CN105998139B - 一种从甘薯叶提取黄酮的方法 - Google Patents

一种从甘薯叶提取黄酮的方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种从甘薯叶提取黄酮的方法，该方法包括预处理、提取、大孔树脂吸附与洗脱等步骤。本发明方法能够制备得到具有抗氧化作用的甘薯叶黄酮，它的DPPH自由基清除能力比传统60％乙醇水提法提高1.35～1.77倍，比传统水提法提高1.58～2.08倍，具有明显高的DPPH自由基清除能力。在DPPH自由基体系中，甘薯叶黄酮的IC50为36.21～47.62μg/mL。本发明的方法是一种绿色环保、前景广阔的生物活性成分提取技术，适宜于工业化生产。

Description

一种从甘薯叶提取黄酮的方法
【技术领域】
本发明属于天然活性物质提取技术领域。更具体地，本发明涉及一种从甘薯叶提取黄酮的方法。
【背景技术】
甘薯(Ipomoea batatas Lam.)又称红薯、番薯和地瓜，属旋花科植物，原产于美洲中部和南美洲西北部热带地区，其叶子在香港被称为“蔬菜皇后”，在美国、日本被列为“长寿食品”。据国外文献报道甘薯叶中含有丰富的胡萝卜素、VB1、VB2、Vc、铁、钙、镁等矿质元素及蛋白质、粗纤维、氨基酸、氯原酸、多糖、黄酮类成分等。甘薯叶作为甘薯的副产品，其所含有的生物活性成分黄酮类化合物具有清除自由基、抗癌作用、抗突变作用、免疫增强等作用。
目前，我国年产甘薯叶700多亿千克，如何充分利用这一资源大量制备生物活性黄酮将会具有十分重大的经济价值和现实意义。提取分离纯化是天然产物生产中的重要环节。大孔树脂法具有吸附容量大、吸附速度快、选择性好、再生简便等优点，因而被广泛用于天然产物的分离纯化。虽然在中国南方部分地区，也有食甘薯藤叶的饮食习惯，但没有对其所含的具有重要生理活性的有效成分进行研究，使得这一资源被扔弃而造成极大资源浪费。
为了使甘薯资源得以综合开发利用，为营养、保健价值的全面评价及其深层次加工成功能性绿色食品、药品提供一定的依据，本发明人对其有效成分-黄酮类物质进行了提取和分析，在此基础上完成了本发明。
【发明内容】
[要解决的技术问题]
本发明的目的是提供一种从甘薯叶提取黄酮的方法。
[技术方案]
本发明是通过下述技术方案实现的。
本发明涉及一种从甘薯叶提取黄酮的方法。
该方法的步骤如下：
A、预处理
将甘薯叶在烘箱中在温度42～45℃下烘干，然后在恒温恒湿干燥器中在温度108～112℃的条件下烘干直至达到恒重，再研磨得到甘薯叶粉；
B、提取
按照以克计甘薯叶粉与以毫升计乙醇水溶液的固液比为1:20～50，把在步骤A得到的甘薯叶粉加到乙醇水溶液中，混合均匀，再在高压脉冲电场下进行处理，减压过滤，滤渣经洗涤后得到甘薯叶黄酮粗产品；
C、大孔树脂吸附
将步骤B得到的甘薯叶黄酮粗产品配制成10.0mg/mL的水溶液，然后让所述水溶液通过大孔树脂床进行吸附，接着转移到水浴中在恒温振荡器里进行振荡吸附；
D、洗脱
让步骤C振荡吸附大孔树脂过滤，用蒸馏水洗涤2～3次，滤干，接着用乙醇水溶液洗脱，洗脱液经减压浓缩与真空冷冻干燥，得到所述的甘薯叶黄酮。
根据本发明的另一种优选实施方式，在步骤A中，所述甘薯叶粉的粒度是100目以上。
根据本发明的另一种优选实施方式，在步骤B中，所述的乙醇水溶液浓度为以体积计60～80％。
根据本发明的另一种优选实施方式，在步骤B中，在脉冲宽度2μs、脉冲频率200Hz与功率100～500W的条件下进行高压脉冲电场处理1～6h。
根据本发明的另一种优选实施方式，在步骤B中，在高压脉冲电场下处理的物料在压力0.008～0.012MPa下过滤0.4～0.6h。
