CN104945532A - 白子菜多糖的制备方法 - Google Patents
白子菜多糖的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104945532A CN104945532A CN201510426645.6A CN201510426645A CN104945532A CN 104945532 A CN104945532 A CN 104945532A CN 201510426645 A CN201510426645 A CN 201510426645A CN 104945532 A CN104945532 A CN 104945532A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- gynura divaricata
- polysaccharide
- purified water
- gynura
- concentration
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Abstract
本发明公开了具有降血糖作用的白子菜多糖的制备方法，方案Ⅰ用水提醇沉法得到粗多糖后，再采用大孔吸附树脂和大孔阴离子交换树脂联用ZTC天然澄清剂法，最后用透析法去除小分子物质得到白子菜多糖，ZTC天然澄清剂能达到很好的絮凝效果，去除蛋白质、鞣质和大分子无机盐类物质；方案Ⅱ是水提醇沉得到粗多糖后，采用大孔吸附树脂和大孔阴离子交换树脂联用酚类吸附剂聚乙烯吡咯烷酮法，并经过透析得到白子菜多糖；两种方案得到的白子菜多糖含量由19～20％提高到90～95％，白子菜多糖为类白色无定形粉末，易溶于水，较之之前的白子菜粗多糖杂质多、颜色深、黏性大有意想不到的效果。
Description
技术领域
本发明属于中药提取技术领域，具体涉及具有降血糖作用的白子菜多糖的制备方法。
背景技术
白子菜(Gynura divaricata(L.)DC)为菊科三七属植物，又名白背三七、富贵菜、降糖草、神仙草等。白子菜已经于2010年被批准为新资源食品。我国广西、福建、山西等地已经大规模培植白子菜，其中北方种植白子菜已申请发明专利102224803A。民间用白子菜具有降血糖的作用。已公开的中国发明专利200710084533.2、200610052502.4、201110372288.1、201210200767.X、200810118639.4均说明白子菜具有降血糖的作用。
动物药理试验证明，白子菜多糖具有显著的降血糖作用(张钱钱，白子草多糖的分离纯化及其降血糖作用研究，福建中医药大学，2014，6；刘薇薇，白背三七多糖的分离表征及α-葡萄糖苷酶抑制活性研究，北京工商大学，2012)，张钱钱将分离得到的白子草酸性多糖GDPs-3进行糖尿病小鼠降血糖作用研究表明其降血糖作用机制可能是通过提高机体抗氧化酶活性、清除活性氧自由基以解除自由基对肝脏的损害实现的。
从白子菜中提取多糖时，通用的方法是水提，浓缩，加入沉淀剂(乙醇)得粗多糖，其多糖含量低、纯度小、杂质多(中国专利200810118639.4)，需进一步分离纯化。目前，白子菜多糖的分离纯化工艺仍然是采用传统的Sevage法去除蛋白质(姜曼花，邱细敏，刘胜姿等，白背三七多糖的提取纯化及含量测定，时珍国医国药，2008，19(9):2147-2151)，由于Sevage法除蛋白操作繁琐、成本较高，所得多糖纯度比较低；也有采用ZTC天然澄清剂联合大孔树脂HPD600纯化白子菜多糖(柯小温，白子草有效部位的提取纯化及其胶囊的制备，福建农林大学，2012)，先用ZTC天然澄清剂纯化粗多糖，再上大孔树脂纯化多糖，所得多糖含量较低，且多糖颜色较重。
申请号为201410673249.9的中国发明专利，提供了白子菜酸性多糖GDPs-3的制备方法，将白子菜干燥叶水提醇沉得粗多糖后，经木瓜蛋白酶-Sevage法除蛋白，再过DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换柱，以水、不同浓度梯度的氯化钠洗脱，收集0.3mol/L氯化钠洗脱液，浓缩，透析后得白子菜酸性多糖GDPs-3。其对白子菜多糖的成分进行了分离，并对酸性多糖GDPs-3的药理作用进行了研究。
发明内容
本发明要解决的技术问题在于提供白子菜多糖含量高、杂质少、颜色好的制备方法。
为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案如下：
Ⅰ、白子菜多糖的制备方法，包括如下步骤：
A、白子菜粗多糖的提取
(1)将白子菜的药用部位粉碎，过20目筛，得白子菜粗粉；
(2)向白子菜粗粉中加入浓度为70％～95％的乙醇，乙醇与白子菜粗粉的重量比为6～10:1，加热回流提取2～3次，每次加热回流时间为1～2h，过滤得乙醇提取液和白子菜残渣，乙醇提取液弃去，将白子菜残渣晾干，加入10倍重量的纯化水，加热回流提取2～3次，每次加热回流时间为1～2h，合并水提取液；
