CN101773593B - 一种甘薯叶抗氧化活性提取物的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种甘薯叶抗氧化活性提取物的制备方法，属于农产品加工领域。将新鲜甘薯叶干燥粉碎，脱色脱脂处理后微波辅助浸提，提取液真空减压浓缩，然后通过柱层析，用大孔树脂进行吸附。收集洗脱液，洗脱液经真空减压浓缩得到甘薯叶提取液，再经喷雾干燥，得到粉末状甘薯叶提取物。该产品为粉末状，具有甘薯叶特有的香味，含有的总酚含量为65～75％，并含有绿原酸、3，5-二咖啡酰奎尼酸。本发明采用大量废弃的甘薯叶制备具有强抗氧化活性的提取物，变废为宝，是一种绿色产业；且工艺简单，无须较大设备投资，抗氧化活性物质提取率高，适合于工业化生产。
Description
技术领域
本发明涉及一种具有抗氧化活性的植物提取物的制备方法，具体地说，涉及一种甘薯叶抗氧化活性提取物的制备方法，属于农产品加工领域。
背景技术
现代医药学研究表明，甘薯[lpomoea batatas Lam.]叶具有促进胃肠蠕动，刺激消化，治疗便秘，促进胆固醇排泄，防止心血管脂肪沉积，维持动脉血管弹性，保护消化道、呼吸道及关节腔润滑等功效。我国中药资料记载以甘薯茎叶入药，其药性微味甘涩，无毒具有通乳汁、溃痈疮、排脓、解毒的功效，主治妇人乳汁不通，痛疮久不溃脓，大便带血及红腹、腹泻等症状。据国内外资料介绍甘薯叶具有增强免疫功能，提高机体抗病力，延缓衰老，抗癌、通便利尿、解毒等保健功能。甘薯叶医疗保健作用与多酚类化合物有关。有研究表明西蒙1号红薯叶中主要清除自由基的物质为绿原酸、咖啡酸和几种多酚化合物。
王友升等在《安徽农业科学》杂志2008年第一期上报道了利用正交试验对甘薯叶中清除自由基的活性物质的提取及保存条件进行优化的研究，并通过相关性分析对提取物中清除自由基能力的活性成分进行探讨。结果表明：甘薯叶中含有清除DPPH自由基和羟自由基的活性物质，甘薯叶提取物总酚含量与其DPPH和羟自由基清除率呈正比关系且具有良好的线性关系；提取物总黄酮含量仅与羟自由基清除率有较好线性关系。提取物中的酚类物质能有效地清除DPPH自由基和羟自由基；提取物中的黄酮类物质仅能有效清除羟自由基。
刘丽香2008年在其硕士论文《甘薯叶中多酚提纯工艺及抗氧化活性研究》中研究确定了甘薯叶多酚的最优提取工艺参数。从116个国产栽培品种甘薯叶中筛选出多酚含量高且抗氧化活性强的优良品种-莆薯53，评价了其粗提物和各分部萃取物的多酚含量及体外抗氧化活性；研究了大孔吸附树脂初步分离纯化甘薯叶多酚的最优条件，并利用HPLC和LC-MS技术对甘薯叶多酚的具体组成进行了分析。
目前有关甘薯营养价值的研究较多，但对甘薯茎叶研究却远不及对甘薯的研究。甘薯叶能够作为中药治疗多种疾病，说明它富含生物活性成分，尤其是甘薯叶提取物中的酚类物质能有效地清除DPPH自由基和羟自由基。经过专利检索，目前还没有发现甘薯叶提取物的相关研究报道。
甘薯深加工利用后的茎叶藤得不到合理利用，绝大部分被弃置于田间路旁，既污染环境，也造成资源极大浪费。将甘薯叶进行深加工，具有十分重要的经济价值和现实意义。
发明内容
技术问题
本发明的目的在于提供一种甘薯叶抗氧化活性提取物的制备方法。该方法生产的甘薯叶抗氧化活性提取物含量高，避免了活性成分的损失，在充分保留甘薯叶抗氧化活性成分的同时，简化了生产工艺、缩短了生产周期。
技术方案
本发明利用筛选的甘薯叶制备甘薯叶抗氧化活性提取物的方法，是以宁薯43-8叶或宁紫薯1号叶为原料，经过烘干、粉碎、微波辅助提取、浓缩、过大孔树脂柱，再经过喷雾干燥而制得粉末状的甘薯叶抗氧化活性提取物的方法。一种甘薯叶抗氧化活性提取物的制备方法，包括如下步骤：
(1)将新鲜甘薯叶收集洗净，经干燥处理后粉碎过40～60目筛待用；
(2)将过筛后的甘薯叶粉采用石油醚脱脂脱色处理，石油醚用量为3∶1～5∶1，处理时间为2～5小时；