根据本发明的另一种优选实施方式，在步骤C中，所述的水溶液在吸附速度1.8～2.2BV/h、所述水溶液与大孔树脂的体积比18～22:1的条件下吸附1.8～2.2h。
根据本发明的另一种优选实施方式，在步骤C中，在水浴温度30℃与振荡频率1000r/min的条件下振荡吸附11～13h。
根据本发明的另一种优选实施方式，在步骤D中，洗涤时振荡吸附的大孔树脂与蒸馏水的体积比是1：2～4。
根据本发明的另一种优选实施方式，在步骤D中，使用浓度为以体积计45～55％的乙醇水溶液在洗脱速度1.8～2.2BV/h、所述乙醇水溶液与大孔树脂的体积比18～22:1的条件下进行洗脱。
根据本发明的另一种优选实施方式，在步骤D中，洗脱液在压力0.08～0.12MPa下浓缩1.6～2.4h，接着在压力0.08～0.12MPa与温度-20℃下进行真空冷冻干燥。
下面将更详细地描述本发明。
一种从甘薯叶提取黄酮的方法。该方法的步骤如下：
A、预处理
将甘薯叶在烘箱中在温度42～45℃下烘干，然后在恒温恒湿干燥器中在温度108～112℃的条件下烘干直至达到恒重，再研磨得到甘薯叶粉；
在本发明中，甘薯叶在温度42～45℃下烘干的主要作用是除去甘薯叶中的水分。本发明使用的烘箱是一种常规的干燥设备，例如由上海一恒科技有限公司以商品名DZF-6063销售的烘箱。
根据本发明，烘干的甘薯叶再在恒温恒湿干燥器中烘干的主要作用是除去可能残留的水分。本发明使用的恒温恒湿干燥器是一种目前市场上销售的干燥设备，例如由上海跃进医疗器械厂公司以商品名LRHS-150B销售的恒温恒湿干燥器。
在步骤A中，使用的烘干甘薯叶研磨设备是本技术领域里在研磨时通常使用的设备，是目前市场上销售的研磨设备。
在本发明中，所述甘薯叶粉的粒度是100目以上。如果所述甘薯叶粉的粒度小于100目，则会使原料料层过厚，物料粒子能量吸收不均，作用效果不均衡，得率小。
B、提取
按照以克计甘薯叶粉与以毫升计乙醇水溶液的固液比为1:20～50，把在步骤A得到的甘薯叶粉加到乙醇水溶液中，混合均匀，再在高压脉冲电场下进行处理，减压过滤，滤渣经洗涤后得到甘薯叶黄酮粗产品；
在本发明中，乙醇水溶液提取剂从甘薯叶中提取黄酮的基本机制是极性相近的体系相近相溶的原理。
根据本发明，所述的乙醇水溶液浓度为以体积计60～80％。选择这个乙醇水溶液浓度范围主要在于此浓度条件的体系与提取目标对象极性更近，提取效率更高。
根据本发明，如果甘薯叶粉与乙醇水溶液的固液比大于1:20，则有效组分无法在乙醇水溶液中完全溶出；如果甘薯叶粉与乙醇水溶液的固液比小于1:50，则溶剂量达到一定程度之后，有效组分已经基本完全溶出，得率变化不明显，此时处理成本明显提高；因此，甘薯叶粉与乙醇水溶液的固液比为1:20～50，是合理的，优选地是1:28～42，更优选地是1:32～38。
高压脉冲电场法是利用细胞膜电穿孔原理在瞬间使细胞破壁，造成细胞膜电位混乱，细胞壁和细胞膜发生可逆或小可逆的破坏，细胞组分流出，因此具有处理时间短、能耗低、不易引起目标产物变性等优点。
在本发明中利用了高压脉冲电场法处理甘薯叶粉。有甘薯叶粉的乙醇水溶液在脉冲宽度为2μs、脉冲频率为200Hz与功率100～500W的条件下进行高压脉冲电场处理1～6h。
在本发明中，如果高压脉冲电场的脉冲宽度与脉冲频率为其它值时，溶出的有效组分太低或者溶出的杂质成分太高。
高压脉冲电场的脉冲宽度为2μs与脉冲频率为200Hz时，如果高压脉冲电场的功率小于100W，则高压脉冲电场对植物细胞破坏的程度和数量均不够；如果高压脉冲电场的功率大于500W，则造成有效组分的降解，提取率降低；因此，高压脉冲电场的功率为100～500W是可行的。
这种高压脉冲电场是由目前市场上销售的美国俄亥俄州州立大学生产的OSU-4L型实验室规模高压脉冲电场连续处理设备提供的。
