，许多结晶区域由甘氨酸和丙氨酸交替地连结的区域形成，因此，与仅由丙氨酸形成结晶区域的大吐丝管牵引丝相比，结晶区域的氢键容易变弱。
作为来自上述横丝蛋白质的重组蛛丝蛋白质，可列举含有式3：REP4(3)所示的氨基酸序列的多肽。在上述式3中，REP4是指由(Gly-Pro-Gly-Gly-X)n构成的氨基酸序列，X是指任意一个氨基酸，特别优选为选自由Ala、Ser、Tyr及Val构成的组中的一个氨基酸。另外，n表示至少4以上的数字，优选为10以上，更优选为20以上。
在蛛丝中，横丝的重要特征在于不具有结晶区域、具有由无定形区域构成的重复区域为。由于在大吐丝管牵引丝等中，具有由结晶区域和无定形区域构成的重复区域，因此，推测为同时具有高的应力和伸缩性。另一方面，关于横丝，与大吐丝管牵引丝相比时，应力差，但具有高伸缩性。其认为是因为，横丝的大部分由无定形区域构成。
所述多肽可以使用以含有编码多肽的基因的表达载体中进行了转化的宿主而制造。基因的制造方法没有特别限制，将编码天然型蛛丝蛋白质的基因从来自蜘蛛的细胞通过聚合酶连锁反应(PCR)等进行扩增而克隆、或化学性地合成。基因的化学的合成方法也没有特别限制，例如，可以以由NCBI的Web数据库等获得的天然型蛛丝蛋白质的氨基酸序列信息为基础，将由AKTA oligopilot plus10/100(GE Healthcare Japan株式会社)等自动合成的低聚核甙酸通过PCR等连结而合成。此时，为了容易进行蛋白质的精制或确认，可以合成编码包含在所述的氨基酸序列的N末端附加有由起始密码子及His10标签构成的氨基酸序列的氨基酸序列的蛋白质的基因。作为所述表达载体，可以使用由DNA序列能表达蛋白质的质粒、噬菌体、病毒等。作为所述质粒型表达载体，只要是在宿主细胞内目标基因表达、且自身可以扩增的表达载体即可，没有特别限定。例如使用大肠杆菌Rosetta(DE3)作为宿主的情况下，可以使用pET22b(+)质粒载体、pCold质粒载体等。其中，从蛋白质的生产率的观点出发，优选使用pET22b(+)质粒载体。作为所述宿主，可以使用例如动物细胞、植物细胞、微生物等。
另外，作为所述多肽，可使用通过与水溶性溶剂的接触可形成凝胶的多肽。在可形成凝胶的多肽中，例如有具有在将所述溶液生成工序中生成的溶液替换为水溶性溶剂时容易凝聚的特性的多肽(例如分子量比较大的多肽)等。予以说明，即使为不具有这样的易凝聚性的多肽，例如如果溶液生成工序中生成的溶液中的浓度升高，则通过所述的溶液替换为水溶性溶剂而凝聚，形成多肽凝胶。凝聚可以通过在高温状态降低温度而至低温状态下发生。总之，多肽多孔质体在将所述溶液生成工序中生成的溶液替换为水溶性溶剂时凝聚，使用形成凝胶的多肽而制造，另外，含有这样的多肽而构成。
多肽多孔质体具有连续孔。推定为：该连续孔在真空冷冻干燥工序中，由脱离的水分的透过孔形成。该结果，认为形成干凝胶(xerogel)，成为在固相的骨架中具有空隙的网眼结构体。这种多肽多孔质体的表观密度设为0.1g/cm3以下，优选设为表观密度为0.01～0.08g/cm3的范围内的值。予以说明，在表观密度低于0.01g/cm3的情况下，由于表观密度过小，因此空隙量变得过大，有可能产生多肽多孔质体的强度降低这样的不良。
