CN111349124A - 一种从多穗石柯中提取分离根皮苷的方法 - Google Patents

一种从多穗石柯中提取分离根皮苷的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种从多穗柯中提取分离根皮苷的方法，其包括以下步骤：第一步：清洗、烘干、粉粹，得到多穗柯粉体；第二步：提取多穗柯黄酮类，得到多穗柯黄酮粗提物；第三步：对第二步中的沉淀物进行二次分离提取，得到多穗柯黄酮粗提物；第四步：分离纯化多穗柯黄酮粗提物，得到分离产物；第五步：对大孔吸附树脂分离产物进行分离纯化，最终得到根皮苷结晶状速溶粉体。本发明的从多穗柯中提取分离根皮苷的方法能够提取高纯度多穗柯根皮苷且在提取分离过程中仅使用水和乙醇作为溶剂，对环境污染少。

Description

一种从多穗石柯中提取分离根皮苷的方法
技术领域
本发明属于多穗柯提纯技术领域，具体地涉及一种从多穗柯中提取分离根皮苷的方法。
背景技术
根皮苷是根皮素的葡萄糖苷，属于黄酮类中的二氢查尔酮类物质。二氢查尔酮在自然界中分布很少，被称为“少数黄酮类”。根皮苷可竞争性的抑制葡萄糖转运载体对葡萄糖分子的运输，减少胰岛素抵抗，提高高密度脂蛋白含量，降低低密度脂蛋白含量，因此具有显著降低空腹血糖、改善脂代谢状况的作用。另外，根皮苷具有非常高的甜度，为蔗糖的300倍，而热量仅为蔗糖的1/300，可以直接添加到食品中，因此在新型药物和天然保健食品开发中具有广泛的应用前景。根皮苷最初由蔷薇科苹果属植物中被发现，随后菊科、杜鹃花科、豆科、壳斗科、百合科等植物中也报道有根皮苷的存在，但含量均较少。近年来在壳斗科石柯属植物—多穗石柯Lithocarpus polystachyus (Wall.) Rehd.）中发现了含量高达6%的根皮苷，因此受到广泛关注。多穗石柯（多穗柯）别名“甜茶”，以野生形式零星分布于我国长江以南各省区的低山密林中。多穗柯属药食同源植物，兼具茶、糖、药三种功能。多穗柯内具有丰富的黄酮类及其根皮苷资源，如何能够高纯度地提取多穗柯中的根皮苷是目前需要积极研究的问题。现有技术中虽然公开了多种从多穗柯中提取根皮苷的方法，然而该方法通常效率低、且工艺复杂、成本高，由于在提取根皮苷过程中使用到有机溶液等溶液，对溶液排放时对环境亦会产生一定的影响。
发明内容
有鉴于此，为了克服现有技术的上述缺陷，本发明的目的在于提供一种从多穗柯中提取分离根皮苷的方法，其能够提取高纯度多穗柯根皮苷且在提取分离过程中仅使用水和乙醇作为溶剂，对环境污染少。
为了达到上述目的，本发明提供一种从多穗柯中提取分离根皮苷的方法，其包括以下步骤：
第一步：对多穗柯新鲜叶片经清洗、烘干和粉碎操作，并过30目筛，得到多穗柯粉体；
第二步：提取多穗柯黄酮类；使用乙醇水溶液为提取液，多穗柯粉与提取液的比例为1：10-12，预煮5-6分钟，在功率为250-300W的超声下处理20-25min，将超声提取到的液体置于离心机中得到上清液和沉淀物，上清液作为多穗柯黄酮粗提物；
第三步：将沉淀物与乙醇水溶液1：5-4的比例混合，将混合液置于800W的微波下处理20-25min，将微波提取到的液体至于离心机中得到上清液和沉淀物，上清液作为多穗柯黄酮粗提物；
第四步：分离纯化多穗柯黄酮粗提物；采用大孔吸附树脂ADS-7对多穗柯黄酮粗提取进行分离纯化，工艺条件为：黄酮粗提物溶液体积与ADS-7树脂质量之比为5-4:1、在PH为中性的条件下静态吸附2.0-3.0h，然后使用乙醇水溶液作为洗脱剂，以1-2 BV/h的流速进行动态洗脱2.0-3.0h，得到分离产物；
第五步：对ADS-7分离产物进行分离纯化；上样量为20 mg/g，使用乙醇水溶液以流速1.5BV/h洗脱4 h，收集洗脱液并进行浓缩、挥干后得倒固体样品，将固体样品溶解于PH为5的70%食用乙醇水溶液中形成80mg/ml溶液，放置于冰箱中结晶，最后得到高纯度的根皮苷结晶状速溶粉。
进一步地，所述第二步中使用的乙醇水溶液中乙醇的体积分数为90%。
进一步地，所述第三步中使用的乙醇水溶液中乙醇的体积分数为85%。
进一步地，所述第四步中使用的乙醇水溶液中乙醇的体积分数为65%。
进一步地，所述第四步中冰箱内的温度控制为0-4oC。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
1. 本发明通过将多穗柯进行超声提取并对超声提取后的沉淀物进行微波提取，从而确保能够将多穗柯中的黄酮类充分提取出；
2. 本发明通过在大孔吸附树脂分离纯化之前经过离心机的分离，从而避免了杂质对大孔吸附树脂的影响，提高了吸附效率；
3. 通过对时间和比例的控制从而确保了在不浪费乙醇和水资源的情况下而高效地完成多穗柯根皮苷的分离纯化；
4. 采用本方法提取多穗石柯根皮苷纯度可以达到99.8%，且最后得到的根皮苷为结晶体，便于根皮苷的收集和存储；