根据本发明，对经高压脉冲电场处理的物料使用上海子期实验设备有限公司销售的SHZ-D(III)循环水式真空泵在压力0.008～0.012MPa下进行减压过滤0.4～0.6h。
得到的滤渣使用本发明提取溶剂乙醇水溶液洗涤2～4次，洗涤的滤渣是所述的甘薯叶黄酮粗产品。采用下面将描述的硝酸铝显色法可以测定得到该甘薯叶黄酮粗产品的黄酮含量。
C、大孔树脂吸附
将步骤B得到的甘薯叶黄酮粗产品配制成10.0mg/mL的水溶液，然后让所述水溶液通过大孔树脂床进行吸附，接着转移到水浴中在恒温振荡器里进行振荡吸附；
所述的大孔树脂吸附的基本作用是纯化有效的黄酮成分。
本发明使用的大孔树脂是目前市场上销售的各种大孔树脂产品，例如南开大学化工厂生产的Daion HP-20大孔树脂等。
本发明使用的大孔树脂需要进行预处理，首先，筛分收集有效粒径为0.5mm的大孔树脂。然后，这种大孔树脂在2倍体积的无水乙醇中浸泡10h，分离乙醇，用去离子水洗涤，直至洗涤液无白色混浊，无醇味。接着，这种大孔树脂在2倍体积、浓度为以重量计5％的NaOH水溶液中浸泡3h，再分离NaOH水溶液，用去离子水洗涤至洗涤液呈中性。然后，在2倍体积、浓度为以重量计5％的HCl水溶液中浸泡3h；分离HCl水溶液，再用去离子水洗涤至洗涤液呈中性。
在这个步骤中，所述的甘薯叶黄酮粗产品水溶液在吸附速度1.8～2.2BV/h、水溶液与大孔树脂的体积比18～22:1的条件下吸附1.8～2.2h。
在大孔树脂床吸附后，在恒温振荡器里，让这种大孔树脂在水浴温度30℃与振荡频率1000r/min的条件下在所述的水溶液中振荡吸附11～13h。
本发明使用的恒温振荡器是目前市场上销售的产品，例如上海一恒WSZ-10A恒温振荡器。
D、洗脱
让步骤C振荡吸附大孔树脂过滤，用蒸馏水洗涤2～3次，滤干，接着用乙醇水溶液洗脱，洗脱液经减压浓缩与真空冷冻干燥，得到所述的甘薯叶黄酮。
在这个步骤中，用蒸馏水洗涤的基本作用是除去树脂表面杂质。用蒸馏水洗涤时，振荡吸附的大孔树脂与蒸馏水的体积比是1：2～4。
根据本发明，使用乙醇水溶液洗脱的基本作用是洗脱出有效的黄酮类物质。使用浓度为以体积计45～55％的乙醇水溶液在洗脱速度1.8～2.2BV/h、乙醇水溶液与大孔树脂的体积比18～22:1的条件下进行洗脱，收集洗脱液。
收集的洗脱液进行浓缩的目的在于得到浓缩的有效黄酮类产品。收集洗脱液在压力0.08～0.12MPa下浓缩1.6～2.4h，接着在压力0.08～0.12MPa与温度-20℃下进行真空冷冻干燥。
本发明使用的真空冷冻干燥器是目前市场上销售的产品，例如由北京博医康实验仪器有限公司以商品名FD-1A-50真空冷冻干燥器销售的产品。
本发明制备得到的甘薯叶黄酮固体样品采用常规紫外分光光度法进行了分析。
硝酸铝络合分光光度法测定总黄酮是在中性或弱碱性环境与亚硝酸钠的存在下，黄酮类化合物与铝盐生成螯合物，加入氢氧化钠后其溶液则显红橙色，在波长510nm处有吸收峰且符合定量分析的比尔定律。因此，可以硝酸铝络合分光光度法测定其甘薯叶黄酮纯度与得率。
本发明采用常规硝酸铝络合分光光度法，使用UV2000紫外可见分光光度计测定在波长510nm处的吸光值，由这个吸光值测得本发明甘薯叶黄酮的纯度。按照下述公式计算得到甘薯叶黄酮的得率：
得率(mg/g)＝提取黄酮产品质量(mg)/甘薯叶原料总量(g)
DPPH自由基有单电子，在波长517nm处有一个强吸收峰，其醇溶液呈紫色特性。当有自由基清除剂存在时，由于与其单电子配对而使其吸收逐渐消失，其褪色程度与其接受电子数量成定量关系，因而可以采用分光光度计进行快速定量分析。
本发明采用分光光度法测定517nm处的吸光值变化计算甘薯叶黄酮清除DPPH自由基的能力。