(3)将脱脂脱色后的甘薯叶粉加入重量百分比浓度为50～80％的乙醇水溶液，甘薯叶粉∶乙醇水溶液为按重量百分比计1∶20～1∶35，放入微波设备中进行浸提微波频率2450MHz、微波功率200～500W，浸提时间为3～8分钟，浸提1-3次；
(4)合并提取液，过滤，滤液回收溶剂，真空减压浓缩，其真空度为-0.02～0.08Mpa，温度为30～60℃，真空浓缩至浓缩液体积为料液体积的1/10～1/15，得到甘薯叶浓缩液；
(5)得到甘薯叶浓缩液后，用大孔树脂进行吸附，用去离子水清洗大孔树脂至流出液体为无色，再用浓度为50～80％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液；所述大孔树脂所选用的型号为AB-8或D101。
(6)洗脱液经真空减压浓缩得到甘薯叶提取液；
(7)甘薯叶提取液再经过喷雾干燥，喷雾干燥时进风口温度160～190℃，出风口温度80～100℃，得到粉末状甘薯叶提取物。
该甘薯叶抗氧化活性提取物为粉末状，具有甘薯叶特有的香味，含有的总酚含量为65～75％，并含有绿原酸、3，5-二咖啡酰奎尼酸。
有益效果
1.由于我国甘薯叶资源丰富，除了少数菜用外，多数被扔弃在路旁，没有得到很好地加工利用，使得目前甘薯叶资源利用率很低，造成资源浪费，且污染环境。因此对甘薯叶进行产业化开发利用，具有显著的经济效益和社会效益。
2.经过试验比较4个甘薯叶品种的DPPH自由基清除能力，结果表明，生长期为45-60天时，宁薯43-8叶和宁紫薯1号叶DPPH自由基清除能力相对较强，且DPPH自由基清除能力均达到80％以上。
表1不同品种不同生长期的甘薯叶清除DPPH·能力比较
3.目前，天然植物活性成分常用的提取方法有常规回流提取、酶法辅助提取、超声波辅助提取和微波辅助提取。常规回流提取法工艺简单、成本低、不会对环境造成污染，实用优点是经济、安全和实用，但溶出的杂质多、提取时间长，溶剂耗量大，为后续精制工艺增添一定的难度；酶法提取选择性较好，但是成本高，得率较低；超声波辅助提取是一种极具应用前景的提取方法，但有研究表明，超声波在活性物质的提取过程中会对其结构和活性产生影响；微波加热固体物质具有加热速度快、均匀性好、节能高效、易于控制等多种特点，已经广泛应用于天然化合物及生物活性成分的提取。微波辅助提取(Microwave-assisted Extraction，MAE)不仅可显著缩短提取时间、减少能源和溶剂消耗以及废物的产生，同时还可以提高目标成分的得率，是一种颇具瞻前性的绿色环保辅助提取技术。
经过对比试验发现，常规回流提取，微波辅助提取均能将甘薯叶中主要的抗氧化活性物质浸提出来，经过常规回流提取后获得的甘薯叶粗提液DPPH自由基清除能力的保留率在60.8～72.3％之间，经过微波辅助提取后获得的甘薯叶粗提液DPPH自由基清除能力的保留率在73.7～81.4％之间，由此可知微波辅助提取对甘薯叶抗氧化能力影响较小(见表2)。微波辅助提取较常规回流提取时间缩短了30倍，节约了时间和溶剂用量，在大大缩短溶剂萃取时间的情况下获得理想的萃取效果。
表2不同提取方法对宁薯43-8叶粗提液DPPH自由基清除能力的影响
4.由于甲醇、丙酮等溶剂存在食用安全隐患，用较为适中浓度的乙醇提取结合微波辅助提取，可以最大限度地增大原料中抗氧化活性物质的溶出，提高提取物的抗氧化能力，又可以减少成本，提高提取效率。采用响应曲面法对微波辅助提取甘薯叶抗氧化活性物质工艺进行优化，确定最佳工艺参数为：微波功率260W，微波时间为105分钟，乙醇浓度为58％。如图1-3所示。
5.为提高甘薯叶抗氧化活性提取物的纯度和提取率，对甘薯叶粗提物采用大孔吸附树脂进一步纯化，具有操作简单易行，成本低，效率高，稳定性好等优点。通过大孔树脂静态吸附试验结果表明，不同型号的大孔树脂对甘薯叶抗氧化活性提取物的吸附效果明显不同，在所选的5种树脂中，以AB-8和D101的效果最好。
附图说明
图1微波功率和提取时间对DPPH自由基清除能力影响的响应曲面
图2微波功率和乙醇浓度对DPPH自由基清除能力影响的响应曲面
