CN106220693A - 一种提取多穗石柯根皮苷的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种提取多穗石柯根皮苷的方法,包括以下工艺步骤:将多穗石柯新鲜叶片经真空冷冻干燥处理,再粉碎,得到多穗石柯粉末;在粉末中加入乙醇和碳酸二甲酯混合溶剂进行超声提取,提取得到的液体经过离心分离,得到上清液和沉淀物;再将沉淀物经过多次超声提取,分别得到上清液,合并上清液;将上清液经过微孔滤膜过滤,大孔树脂吸附,最后经过减压蒸干,即可得到根皮苷。本发明方法提取的多穗石柯根皮苷,得率达到90%以上,纯度达到99.8%。本方法还具有工艺简单、成本低、耗能低、操作简单等优点,容易实现工业化生产,具有较好的经济效益和良好的市场前景。
Description
技术领域
本发明涉及天然植物有效成分技术领域,具体是一种提取多穗石柯根皮苷的方法。
背景技术
根皮苷是根皮素的葡萄糖苷,属于黄酮类中的二氢查尔酮类物质。二氢查尔酮在自然界中分布很少,被称为“少数黄酮类”。根皮苷可竞争性的抑制葡萄糖转运载体对葡萄糖分子的运输,减少胰岛素抵抗,提高高密度脂蛋白含量,降低低密度脂蛋白含量,因此具有显著降低空腹血糖、改善脂代谢状况的作用。另外,根皮苷具有非常高的甜度,为蔗糖的300倍,而热量仅为蔗糖的1/300,可以直接添加到食品中,因此在新型药物和天然保健食品开发中具有广泛的应用前景。根皮苷最初由蔷薇科苹果属植物中被发现,随后菊科、杜鹃花科、豆科、壳斗科、百合科等植物中也报道有根皮苷的存在,但含量均较少。近年来在壳斗科石柯属植物—多穗石柯(Lithocarpus polystachyus (Wall.) Rehd.)中发现了含量高达6%的根皮苷,因此受到广泛关注。
根皮苷的提取方法一般为有热水提取法、微波辅助提取法、有机溶剂提取法、超声提取法等。其中热水提取法成本低廉、设备简单、安全无毒,但根皮苷在水中的溶解度较低,提取的杂质也会比较多,收率较低。微波提取法的原理是:在微波场中,不同的物质吸收微波能力不同,使得溶液中的部分组分被选择性加热,导致要提取的目标产物可以从基质中被溶解出来,溶解在溶解度不强的溶剂中。但目前微波设备和技术尚有待提高,且根皮苷热稳定性欠佳,难于应用。超声波能破碎植物细胞,使溶剂快速到达到植物细胞中,又不会破坏有效成分,加速植物中有效成分溶出,以达到快速、高效提取有效成分的目的。有机溶剂提取法中多使用乙醇,此法可以较高程度的减少材料中水溶性杂质的浸出,减少后期分离、纯化成本。但此法消耗乙醇较多、耗时较长,若升高温度处理,则容易导致溶出杂质较多。
从粗提物中纯化根皮苷的方法一般为聚合氯化销絮凝法、壳聚糖絮凝法、大孔树脂吸附法等。用聚合氯化铅来处理多穗石柯水提取液可有效去除杂质,使提取液达到最大的透光率,但根皮苷得率较低。壳聚糖也大量被应用于在中草药提取过程,但其纯化效果较差。大孔树脂具有物理化学性质稳定、选择性好、容易再生、解吸条件温和、吸附容量大、使用周期长、较易形成闭路循环、机械强度高、成本低廉等优点,在黄酮的提取和分离方面应用的非常广泛,但在具体树脂类型和工艺上,尚有待深入分析。
根皮苷因其对糖尿病的良好疗效及超高的甜度,在医药和食品行业具有良好的应用前景,但根皮苷的产量极少,因而十分昂贵。现有方法中提取多穗石柯根皮苷的得率较低,且工艺复杂、成本较高,因此,如何提高根皮苷的产量、纯度以及优化工艺、降低成本是当今的研究热点。