所述多孔质体的水分最大吸收倍率以重量换算计优选为2倍以上，进一步优选为3倍以上。优选的上限为20倍以下，进一步优选为18倍以下。所述水分最大吸收倍率为使水分最大吸收、即使倾斜也不被水润湿这一点。
本发明的多肽多孔质体通过如下工序来得到，即，使来自蛛丝蛋白质的多肽溶解于选自由下述(A)～(C)构成的组中的至少一种溶解用溶剂而得到多肽的溶液的溶液生成工序；通过将所述溶液生成工序中生成的溶液替换为水溶性溶剂而得到多肽凝胶的工序；和将所述多肽凝胶进行干燥的工序。
(A)二甲基亚砜
(B)在二甲基亚砜中加入有无机盐的溶液
(C)在N,N-二甲基甲酰胺中加入有无机盐的溶液
在所述溶液生成工序和将所述溶剂替换为水溶性溶剂的工序之间插入流入模框、成形为规定的形状的工序，或者可以通过在将所述溶剂替换为水溶性溶剂的工序之后进行切割而制成规定的形状。在得到的多肽多孔质的内部可以存在选自由二甲基亚砜及N,N-二甲基甲酰胺构成的组中的至少一种。所述溶解用溶剂的存在量没有特别限定，为在将所述溶液生成工序中所生成的溶液替换为所述水溶性溶剂之后无意地残存的程度的量。
溶解用溶剂除所述(A)～(C)所示的物质之外，可以含有醇和/或水。所述溶解用溶剂为极性溶剂，具有容易吸收空气中的水分的性质，因此，通常所出售的溶剂也有含有数％水的情况。可以含有该程度的水或醇。但是，作为溶解用溶剂起作用的是所述(A)～(C)所示的物质。
所述水溶性溶剂是指含有水的溶剂，可列举例如水、水溶性缓冲液、生理食盐水等。从对人体的适应性高的观点出发，所述水溶性溶剂优选为水。作为所述水，没有特别限定，可以使用纯水、蒸馏水、超纯水等。
溶液生成工序后的溶液粘度优选为5～80cP(厘泊)，进一步优选为10～50cP。只要是所述的范围，则适用性良好且便利。
本发明中，作为溶剂，使用含有作为极性溶剂的DMSO和/或DMF的溶剂。DMSO为熔点18.4℃、沸点189℃，DMF为熔点-61℃、沸点153℃，与现有法中所使用的六氟异丙醇(HFIP)的沸点59℃、六氟丙酮(HFAc)的沸点-26.5℃相比时，沸点相当高，溶解性也相应地良好。另外，DMSO及DMF一般在工业领域中也作为丙烯酸纤维的聚合、纺丝液使用，也作为聚酰亚胺的聚合溶剂使用，因此，为成本也廉价且也确认安全性的物质。
在DMSO或DMF中加入无机盐时，介质的溶解度进一步提高。作为无机盐，为选自碱金属卤化物(例如LiCl、LiBr等)、碱土金属卤化物(例如CaCl2)、碱土金属硝酸盐(例如Ca(NO3)2等)、硫代氰酸钠(例如NaSCN等)中的至少一种。将溶解成分设为100质量％时，无机盐的比例优选0.1～20质量％的范围。
所述多肽凝胶是将溶剂替换为水溶性溶剂而生成的。此时，所述多肽凝胶在水中不溶解。替换为水溶性溶剂的工序优选将溶解于溶剂的多肽溶液放入透析膜内，浸渍于水溶性溶剂中，更换1次以上水溶性溶剂的方法。具体而言，将溶剂替换为水溶性溶剂的工序优选将溶液生成工序后的溶液放入透析膜中，在所述溶液的100倍以上的水溶性溶剂(1次所用的分量)中静置3小时，重复该水溶性溶剂替换总计3次以上。关于透析膜，只要是不透过溶液中的多肽的尺寸即可，例如可以使用纤维素透析膜等。如果重复水溶性溶剂替换，则可以使溶剂接近于零。在脱溶剂工序的后半，可以不使用透析膜。
水溶性溶剂替换工序后的多肽中的溶剂：二甲基亚砜(DMSO)或N,N-二甲基甲酰胺(DMF)的残量可以利用核磁共振分光装置(NMR)来测定。作为内部标准，可以使用1,2-二氯乙烷-甲酸溶液。