采用本发明方法制备得到的甘薯叶黄酮产品DPPH自由基清除能力比传统60％乙醇水提法提高1.35～1.77倍，比传统水提法提高1.58～2.08倍，具有明显提高的DPPH自由基清除能力。如图1所显示的，在DPPH自由基体系中，甘薯叶黄酮的IC50为36.21～47.62μg/mL。
[有益效果]
本发明的有益效果是：本发明从甘薯叶提取黄酮的方法能够制备得到具有抗氧化作用的甘薯叶黄酮，它的DPPH自由基清除能力比传统60％乙醇水提法提高1.35～1.77倍，比传统水提法提高1.58～2.08倍，具有明显高的DPPH自由基清除能力。在DPPH自由基体系中，甘薯叶黄酮的IC50为36.21～47.62μg/mL。本发明的方法是一种绿色环保、前景广阔的生物活性成分提取技术，适宜于工业化生产。
【附图说明】
图1是本发明提取甘薯叶黄酮的纯度、得率与清除DPPH自由基能力结果示意图。
【具体实施方式】
通过下述实施例将能够更好地理解本发明。
实施例1：从甘薯叶提取黄酮
该实施例的实施步骤如下：
A、预处理
将甘薯叶在由上海一恒科技有限公司公司以商品名DZF-6063销售的烘箱中在温度42℃下烘干，然后在由上海跃进医疗器械厂公司以商品名LRHS-150B销售的恒温恒湿干燥器中在温度110℃的条件下烘干直至达到恒重，再研磨得到粒度100目甘薯叶粉；
B、提取
按照以克计甘薯叶粉与以毫升计乙醇水溶液的固液比为1：30，把在步骤A得到的甘薯叶粉加到浓度以体积计70％的乙醇水溶液中，混合均匀，再使用美国俄亥俄州州立大学生产的OSU-4L型实验室规模高压脉冲电场连续处理设备，在脉冲宽度2μs、脉冲频率200Hz与功率300W的条件下进行高压脉冲电场处理4h，再使用上海子期实验设备有限公司销售的SHZ-D(III)循环水式真空泵，在压力0.008MPa下减压过滤0.4h，滤渣使用所述提取溶剂乙醇水溶液洗涤2次，经洗涤后得到甘薯叶黄酮粗产品；采用本说明书中描述的方法测定得到甘薯叶黄酮粗产品的黄酮含量为2.09g/100g。
C、大孔树脂吸附
南开大学化工厂生产的Daion HP-20大孔树脂预处理，首先进行筛分收集有效粒径为0.5mm的大孔树脂。将收集的大孔树脂在2倍体积的无水乙醇中浸泡10h，分离乙醇，用去离子水洗涤，直至洗涤液无白色混浊，无醇味。接着再在2倍体积、浓度为以重量计5％的NaOH水溶液中浸泡3h，再分离NaOH水溶液，用去离子水洗涤至洗涤液呈中性。然后，在2倍体积、浓度为以重量计5％的HCl水溶液中浸泡3h；分离HCl水溶液，再用去离子水洗涤至洗涤液呈中性。
将步骤B得到的甘薯叶黄酮粗产品配制成10.0mg/mL的水溶液，然后让所述水溶液通过大孔树脂床在吸附速度1.8BV/h、所述水溶液与大孔树脂的体积比21:1的条件下吸附1.8h，接着转移到水浴中在上海一恒WSZ-10A恒温振荡器里在水浴温度30℃与振荡频率1000r/min的条件下振荡吸附12h；
D、洗脱
让步骤C振荡吸附大孔树脂过滤，按照振荡吸附的大孔树脂与蒸馏水的体积比是1：2用蒸馏水洗涤2次，滤干，接着使用浓度为以体积计45％的乙醇水溶液在洗脱速度2.1BV/h、所述乙醇水溶液与大孔树脂的体积比18：1的条件下进行洗脱，洗脱液在压力0.08MPa下浓缩1.6h，接着使用由北京博医康实验仪器有限公司以商品名FD-1A-50销售的真空冷冻干燥器，在压力0.08MPa与温度-20℃下进行真空冷冻干燥，得到所述的甘薯叶黄酮。采用本说明书中描述的方法测定得到甘薯叶黄酮纯度、得率与清除DPPH自由基的能力，其结果列于附图1中。
实施例2：从甘薯叶提取黄酮
该实施例的实施步骤如下：
A、预处理
将甘薯叶在由上海一恒科技有限公司公司以商品名DZF-6063销售的烘箱中在温度43℃下烘干，然后在由上海跃进医疗器械厂公司以商品名LRHS-150B销售的恒温恒湿干燥器中在温度108℃的条件下烘干直至达到恒重，再研磨得到粒度100目甘薯叶粉；
