CN104621339A - 一种提取水飞蓟分离蛋白的方法 - Google Patents
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Abstract
一种提取水飞蓟分离蛋白的方法，涉及一种提取食品蛋白方法，包括以下过程：（1）将脱脂处理后的水飞蓟籽仁粉碎；过80目筛制得水飞蓟籽仁脱脂粉，装入实验袋，封好口，冷冻备用；（2）以步骤（1）中制备的水飞蓟籽仁脱脂粉为原料，在一定的温度下用提取溶剂浸提。（3）浸提结束后，离心收集上清液；（4）在收集的上清液中滴加HCl，以使上清液中蛋白质沉淀；（5）离心，倾去上清液，收集沉淀；（6）将收集到的蛋白质沉淀真空冷冻干燥12-18h，即得水飞蓟分离蛋白。采用本发明的方法提取水飞蓟中的分离蛋白，工艺过程简单、合理、对环境无污染（酸碱中和）、蛋白质提取率高、操作时间短、具有很高的实用价值，可为与水飞蓟蛋白质相关的研究提供高质量的样品。
Description
技术领域
本发明涉及一种提取食品蛋白方法，特别是涉及一种提取水飞蓟分离蛋白的方法。
背景技术
水飞蓟，Silybum marianum(L.)Gaertn，别名水飞雉、奶蓟，为菊科一至二年生草本植物。水飞蓟很早就作为保肝的草药在民间流传。1947年，水飞蓟被收载于《美国处方剂》中。水飞蓟果实中有较大药用价值的是水飞蓟素、水飞蓟油和水飞蓟蛋白。其中，水飞蓟素主要存在壳中，籽仁中主要含有蛋白质、油脂和糖类。经脱去油脂后的水飞蓟粕可用于提取水飞蓟素。提取水溶性水飞蓟素后的渣饼富含淀粉、蛋白质。有研究表明，水飞蓟蛋白是一种优质植物蛋白，不仅蛋白质含量高且氨基酸种类齐全，具有较高的营养价值，其效价介于大豆蛋白和小麦蛋白之间。
发明内容
本发明的目的在于提供一种提取水飞蓟分离蛋白的方法，本发明利用蛋白质在碱条件下溶解度较高，而在等电点条件下溶解度很低的特性，通过调节分散体系 pH 值将蛋白质与淀粉和纤维素分离出来。通过实验对比，筛选出最适的提取溶剂和最优的提取条件。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
一种提取水飞蓟分离蛋白的方法，所述方法包括以下过程：
（1）将脱脂处理后的水飞蓟籽仁粉碎；过80目筛制得水飞蓟籽仁脱脂粉，装入实验袋，封好口，冷冻备用；
（2）以步骤（1）中制备的水飞蓟籽仁脱脂粉为原料，在一定的温度下用提取溶剂浸提。
（3）浸提结束后，离心收集上清液；
（4）在收集的上清液中滴加HCl，以使上清液中蛋白质沉淀；
（5）离心，倾去上清液，收集沉淀；
（6）将收集到的蛋白质沉淀真空冷冻干燥12-18h，即得水飞蓟分离蛋白。
所述的一种提取水飞蓟分离蛋白的方法，所述步骤（1）中所述的脱脂处理为用乙醚脱脂处理三次。
所述的一种提取水飞蓟分离蛋白的方法，所述步骤（2）中的提取溶剂为0.05mol/L的Tris-HCl溶液（pH=8），其料液比为1：16，浸提温度为40-50℃。浸提过程中不断搅拌，用1mol/L NaOH溶液调体系pH至11，浸提时间为60-80min。
所述的一种提取水飞蓟分离蛋白的方法，步骤（3）中所述的离心条件为低温冷冻4000r/min，离心30min。
所述的一种提取水飞蓟分离蛋白的方法，步骤（4）中所述的HCl为1mol/L，调节反应体系的pH 至5.5。
所述的一种提取水飞蓟分离蛋白的方法，步骤（5）中所述的离心条件为低温冷冻4000r/min，离心30min。
所述的一种提取水飞蓟分离蛋白的方法，提取过程中浸泡原料用水、缓冲液的配置用水均为去离子水。
本发明的优点与效果是：
本发明通过单因素实验和响应面优化，筛选合适的提取剂和最优提取条件。该套提取技术操作简单、用时短，能较其他方法有效地提高蛋白质的提取率。