(3)向水提取液中加入浓度为95％的乙醇至乙醇浓度达到80％，静置24～48h，3000r/min离心15min，得白子菜多糖沉淀；
(4)将白子菜多糖沉淀分别以石油醚、无水乙醇、浓度为95％的乙醇依次洗涤，干燥，得白子菜粗多糖；
B、白子菜粗多糖初步纯化
(1)将白子菜粗多糖溶于纯化水中，其中白子菜粗多糖与纯化水的重量比为1:6～10，3000r/min离心10min，弃去沉淀，取上清液，备用；
(2)大孔吸附树脂预处理：将大孔吸附树脂加入浓度为95％的乙醇浸泡4～6h，并以纯化水洗至无醇味；
(3)按照白子菜粗粉:树脂＝1：2～4的重量比将大孔吸附树脂进行湿法装柱，径高比为1:6～10，将上清液上柱，吸附，以0.5～1mL/min的流速流出，至与大孔吸附树脂平齐的时候，以6～10倍柱体积纯化水洗脱，收集洗脱液，并和流出液混合均匀，备用；
C、ZTC天然澄清剂进一步纯化
(1)将混合液加热至80℃，加入配置好的浓度为1％的ZTC天然澄清剂B组分黏胶液，其加入量为混合液重量的4-6％，，反应1～2h，每30min搅拌一次；
(2)待上述反应液降温至60℃，加入配置好的浓度为1％的ZTC天然澄清剂A组分黏胶液，其加入量为混合液重量的2～3％，反应0.5～1h，每30min搅拌一次，放冷，3000r/min离心10min，收集上清液，备用；
D、大孔阴离子交换树脂纯化白子菜多糖
(1)大孔阴离子交换树脂预处理：将大孔阴离子交换树脂以3～5％盐酸浸泡4～6h，以纯化水洗至中性，再以2～4％氢氧化钠溶液浸泡4～6h，以纯化水洗至中性，备用；
(2)将大孔阴离子交换树脂湿法装柱，径高比为1:6～8，取步骤C所得上清液，上大孔阴离子交换树脂进行脱色处理，流速0.5～1mL/min，收集流出液；
E、透析
(1)将流出液浓缩至原体积的1/10，注入透析袋内，用纯化水浸泡，放置于电动磁力搅拌器上进行透析，每0.5h换一次纯化水，透析1～3天；
(2)将透析液浓缩，加入浓度为95％的乙醇至乙醇浓度达到80％，静置24h，3000r/min离心15min，得白子菜多糖沉淀；
(3)将白子菜多糖沉淀依次用石油醚、无水乙醇、浓度为95％的乙醇洗涤，干燥，所得干燥粉末即为白子菜多糖。
作为本发明的一种优选技术方案，白子菜为人工栽培品和/或野生品；白子菜为自然晾干白子菜或低温烘干白子菜；白子菜的药用部位包括根、茎、叶。
作为本发明的一种优选技术方案，方案Ⅰ步骤B中使用的大孔吸附树脂包括XDA-7、AB-8、HPD100。
作为本发明的一种优选技术方案，方案Ⅰ步骤C中使用的ZTC天然澄清剂包括ZTC1+1I型、ZTC1+1II型、ZTC1+1III型。
作为本发明的一种优选技术方案，方案Ⅰ步骤C中使用的ZTC天然澄清剂A组分黏胶液和B组分黏胶液的浓度均为1％；其配置方法：A组分为白色至微黄色粉末，1gA组分加入100g纯化水搅拌成糊状，放置24h，过滤得浓度为1％的黏胶液，备用；B组分为微黄色至浅黄色粉末，1g B组分加入100g浓度为1％的乙酸搅拌成糊状，放置24h，过滤得浓度为1％的黏胶液，备用。
作为本发明的一种优选技术方案，方案Ⅰ步骤D中使用的大孔阴离子交换树脂包括脱色1号、D900。
作为本发明的一种优选技术方案，方案Ⅰ步骤E中使用的透析袋用于截留分子量大于3000的物质。
作为本发明的一种优选技术方案，方案Ⅰ步骤A、E中使用的干燥方式为电热恒温干燥、真空干燥、冷冻干燥。
Ⅱ、白子菜多糖的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
A、白子菜粗多糖的提取
(1)将白子菜的药用部位粉碎，过20目筛，得白子菜粗粉；
(2)向所述白子菜粗粉中加入浓度为70％～95％的乙醇，此乙醇与所述白子菜粗粉的重量比为6～10:1，加热回流提取2～3次，每次加热回流时间为1～2h，过滤得乙醇提取液和白子菜残渣，此乙醇提取液弃去，将所述白子菜残渣晾干，加入10倍重量的纯化水，加热回流提取2～3次，每次加热回流时间为1～2h，合并水提取液；
(3)按照0.01g/ml的比例添加聚乙烯吡咯烷酮至所述水提取液中，加热浓缩，浓缩至白子菜粗粉的重量：浓缩液的体积＝1g/ml后，放冷，3000r/min离心15min，弃去沉淀，取上清液，备用；
(4)向所述上清液中加入浓度为95％的乙醇至乙醇浓度达到80％，静置24～48h，3000r/min离心15min，得白子菜多糖沉淀；
(5)将所述白子菜多糖沉淀分别以石油醚、无水乙醇、浓度为95％的乙醇依次洗涤，干燥，得白子菜粗多糖；
B、白子菜粗多糖初步纯化
(1)将所述白子菜粗多糖溶于纯化水中，其中白子菜粗多糖与纯化水的重量比为1:6～10，3000r/min离心10min，弃去沉淀，取上清液，备用；
(2)大孔吸附树脂预处理：将大孔吸附树脂加入浓度为95％的乙醇浸泡4～6h，并以纯化水洗至无醇味；
(3)按照白子菜粗粉:树脂＝1：2～4的重量比将所述大孔吸附树脂进行湿法装柱，径高比为1:6～10，将所述上清液上柱，吸附，以0.5～1mL/min的流速流出，至与所述大孔吸附树脂平齐的时候，以6～10倍柱体积纯化水洗脱，收集洗脱液，并和流出液混合均匀，备用；