B、提取
按照以克计甘薯叶粉与以毫升计乙醇水溶液的固液比为1：50，把在步骤A得到的甘薯叶粉加到浓度以体积计60％的乙醇水溶液中，混合均匀，再使用美国俄亥俄州州立大学生产的OSU-4L型实验室规模高压脉冲电场连续处理设备，在脉冲宽度2μs、脉冲频率200Hz与功率500W的条件下进行高压脉冲电场处理2h，再使用上海子期实验设备有限公司销售的SHZ-D(III)循环水式真空泵，在压力0.012MPa下减压过滤0.6h，滤渣使用所述提取溶剂乙醇水溶液洗涤3次，经洗涤后得到甘薯叶黄酮粗产品；采用本说明书中描述的方法测定得到甘薯叶黄酮粗产品的黄酮含量为1.79g/100g。
C、大孔树脂吸附
使用南开大学化工厂生产的Daion HP-20大孔树脂，其预处理与实施例1的相同。
将步骤B得到的甘薯叶黄酮粗产品配制成10.0mg/mL的水溶液，然后让所述水溶液通过大孔树脂床在吸附速度2.0BV/h、所述水溶液与大孔树脂的体积比18:1的条件下吸附2.0h，接着转移到水浴中在上海一恒WSZ-10A恒温振荡器里在水浴温度30℃与振荡频率1000r/min的条件下振荡吸附11h；
D、洗脱
让步骤C振荡吸附大孔树脂过滤，按照振荡吸附的大孔树脂与蒸馏水的体积比是1：3用蒸馏水洗涤2次，滤干，接着使用浓度为以体积计50％的乙醇水溶液在洗脱速度2.0BV/h、所述乙醇水溶液与大孔树脂的体积比22:1的条件下进行洗脱，洗脱液在压力0.10MPa下浓缩2.4h，接着使用由北京博医康实验仪器有限公司以商品名FD-1A-50销售的真空冷冻干燥器，在压力0.10MPa与温度-20℃下进行真空冷冻干燥，得到所述的甘薯叶黄酮。采用本说明书中描述的方法测定得到甘薯叶黄酮纯度、得率与清除DPPH自由基的能力，其结果列于附图1中。
实施例3：从甘薯叶提取黄酮
该实施例的实施步骤如下：
A、预处理
将甘薯叶在由上海一恒科技有限公司公司以商品名DZF-6063销售的烘箱中在温度45℃下烘干，然后在由上海跃进医疗器械厂公司以商品名LRHS-150B销售的恒温恒湿干燥器中在温度112℃的条件下烘干直至达到恒重，再研磨得到粒度100目甘薯叶粉；
B、提取
按照以克计甘薯叶粉与以毫升计乙醇水溶液的固液比为1:40，把在步骤A得到的甘薯叶粉加到浓度以体积计80％的乙醇水溶液中，混合均匀，再使用美国俄亥俄州州立大学生产的OSU-4L型实验室规模高压脉冲电场连续处理设备，在脉冲宽度2μs、脉冲频率200Hz与功率300W的条件下进行高压脉冲电场处理1h，再使用上海子期实验设备有限公司销售的SHZ-D(III)循环水式真空泵在压力0.010MPa下减压过滤0.5h，滤渣使用所述提取溶剂乙醇水溶液洗涤4次，经洗涤后得到甘薯叶黄酮粗产品；采用本说明书中描述的方法测定得到甘薯叶黄酮粗产品的黄酮含量为2.03g/100g。
C、大孔树脂吸附
使用南开大学化工厂生产的Daion HP-20大孔树脂，其预处理与实施例1的相同。
将步骤B得到的甘薯叶黄酮粗产品配制成10.0mg/mL的水溶液，然后让所述水溶液通过大孔树脂床在吸附速度2.2BV/h、所述水溶液与大孔树脂的体积比19:1的条件下吸附2.1h，接着转移到水浴中在上海一恒WSZ-10A恒温振荡器里在水浴温度30℃与振荡频率1000r/min的条件下振荡吸附11.5h；
D、洗脱
