CN106619873B - 一种提高木瓜皮多酚抗氧化活性的hpef提取方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种提高木瓜皮多酚抗氧化活性的HPEF提取方法，它包括原料处理、HPEF提取、树脂吸附和成品制备等步骤。本发明的提取方法适宜工业化生产，提取率高、纯度高；根据本发明方法得到的木瓜皮多酚具有明显提高的DPPH自由基清除能力；本发明方法所使用的溶剂等具有无毒、无害、用量少、成本低的特点，工艺简单、无环境污染，具有高效、省时和成本低等优点，是一种绿色环保、前景广阔的木瓜皮多酚提取技术。

Description

一种提高木瓜皮多酚抗氧化活性的HPEF提取方法
【技术领域】
本发明属于多酚提取技术领域。更具体地，本发明涉及一种提高木瓜皮多酚抗氧化活性的HPEF提取方法。
【背景技术】
木瓜(学名：Chaenomeles sinensis(Thouin)Koehne)，有“百益果王”的称号，它不仅食味鲜美，而且也是营养价值和药用价值很高的中药。中医认为，木瓜具有舒经活络、健脾开胃、祛风湿的功效。我国的木瓜多产于山东、陕西、湖北、江西、安徽、江苏、浙江、广东、广西等地。
由于习惯以及加工条件的限制，木瓜皮在加工中一般被遗弃，造成极大的资源浪费。从以往的研究可以发现，木瓜皮中含有多酚类化合物、生物碱、维生素等多种生理活性物质，但对这些物质进行提取、成分分析的研究报道很少，尤其是对木瓜皮多酚的研究就更少了。多酚在增强免疫力、降血糖、抗肿瘤、抗炎、抗病毒、抗衰老、抗凝血等方面发挥着生物活性作用。随着技术发展和人类认识不断加深，人们发现多酚类在生物体中除作结构材料和能源性材料外，更重要地，还参与了生命现象中细胞的各种活动。多酚广泛应用于食品、纺织、化妆品和医药领域等领域，其在生物学上的重要意义决定了它在食品及医药领域有广阔的前景。
多酚是多羟基化合物，它的结构特点决定多酚易溶或可溶于水、醇类、醚类、酮类、酯类等，因此，溶剂提取法主要有水溶剂提取和有机溶剂提取两种。除此之外，还有微波辅助提取、超声波辅助提取、生物酶解提取、超临界流体萃取和膜技术提取等。CN200610095283.8、“木瓜多酚类物质的酶解提取方法”公开了一种木瓜多酚类物质的酶解提取方法，它主要是经过制浆、酶解、固液分离、回流浸提、合并、浓缩和干燥的步骤，在纤维素酶的作用下，从木瓜中分别得到木瓜水提物和木瓜醇提物，然后彼此混合，加入高倍醇，经沉淀后除去蛋白多糖等杂质，再经减压浓缩、喷雾干燥后即得木瓜粗多酚固体物。
高压脉冲电场法(HPEF)是近年发展起来的一种新技术，其机理是利用细胞膜电穿孔原理在瞬间使细胞破壁，造成细胞膜电位混乱，细胞壁和细胞膜受到可逆或小可逆的破坏，从而令细胞组分流出，具有处理时间短、能耗低、较不易引起目的产物变性等优点。以提高木瓜皮多酚抗氧化活性为目的的HPEF提取方法，能够克服常规乙醇水提取对活性物质带来的不利影响；利用HPEF提取方法能够加强与样品相接触的溶剂，并破坏其中木瓜中的细胞组分，将所需化合物从样品基体中分离，从而进入溶剂中。CN 201010278239.7、“一种减少苹果多酚在贮藏过程中损失量的高压脉冲处理方法”公开了一种减少苹果多酚在贮藏过程中损失量的高压脉冲处理方法，其处理步骤包括：称取苹果多酚粉末0.5g溶于1000mL pH值5.0～7.0的磷酸缓冲溶液中，得到36.3mg/100mL电导率为2.11～4.90的苹果多酚溶液，将配制完成的苹果多酚溶液泵入高压脉冲处理室，设置场强30～35KV/cm，脉宽4～6μs，频率80～100Hz，循环处理1000～1500μs，收集处理完成的苹果多酚溶液，苹果多酚含量37.1～39.5mg/100mL。