发明内容
本发明针对现有多穗石柯根皮苷提取中存在的问题,提供一种提取多穗石柯根皮苷的方法。该方法具有根皮苷产量高、产品纯度高、工艺简单、成本低、提取时间短、耗能低等优点。
为实现以上目的,本发明采用的技术方案如下:
一种提取多穗石柯根皮苷的方法,包括以下工艺步骤:
(1)烘干:将多穗石柯新鲜叶片经真空冷冻干燥处理,干燥至含水量≤15%,得干燥叶片;
(2)粉碎:将干燥叶片置于中药粉碎机,粉碎至粒度为100-200目,得多穗石柯粉末;
(3)超声提取:将上述多穗石柯粉末加入超声波容器中,再加入乙醇和碳酸二甲酯混合溶剂,其中多穗石柯粉末与混合溶剂的固液比为1:10-15,在功率为250-350W下超声提取20-30 min,将超声提取得到的液体置于高速离心机中10000 rpm离心2 -5min,得到上清液和沉淀物;
(4)重复超声提取:将步骤(3)中得到的沉淀物再加入超声波容器中,加入乙醇和碳酸二甲酯混合有机溶剂,在功率为250-350W下超声提取20-30 min,将提取得到的液体置于高速离心机中10000 rpm离心2 -5min,得上清液和沉淀物,此步骤重复2次,得到上清液;
(5)过滤:将步骤(3)和步骤(4)中所得到的上清液用孔径1 μm的无菌微孔滤膜过滤,合并滤液;
(6)吸附:将步骤(5)得到的滤液用食用乙醇调整至终浓度为60 mg/mL,再以1 mL/min的流速通过AB-8食品级大孔树脂进行吸附;
(7)解吸:用浓度为90%的食用乙醇以1-3 mL/min的流速洗脱AB-8食品级大孔树脂吸附物,得洗脱液;
(8)减压蒸干:将步骤(7)的洗脱液置于减压蒸干机中干燥,回收溶剂,即得到根皮苷。
优选地,以上步骤(3)和步骤(4)所述乙醇和碳酸二甲酯的体积比为3-6:1。
优选地,以上步骤(3)和步骤(4)所述乙醇的浓度为85-95%。
优选地,以上步骤(6)所述食用乙醇的浓度为40%。
优选地,以上步骤(7)所述食用乙醇的用量为AB-8食品级大孔树脂体积的2-3倍。
优选地,以上步骤(8)所述的减压蒸干的真空度为-0.15~ -0.2Mpa。
与现有技术相比,本发明的有益效果:
1、本方法将有机溶剂提取法和超声提取法相结合来提取多穗石柯的根皮苷,不仅能提高提取效率和降低成本,还能提高根皮苷的得率和纯度,解决了现有根皮苷提取方法存在的问题。
2、本发明以乙醇和碳酸二甲酯混合溶剂作为超声波辅助溶剂,溶剂价格低廉、容易获取、环保无毒,能加速植物中有效成分溶出,以达到快速、高效提取有效成分;与单一的乙醇作为溶剂相比,根皮苷的提取率提高20%左右。
3、本方法将超声后的液体先离心再过滤,解决了传统大孔树脂吸附过程中大颗粒的干扰,提高了吸附效率和根皮苷的得率。
4、本方法以大孔树脂纯化粗提物,纯化材料可再生,同时过程中未使用高温、高压设备和工艺,从而避免了根皮苷的降解,且成本低,工艺简单。
5、采用本方法提取多穗石柯根皮苷,得率达到90%以上,纯度达到99.8%。
6、本方法不仅提高了多穗石柯根皮苷的得率和纯度,同时还具有工艺简单、成本低、耗能低、操作简单等优点,容易实现工业化生产,具有较好的经济效益和良好的市场前景。
具体实施方式