让步骤C振荡吸附大孔树脂过滤，按照振荡吸附的大孔树脂与蒸馏水的体积比是1：4用蒸馏水洗涤3次，滤干，接着使用浓度为以体积计55％的乙醇水溶液在洗脱速度1.8BV/h、所述乙醇水溶液与大孔树脂的体积比20:1的条件下进行洗脱，洗脱液在压力0.12MPa下浓缩1.8h，接着使用由北京博医康实验仪器有限公司以商品名FD-1A-50销售的真空冷冻干燥器，在压力0.12MPa与温度-20℃下进行真空冷冻干燥，得到所述的甘薯叶黄酮。采用本说明书中描述的方法测定得到甘薯叶黄酮纯度、得率与清除DPPH自由基的能力，其结果列于附图1中。
实施例4：从甘薯叶提取黄酮
该实施例的实施步骤如下：
A、预处理
将甘薯叶在由上海一恒科技有限公司公司以商品名DZF-6063销售的烘箱中在温度44℃下烘干，然后在由上海跃进医疗器械厂公司以商品名LRHS-150B销售的恒温恒湿干燥器中在温度111℃的条件下烘干直至达到恒重，再研磨得到粒度100目甘薯叶粉；
B、提取
按照以克计甘薯叶粉与以毫升计乙醇水溶液的固液比为1:30，把在步骤A得到的甘薯叶粉加到浓度以体积计70％的乙醇水溶液中，混合均匀，再使用美国俄亥俄州州立大学生产的OSU-4L型实验室规模高压脉冲电场连续处理设备，在脉冲宽度2μs、脉冲频率200Hz与功率500W的条件下进行高压脉冲电场处理3h，再使用上海子期实验设备有限公司销售的SHZ-D(III)循环水式真空泵在压力0.012MPa下减压过滤0.6h，滤渣使用所述提取溶剂乙醇水溶液洗涤3次，经洗涤后得到甘薯叶黄酮粗产品；采用本说明书中描述的方法测定得到甘薯叶黄酮粗产品的黄酮含量为1.86g/100g。
C、大孔树脂吸附
使用南开大学化工厂生产的Daion HP-20大孔树脂，其预处理与实施例1的相同。
将步骤B得到的甘薯叶黄酮粗产品配制成10.0mg/mL的水溶液，然后让所述水溶液通过大孔树脂床在吸附速度2.1BV/h、所述水溶液与大孔树脂的体积比20:1的条件下吸附2.2h，接着转移到水浴中在上海一恒WSZ-10A恒温振荡器里在水浴温度30℃与振荡频率1000r/min的条件下振荡吸附13h；
D、洗脱
让步骤C振荡吸附大孔树脂过滤，按照振荡吸附的大孔树脂与蒸馏水的体积比是1：3用蒸馏水洗涤3次，滤干，接着使用浓度为以体积计52％的乙醇水溶液在洗脱速度2.2BV/h、所述乙醇水溶液与大孔树脂的体积比19:1的条件下进行洗脱，洗脱液在压力0.10MPa下浓缩2.0h，接着使用由北京博医康实验仪器有限公司以商品名FD-1A-50销售的真空冷冻干燥器，在压力0.10MPa与温度-20℃下进行真空冷冻干燥，得到所述的甘薯叶黄酮。采用本说明书中描述的方法测定得到甘薯叶黄酮纯度、得率与清除DPPH自由基的能力，其结果列于附图1中。
实施例5：从甘薯叶提取黄酮
该实施例的实施步骤如下：
A、预处理
将甘薯叶在由上海一恒科技有限公司公司以商品名DZF-6063销售的烘箱中在温度43℃下烘干，然后在由上海跃进医疗器械厂公司以商品名LRHS-150B销售的恒温恒湿干燥器中在温度110℃的条件下烘干直至达到恒重，再研磨得到粒度100目甘薯叶粉；
B、提取
按照以克计甘薯叶粉与以毫升计乙醇水溶液的固液比为1:20，把在步骤A得到的甘薯叶粉加到浓度以体积计80％的乙醇水溶液中，混合均匀，再使用美国俄亥俄州州立大学生产的OSU-4L型实验室规模高压脉冲电场连续处理设备，在脉冲宽度2μs、脉冲频率200Hz与功率100W的条件下进行高压脉冲电场处理6h，再使用上海子期实验设备有限公司销售的SHZ-D(III)循环水式真空泵在压力0.010MPa下减压过滤0.5h，滤渣使用所述提取溶剂乙醇水溶液洗涤3次，经洗涤后得到甘薯叶黄酮粗产品；采用本说明书中描述的方法测定得到甘薯叶黄酮粗产品的黄酮含量为1.73g/100g。
C、大孔树脂吸附
使用南开大学化工厂生产的Daion HP-20大孔树脂，其预处理与实施例1的相同。