目前尚无利用HPEF提取方法提取木瓜多酚的研究和应用。本发明人在已有研究的基础上做了大量试验，对于不同原料中的多酚，由于其溶出速率及干扰组分存在差异，在选择处理条件上综合考虑了得率、纯度及抗氧化性能的差异，终于研制出本发明方法。本发明方法具有快速、成本低等特点，并且可以减少溶剂的用量，提高提取得率以及产品纯度。
【发明内容】
[要解决的技术问题]
本发明的目的是提供一种提高木瓜皮多酚抗氧化活性的HPEF提取方法。
[技术方案]
本发明是通过下述技术方案实现的。
本发明涉及一种提高木瓜皮多酚抗氧化活性的HPEF提取方法，所述方法包括以下步骤：
(1)原料处理
将木瓜皮清洗干净后置于烘箱中烘至近干，然后在恒温恒湿干燥器内烘至恒重，使得木瓜皮的含水率低于0.01％，然后粉碎并过80目筛后，得到木瓜皮粉末，备用；
(2)HPEF提取
步骤(1)得到的木瓜皮粉末与乙醇水溶液混合，得到的混合物利用HPEF进行处理，再在0.01MPa条件下减压过滤1.0h，得到的滤渣用提取溶剂洗涤3次，洗涤后的滤渣合并，得到木瓜皮多酚粗产品；
(3)树脂吸附
将步骤(2)得到的木瓜皮多酚粗产品加水配制成10.0mg/mL的溶液，用大孔树脂进行吸附，然后在30℃恒温水浴中振荡12h，振荡频率为1000r/min；
(4)成品制备
将步骤(3)的吸附后的大孔树脂过滤，过滤后的树脂用蒸馏水洗涤两次，待树脂滤干后用体积浓度50％的乙醇进行动态洗脱，洗脱液浓缩后真空冷冻干燥，得到木瓜皮多酚提取物固体。
根据本发明的一种具体实施方案，步骤(1)中所述烘箱的温度为55～65℃，所述的恒温恒湿干燥器的温度为100～110℃。
根据本发明的另一种具体实施方案，在步骤(2)中，按照以mg计木瓜皮粉末的质量与以mL计乙醇水溶液的体积比1:20～1:60的比例，将木瓜皮粉末置于乙醇水溶液中。
根据本发明的另一种具体实施方案，在步骤(2)中，HPEF的处理条件为功率400～600W、电场强度20～30KV/cm、脉宽4～8μs、频率60～80Hz，处理时间为3～5h。
根据本发明的另一种具体实施方案，在步骤(2)中，所述乙醇水溶液的体积浓度是50～80％。
根据本发明的另一种具体实施方案，在步骤(2)中，提取溶剂是丙酮或乙醇，其体积浓度是60％～90％，以mg计滤渣的质量与以mL计提取溶剂的体积之比为1:30～50。
根据本发明的另一种具体实施方案，在步骤(3)中，大孔树脂吸附的流速为1.0～3.0BV/h，吸附时间为1.0～3.0h。
根据本发明的另一种具体实施方案，在步骤(4)中，动态洗脱的速率为2.0～4.0BV/h。
根据本发明的另一种具体实施方案，在步骤(4)中，洗脱液在60℃条件下浓缩到原有体积的10～15％，然后在-20～-10℃温度和0.1～0.2MPa压力条件下进行真空冷冻干燥。
下面将更详细地描述本发明。
本发明涉及一种提高木瓜皮多酚抗氧化活性的HPEF提取方法，所述方法包括以下步骤：
(1)原料处理
将木瓜皮清洗干净后置于55～65℃烘箱中烘至近干，然后在100～110℃恒温恒湿干燥器内烘至恒重，使得木瓜皮的含水率低于0.01％，然后粉碎并过80目筛后，得到木瓜皮粉末，备用。
在该原料处理步骤中，烘干木瓜皮的烘箱温度范围为55～65℃是适宜的，如果温度高于65℃，会导致组织水分散失过快带来组织体的萎缩，如果温度低于55℃则会导致原料预处理时间过长。
恒温恒湿干燥器的温度100～110℃是适宜的，如果温度高于110℃，会造成原料组织内活性物质的降解，如果低于100℃则会导致水分清除不彻底。使用的恒温恒湿干燥器是本技术领域常用的可在市场上购买得到的产品，例如上海一恒仪器公司生产销售的DHG-9031A型产品。
用恒温恒湿干燥器处理木瓜皮使其含水率低于0.01％，是为了提高样品的贮藏性及提高后期处理效率。
接下来木瓜皮进行粉碎并过80目筛，这是为了利于下一步HPEF提取，提高萃取效率，降低活性成分的破坏率。
(2)HPEF提取