在干燥工序中，优选使用真空冷冻干燥。真空冷冻干燥时的真空度优选为200帕斯卡(Pa)以下，进一步优选为150帕斯卡以下，更优选为100帕斯卡以下。通过真空干燥将水分从多肽中蒸发，通过该蒸发潜热而温度下降，成为冻结状态。真空冷冻干燥时的多肽的温度优选为70℃以下，进一步优选为60℃以下，更优选为50℃以下。予以说明，在真空冷冻干燥之前，可以在-10～-45℃的温度下预冻结10～36小时左右。冻结干燥后的水分率优选为5.0％以下，进一步优选为3.0％以下。
实施例
以下，使用实施例进一步具体地说明本发明。予以说明，本发明并不限定于下述的实施例。对使用水作为水溶性溶剂的例子进行说明。
＜各测定方法＞
(1)溶剂残量测定
作为内部标准，准备1,2-二氯乙烷-甲酸溶液浓度3,100ppm(0.00310mg/ml)。将蛋白质溶液(在10ml的甲酸中溶解有0.1g的多肽多孔质体的溶液)500μl和内部标准溶液500μl进行混合。进而，将用于H-NMR测定的乙腈氘代溶剂加入同量程度并稀释为约2倍，进行了H-NMR测定(NMR的机种：JEOL社JNM-ECX100)。将内部标准试样1,2-二氯乙烷的H-NMR积分强度和DMSO的H-NMR积分强度进行比较。就标准曲线的制作而言，制作3ppm～3000ppm的DMSO-甲酸溶液，按照上述协议制作标准曲线。由与标准曲线的比较求出蛋白质溶液中的DMSO浓度。DMSO浓度测定使用JEOL社制、核磁共振装置(NMR)。
(2)粘度
使用KEM社制、EMS装置。
(实施例1)
1.多肽的准备
＜ADF3Kai-A的基因的合成＞
由NCBI的Web数据库(NCBI登录号：AAC47010、GI：1263287)取得作为十字园蛛的2个主要的牵引丝蛋白质的一个的ADF3的部分的氨基酸序列，在同序列的N末端附加由起始密码子和His10标签及HRV3C蛋白酶(Human rhinovirus 3C蛋白酶)识别位点构成的氨基酸序列(序列号5)，合成编码由从该序列的N末端的第1残基至第631残基的氨基酸序列(序列号1)构成的多肽(ADF3Kai-A)的基因。其结果，取得导入有由序列号6所示的碱基序列构成的ADF3Kai-A的基因的pUC57载体(在基因的5’末端正上游具有Nde I位点，及在5’末端正下游具有Xba I位点)。其后，将同基因用Nde I及EcoR I进行限制酶处理，在pET22b(+)表达载体中重组，得到导入有ADF3Kai-A的基因的pET22b(+)载体。
＜蛋白质的表达＞
将含有上述中得到的ADF3Kai-A的基因序列的pET22b(+)表达载体转化成大肠杆菌Rosetta(DE3)。将得到的单菌落在含有氨比西林的2mL的LB培养基中培养15小时后，将该培养液1.4ml添加于含有氨比西林的140mL的LB培养基中，在37℃、200rpm的条件下培养至培养液的OD600成为3.5。接着，将OD600为3.5的培养液与50％葡萄糖140mL一起加入含有氨比西林的7L的2×YT培养基中，进一步培养至OD600成为4.0。其后，在得到的OD600为4.0的培养液中添加异丙基-β-硫代半乳糖苷(IPTG)，以使终浓度成为0.5mM，诱导蛋白质表达。在添加IPTG后经过2小时的时刻，将培养液进行离心分离，回收菌体。使由添加IPTG前和添加IPTG后的培养液制备的蛋白质溶液在聚丙烯酰胺凝胶中泳动，结果，依赖于添加IPTG而观察目标尺寸(约56.1kDa)的带，确认目标的蛋白质(ADF3Kai-A)表达。