图3微波时间和乙醇浓度对DPPH自由基清除能力影响的响应曲面
图4甘薯叶提取物的高效液相色谱图
图5依据本发明提供的工艺流程图
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步阐述，但不因此而限制本发明。
实施例1
选用宁紫薯1号叶品种1千克，将新鲜甘薯叶收集洗净，经干燥后粉碎过60目筛待用；将过筛后的甘薯叶粉采用石油醚脱色脱脂，石油醚用量为5∶1，处理时间为3小时；将脱色脱脂甘薯叶粉加入60％乙醇水溶液，放入微波设备中进行浸提，微波功率300W，甘薯叶粉∶乙醇水溶液为1∶25(按重量百分比计)，提取2次，每次提取时间5分钟。合并提取液，过滤，滤液回收溶剂，真空减压浓缩，其真空度为-0.02～0.08Mpa，温度为40℃，得到甘薯叶粗提液；得到甘薯叶粗提液后，用AB-8型大孔树脂进行吸附。用去离子水清洗大孔树脂至流出液体为无色，再用浓度为70％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液；洗脱液经真空减压浓缩得到甘薯叶提取液；甘薯叶提取液再经过喷雾干燥，喷雾干燥时进风口温度180℃，出风口温度90℃，得到粉末状甘薯叶提取物26.8克，其中总酚含量18.7克，达69.8％，并含有绿原酸10.3克、3，5-二咖啡酰奎尼酸4.6克。
甘薯叶提取物总酚含量的测定采用福林-酚比色法(Folin-Ciocalteu法)。准确称取真空干燥至恒重的没食子酸标准品10mg，用水溶解并定容至100mL。配制成不同浓度梯度，分别取上述不同浓度溶液1mL加到10mL比色管中，然后依次加入1mL去离子水，0.5mL已稀释2倍的福林-酚试液，1.5mL20％Na2CO3溶液，用水定容至10mL，室温下反应2h，在760nm下测定吸光度。由吸光度对浓度进行回归，求得标准曲线为y＝0.0802x-0.032，相关系数R2＝0.9920。
甘薯叶提取物DPPH自由基清除率的测定方法。取2mL样品溶液，加入2×10-4mol/LDPPH·溶液2mL，30min后，于517nm处测吸光值。通过下式计算对DPPH·的清除率。
DPPH·清除率(％)＝[1-(Ai-Aj)/A0]×100％
式中，Ai为样液清除DPPH·后的吸光值，Aj为样液在517nm处的吸光值，A0为DPPH·的吸光值。重复三次。
甘薯叶提取物HPLC主要成分分析。仪器设备：美国安捷伦高效液相色谱仪HPLC1200，在线真空脱气机，四元梯度洗脱泵，柱温箱，DAD检测器；色谱柱：C18柱，5μm，4.6×250mm；流动相组成：1％(v/v)甲酸溶液(A)和甲醇(B)，pH 2.5，梯度洗脱，0-20min：流动相B从20％到35％，20-35min：流动相B从35％到50％，35-65min：流动相B从50％到65％。流速0.6ml/min，温度25℃，进样量20μl，检测波长320nm。见图4。
实施例2
选用宁薯43-8叶品种1千克，将新鲜甘薯叶收集洗净，经干燥后粉碎过60目筛待用；将过筛后的甘薯叶粉采用石油醚脱色脱脂，石油醚用量为4∶1，处理时间为2.5小时；将脱色脱脂甘薯叶粉加入70％乙醇水溶液，放入微波设备中进行浸提，微波功率250W，甘薯叶粉∶乙醇水溶液为1∶25(按重量百分比计)，提取2次，每次提取时间5分钟。合并提取液，过滤，滤液回收溶剂，真空减压浓缩，其真空度为-0.02～0.08Mpa，温度为35℃，得到甘薯叶粗提液；得到甘薯叶粗提液后，用D101型大孔树脂进行吸附。用去离子水清洗大孔树脂至流出液体为无色，再用浓度为70％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液；洗脱液经真空减压浓缩得到甘薯叶提取液；甘薯叶提取液再经过喷雾干燥，喷雾干燥时进风口温度170℃，出风口温度80℃，得到粉末状甘薯叶提取物24.6克，其中总酚含量17.8克，达72.4％，并含有绿原酸10.3克、3，5-二咖啡酰奎尼酸3.9克。