按照以mg计木瓜皮粉末的质量与以mL计乙醇水溶液的体积比1:20～1:60的比例，将步骤(1)得到的木瓜皮粉末置于体积浓度50～80％的乙醇水溶液中，得到的混合物利用HPEF进行处理，HPEF的处理条件为功率400～600W、电场强度20～30KV/cm、脉宽4～8μs、频率60～80Hz，处理时间为3～5h，再在0.01MPa条件下减压过滤1.0h，得到的滤渣用提取溶剂洗涤3次，提取溶剂是丙酮或乙醇，其体积浓度是60～90％，以mg计滤渣的质量与以mL计提取溶剂的体积之比为1:30～50，洗涤后的滤渣合并，得到木瓜皮多酚粗产品。
本发明方法中使用的HPEF设备是本技术领域常用的设备，可在市场中购买得到，例如是中国农业大学生产的OSU-4L型实验室规模高压脉冲电场连续处理设备。
对于HPEF提取方法来说，高压脉冲功率、电场强度、料液比、脉宽、脉冲频率等都是影响提取效率的关键因素。
在高压脉冲功率方面，400～600W是合适的，在该功率条件下，原料组织内活性物质的溶出速率最为合适。
在电场强度上，当电场强度大于20KV/cm时，多酚的提取率逐渐提高，当电场强度超过30KV/cm，多酚的提取率下降。这是由于随着电场强度增加，运动加快的极性溶剂能够更多地进入到细胞内，使多酚更容易渗透出来，同时细胞内外的电场强度差异使细胞电极化，从而破坏细胞膜，使多酚更容易被提取。但过大的电场强度对多酚有降解作用。因此电场强度20～30KV/cm是适宜的。
在料液比方面，以mg计木瓜皮粉末的质量与以mL计乙醇水溶液的体积之比是1:20～1:60。当木瓜皮的粉末质量一定而溶剂量过少时，萃取体系的渗透压过高，会阻碍木瓜皮多酚的溶出。当料液比在1:20～1:60这一范围内时，提取率随着溶剂量增加而提高，当料液比超过1:60时，提取率下降。
在脉宽方面，由于兼顾仪器运行成本及提取效率，因而脉宽4～8μs是合适的。
脉冲频率的适宜范围是60～80Hz，这是由于高压脉冲电场对植物细胞破坏的程度会影响提取率，当脉冲频率小于60Hz时，会造成破壁作用不明显、提取效率无明显变化；当脉冲频率大于80Hz时，由于电场频率过大，会造成多酚降解。
该步骤中使用的提取溶剂是丙酮或乙醇，之所以选择这些溶剂作为提取溶剂，是因为这些溶剂可改善原料和提取溶剂分子间的作用力，从而改善原料与提取溶剂的溶解度和选择性。
提取溶剂的浓度对于多酚的提取效率有重要影响。如果提取溶剂的浓度高于90％，会造成原料与提取溶剂的溶解度降低；如果浓度低于60％，则会造成原料中活性物质与提取溶剂的选择性降低。
(3)树脂吸附
将步骤(2)得到的木瓜皮多酚粗产品加水配制成10.0mg/mL的溶液，用大孔树脂进行吸附，大孔树脂吸附的流速为1.0～3.0BV/h，吸附时间为1.0～3.0h，然后在30℃恒温水浴中振荡12h，振荡频率为1000r/min。
在本发明方法中使用的大孔树脂是本技术领域常用的大孔树脂，例如是DaionHP-20或Amberlite XAD-4大孔树脂，它们的特点是成本低且适用性好。
本发明方法使用例如由上海一恒生产的WSZ-10A恒温振荡器进行恒温水浴振荡，这些设备也都是本技术领域常用的设备。
(4)成品制备
将步骤(3)的吸附后的大孔树脂过滤，过滤后的树脂用蒸馏水洗涤两次，待树脂滤干后用体积浓度50％的乙醇进行动态洗脱，其洗脱速率为2.0～4.0BV/h，洗脱液在60℃条件下浓缩到原有体积的10～15％，然后在-20～-10℃温度和0.1～0.2MPa压力条件下进行真空冷冻干燥，得到木瓜皮多酚提取物固体。
之所以用浓度50％乙醇进行动态洗脱，是由于此浓度下解吸率最高。
采用以下方法和条件测定根据上述方法制备得到的木瓜皮多酚的得率、纯度以及DPPH自由基清除能力。