C、大孔阴离子交换树脂纯化白子菜多糖
(1)大孔阴离子交换树脂预处理：将大孔阴离子交换树脂以3～5％盐酸浸泡4～6h，以纯化水洗至中性，再以2～4％氢氧化钠溶液浸泡4～6h，以纯化水洗至中性，备用；
(2)将所述大孔阴离子交换树脂湿法装柱，径高比为1:6～8，取步骤B所得上清液，上所述大孔阴离子交换树脂进行脱色处理，流速0.5～1mL/min，收集流出液；
D、透析
(1)将所述流出液浓缩至原体积的1/10，注入透析袋内，用纯化水浸泡，放置于电动磁力搅拌器上进行透析，每0.5h换一次纯化水，透析1～3天；
(2)将所述透析液浓缩，加入浓度为95％的乙醇至乙醇浓度达到80％，静置24h，3000r/min离心15min，得白子菜多糖沉淀；
(3)将所述白子菜多糖沉淀依次用石油醚、无水乙醇、浓度为95％的乙醇洗涤，干燥，所得干燥粉末即为白子菜多糖。
作为本发明的一种优选技术方案，方案Ⅱ步骤A中使用的聚乙烯吡咯烷酮的规格为PVP-40。
采用上述技术方案所产生的有益效果在于：制备得到白子菜多糖含量高、杂质少、颜色好，具体体现在以下几方面：
(1)大孔吸附树脂进行初步纯化去除一些蛋白质和色素类物质，洗脱液为纯化水，在有效保护多糖结构不发生变化的同时还能起到脱色的作用；
(2)ZTC天然澄清剂具有清除鞣质蛋白质的作用，且不会沉淀多糖类成分，ZTC两种组分的应用顺序在纯化过程中起很重要的作用，B组分能初步沉淀，A组分能协助。经大孔吸附树脂所得的洗脱液加入ZTC天然澄清剂，比直接的多糖溶解后加入ZTC纯化效果好：一方面不用再经稀释能达到最好的絮凝效果，能充分反应，去除蛋白质、鞣质和大分子无机盐类物质，却不影响多糖类物质的保留；另一方面经过ZTC天然澄清剂的絮凝作用，能减少大孔阴离子交换树脂的压力，使其脱色效果更好；
(3)大孔阴离子交换树脂能起到脱色的作用，去除色素等杂质；
(4)透析法能去除小分子物质；
(5)采用酚类吸附剂聚乙烯吡咯烷酮吸附去除酚类物质；
通过采用大孔吸附树脂和大孔阴离子交换树脂联用ZTC天然澄清剂法，或者采用大孔吸附树脂和大孔阴离子交换树脂联用酚类吸附剂聚乙烯吡咯烷酮法，并经过透析，得到的白子菜多糖含量由19～20％提高到90～95％，白子菜多糖性状为类白色无定形粉末，易溶于水，较之之前的白子菜粗多糖杂质多、颜色深、黏性大有意想不到的显著效果。
具体实施方式
以下实施例详细说明了本发明。本发明所使用的各种原料及各项设备均为常规市售产品，均能够通过市场购买直接获得，其中：聚乙烯吡咯烷酮PVP-40购自辽宁省营口奥达制药有限公司，规格是25kg；ZTC天然澄清剂厂家是天津正天成澄清技术有限公司，规格是500g。
实施例1和实施例2步骤C中使用的ZTC天然澄清剂A组分黏胶液和B组分黏胶液的浓度均为1％，其配置方法：A组分为白色至微黄色粉末，1gA组分加入100g纯化水搅拌成糊状，放置24h，过滤得浓度为1％的黏胶液，备用；B组分为微黄色至浅黄色粉末，1g B组分加入100g浓度为1％的乙酸搅拌成糊状，放置24h，过滤得浓度为1％的黏胶液，备用。
实施例1：白子菜多糖的制备实施例1
A、白子菜粗多糖的提取
(1)将白子菜的药用部位粉碎，过20目筛，得白子菜粗粉；
(2)按照1:10的重量比例向白子菜粗粉中加入10倍量的浓度为95％的乙醇，加热至80℃回流提取3次，每次加热回流时间为1h，过滤得乙醇提取液和白子菜残渣，乙醇提取液弃去，将白子菜残渣晾干，加入10倍重量的纯化水，加热至100℃回流提取3次，每次加热回流时间为1h，合并3次的水提取液；
(3)向水提取液中加入浓度为95％的乙醇至乙醇浓度达到80％，静置24h，3000r/min离心15min，得白子菜多糖沉淀；
(4)将白子菜多糖沉淀分别以石油醚、无水乙醇、浓度为95％的乙醇依次洗涤，于电热恒温干燥箱干燥，得白子菜粗多糖；
B、白子菜粗多糖初步纯化
(1)将白子菜粗多糖溶于10倍重量的纯化水中，3000r/min离心10min，弃去沉淀，取上清液，备用；
(2)大孔吸附树脂预处理：将大孔吸附树脂XDA-7加入浓度为95％的乙醇浸泡6h，并以纯化水洗至无醇味；
(3)按照白子菜粗粉:树脂＝1：2的重量比将大孔吸附树脂XDA-7进行湿法装柱，径高比为1:8，将上清液上柱，吸附，以1mL/min的流速流出，至与大孔吸附树脂XDA-7平齐的时候，以10倍柱体积纯化水洗脱，收集洗脱液，并和流出液混合均匀，备用；
C、ZTC天然澄清剂进一步纯化
(1)将混合液加热至80℃，加入配置好的浓度为1％的ZTC1+1I型天然澄清剂B组分黏胶液，其加入量为混合液重量的6％，，反应2h，每30min搅拌一次；
(2)待上述反应液降温至60℃，加入配置好的浓度为1％的ZTC1+1I型天然澄清剂A组分黏胶液，其加入量为混合液重量的3％，反应1h，每30min搅拌一次，放冷，3000r/min离心10min，收集上清液，备用；
D、大孔阴离子交换树脂纯化白子菜多糖
(1)大孔阴离子交换树脂预处理：将大孔阴离子交换树脂脱色1号以5％盐酸浸泡6h，以纯化水洗至中性，再以4％氢氧化钠溶液浸泡6h，以纯化水洗至中性，备用；