下面将结合具体实施例对本发明方案详细说明,但不限于本发明的保护范围。
实施例1
一种提取多穗石柯根皮苷的方法,包括以下工艺步骤:
(1)烘干:将多穗石柯新鲜叶片(其中根皮苷含量为7.89%)经真空冷冻干燥处理,干燥至含水量≤15%,得干燥叶片;
(2)粉碎:将干燥叶片置于中药粉碎机,粉碎至粒度为100目,得多穗石柯粉末;
(3)超声提取:取1kg多穗石柯粉末加入超声波容器中,再加入体积比为3:1的乙醇(乙醇浓度为85%)和碳酸二甲酯混合溶剂10L,在功率为250W下超声提取30min,将超声提取得到的液体置于高速离心机中10000 rpm离心2min,得到上清液和沉淀物;
(4)重复超声提取:将步骤(3)中得到的沉淀物加入超声波容器,再加入体积比为3:1的乙醇和碳酸二甲酯混合有机溶剂8L,在功率为250W下超声提取30 min,将提取得到的液体置于高速离心机中10000 rpm离心2min,得上清液和沉淀物,此步骤重复2次,得到上清液;
(5)过滤:将步骤(3)和步骤(4)中所得到的上清液用孔径1 μm的无菌微孔滤膜过滤,合并滤液;
(6)吸附:将步骤(5)得到的滤液用浓度为40%的食用乙醇调整至终浓度为60 mg/mL,再以1 mL/min的流速通过AB-8食品级大孔树脂进行吸附;
(7)解吸:用浓度为90%的食用乙醇以1mL/min的流速洗脱AB-8食品级大孔树脂吸附物,得洗脱液;
(8)减压蒸干:将步骤(7)得到的洗脱液置于真空度为-0.18MPa的减压蒸干机中干燥,回收溶剂,即得到根皮苷72.43g。
本实施例中根皮苷的得率为91.8%,纯度为99.17%。
实施例2
一种提取多穗石柯根皮苷的方法,包括以下工艺步骤:
(1)烘干:将多穗石柯新鲜叶片(其中根皮苷含量为7.89%)经真空冷冻干燥处理,干燥至含水量≤15%,得干燥叶片;
(2)粉碎:将干燥叶片置于中药粉碎机,粉碎至粒度为150目,得多穗石柯粉末;
(3)超声提取:取1kg多穗石柯粉末加入超声波容器中,再加入体积比为4:1的乙醇(乙醇浓度为90%)和碳酸二甲酯混合溶剂12L,在功率为300W下超声提取25min,将超声提取得到的液体置于高速离心机中10000rpm离心3min,得上清液和沉淀物;
(4)重复超声提取:将步骤(3)中得到的沉淀物加入体积比为4:1的乙醇和碳酸二甲酯混合有机溶剂10L,在功率为300W下超声提取25 min,将提取得到的液体置于高速离心机中10000 rpm离心3min,得上清液和沉淀物,此步骤重复2次,得到上清液;
(5)过滤:将步骤(3)和步骤(4)中所得到的上清液用孔径1 μm的无菌微孔滤膜过滤,合并滤液;
(6)吸附:将步骤(5)得到的滤液用浓度为40%的食用乙醇调整至终浓度为60 mg/mL,再以1mL/min的流速通过AB-8食品级大孔树脂进行吸附;
(7)解吸:用浓度为90%的食用乙醇以2mL/min的流速洗脱AB-8食品级大孔树脂吸附物,得洗脱液;
(8)减压蒸干:将步骤(7)得到的洗脱液置于真空度为-0.15MPa的减压蒸干机中干燥,回收溶剂,即得到根皮苷74.18g。
本实施例中根皮苷的得率为94.02%,纯度为98.97%。
实施例3
一种提取多穗石柯根皮苷的方法,包括以下工艺步骤:
(1)烘干:将多穗石柯新鲜叶片(其中根皮苷含量为7.89%)经真空冷冻干燥处理,干燥至含水量≤15%,得干燥叶片;