5. 本发明的整个提取分离过程中只使用了水和乙醇为溶剂，不使用任何其它有机溶剂和有害化学成分，保证了生产过程和分离产品的安全性，把对环境的污染降到最低。
6. 本发明提取的黄酮素化合物和生物碱，不仅能够提高饮者免疫能力，起到生津止渴、和胃降逆、降三高的目的，而且具有抗氧化、抗病毒、抗炎、抗组胺、抗痢疾、痉挛以及治疗高血压、抗肿瘤的功能。
具体实施方式
下面将对本发明的优选实施例进行详细的描述。
实施例1
取多穗柯新鲜叶片，对多穗柯新鲜叶片依次经清洗、烘干和粉碎步骤，将粉粹后的粉体过30目筛，筛选得到多穗柯粉体。
使用90%乙醇水溶液作为提取液，多穗柯粉与提取液的比例为1:10，对混合后的液体预煮6分钟，在功率为300W的超声下处理20min，将超声提取到的液体置于离心机中离心得到上清液和沉淀物，其中上清液作为多穗柯黄酮粗提取。
将经超声提取到的沉淀物进行微波处理，具体地，将沉淀物与乙醇水溶液提取液1:5的比例混合后，置于800W的微波下处理20min，将微波提取到的液体置于离心机中离心得到上清液和沉淀物，其中上清液作为多穗柯黄酮粗提物，经超声处理后的沉淀物则作为多穗柯茶渣另做他用。经过上述超声和微波处理后的上清液中黄酮类提取率可达到97.6%，提取物中黄酮含量达到42%，其中根皮苷含量30.2%。
采用大孔吸附树脂ADS-7对多穗柯黄酮粗提取进行分离纯化，工艺条件为：黄酮粗提物溶液体积与ADS-7树脂质量之比为5：1、在PH为中性的条件下静态吸附3.0h，然后使用85%（体积分数）乙醇水溶液作为洗脱剂，以2BV/H的流速进行动态洗脱3.0h，得到分离产物。通过该方法分离产物中黄酮类纯度可达到89%，根皮苷纯度达到81.2%。
对ADS-7分离产物进行分离纯化；上样量为20 mg/g，使用65%乙醇水溶液以流速1.5BV/h洗脱4 h，收集洗脱液并进行浓缩、挥干后得倒固体样品，将固体样品溶解于PH为5的70%食用乙醇水溶液中形成80mg/ml溶液，放置于温度在0摄氏度的冰箱中结晶，最后得到高纯度的根皮苷结晶状速溶粉。通过以上工艺，可以获得纯度为99.9%的根皮苷结晶状速溶粉。
实施例2
取多穗柯新鲜叶片，对多穗柯新鲜叶片依次经清洗、烘干和粉碎步骤，将粉粹后的粉体过30目筛，筛选得到多穗柯粉体。
使用90%乙醇水溶液作为提取液，多穗柯粉与提取液的比例为1:12，对混合后的液体预煮5分钟，在功率为250W的超声下处理25min，将超声提取到的液体置于离心机中离心得到上清液和沉淀物，其中上清液作为多穗柯黄酮粗提取。
将经超声提取到的沉淀物进行微波处理，具体地，将沉淀物与乙醇水溶液提取液1:4的比例混合后，置于800W的微波下处理25min，将微波提取到的液体置于离心机中离心得到上清液和沉淀物，其中上清液作为多穗柯黄酮粗提物，经超声处理后的沉淀物则作为多穗柯茶渣另做他用。经过上述超声和微波处理后的上清液中黄酮类提取率可达到97.8%，提取物中黄酮含量达到42.5%，其中根皮苷含量32.2%。
采用大孔吸附树脂ADS-7对多穗柯黄酮粗提取进行分离纯化，工艺条件为：黄酮粗提物溶液体积与ADS-7树脂质量之比为4：1、在PH为中性的条件下静态吸附2.0h，然后使用85%（体积分数）乙醇水溶液作为洗脱剂，以1BV/H的流速进行动态洗脱2.0h，得到分离产物。通过该方法分离产物中黄酮类纯度可达到89.2%，根皮苷纯度达到81.3%。
对ADS-7分离产物进行分离纯化；上样量为20 mg/g，使用65%乙醇水溶液以流速1.5BV/h洗脱4 h，收集洗脱液并进行浓缩、挥干后得倒固体样品，将固体样品溶解于PH为5的70%食用乙醇水溶液中形成80mg/ml溶液，放置于温度在4摄氏度的冰箱中结晶，最后得到高纯度的根皮苷结晶状速溶粉。通过以上工艺，可以获得纯度为99.8%的根皮苷结晶状速溶粉。
本发明的实施例的整个提取分离过程中只使用了水和乙醇为溶剂，不使用任何其它有机溶剂和有害化学成分，保证了生产过程和分离产品的安全性，把对环境的污染降到最低。
通过本发明的上述工艺提取分离获得的多穗柯黄酮类以及根皮苷，主要用于鲜切苹果保险和糖尿病的防治。大孔树脂ADS-7分离产物（ADSF）和结晶根皮苷明显提高了鲜切苹果保鲜品质，完全可以替代现有的产业化学品处理，其中以ADSF更适合用于鲜切苹果保险；ADSF处理明显抑制了鲜切苹果酶提取液和保鲜过程中的多酚氧化酶（PPO）和过氧化物酶（POD）活性。以多穗柯粗提物（CA）和根皮苷结晶状速溶粉（PHL）灌胃处理四氧嘧啶诱导糖尿病小鼠，有效降低了小鼠空腹喝餐后血糖水平，对糖耐量曲线变化有明显改善，并推论其中的降血糖功能性成分为根皮苷。
最后说明的是，以上优选实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过上述优选实施例已经对本发明进行了详细的描述，但本领域技术人员应当理解，可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离本发明权利要求书所限定的范围。