(2)将大孔阴离子交换树脂脱色1号湿法装柱，径高比为1:8，取步骤C所得上清液，上大孔阴离子交换树脂进行脱色处理，流速1mL/min，收集流出液；
E、透析
(1)将流出液浓缩至原体积的1/10，注入截留分子量大于3000的透析袋内，用纯化水浸泡，放置于电动磁力搅拌器上进行透析，每0.5h换一次纯化水，透析3天；
(2)将透析液浓缩，加入浓度为95％的乙醇至乙醇浓度达到80％，静置24h，3000r/min离心15min，得白子菜多糖沉淀；
(3)将白子菜多糖沉淀依次用石油醚、无水乙醇、浓度为95％的乙醇洗涤，于电热恒温干燥箱内60℃干燥，所得干燥粉末即为白子菜多糖，颜色为类白色，含量92％。
实施例2：白子菜多糖的制备实施例2
A、白子菜粗多糖的提取
(1)将白子菜的药用部位粉碎，过20目筛，得白子菜粗粉；
(2)按照1:8的重量比例向白子菜粗粉中加入8倍量的浓度为80％的乙醇，加热至80℃回流提取2次，每次加热回流时间为2h，过滤得乙醇提取液和白子菜残渣，乙醇提取液弃去，将白子菜残渣晾干，加入10倍重量的纯化水，加热至100℃回流提取2次，每次加热回流时间为2h，合并2次的水提取液；
(3)向水提取液中加入浓度为95％的乙醇至乙醇浓度达到80％，静置36h，3000r/min离心15min，得白子菜多糖沉淀；
(4)将白子菜多糖沉淀分别以石油醚、无水乙醇、浓度为95％的乙醇依次洗涤，于电热恒温干燥箱干燥，得白子菜粗多糖；
B、白子菜粗多糖初步纯化
(1)将白子菜粗多糖溶于8倍重量的纯化水中，3000r/min离心10min，弃去沉淀，取上清液，备用；
(2)大孔吸附树脂预处理：将大孔吸附树脂AB-8加入浓度为95％的乙醇浸泡5h，并以纯化水洗至无醇味；
(3)按照白子菜粗粉:树脂＝1：3的重量比将大孔吸附树脂AB-8进行湿法装柱，径高比为1:10，将上清液上柱，吸附，以0.5mL/min的流速流出，至与大孔吸附树脂AB-8平齐的时候，以8倍柱体积纯化水洗脱，收集洗脱液，并和流出液混合均匀，备用；
C、ZTC天然澄清剂进一步纯化
(1)将混合液加热至80℃，加入配置好的浓度为1％的ZTC1+1II型天然澄清剂B组分黏胶液，其加入量为混合液重量的5％，反应1h，每30min搅拌一次；
(2)待上述反应液降温至60℃，加入配置好的浓度为1％的ZTC1+1II型天然澄清剂A组分黏胶液，其加入量为混合液重量的2％，反应0.5h，每30min搅拌一次，放冷，3000r/min离心10min，收集上清液，备用；
D、大孔阴离子交换树脂纯化白子菜多糖
(1)大孔阴离子交换树脂预处理：将大孔阴离子交换树脂D900以4％盐酸浸泡5h，以纯化水洗至中性，再以3％氢氧化钠溶液浸泡5h，以纯化水洗至中性，备用；
(2)将大孔阴离子交换树脂D900湿法装柱，径高比为1:6，取步骤C所得上清液，上大孔阴离子交换树脂进行脱色处理，流速0.5mL/min，收集流出液；
E、透析
(1)将流出液浓缩至原体积的1/10，注入截留分子量大于3000的透析袋内，用纯化水浸泡，放置于电动磁力搅拌器上进行透析，每0.5h换一次纯化水，透析2天；
(2)将透析液浓缩，加入浓度为95％的乙醇至乙醇浓度达到80％，静置24h，3000r/min离心15min，得白子菜多糖沉淀；
(3)将白子菜多糖沉淀依次用石油醚、无水乙醇、浓度为95％的乙醇洗涤，冷冻干燥，所得干燥粉末即为白子菜多糖，颜色为类白色，含量95％。
实施例3：白子菜多糖的制备实施例3
A、白子菜粗多糖的提取
(1)将白子菜的药用部位粉碎，过20目筛，得白子菜粗粉；
(2)按照1:6的重量比例向白子菜粗粉中加入6倍量的浓度为70％的乙醇，加热至80℃回流提取2次，每次加热回流时间为1h，过滤得乙醇提取液和白子菜残渣，乙醇提取液弃去，将白子菜残渣晾干，加入10倍重量的纯化水，加热至100℃回流提取2次，每次加热回流时间为1h，合并2次的水提取液；
(3)按照0.01g/ml的比例添加聚乙烯吡咯烷酮至水提取液中，加热浓缩，浓缩至白子菜粗粉的重量：浓缩液的体积＝1g/ml后，放冷，3000r/min离心15min，弃去沉淀，取上清液，备用；
(4)向上清液中加入浓度为95％的乙醇至乙醇浓度达到80％，静置48h，3000r/min离心15min，得白子菜多糖沉淀；
(5)将白子菜多糖沉淀分别以石油醚、无水乙醇、浓度为95％的乙醇依次洗涤，真空60℃干燥，得白子菜粗多糖；
B、白子菜粗多糖初步纯化
(1)将白子菜粗多糖溶于6倍重量的纯化水中，3000r/min离心10min，弃去沉淀，取上清液，备用；
(2)大孔吸附树脂预处理：将大孔吸附树脂HPD100加入浓度为95％的乙醇浸泡4h，并以纯化水洗至无醇味；
(3)按照白子菜粗粉:树脂＝1：4的重量比将大孔吸附树脂HPD100进行湿法装柱，径高比为1:68，将上清液上柱，吸附，以0.9mL/min的流速流出，至与大孔吸附树脂HPD100平齐的时候，以6倍柱体积纯化水洗脱，收集洗脱液，并和流出液混合均匀，备用；
C、大孔阴离子交换树脂纯化白子菜多糖