实施例3
选用宁紫薯1号叶品种0.5千克，将新鲜甘薯叶收集洗净，经干燥后粉碎过40目筛待用；将过筛后的甘薯叶粉采用石油醚脱色脱脂，石油醚用量为3∶1，处理时间为3小时；将脱色脱脂甘薯叶粉加入70％乙醇水溶液，放入微波设备中进行浸提，微波功率300W，甘薯叶粉∶乙醇水溶液为1∶25(按重量百分比计)，提取3次，每次提取时间3分钟。合并提取液，过滤，滤液回收溶剂，真空减压浓缩，其真空度为-0.02-0.08Mpa，温度为35℃，得到甘薯叶粗提液；得到甘薯叶粗提液后，用AB-8型大孔树脂进行吸附。用去离子水清洗大孔树脂至流出液体为无色，再用浓度为60％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液；洗脱液经真空减压浓缩得到甘薯叶提取液；甘薯叶提取液再经过喷雾干燥，喷雾干燥时进风口温度160℃，出风口温度90℃，得到粉末状甘薯叶提取物14.2克，其中总酚含量9.9克，达69.7％，并含有绿原酸4.8克、3，5-二咖啡酰奎尼酸1.5克。
实施例4
选用宁薯43-8叶品种0.5千克，将新鲜甘薯叶收集洗净，经干燥后粉碎过40目筛待用；将过筛后的甘薯叶粉采用石油醚脱色脱脂，石油醚用量为3∶1，处理时间为2小时；将脱色脱脂甘薯叶粉加入80％乙醇水溶液，放入微波设备中进行浸提，微波功率400W，甘薯叶粉∶乙醇水溶液为1∶25(按重量百分比计)，提取2次，每次提取时间4分钟。合并提取液，过滤，滤液回收溶剂，真空减压浓缩，其真空度为-0.02～0.08Mpa，温度为35℃，得到甘薯叶粗提液；得到甘薯叶粗提液后，用AB-8型大孔树脂进行吸附。用去离子水清洗大孔树脂至流出液体为无色，再用浓度为70％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液；洗脱液经真空减压浓缩得到甘薯叶提取液；甘薯叶提取液再经过喷雾干燥，喷雾干燥时进风口温度190℃，出风口温度100℃，得到粉末状甘薯叶提取物12.6克，其中总酚含量9.4克，达74.6％，并含有绿原酸4.9克、3，5-二咖啡酰奎尼酸2.2克。
Claims (4)
1.一种甘薯叶抗氧化活性提取物的制备方法，包括如下步骤：
(1)将新鲜甘薯叶收集洗净，经干燥处理后粉碎过40～60目筛待用；
(2)将过筛后的甘薯叶粉采用石油醚脱脂脱色处理，石油醚用量为3∶1～5∶1，处理时间为2～5小时；
(3)将脱脂脱色后的甘薯叶粉加入重量百分比浓度为50～80％的乙醇水溶液，甘薯叶粉∶乙醇水溶液为按重量百分比计1∶20～1∶35，放入微波设备中进行浸提，微波频率2450MHz、微波功率200～500W，浸提时间为3～8分钟，浸提1-3次；
(4)合并提取液，过滤，滤液回收溶剂，真空减压浓缩，其真空度为-0.02～0.08Mpa，温度为30～60℃，真空浓缩至浓缩液体积为料液体积的1/10～1/15，得到甘薯叶浓缩液；
(5)得到甘薯叶浓缩液后，用大孔树脂进行吸附，用去离子水清洗大孔树脂至流出液体为无色，再用浓度为50～80％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液；
(6)洗脱液经真空减压浓缩得到甘薯叶提取液；
(7)甘薯叶提取液再经过喷雾干燥，喷雾干燥时进风口温度160～190℃，出风口温度80～100℃，得到粉末状甘薯叶提取物。
2.根据权利要求1所述一种甘薯叶抗氧化活性提取物的制备方法，其特征在于：步骤(5)所述大孔树脂所选用的型号为AB-8或D101。
3.权利要求1或2所述方法制备获得的甘薯叶抗氧化活性提取物产品。
4.根据权利要求3所述的产品，其特征在于：该甘薯叶抗氧化活性提取物为粉末状，具有甘薯叶特有的香味，含有的总酚含量为65～75％，并含有绿原酸和3，5-二咖啡酰奎尼酸。
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