采用Folin-酚法测定多酚产品中多酚的纯度，测定的条件为：准确称取一定质量的多酚产品，加水溶解后定容成一定体积，吸取样品溶液1mL，加入1mL蒸馏水、1mL Folin-酚试剂、3mL 10％的Na2CO3，测其750nm处的吸光值，代入回归方程计算多酚含量，并计算多酚得率。
多酚得率的计算公式为：
多酚得率(mg/g)＝提取产品多酚量(mg)/原料总量(g)。
采用van der Toorn等使用的DTNB间接测定卷烟烟气中自由基，结果以自由基清除率(％)表示，不同提取物清除自由基能力采用清除的IC50值表示；计算出自由基清除率为50％时所需提取物浓度(EC50)，按式计算IC50＝50％×加入的DPPH质量/加入的试样溶液中溶质质量。
测定结果表明，根据本发明方法制备得到的木瓜皮多酚的DPPH自由基清除能力比传统70％乙醇水提法提高1.31～1.83倍，具有明显提高的DPPH自由基清除能力。如附图1所示，在DPPH自由基体系中，木瓜皮多酚的IC50为30.21～42.36μg/mL。
根据本发明方法制备得到的木瓜皮多酚具有抗氧化、增强机体免疫功能及抗肿瘤等活性，可在食品、医药及烟草领域中应用。
[有益效果]
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
(1)本发明的提取方法适宜工业化生产，提取率高、纯度高；
(2)根据本发明方法得到的木瓜皮多酚具有明显提高的DPPH自由基清除能力；
(3)所使用的溶剂等具有无毒、无害、用量少、成本低的特点，工艺简单、无环境污染，具有高效、省时和成本低等优点，是一种绿色环保、前景广阔的木瓜皮多酚提取技术。
【附图说明】
附图1是本发明的提取方法的木瓜皮多酚的得率、纯度以及清除DPPH自由基活性的IC50值与传统的乙醇水提法的对比图。
【具体实施方式】
通过下述实施例将能够更好地理解本发明。
实施例1：本发明的木瓜皮多酚的提取
(1)原料处理
称取木瓜皮置于60℃烘箱中烘至近干，然后置于105℃的恒温恒湿干燥器内烘至恒重，过80目筛后，备用；
(2)HPEF提取
按照以mg计木瓜皮粉末的质量与以mL计乙醇水溶液的体积比1:40的比例，取步骤(1)得到的木瓜皮粉末样品，置于体积浓度70％的乙醇水溶液中，在功率500W、电场强度25KV/cm、脉宽6μs、频率70Hz的处理条件下，用HPEF设备(OSU-4L型实验室规模高压脉冲电场连续处理设备，中国农业大学生产)处理3h，在SHZ-D(III)循环水真空泵0.01MPa条件下减压过滤1.0h，滤渣用体积浓度为80％的乙醇提取溶剂洗涤3次，以mg计滤渣的质量与以mL计提取溶剂的体积之比为1:40，洗涤后的滤渣合并，得到木瓜皮多酚粗产品；
(3)树脂吸附
将步骤(2)得到的木瓜皮多酚粗产品加水配制成10.0mg/mL的溶液，用Daion HP-20大孔树脂进行吸附，流速为2.0BV/h，吸附时间为2.0h，然后在WSZ-10A恒温振荡器水浴中振荡12h，保持水浴温度恒定为30℃，振荡频率为1000r/min；
(4)成品制备
将步骤(3)的吸附后的大孔树脂过滤，过滤后的树脂用蒸馏水洗涤两次，待树脂滤干后用体积浓度50％的乙醇进行动态洗脱，其洗脱速率为2.0BV/h，洗脱液在60℃条件下浓缩到原有体积的10～15％，然后在-15℃温度和0.15MPa压力条件下进行真空冷冻干燥，得到木瓜皮多酚提取物固体。
实施例2：本发明的木瓜皮多酚的提取
(1)原料处理
称取木瓜皮置于65℃烘箱中烘至近干，然后置于100℃的恒温恒湿干燥器内烘至恒重，过80目筛后，备用；
(2)HPEF提取
按照以mg计木瓜皮粉末的质量与以mL计乙醇水溶液的体积比1:60的比例，取步骤(1)得到的木瓜皮粉末样品，置于体积浓度60％的乙醇水溶液中，在功率600W、电场强度25KV/cm、脉宽8μs、频率60Hz的处理条件下，用HPEF设备(OSU-4L型实验室规模高压脉冲电场连续处理设备，中国农业大学生产)处理4h，在SHZ-D(III)循环水真空泵0.01MPa条件下减压过滤1.0h，滤渣用体积浓度为90％的乙醇提取溶剂洗涤3次，以mg计滤渣的质量与以mL计提取溶剂的体积之比为1:40，洗涤后的滤渣合并，得到木瓜皮多酚粗产品；