(1)大孔阴离子交换树脂预处理：将大孔阴离子交换树脂脱色1号以3％盐酸浸泡4h，以纯化水洗至中性，再以2％氢氧化钠溶液浸泡4h，以纯化水洗至中性，备用；
(2)将大孔阴离子交换树脂脱色1号湿法装柱，径高比为1:7，取步骤B所得上清液，上大孔阴离子交换树脂进行脱色处理，流速0.9mL/min，收集流出液；
D、透析
(1)将流出液浓缩至原体积的1/10，注入截留分子量大于3000的透析袋内，用纯化水浸泡，放置于电动磁力搅拌器上进行透析，每0.5h换一次纯化水，透析1天；
(2)将透析液浓缩，加入浓度为95％的乙醇至乙醇浓度达到80％，静置24h，3000r/min离心15min，得白子菜多糖沉淀；
(3)将白子菜多糖沉淀依次用石油醚、无水乙醇、浓度为95％的乙醇洗涤，真空60℃干燥，所得干燥粉末即为白子菜多糖，颜色为类白色，含量91％。
实施例4：白子菜多糖的制备实施例4
A、白子菜粗多糖的提取
(1)将白子菜的药用部位粉碎，过20目筛，得白子菜粗粉；
(2)按照1:10的重量比例向白子菜粗粉中加入10倍量的浓度为95％的乙醇，加热至80℃回流提取3次，每次加热回流时间为2h，过滤得乙醇提取液和白子菜残渣，乙醇提取液弃去，将白子菜残渣晾干，加入10倍重量的纯化水，加热至100℃回流提取3次，每次加热回流时间为2h，合并3次的水提取液；
(3)按照0.01g/ml的比例添加聚乙烯吡咯烷酮至水提取液中，加热浓缩，浓缩至白子菜粗粉的重量：浓缩液的体积＝1g/ml后，放冷，3000r/min离心15min，弃去沉淀，取上清液，备用；
(4)向上清液中加入浓度为95％的乙醇至乙醇浓度达到80％，静置48h，3000r/min离心15min，得白子菜多糖沉淀；
(5)将白子菜多糖沉淀分别以石油醚、无水乙醇、浓度为95％的乙醇依次洗涤，于电子恒温干燥箱中干燥，得白子菜粗多糖；
B、白子菜粗多糖初步纯化
(1)将白子菜粗多糖溶于10倍重量的纯化水中，3000r/min离心10min，弃去沉淀，取上清液，备用；
(2)大孔吸附树脂预处理：将大孔吸附树脂XDA-7加入浓度为95％的乙醇浸泡6h，并以纯化水洗至无醇味；
(3)按照白子菜粗粉:树脂＝1：4的重量比将大孔吸附树脂XDA-7进行湿法装柱，径高比为1:10，将上清液上柱，吸附，以0.6mL/min的流速流出，至与大孔吸附树脂XDA-7平齐的时候，以10倍柱体积纯化水洗脱，收集洗脱液，并和流出液混合均匀，备用；
C、大孔阴离子交换树脂纯化白子菜多糖
(1)大孔阴离子交换树脂预处理：将大孔阴离子交换树脂脱色1号以4％盐酸浸泡6h，以纯化水洗至中性，再以3％氢氧化钠溶液浸泡5h，以纯化水洗至中性，备用；
(2)将大孔阴离子交换树脂脱色1号湿法装柱，径高比为1:8，取步骤B所得上清液，上大孔阴离子交换树脂进行脱色处理，流速0.6mL/min，收集流出液；
D、透析
(1)将流出液浓缩至原体积的1/10，注入截留分子量大于3000的透析袋内，用纯化水浸泡，放置于电动磁力搅拌器上进行透析，每0.5h换一次纯化水，透析1天；
(2)将透析液浓缩，加入浓度为95％的乙醇至乙醇浓度达到80％，静置24h，3000r/min离心15min，得白子菜多糖沉淀；
(3)将白子菜多糖沉淀依次用石油醚、无水乙醇、浓度为95％的乙醇洗涤，真空60℃干燥，所得干燥粉末即为白子菜多糖，颜色为类白色，含量93％。
实施例5：白子菜多糖的药效实验
1、实验动物
昆明种小鼠100只，雌雄各半，体重25-35g，购自中国医学科学院医学实验动物研究所，在动物房适应性喂养3周，期间自由饮水和进食普通饲料，保持充足的光照和通风。
2、实验材料
白子菜水提物(实施例2步骤A第(2)步中得到的纯化水提取液浓缩干燥后所得物)、白子菜粗多糖(实施例2步骤A第(5)步中得到的白子菜粗多糖)、白子菜精制多糖(由实施例2制得)；盐酸二甲双胍片(天津天平洋制药有限公司)；四氧嘧啶(北京美科美生物技术开发有限公司)；稳豪型血糖仪及血糖试纸(上海强生医疗器材有限公司)。
3、实验方法
(1)1型糖尿病动物模型的建立
将100只昆明种小鼠喂养3周后，随机分组，分别为空白组10只，实验组90只，小鼠禁食12h后，按照200mg/kg腹腔注射四氧嘧啶制备1型糖尿病模型，正常喂养72h后，剪尾取血测定血糖值，以血糖值大于16.0mmol/L判断为1型糖尿病造模成功小鼠。取50只成模鼠纳入本实验随机分组，分为5组，每组各10只，即为白子菜水提物组、白子菜粗多糖组、白子菜精制多糖组，阳性对照组、模型组，给药3周。
(2)给药方法
灌胃给药，白子菜水提物组、白子菜粗多糖组、白子菜精制多糖组分别给予相应剂量0.7g/kg、0.4g/kg、0.08g/kg；阳性对照药用盐酸二甲双胍片混悬液125mg/kg，给药体积为2ml/100g，空白组与模型组灌胃给予等量生理盐水，1次/天。
(3)禁食血糖测定
在试验第0、7、14、21d每组小鼠禁食不禁水12h后，剪尾取血测定血糖值。
(4)统计学分析
实验数据均用SPSS13.0软件进行统计学处理，血糖值以均数±标准差表示，组间比较采用t检验，以P小于0.05为有统计学显著差异性。
(5)结果