Claims (5)

1.一种从多穗柯中提取分离根皮苷的方法，其特征在于包括以下步骤：
第一步：对多穗柯新鲜叶片经清洗、烘干和粉碎操作，并过30目筛，得到多穗柯粉体；
第二步：提取多穗柯黄酮类；使用乙醇水溶液为提取液，多穗柯粉与提取液的比例为1：10-12，预煮5-6分钟，在功率为250-300W的超声下处理20-25min，将超声提取到的液体置于离心机中得到上清液和沉淀物，上清液作为多穗柯黄酮粗提物；
第三步：将沉淀物与乙醇水溶液1：5-4的比例混合，将混合液置于800W的微波下处理20-25min，将微波提取到的液体置于离心机中得到上清液和沉淀物，上清液作为多穗柯黄酮粗提物；
第四步：分离纯化多穗柯黄酮粗提物；采用大孔吸附树脂ADS-7对多穗柯黄酮粗提取进行分离纯化，工艺条件为：黄酮粗提物溶液体积与ADS-7树脂质量之比为5-4:1、在PH为中性的条件下静态吸附2.0-3.0h，然后使用乙醇水溶液作为洗脱剂，以1-2 BV/h的流速进行动态洗脱2.0-3.0h，得到分离产物；
第五步：对大孔吸附树脂ADS-7分离产物进行分离纯化；上样量为20 mg/g，使用乙醇水溶液以流速1.5BV/h洗脱4 h，收集洗脱液并进行浓缩、挥干后得倒固体样品，将固体样品溶解于PH为5的70%食用乙醇水溶液中形成80mg/ml溶液，放置于冰箱中结晶，最后得到高纯度的根皮苷结晶状速溶粉。
2.根据权利要求1所述的从多穗柯中提取分离根皮苷的方法，其特征在于：所述第二步中使用的乙醇水溶液中乙醇的体积分数为90%。
3.根据权利要求1所述的从多穗柯中提取分离根皮苷的方法，其特征在于：所述第三步中使用的乙醇水溶液中乙醇的体积分数为85%。
4.根据权利要求1所述的从多穗柯中提取分离根皮苷的方法，其特征在于：所述第四步中使用的乙醇水溶液中乙醇的体积分数为65%。
5.根据权利要求1所述的从多穗柯中提取分离根皮苷的方法，其特征在于：所述第四步中冰箱内的温度控制为0-4oC。
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