(3)树脂吸附
将步骤(2)得到的木瓜皮多酚粗产品加水配制成10.0mg/mL的溶液，用AmberliteXAD-4大孔树脂进行吸附，流速为1.0BV/h，吸附时间为3.0h，然后在WSZ-10A恒温振荡器水浴中振荡12h，保持水浴温度恒定为30℃，振荡频率为1000r/min；
(4)成品制备
将步骤(3)的吸附后的大孔树脂过滤，过滤后的树脂用蒸馏水洗涤两次，待树脂滤干后用体积浓度50％的乙醇进行动态洗脱，其洗脱速率为4.0BV/h，洗脱液在60℃条件下浓缩到原有体积的10～15％，然后在-20℃温度和0.1MPa压力条件下进行真空冷冻干燥，得到木瓜皮多酚提取物固体。
实施例3：本发明的木瓜皮多酚的提取
(1)原料处理
称取木瓜皮置于55℃烘箱中烘至近干，然后置于110℃的恒温恒湿干燥器内烘至恒重，过80目筛后，备用；
(2)HPEF提取
按照以mg计木瓜皮粉末的质量与以mL计乙醇水溶液的体积比1:20的比例，取步骤(1)得到的木瓜皮粉末样品，置于体积浓度80％的乙醇水溶液中，在功率600W、电场强度25KV/cm、脉宽7μs、频率80Hz的处理条件下，用HPEF设备(OSU-4L型实验室规模高压脉冲电场连续处理设备，中国农业大学生产)处理5h，在SHZ-D(III)循环水真空泵0.01MPa条件下减压过滤1.0h，滤渣用浓度为70％的乙醇提取溶剂洗涤3次，以mg计滤渣的质量与以mL计提取溶剂的体积之比为1:30，洗涤后的滤渣合并，得到木瓜皮多酚粗产品；
(3)树脂吸附
将步骤(2)得到的木瓜皮多酚粗产品加水配制成10.0mg/mL的溶液，用Daion HP-20大孔树脂进行吸附，流速为3.0BV/h，吸附时间为1.0h，然后在WSZ-10A恒温振荡器水浴中振荡12h，保持水浴温度恒定为30℃，振荡频率为1000r/min；
(4)成品制备
将步骤(3)的吸附后的大孔树脂过滤，过滤后的树脂用蒸馏水洗涤两次，待树脂滤干后用体积浓度50％的乙醇进行动态洗脱，其洗脱速率为3.0BV/h，洗脱液在60℃条件下浓缩到原有体积的10～15％，然后在-20℃温度和0.2MPa压力条件下进行真空冷冻干燥，得到木瓜皮多酚提取物固体。
实施例4：本发明的木瓜皮多酚的提取
(1)原料处理
称取木瓜皮置于60℃烘箱中烘至近干，然后置于105℃的恒温恒湿干燥器内烘至恒重，过80目筛后，备用；
(2)HPEF提取
按照以mg计木瓜皮粉末的质量与以mL计乙醇水溶液的体积比1:40的比例，取步骤(1)得到的木瓜皮粉末样品，置于体积浓度60％的乙醇水溶液中，在功率600W、电场强度30KV/cm、脉宽8μs、频率60Hz的处理条件下，用HPEF设备(OSU-4L型实验室规模高压脉冲电场连续处理设备，中国农业大学生产)处理4h，在SHZ-D(III)循环水真空泵0.01MPa条件下减压过滤1.0h，滤渣用体积浓度为60％的乙醇提取溶剂洗涤3次，以mg计滤渣的质量与以mL计提取溶剂的体积之比为1:30g/mL，洗涤后的滤渣合并，得到木瓜皮多酚粗产品；
(3)树脂吸附
将步骤(2)得到的木瓜皮多酚粗产品加水配制成10.0mg/mL的溶液，用AmberliteXAD-4大孔树脂进行吸附，流速为2.0BV/h，吸附时间为1.0h，然后在WSZ-10A恒温振荡器水浴中振荡12h，保持水浴温度恒定为30℃，振荡频率为1000r/min；
(4)成品制备
将步骤(3)的吸附后的大孔树脂过滤，过滤后的树脂用蒸馏水洗涤两次，待树脂滤干后用体积浓度50％的乙醇进行动态洗脱，其洗脱速率为2.0BV/h，洗脱液在60℃条件下浓缩到原有体积的10～15％，然后在-10℃温度和0.1MPa压力条件下进行真空冷冻干燥，得到木瓜皮多酚提取物固体。