采用本发明的方法提取水飞蓟中的分离蛋白，工艺过程简单、合理、对环境无污染（酸碱中和）、蛋白质提取率高、操作时间短、具有很高的实用价值，可为与水飞蓟蛋白质相关的研究提供高质量的样品。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进行详细说明。
实施例1 不同提取液对SMP提取效果的影响结果
取5份2g过80目筛的水飞蓟籽仁脱脂粉，按1:16的料液比分别溶解于去离子水、1.0mol/LNaCl溶液、70%乙醇溶液、0.1mol/LPBS溶液（pH=8）、0.05mol/LTris-HCl溶液（pH=8）；50℃水浴加热50min，然后4000r/min离心30min，取上清液；用凯氏定氮法测定上清液中的蛋白质含量。结果表明：pH=8的Tris-HCl溶液提取水飞蓟分离蛋白（SMPI）的得率最高，达41.52%，优于其他。
实施例2
取2g过80目筛的水飞蓟籽仁脱脂粉，按1:16的料液比加入到0.5mol/L的Tris-HCl溶液中，调节pH为8；在50℃条件下水浴加热50min；然后4000r/min离心30min。收集上清液，滴加HCl，使上清液中蛋白质沉淀。4000r/min离心30min，倾去上清液，将收集到的蛋白质沉淀真空冷冻干燥12-18h，即得水飞蓟分离蛋白。
实施例3
除以下区别外，其他同实施例2。
取2g过80目筛的水飞蓟籽仁脱脂粉，分别按液料比为1:14加入到0.5mol/L的Tris-HCl溶液中，调节pH=9。在45℃条件下水浴加热50min；然后4000r/min离心30min。收集上清液，滴加HCl，使上清液中蛋白质沉淀。4000r/min离心30min，倾去上清液，将收集到的蛋白质沉淀真空冷冻干燥12-18h，即得水飞蓟分离蛋白。
本研究在对比水飞蓟蛋白质提取方法的基础上，筛选出最佳的提取方法为碱提酸沉法，结合单因素试验，并通过响应面分析，得到了提取水飞蓟籽仁中蛋白质的最佳工艺条件为：pH=8，液料比1：16，温度50℃，最佳提取液为Tris-HCl溶液。
Claims (7)
1.一种提取水飞蓟分离蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括以下过程：
（1）将脱脂处理后的水飞蓟籽仁粉碎；过80目筛制得水飞蓟籽仁脱脂粉，装入实验袋，封好口，冷冻备用；
（2）以步骤（1）中制备的水飞蓟籽仁脱脂粉为原料，在一定的温度下用提取溶剂浸提；
（3）浸提结束后，离心收集上清液；
（4）在收集的上清液中滴加HCl，以使上清液中蛋白质沉淀；
（5）离心，倾去上清液，收集沉淀；
（6）将收集到的蛋白质沉淀真空冷冻干燥12-18h，即得水飞蓟分离蛋白。
2.根据权利要求1述的一种提取水飞蓟分离蛋白的方法，其特征在于，所述步骤（1）中所述的脱脂处理为用乙醚脱脂处理三次。
3.根据权利要求1所述的一种提取水飞蓟分离蛋白的方法，其特征在于，所述步骤（2）中的提取溶剂为0.05mol/L的Tris-HCl溶液（pH=8），其料液比为1：16，浸提温度为40-50℃；
浸提过程中不断搅拌，用1mol/L NaOH溶液调体系pH至11，浸提时间为60-80min。
4. 根据权利要求1所述的一种提取水飞蓟分离蛋白的方法，其特征在于：步骤（3）中所述的离心条件为低温冷冻4000r/min，离心30min。
5. 根据权利要求1所述的一种提取水飞蓟分离蛋白的方法，其特征在于：步骤（4）中所述的HCl为1mol/L，调节反应体系的pH 至5.5。
6. 根据权利要求1所述的一种提取水飞蓟分离蛋白的方法，其特征在于：步骤（5）中所述的离心条件为低温冷冻4000r/min，离心30min。
7. 根据权利要求1所述的一种提取水飞蓟分离蛋白的方法，其特征在于：提取过程中浸泡原料用水、缓冲液的配置用水均为去离子水。
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