由表1可知，小鼠一次性腹腔注射四氧嘧啶后，血糖值显著升高，以大于16.0mmol/L为糖尿病小鼠造模成功。给药前，模型组、阳性组、白子菜水提物组、粗多糖组、精制多糖组糖尿病小鼠的血糖水平，组间比较无显著性差异(P＞0.05)。连续灌胃给药7天后，与模型组比较，阳性组小鼠血糖值显著降低(P＜0.05)，白子菜水提物组、粗多糖组、精制多糖组与模型中相比小鼠水平有下降的趋势，但是无显著性差异(P＞0.05)；给药14天后，阳性组和精制多糖组与模型对照组相比小鼠血糖水平显著降低(P＜0.05)，血糖值分别为15.36±4.01和19.32±3.12mmol/L；给药21天后，与模型组比较，阳性组和精制多糖组小鼠血糖值显著降低(P＜0.05)，白子菜水提物组和粗多糖组与模型中相比小鼠血糖水平降低(P＜0.05)。综合来看，白子菜精制多糖对1型糖尿病小鼠具有较好的的降血糖作用。
表1白子菜精制多糖对糖尿病小鼠血糖水平的影响
注a：与空白对照组比较，*P＜0.01；b：与模型对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01
上述描述仅作为本发明可实施的技术方案提出，不作为对其技术方案本身的单一限制条件。
Claims (10)
1.白子菜多糖的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
A、白子菜粗多糖的提取
(1)将白子菜的药用部位粉碎，过20目筛，得白子菜粗粉；
(2)向所述白子菜粗粉中加入浓度为70％～95％的乙醇，此乙醇与所述白子菜粗粉的重量比为6～10:1，加热回流提取2～3次，每次加热回流时间为1～2h，过滤得乙醇提取液和白子菜残渣，此乙醇提取液弃去，将所述白子菜残渣晾干，加入10倍重量的纯化水，加热回流提取2～3次，每次加热回流时间为1～2h，合并水提取液；
(3)向所述水提取液中加入浓度为95％的乙醇至乙醇浓度达到80％，静置24～48h，3000r/min离心15min，得白子菜多糖沉淀；
(4)将所述白子菜多糖沉淀分别以石油醚、无水乙醇、浓度为95％的乙醇依次洗涤，干燥，得白子菜粗多糖；
B、白子菜粗多糖初步纯化
(1)将所述白子菜粗多糖溶于纯化水中，其中白子菜粗多糖与纯化水的重量比为1:6～10，3000r/min离心10min，弃去沉淀，取上清液，备用；
(2)大孔吸附树脂预处理：将大孔吸附树脂加入浓度为95％的乙醇浸泡4～6h，并以纯化水洗至无醇味；
(3)按照白子菜粗粉:树脂＝1：2～4的重量比将所述大孔吸附树脂进行湿法装柱，径高比为1:6～10，将所述上清液上柱，吸附，以0.5～1mL/min的流速流出，至与所述大孔吸附树脂平齐的时候，以6～10倍柱体积纯化水洗脱，收集洗脱液，并和流出液混合均匀，备用；
C、ZTC天然澄清剂进一步纯化
(1)将所述混合液加热至80℃，加入配置好的浓度为1％的ZTC天然澄清剂B组分黏胶液，其加入量为所述混合液重量的4-6％，，反应1～2h，每30min搅拌一次；
(2)待上述反应液降温至60℃，加入配置好的浓度为1％的ZTC天然澄清剂A组分黏胶液，其加入量为所述混合液重量的2～3％，反应0.5～1h，每30min搅拌一次，放冷，3000r/min离心10min，收集上清液，备用；
D、大孔阴离子交换树脂纯化白子菜多糖
(1)大孔阴离子交换树脂预处理：将大孔阴离子交换树脂以3～5％盐酸浸泡4～6h，以纯化水洗至中性，再以2～4％氢氧化钠溶液浸泡4～6h，以纯化水洗至中性，备用；
(2)将所述大孔阴离子交换树脂湿法装柱，径高比为1:6～8，取步骤C所得上清液，上所述大孔阴离子交换树脂进行脱色处理，流速0.5～1mL/min，收集流出液；
E、透析
(1)将所述流出液浓缩至原体积的1/10，注入透析袋内，用纯化水浸泡，放置于电动磁力搅拌器上进行透析，每0.5h换一次纯化水，透析1～3天；
(2)将所述透析液浓缩，加入浓度为95％的乙醇至乙醇浓度达到80％，静置24h，3000r/min离心15min，得白子菜多糖沉淀；
(3)将所述白子菜多糖沉淀依次用石油醚、无水乙醇、浓度为95％的乙醇洗涤，干燥，所得干燥粉末即为白子菜多糖。
2.根据权利要求1所述的白子菜多糖的制备方法，其特征在于所述白子菜为人工栽培品和/或野生品；白子菜为自然晾干白子菜或低温烘干白子菜；白子菜的药用部位包括根、茎、叶。
3.根据权利要求1所述的白子菜多糖的制备方法，其特征在于所述步骤B中使用的大孔吸附树脂包括XDA-7、AB-8、HPD100。
4.根据权利要求1所述的白子菜多糖的制备方法，其特征在于所述步骤C中使用的ZTC天然澄清剂包括ZTC1+1I型、ZTC1+1II型、ZTC1+1III型。
5.根据权利要求1所述的白子菜多糖的制备方法，其特征在于所述步骤C中使用的ZTC天然澄清剂A组分黏胶液和B组分黏胶液的浓度均为1％；其配置方法：A组分为白色至微黄色粉末，1g A组分加入100g纯化水搅拌成糊状，放置24h，过滤得浓度为1％的黏胶液，备用；B组分为微黄色至浅黄色粉末，1g B组分加入100g浓度为1％的乙酸搅拌成糊状，放置24h，过滤得浓度为1％的黏胶液，备用。