将步骤B得到的甘薯叶黄酮粗产品配制成10.0mg/mL的水溶液，然后让所述水溶液通过大孔树脂床在吸附速度1.9BV/h、所述水溶液与大孔树脂的体积比22:1的条件下吸附2.0h，接着转移到水浴中在上海一恒WSZ-10A恒温振荡器里在水浴温度30℃与振荡频率1000r/min的条件下振荡吸附12.5h；
D、洗脱
让步骤C振荡吸附大孔树脂过滤，按照振荡吸附的大孔树脂与蒸馏水的体积比是1：4用蒸馏水洗涤3次，滤干，接着使用浓度为以体积计48％的乙醇水溶液在洗脱速度2.0BV/h、所述乙醇水溶液与大孔树脂的体积比21:1的条件下进行洗脱，洗脱液在压力0.09MPa下浓缩2.2h，接着使用由北京博医康实验仪器有限公司以商品名FD-1A-50销售的真空冷冻干燥器，在压力0.09MPa与温度-20℃下进行真空冷冻干燥，得到所述的甘薯叶黄酮。采用本说明书中描述的方法测定得到甘薯叶黄酮纯度、得率与清除DPPH自由基的能力，其结果列于附图1中。

Claims (8)

1.一种从甘薯叶提取黄酮的方法，其特征在于该方法的步骤如下：
A、预处理
将甘薯叶在烘箱中在温度42～45℃下烘干，然后在恒温恒湿干燥器中在温度108～112℃的条件下烘干直至达到恒重，再研磨得到粒度为100目以上的甘薯叶粉；
B、提取
按照以克计甘薯叶粉与以毫升计乙醇水溶液的固液比为1:20～50，把在步骤A得到的甘薯叶粉加到乙醇水溶液中，混合均匀，再在脉冲宽度2μs、脉冲频率200Hz与功率100～500W的条件下进行高压脉冲电场处理1～6h，减压过滤，滤渣经洗涤后得到甘薯叶黄酮粗产品；
C、大孔树脂吸附
将步骤B得到的甘薯叶黄酮粗产品配制成10.0mg/mL的水溶液，然后让所述水溶液通过大孔树脂床进行吸附，接着转移到水浴中在恒温振荡器里进行振荡吸附；
D、洗脱
让步骤C振荡吸附大孔树脂过滤，用蒸馏水洗涤2～3次，滤干，接着用乙醇水溶液洗脱，洗脱液经减压浓缩与真空冷冻干燥，得到所述的甘薯叶黄酮。
2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于在步骤B中，所述的乙醇水溶液浓度为以体积计60～80％。
3.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于在步骤B中，在高压脉冲电场下处理的物料在压力0.008～0.012MPa下过滤0.4～0.6h。
4.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于在步骤C中，所述的水溶液在吸附速度1.8～2.2BV/h、所述水溶液与大孔树脂的体积比18～22:1的条件下吸附1.8～2.2h。
5.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于在步骤C中，在水浴温度30℃与振荡频率1000r/min的条件下振荡吸附11～13h。
6.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于在步骤D中，洗涤时振荡吸附的大孔树脂与蒸馏水的体积比是1：2～4。
7.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于在步骤D中，使用浓度为以体积计45～55％的乙醇水溶液在洗脱速度1.8～2.2BV/h、所述乙醇水溶液与大孔树脂的体积比18～22:1的条件下进行洗脱。
8.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于在步骤D中，洗脱液在压力0.08～0.12MPa下浓缩1.6～2.4h，接着在压力0.08～0.12MPa与温度-20℃下进行真空冷冻干燥。
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