＜精制＞
(1)在离心管(1000ml)中添加表达ADF3Kai-A的蛋白质的大肠杆菌的菌体约50g和缓冲液AI(20mMTris-HCl、pH7.4)300ml，用混合机(IKA社制“T18basic ULTRA-TURRAX”、水平2)使菌体分散之后，用离心分离机(Kubota社制的“Model 7000”)离心分离(11,000g、10分钟、室温)，舍弃上清液。
(2)在通过离心分离得到的沉淀物(菌体)中添加300ml缓冲液AI和0.1M的PMSF(用异丙醇溶解)3ml，用所述IKA社制的混合机(水平2)分散3分钟。其后，使用高压均质机(GEANiro Saovi社制的“Panda Plus 2000”)将菌体重复破碎3次。
(3)在被破碎的菌体中加入含有3w/v％的SDS的缓冲液B(50mMTris-HCL、100mMNaCl、pH7.0)300mL，用所述IKA社制的混合机(水平2)充分地分散之后，用振荡器(TIETECH社制、200rpm、37℃)搅拌60分钟。其后，用所述Kubota社制的离心分离机进行离心分离(11,000g、30分钟、室温)，舍弃上清液，得到SDS清洗颗粒(沉淀物)。
(4)将SDS清洗颗粒以成为100mg/mL的浓度的方式在含有1M的氯化锂的DMSO溶液中悬浮，在80℃下热处理1小时。其后，用所述Kubota社制的离心分离机进行离心分离(11,000g、30分钟、室温)，回收上清液。
(5)相对于回收的上清液准备3倍量的乙醇，在乙醇中加入回收的上清液，在室温下静置1小时。其后，用所述Kubota社制的离心分离机进行离心分离(11,000g、30分钟、室温)，回收凝聚蛋白质。接着，使用纯水清洗凝聚蛋白质，通过离心分离回收凝聚蛋白质，将该工序重复3次之后，用冻结干燥机除去水分，回收冻结干燥粉末。得到的冻结干燥粉末中的目标蛋白质ADF3Kai-A(约56.1kDa)的精制度通过将粉末的聚丙烯酰胺凝胶电泳(CBB染色)的结果使用Totallab(nonlinear dynamics ltd.)进行图像分析来确认。其结果，ADF3Kai-A的精制度约为85％。
2.溶液的调整
将蛛丝蛋白质(ADF3Kai-A)的粉末0.8g放入DMSO(含有1M的LiCl)20ml中，在80℃下使其溶解30分钟。其后，除掉废物和泡。溶液的溶液粘度为30.8cP(厘泊)。将该溶液放入透析管(三光纯药株式会社纤维素管36/32)中。
3.水替换
将所述透析管放入用3升的纯水充满的烧杯中。其后静置3小时之后，更换水，进行总计6次该操作。由此，溶液中的蛛丝蛋白质凝聚，可以制作几乎全部的DMSO替换为水的水凝胶。得到的凝胶的水分率为95.3质量％。
4.真空冷冻干燥
将所述水凝胶利用冻结干燥机(东京理化器械制的“FDU-1200”)、在14Pa、-45℃的条件下冻结干燥15小时。
5.结果
(1)得到的多孔质体的溶剂残量相对于多孔质体100g为2.63g。
(2)得到的多孔质的表观密度为0.077g/cm3。予以说明，表观密度按照公知的方法求出。以下所示的实施例2～4的密度(表观密度)也同样地求出。