实施例5：本发明的木瓜皮多酚的提取
(1)原料处理
称取木瓜皮置于55℃烘箱中烘至近干，然后置于100℃的恒温恒湿干燥器内烘至恒重，过80目筛后，备用；
(2)HPEF提取
按照以mg计木瓜皮粉末的质量与以mL计乙醇水溶液的体积比1:20的比例，取步骤(1)得到的木瓜皮粉末样品，置于体积浓度50％的乙醇水溶液中，在功率400W、电场强度20KV/cm、脉宽5μs、频率80Hz的处理条件下，用HPEF设备(OSU-4L型实验室规模高压脉冲电场连续处理设备，中国农业大学生产)处理5h，在SHZ-D(III)循环水真空泵0.01MPa条件下减压过滤1.0h，滤渣用体积浓度为80％的丙酮提取溶剂洗涤3次，以mg计滤渣的质量与以mL计提取溶剂的体积之比为1:50，洗涤后的滤渣合并，得到木瓜皮多酚粗产品；
(3)树脂吸附
将步骤(2)得到的木瓜皮多酚粗产品加水配制成10.0mg/mL的溶液，用AmberliteXAD-4大孔树脂进行吸附，流速为3.0BV/h，吸附时间为3.0h，然后在WSZ-10A恒温振荡器水浴中振荡12h，保持水浴温度恒定为30℃，振荡频率为1000r/min；
(4)成品制备
将步骤(3)的吸附后的大孔树脂过滤，过滤后的树脂用蒸馏水洗涤两次，待树脂滤干后用体积浓度50％的乙醇进行动态洗脱，其洗脱速率为4.0BV/h，洗脱液在60℃条件下浓缩到原有体积的10～15％，然后在-10℃温度和0.2MPa压力条件下进行真空冷冻干燥，得到木瓜皮多酚提取物固体。
实施例6：本发明的木瓜皮多酚的提取
(1)原料处理
称取木瓜皮置于65℃烘箱中烘至近干，然后置于100℃的恒温恒湿干燥器内烘至恒重，过80目筛后，备用；
(2)HPEF提取
按照以mg计木瓜皮粉末的质量与以mL计乙醇水溶液的体积比1:60的比例，取步骤(1)得到的木瓜皮粉末样品，置于体积浓度70％的乙醇水溶液中，在功率500W、电场强度20KV/cm、脉宽4μs、频率70Hz的处理条件下，用HPEF设备(OSU-4L型实验室规模高压脉冲电场连续处理设备，中国农业大学生产)处理3h，在SHZ-D(III)循环水真空泵0.01MPa条件下减压过滤1.0h，滤渣用体积浓度为70％的丙酮提取溶剂洗涤3次，以mg计滤渣的质量与以mL计提取溶剂的体积之比为1:40，洗涤后的滤渣合并，得到木瓜皮多酚粗产品；
(3)树脂吸附
将步骤(2)得到的木瓜皮多酚粗产品加水配制成10.0mg/mL的溶液，用AmberliteXAD-4大孔树脂进行吸附，流速为1.0BV/h，吸附时间为2.0h，然后在WSZ-10A恒温振荡器水浴中振荡12h，保持水浴温度恒定为30℃，振荡频率为1000r/min；
(4)成品制备
将步骤(3)的吸附后的大孔树脂过滤，过滤后的树脂用蒸馏水洗涤两次，待树脂滤干后用体积浓度50％的乙醇进行动态洗脱，其洗脱速率为3.0BV/h，洗脱液在60℃条件下浓缩到原有体积的10～15％，然后在-15℃温度和0.1MPa压力条件下进行真空冷冻干燥，得到木瓜皮多酚提取物固体。
实施例7：本发明的木瓜皮多酚的提取
(1)原料处理
称取木瓜皮置于60℃烘箱中烘至近干，然后置于105℃的恒温恒湿干燥器内烘至恒重，过80目筛后，备用；
(2)HPEF提取
按照以mg计木瓜皮粉末的质量与以mL计乙醇水溶液的体积比1:20的比例，取步骤(1)得到的木瓜皮粉末样品，置于体积浓度60％的乙醇水溶液中，在功率400W、电场强度30KV/cm、脉宽7μs、频率60Hz的处理条件下，用HPEF设备(OSU-4L型实验室规模高压脉冲电场连续处理设备，中国农业大学生产)处理4h，在SHZ-D(III)循环水真空泵0.01MPa条件下减压过滤1.0h，滤渣用体积浓度为90％的丙酮提取溶剂洗涤3次，以mg计滤渣的质量与以mL计提取溶剂的体积之比为1:50，洗涤后的滤渣合并，得到木瓜皮多酚粗产品；