(2)粉碎:将干燥叶片置于中药粉碎机,粉碎至粒度为200目,得多穗石柯粉末;
(3)超声提取:取1kg多穗石柯粉末加入超声波容器中,再加入体积比为5:1的乙醇(乙醇浓度为95%)和碳酸二甲酯混合溶剂15L,在功率为350W下超声提取20min,将超声提取得到的液体置于高速离心机中10000rpm离心5min,得到上清液和沉淀物;
(4)重复超声提取:将步骤(3)中得到的沉淀物加入超声波容器中,再加入体积比为5:1的乙醇和碳酸二甲酯混合有机溶剂8L,在功率为350W下超声提取20min,将提取得到的液体置于高速离心机中10000 rpm离心5min,得上清液和沉淀物,此步骤重复2次,得到上清液;
(5)过滤:将步骤(3)和步骤(4)中所得到的上清液用孔径1μm的无菌微孔滤膜过滤,合并滤液;
(6)吸附:将步骤(5)得到的滤液用浓度为40%的食用乙醇调整至终浓度为60 mg/mL,再以1mL/min的流速通过AB-8食品级大孔树脂进行吸附;
(7)解吸:用浓度为90%的食用乙醇以3mL/min的流速洗脱AB-8食品级大孔树脂吸附物,得洗脱液;
(8)减压蒸干:将步骤(7)得到的洗脱液置于真空度为-0.20MPa的减压蒸干机中干燥,回收溶剂,即得到根皮苷74.97g。
本实施例中根皮苷的得率为95.01%,纯度为99.83%。
实施例4
一种提取多穗石柯根皮苷的方法,包括以下工艺步骤:
(1)烘干:将多穗石柯新鲜叶片(其中根皮苷含量为7.89%)经真空冷冻干燥处理,干燥至含水量≤15%,得干燥叶片;
(2)粉碎:将干燥叶片置于中药粉碎机,粉碎至粒度为200目,得多穗石柯粉末;
(3)超声提取:取1kg多穗石柯粉末加入超声波容器中,再加入体积比为6:1的乙醇(乙醇浓度为90%)和碳酸二甲酯混合溶剂12L,在功率为350W下超声提取30min,将超声提取得到的液体置于高速离心机中10000rpm离心3min,得到上清液和沉淀物;
(4)重复超声提取:将(3)中得到的沉淀物加入体积比为6:1的乙醇和碳酸二甲酯混合有机溶剂8L,在功率为350W下超声提取30min,将提取得到的液体置于高速离心机中10000rpm离心3min,得上清液和沉淀物,此步骤重复2次,得到上清液;
(5)过滤:将步骤(3)和步骤(4)中所得到的上清液用孔径1μm的无菌微孔滤膜过滤,合并滤液;
(6)吸附:将步骤(5)得到的滤液用浓度为40%的食用乙醇调整至终浓度为60 mg/mL,再以1mL/min的流速通过AB-8食品级大孔树脂进行吸附;
(7)解吸:用浓度为90%的食用乙醇以2mL/min的流速洗脱AB-8食品级大孔树脂吸附物,得洗脱液;
(8)减压蒸干:将步骤(7)得到的洗脱液置于真空度为-0.15MPa的减压蒸干机中干燥,回收溶剂,即得到根皮苷74.97g。
本实施例中根皮苷的得率为92.65%,纯度为99.16%。
对比例1
一种提取多穗石柯根皮苷的方法,包括以下工艺步骤:
(1)烘干:将多穗石柯新鲜叶片(其中根皮苷含量为7.89%)经真空冷冻干燥处理,干燥至含水量≤15%,得干燥叶片;
(2)粉碎:将干燥叶片置于中药粉碎机,粉碎至粒度为200目,得多穗石柯粉末;
(3)超声提取:取1kg多穗石柯粉末加入超声波容器中,再加入浓度为95%的乙醇15L,在功率为350W下超声提取20min,将超声提取得到的液体置于高速离心机中10000rpm离心5min,得上清液和沉淀物;