(3)得到的多孔质体的水分最大吸收倍率为15.4倍。该水分吸收倍率设为使水分最大吸收、即使倾斜也不被水润湿这一点。以下也同样。
(4)得到的多孔质体如图1～4所示。
(实施例2)
使用与实施例1相同的多肽，也同样地进行操作，制作以下的凝胶。作为浓度淡的凝胶，使用多肽粉末0.4g，准备20mg/ml的掺杂剂(dope)(DMSO+1M的LiCl)，制作凝胶。掺杂剂粘度为13.9cP。得到的凝胶的水分率为98.8质量％。将该凝胶在与实施例1相同的条件下进行真空冷冻干燥。得到的多孔质体的密度为0.020g/cm3。得到的多孔质体的水分最大吸收倍率为7.2倍。
(实施例3)
使用与实施例1相同的多肽，也同样地进行操作，制作以下的凝胶。使用多肽粉末0.4g，准备20mg/ml的掺杂剂(没有盐的DMSO)，制作凝胶。得到的凝胶的水分率为97.4质量％。将该凝胶在与实施例1相同的条件下进行真空冷冻干燥。得到的多孔质体的密度为0.036g/cm3。得到的多孔质体的水分最大吸收倍率为6.1倍。
(实施例4)
使用与实施例1相同的多肽，也同样地进行操作，制作以下的凝胶。使用多肽粉末0.4g，准备20mg/ml的掺杂剂(DMF+1M的LiCl)，制作凝胶。得到的凝胶的水分率为98.2质量％。将该凝胶在与实施例1相同的条件下进行真空冷冻干燥。得到的多孔质体的密度为0.039g/cm3。得到的多孔质体的水分最大吸收倍率为3.8倍。
予以说明，在上述实施例1～4中，在替换工序中使用水，但用其它水溶性溶剂也可得到同样的效果。
工业上的可利用性
本发明的多肽多孔质体作为药剂、香料等缓释基材、吸收材料等是有用的。
序列号1～5 氨基酸序列
序列号6 碱基序列
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Claims (7)

1.一种多肽多孔质体，其为来自蛛丝蛋白质的多肽多孔质体，其特征在于，所述多肽含有非水溶性多肽，表观密度为0.1g/cm3以下；在所述多肽多孔质体中，在内部存在选自由二甲基亚砜及N,N-二甲基甲酰胺构成的组中的至少一种。
2.根据权利要求1所述的多肽多孔质体，其中，
所述多肽多孔质体的表观密度为0.01～0.08g/cm3。
3.根据权利要求1或2所述的多肽多孔质体，其中，所述多肽多孔质体的水分吸收倍率为2～20倍。
4.根据权利要求1～3中任一项所述的多肽多孔质体的制造方法，其特征在于，包括：
使来自蛛丝蛋白质的多肽溶解于选自由下述(A)～(C)构成的组中的至少一种溶解用溶剂而得到多肽的溶液的溶液生成工序；通过将所述溶液生成工序中生成的溶液替换为水溶性溶剂而得到多肽凝胶的工序；和将所述多肽凝胶进行干燥的工序，
(A)二甲基亚砜、
(B)在二甲基亚砜中加入有无机盐的溶液、
(C)在N,N-二甲基甲酰胺中加入有无机盐的溶液。
5.根据权利要求4所述的多肽多孔质体的制造方法，其中，
所述多肽多孔质体是使用将所述多肽的溶液替换为水的水溶液而生成的。
6.根据权利要求4或5所述的多肽多孔质体的制造方法，其中，
替换为所述水溶性溶剂的工序将溶解于所述溶解用溶剂的多肽的溶液放入透析膜内，浸渍于水溶性溶剂中，更换1次以上水溶性溶剂。
7.根据权利要求4或5所述的多肽多孔质体的制造方法，其中，
所述干燥为真空冷冻干燥。
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