6.根据权利要求1所述的白子菜多糖的制备方法，其特征在于所述步骤D中所述大孔阴离子交换树脂包括脱色1号、D900。
7.根据权利要求1所述的白子菜多糖的制备方法，其特征在于所述步骤E中所述透析袋用于截留分子量大于3000的物质。
8.根据权利要求1所述的白子菜多糖的制备方法，其特征在于所述步骤A、E中使用的干燥方式为电热恒温干燥、真空干燥、冷冻干燥。
9.白子菜多糖的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
A、白子菜粗多糖的提取
(1)将白子菜的药用部位粉碎，过20目筛，得白子菜粗粉；
(2)向所述白子菜粗粉中加入浓度为70％～95％的乙醇，此乙醇与所述白子菜粗粉的重量比为6～10:1，加热回流提取2～3次，每次加热回流时间为1～2h，过滤得乙醇提取液和白子菜残渣，此乙醇提取液弃去，将所述白子菜残渣晾干，加入10倍重量的纯化水，加热回流提取2～3次，每次加热回流时间为1～2h，合并水提取液；
(3)按照0.01g/ml的比例添加聚乙烯吡咯烷酮至所述水提取液中，加热浓缩，浓缩至白子菜粗粉的重量：浓缩液的体积＝1g/ml后，放冷，3000r/min离心15min，弃去沉淀，取上清液，备用；
(4)向所述上清液中加入浓度为95％的乙醇至乙醇的浓度达到80％，静置24～48h，3000r/min离心15min，得白子菜多糖沉淀；
(5)将所述白子菜多糖沉淀分别以石油醚、无水乙醇、浓度为95％的乙醇依次洗涤，干燥，得白子菜粗多糖；
B、白子菜粗多糖初步纯化
(1)将所述白子菜粗多糖溶于纯化水中，其中白子菜粗多糖与纯化水的重量比为1:6～10，3000r/min离心10min，弃去沉淀，取上清液，备用；
(2)大孔吸附树脂预处理：将大孔吸附树脂加入浓度为95％的乙醇浸泡4～6h，并以纯化水洗至无醇味；
(3)按照白子菜粗粉:树脂＝1：2～4的重量比将所述大孔吸附树脂进行湿法装柱，径高比为1:6～10，将所述上清液上柱，吸附，以0.5～1mL/min的流速流出，至与所述大孔吸附树脂平齐的时候，以6～10倍柱体积纯化水洗脱，收集洗脱液，并和流出液混合均匀，备用；
C、大孔阴离子交换树脂纯化白子菜多糖
(1)大孔阴离子交换树脂预处理：将大孔阴离子交换树脂以3～5％盐酸浸泡4～6h，以纯化水洗至中性，再以2～4％氢氧化钠溶液浸泡4～6h，以纯化水洗至中性，备用；
(2)将所述大孔阴离子交换树脂湿法装柱，径高比为1:6～8，取步骤B所得上清液，上所述大孔阴离子交换树脂进行脱色处理，流速0.5～1mL/min，收集流出液；
D、透析
(1)将所述流出液浓缩至原体积的1/10，注入透析袋内，用纯化水浸泡，放置于电动磁力搅拌器上进行透析，每0.5h换一次纯化水，透析1～3天；
(2)将所述透析液浓缩，加入浓度为95％的乙醇至乙醇浓度达到80％，静置24h，3000r/min离心15min，得白子菜多糖沉淀；
(3)将所述白子菜多糖沉淀依次用石油醚、无水乙醇、浓度为95％的乙醇洗涤，干燥，所得干燥粉末即为白子菜多糖。
10.根据权利要求9所述的白子菜多糖的制备方法，其特征在于所述步骤A中使用的聚乙烯吡咯烷酮的规格为PVP-40。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510426645.6A CN104945532B (zh) | 2015-07-20 | 2015-07-20 | 白子菜多糖的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510426645.6A CN104945532B (zh) | 2015-07-20 | 2015-07-20 | 白子菜多糖的制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104945532A true CN104945532A (zh) | 2015-09-30 |
| CN104945532B CN104945532B (zh) | 2017-09-05 |
Family
ID=54160642
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201510426645.6A Active CN104945532B (zh) | 2015-07-20 | 2015-07-20 | 白子菜多糖的制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104945532B (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105418726A (zh) * | 2015-12-25 | 2016-03-23 | 山西省中医药研究院 | 一种通关藤总皂苷提取物及其提取方法 |
| CN110537686A (zh) * | 2019-10-10 | 2019-12-06 | 陕西科技大学 | 一种富硒黑蒜金花葵咀嚼片及其制备方法 |