(4)重复超声提取:将步骤(3)中得到的沉淀物加入浓度为95%的乙醇8L,在功率为350W下超声提取20min,将提取得到的液体置于高速离心机中10000 rpm离心5min,得上清液和沉淀物,此步骤重复2次,得到上清液;
(5)过滤:将步骤(3)和步骤(4)中所得到的上清液用孔径1μm的无菌微孔滤膜过滤,合并滤液;
(6)吸附:将步骤(5)得到的滤液用浓度为40%的食用乙醇调整至终浓度为60 mg/mL,再以1mL/min的流速通过AB-8食品级大孔树脂进行吸附;
(7)解吸:用浓度为90%的食用乙醇以3mL/min的流速洗脱AB-8食品级大孔树脂吸附物,得洗脱液;
(8)减压蒸干:将步骤(7)得到的洗脱液置于真空度为-0.20MPa的减压蒸干机中干燥,回收溶剂,即得到根皮苷58.43g。
本实施例中根皮苷的得率为74.06%,纯度为98.24%。
Claims (6)
1.一种提取多穗石柯根皮苷的方法,其特征在于:包括以下工艺步骤:
(1)烘干:将多穗石柯新鲜叶片经真空冷冻干燥处理,干燥至含水量≤15%,得干燥叶片;
(2)粉碎:将干燥叶片置于中药粉碎机,粉碎至粒度为100-200目,得多穗石柯粉末;
(3)超声提取:将上述多穗石柯粉末加入超声波容器中,再加入乙醇和碳酸二甲酯混合溶剂,其中多穗石柯粉末与混合溶剂的固液比为1:10-15,在功率为250-350W下超声提取20-30 min,将超声提取得到的液体置于高速离心机中10000 rpm离心2 -5min,得到上清液和沉淀物;
(4)重复超声提取:将步骤(3)中得到的沉淀物再加入超声波容器中,加入乙醇和碳酸二甲酯混合有机溶剂,在功率为250-350W下超声提取20-30 min,将提取得到的液体置于高速离心机中10000 rpm离心2 -5min,得上清液和沉淀物,此步骤重复2次,得到上清液;
(5)过滤:将步骤(3)和步骤(4)中所得到的上清液用孔径1 μm的无菌微孔滤膜过滤,合并滤液;
(6)吸附:将步骤(5)得到的滤液用食用乙醇调整至终浓度为60 mg/mL,再以1 mL/min的流速通过AB-8食品级大孔树脂进行吸附;
(7)解吸:用浓度为90%的食用乙醇以1-3 mL/min的流速洗脱AB-8食品级大孔树脂吸附物,得洗脱液;
(8)减压蒸干:将步骤(7)的洗脱液置于减压蒸干机中干燥,回收溶剂,即得到根皮苷。
2.根据权利要求1所述提取多穗石柯根皮苷的方法,其特征在于:步骤(3)和步骤(4)所述乙醇和碳酸二甲酯的体积比为3-6:1。
3.根据权利要求2所述提取多穗石柯根皮苷的方法,其特征在于:步骤(3)和步骤(4)所述乙醇的浓度为85-95%。
4.根据权利要求1所述提取多穗石柯根皮苷的方法,其特征在于:步骤(6)所述食用乙醇的浓度为40%。
5.根据权利要求1所述提取多穗石柯根皮苷的方法,其特征在于:步骤(7)所述食用乙醇的用量为AB-8食品级大孔树脂体积的2-3倍。
6.根据权利要求1所述提取多穗石柯根皮苷的方法,其特征在于:步骤(8)所述的减压蒸干的真空度为-0.15~ -0.2Mpa。
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