(3)树脂吸附
将步骤(2)得到的木瓜皮多酚粗产品加水配制成10.0mg/mL的溶液，用Daion HP-20大孔树脂进行吸附，流速为2.0BV/h，吸附时间为2.0h，然后在WSZ-10A恒温振荡器水浴中振荡12h，保持水浴温度恒定为30℃，振荡频率为1000r/min；
(4)成品制备
将步骤(3)的吸附后的大孔树脂过滤，过滤后的树脂用蒸馏水洗涤两次，待树脂滤干后用体积浓度50％的乙醇进行动态洗脱，其洗脱速率为3.0BV/h，洗脱液在60℃条件下浓缩到原有体积的10～15％，然后在-20℃温度和0.2MPa压力条件下进行真空冷冻干燥，得到木瓜皮多酚提取物固体。

Claims (8)

1.一种提高木瓜皮多酚抗氧化活性的HPEF提取方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：
(1)原料处理
将木瓜皮清洗干净后置于烘箱中烘至近干，然后在恒温恒湿干燥器内烘至恒重，使得木瓜皮的含水率低于0.01％，然后粉碎并过80目筛后，得到木瓜皮粉末，备用；
(2)HPEF提取
步骤(1)得到的木瓜皮粉末与乙醇水溶液混合，得到的混合物利用HPEF进行处理，HPEF的处理条件为功率400～600W、电场强度20～30KV/cm、脉宽4～8μs、频率60～80Hz，处理时间为3～5h；再在0.01MPa条件下减压过滤1.0h，得到的滤渣用提取溶剂洗涤3次，洗涤后的滤渣合并，得到木瓜皮多酚粗产品；
(3)树脂吸附
将步骤(2)得到的木瓜皮多酚粗产品加水配制成10.0mg/mL的溶液，用大孔树脂进行吸附，然后在30℃恒温水浴中振荡12h，振荡频率为1000r/min；
(4)成品制备
将步骤(3)的吸附后的大孔树脂过滤，过滤后的树脂用蒸馏水洗涤两次，待树脂滤干后用体积浓度50％的乙醇进行动态洗脱，洗脱液浓缩后真空冷冻干燥，得到木瓜皮多酚提取物固体。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤(1)中所述烘箱的温度为55～65℃，所述的恒温恒湿干燥器的温度为100～110℃。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤(2)中，按照以mg计木瓜皮粉末的质量与以mL计乙醇水溶液的体积比1:20～1:60的比例，将木瓜皮粉末置于乙醇水溶液中。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤(2)中，所述乙醇水溶液的体积浓度是50～80％。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤(2)中，提取溶剂是丙酮或乙醇，其体积浓度是60～90％，以mg计滤渣的质量与以mL计提取溶剂的体积之比为1:30～50。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤(3)中，大孔树脂吸附的流速为1.0～3.0BV/h，吸附时间为1.0～3.0h。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤(4)中，动态洗脱的速率为2.0～4.0BV/h。
8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤(4)中，洗脱液在60℃条件下浓缩到原有体积的10～15％，然后在-20～-10℃温度和0.1～0.2MPa压力条件下进行真空冷冻干燥。
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