| CN111329799A (zh) * | 2020-02-18 | 2020-06-26 | 广州清淞泉生物科技有限公司 | 无刺激性的白子菜活性物的制备方法及其应用 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101336949A (zh) * | 2008-08-21 | 2009-01-07 | 中国食品发酵工业研究院 | 从白子菜中提取多糖和黄酮的方法 |
-
2015
- 2015-07-20 CN CN201510426645.6A patent/CN104945532B/zh active Active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101336949A (zh) * | 2008-08-21 | 2009-01-07 | 中国食品发酵工业研究院 | 从白子菜中提取多糖和黄酮的方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 刘微微，刘旭，曹学丽: "白背三七多糖的分离和纯化", 《食品科学》 * |
| 柯小温，陈磊，宋洪涛，庞杰: "大孔树脂与ZTC联用纯化白子草总黄酮的研究", 《中国中药杂志》 * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105418726A (zh) * | 2015-12-25 | 2016-03-23 | 山西省中医药研究院 | 一种通关藤总皂苷提取物及其提取方法 |
| CN110537686A (zh) * | 2019-10-10 | 2019-12-06 | 陕西科技大学 | 一种富硒黑蒜金花葵咀嚼片及其制备方法 |
| CN111329799A (zh) * | 2020-02-18 | 2020-06-26 | 广州清淞泉生物科技有限公司 | 无刺激性的白子菜活性物的制备方法及其应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN104945532B (zh) | 2017-09-05 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103445190B (zh) | 一种从铁皮石斛中提取膳食纤维的方法 | |
| CN104829743A (zh) | 一种辣木叶多糖的制备方法及其用途 | |
| CN101585885A (zh) | 一种玉竹多糖的制备方法 | |
| CN101003775A (zh) | 一种显齿蛇葡萄保健茶酒的生产方法及其产品 | |
| CN104546957B (zh) | 一种菱角果壳多酚提取物及其制备方法与应用 | |
| CN101468944A (zh) | 一种姜黄有效成分姜黄素的提取分离方法 | |
| CN104945532A (zh) | 白子菜多糖的制备方法 | |
| CN101401829A (zh) | 一种野金柴活性提取物及其制备方法和应用 | |
| CN104367987A (zh) | 兽用黄芪制剂及其制备方法 | |
| CN108329368A (zh) | 一种从黄芩中制备黄芩苷的方法 | |
| CN102228515A (zh) | 一种分离和富集莲子心总黄酮和总生物碱的方法 | |
| CN102653566A (zh) | 一种有机法制备硒化黄芪多糖的方法 | |
| CN102228513B (zh) | 一种治疗糖尿病或糖尿病并发症的药物组合物及其制备方法 | |
| CN104398619B (zh) | 鸡矢藤提取物及其用途 | |
| CN108822229B (zh) | 一种黑枸杞多糖的提取方法 | |
| CN103463201B (zh) | 一种双黄连提取物的提取方法 | |
| CN103127227A (zh) | 一种桑叶多糖降血糖活性组分的制备方法 | |
| CN106916065B (zh) | 从牛蒡根中制备高纯度绿原酸的方法 | |
| CN104784252A (zh) | 苦参总生物碱提取物的制备方法及其应用 | |
| CN111349124A (zh) | 一种从多穗石柯中提取分离根皮苷的方法 | |
| CN104926892A (zh) | 一种从甜茶中提取甜茶甙的方法 | |
| CN104031155B (zh) | 全真一气汤多糖的工业化提取纯化的方法 | |
| CN109620860B (zh) | 一种用于提取香椿多酚的溶剂及其应用 | |
| CN102327324A (zh) | 一种桑叶总碱提取物及其制备方法和其用途 | |
| CN103159612B (zh) | 从银杏外种皮中提取银杏酸的工业化生产技术 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |