CN114395401B - 一种细胞修复液、制备方法及其应用 - Google Patents

一种细胞修复液、制备方法及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN114395401B
CN114395401B CN202111599445.2A CN202111599445A CN114395401B CN 114395401 B CN114395401 B CN 114395401B CN 202111599445 A CN202111599445 A CN 202111599445A CN 114395401 B CN114395401 B CN 114395401B
Authority
CN
China
Prior art keywords
parts
mass ratio
sturgeon
step enzymolysis
cell repair
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202111599445.2A
Other languages
English (en)
Other versions
CN114395401A (zh
Inventor
蔡敬海
夏晓琳
陈红
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Chongqing Youde Youfu Health And Elderly Care Service Co ltd
Shenjiu Selenium Enriched Agricultural Development Shandong Co ltd
Original Assignee
Chongqing Youde Youfu Health And Elderly Care Service Co ltd
Shenjiu Selenium Enriched Agricultural Development Shandong Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Chongqing Youde Youfu Health And Elderly Care Service Co ltd, Shenjiu Selenium Enriched Agricultural Development Shandong Co ltd filed Critical Chongqing Youde Youfu Health And Elderly Care Service Co ltd
Priority to CN202111599445.2A priority Critical patent/CN114395401B/zh
Publication of CN114395401A publication Critical patent/CN114395401A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN114395401B publication Critical patent/CN114395401B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C09DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09KMATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
    • C09K17/00Soil-conditioning materials or soil-stabilising materials
    • C09K17/40Soil-conditioning materials or soil-stabilising materials containing mixtures of inorganic and organic compounds
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01NPRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N61/00Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing substances of unknown or undetermined composition, e.g. substances characterised only by the mode of action
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01NPRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N65/00Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing material from algae, lichens, bryophyta, multi-cellular fungi or plants, or extracts thereof
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01NPRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N65/00Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing material from algae, lichens, bryophyta, multi-cellular fungi or plants, or extracts thereof
    • A01N65/08Magnoliopsida [dicotyledons]
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01NPRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N65/00Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing material from algae, lichens, bryophyta, multi-cellular fungi or plants, or extracts thereof
    • A01N65/08Magnoliopsida [dicotyledons]
    • A01N65/12Asteraceae or Compositae [Aster or Sunflower family], e.g. daisy, pyrethrum, artichoke, lettuce, sunflower, wormwood or tarragon
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01NPRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N65/00Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing material from algae, lichens, bryophyta, multi-cellular fungi or plants, or extracts thereof
    • A01N65/08Magnoliopsida [dicotyledons]
    • A01N65/34Rosaceae [Rose family], e.g. strawberry, hawthorn, plum, cherry, peach, apricot or almond
    • BPERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B09DISPOSAL OF SOLID WASTE; RECLAMATION OF CONTAMINATED SOIL
    • B09CRECLAMATION OF CONTAMINATED SOIL
    • B09C1/00Reclamation of contaminated soil
    • BPERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B09DISPOSAL OF SOLID WASTE; RECLAMATION OF CONTAMINATED SOIL
    • B09CRECLAMATION OF CONTAMINATED SOIL
    • B09C1/00Reclamation of contaminated soil
    • B09C1/08Reclamation of contaminated soil chemically
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12PFERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00Preparation of peptides or proteins
    • C12P21/06Preparation of peptides or proteins produced by the hydrolysis of a peptide bond, e.g. hydrolysate products
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C09DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09KMATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
    • C09K2101/00Agricultural use

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Soil Sciences (AREA)
  • Environmental & Geological Engineering (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
  • Fertilizers (AREA)

Abstract

本发明公开一种细胞修复液,所述细胞修复液按质量份计,包括以下组分:鲟鱼小分子多肽营养液14‑16份、腐殖酸1.5‑2.5份、改性高岭石超细粉4‑6份、氨基三乙酸1.5‑2.5份、木瓜多酚1.5‑2.5份、环糊精包埋角鲨烯复合物4‑6份、豆甾醇2.5‑3.5份、丙烯酰二甲基牛磺酸钠0.8‑1.2份、透明质酸钠2.5‑3.5份、白芨提取物2.5‑3.5份、杏仁提取物2.5‑3.5份、牛蒡粉1.5‑2.5份、螺旋藻多糖2.5‑3.5份、吐温‑80 10‑20份、水250‑350份。本发明还公开一种细胞修复液的制备方法,所述制备方法包括连续酶解制备鲟鱼小分子多肽营养液、制备改性高岭石超细粉、制备环糊精包埋角鲨烯复合物、制备细胞修复液。本发明还公开一种细胞修复液在植物细胞修复中的应用。

Description

一种细胞修复液、制备方法及其应用
技术领域
本发明涉及一种细胞修复液、制备方法及其应用,属于农业技术领域。
背景技术
随着工业化进程的不断加快,矿产资源的不合理开采及其冶炼排放、长期对土壤进行污水灌溉和污泥施用、人为活动引起的大气沉降、化肥和农药的施用等原因,造成了土壤污染严重。
全国土壤总的超标率为16.1%,其中轻微、轻度、中度和重度污染点位比例分别为11.2%、2.3%、1.5%和1.1%。污染类型以无机型为主,有机型次之,复合型污染比重较小,无机污染物超标点位数占全部超标点位的82.8%。
作物种植于污染的土壤会造成重金属超标,产量低下,作物在地里长势羸弱,发生烂根等病害,影响食品安全和农民收入,现有技术有在植物生长周期中通过施用植物细胞修复液,通过修复植物细胞来防止植物烂根等病害,但是在正常土壤中对植物细胞的修复作用比较好,在轻度污染土壤中修复效果差,植物烂根等病害发病率仍然较高,作物产量低,同时也无法阻止重金属在作物体内的富集,影响产量和质量。
综上所述,现有技术存在以下问题:
(1)现有细胞修复液,在轻度污染土壤中修复效果差,植物烂根等病害发病率高;
(2)现有细胞修复液,在轻度污染土壤中使用,作物产量低;
(2)现有细胞修复液,在轻度污染土壤中无法阻止作物中重金属的富集。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服现有技术存在的缺陷,通过多步酶解制备特定分子量多肽,添加改性原料制成细胞修复液,实现以下发明目的:
(1)细胞修复液在轻度污染土壤中修复效果好,植物烂根等病害发病率低;
(2)细胞修复液在轻度污染土壤中使用,作物产量高;
(2)细胞修复液在轻度污染土壤中可以阻止作物中重金属的富集。
为解决上述技术问题,本发明采取以下技术方案:
一种细胞修复液,其特征在于,所述细胞修复液按质量份计,包括以下组分:鲟鱼小分子多肽营养液14-16份、腐殖酸1.5-2.5份、改性高岭石超细粉4-6份、氨基三乙酸1.5-2.5份、木瓜多酚1.5-2.5份、环糊精包埋角鲨烯复合物4-6份、豆甾醇2.5-3.5份、丙烯酰二甲基牛磺酸钠0.8-1.2份、透明质酸钠2.5-3.5份、白芨提取物2.5-3.5份、杏仁提取物2.5-3.5份、牛蒡粉1.5-2.5份、螺旋藻多糖2.5-3.5份、吐温-80 10-20份、水250-350份。
以下是对上述技术方案的进一步改进:
所述制备方法包括连续酶解制备鲟鱼小分子多肽营养液、制备改性高岭石超细粉、制备环糊精包埋角鲨烯复合物、制备细胞修复液。
所述连续酶解制备鲟鱼小分子多肽营养液包括前处理、一步酶解、二步酶解、三步酶解;
所述前处理,鲟鱼除去头部和内脏,剩余部分破碎后冻干,再粉碎至80-120目得到鲟鱼肉骨粉备用;
头部和内脏粉碎至大小为2-3cm,在100℃下蒸煮20-40min,得到鲟鱼熟内脏备用。
所述一步酶解,将鲟鱼熟内脏与去离子水混合并调节pH为8.0-9.0,加入枯草杆菌蛋白酶和抗坏血酸,辅以80-120W功率的微波辐照下于50-60℃下酶解25-35min,过滤得到一步酶解液;
所述鲟鱼熟内脏与去离子水的质量比为2:4-6;
所述枯草杆菌蛋白酶的酶活力为9.0-9.5*105U/g;
所述枯草杆菌蛋白酶与鲟鱼熟内脏的质量比为1:250-350;
所述抗坏血酸与鲟鱼熟内脏的质量比1:800-1200。
所述二步酶解,一步酶解液加入鲟鱼肉骨粉,再加入一定量的去离子水,调节pH为6.0-7.0,加入木瓜蛋白酶和丝氨酸蛋白酶的组合酶A,于50-60℃下酶解30-50min,得到二步酶解液;
所述鲟鱼肉骨粉与一步酶解液的质量比为1:1.5-2.5;
所述去离子水与一步酶解液的质量比为1: 1.5-2.5;
所述组合酶A中木瓜蛋白酶和丝氨酸蛋白酶的质量比为2:2-4;
所述木瓜蛋白酶的酶活力为7.0-8.0*105U/g;
所述丝氨酸蛋白酶的酶活力为8.0-9.0*105U/g;
所述组合酶A与一步酶解液的质量比为1:80-120。
所述三步酶解,二步酶解液加入鲟鱼肉骨粉,再加入一定量的去离子水,调节pH为1.8-2.2,加入胃蛋白酶于30-40℃下酶解15-25min,然后调节pH为7.0-8.0,再加入胰蛋白酶于30-40℃下酶解30-50min得到三步酶解液,同时三步酶解全程辅以间隔的超声,超声功率200-300W、频率30-50kHz,每间隔3-7min辅助超声3-7min,三步酶解液灭活并调节pH为中性,过滤离心取上清液得到鲟鱼小分子多肽营养液;
所述鲟鱼小分子多肽营养液中多肽分子量为1.2-1.4kDa,硒含量为130-140mg/L,锰含量为50-60 mg/L,锶含量为30-40 mg/L,锌含量为180-190 mg/L;
所述鲟鱼肉骨粉与二步酶解液的质量比为1:0.8-1.2;
所述去离子水与二步酶解液的质量比为1:1.5-2.5;
所述胃蛋白酶与二步酶解液的质量比为1:200-300;
所述丝氨酸蛋白酶的酶活力为3.0-4.0*105U/g;
所述胰蛋白酶与二步酶解液的质量比为1:100-200;
所述丝氨酸蛋白酶的酶活力为2.0-3.0*105U/g。
所述制备改性高岭石超细粉,将高岭石粉碎至40-60μm,分散于无水乙醇形成均匀的分散液,并调节pH至3.0-4.0,缓慢滴加3-氨基丙烷三乙氧基硅烷,2-4min内滴加完成,搅拌50-70min,过滤后将滤渣清洗至中性,在105-130℃下干燥200-300min得到初步改性高岭石粉,将初步改性高岭石粉与石榴籽油混合,在73-80℃下搅拌25-35min,再加入氨基环丙烷羧酸、马来酸酐、浓硫酸的混合物,在105-120℃下搅拌300-400min,然后水洗至中性并干燥,最后粉碎至粒径为5-10μm得到改性高岭石超细粉;
所述高岭石与无水乙醇的质量比为1:50-70;
所述3-氨基丙烷三乙氧基硅烷与高岭石的质量比为1:100-200;
所述石榴籽油与初步改性高岭石粉的质量比为2:4-6;
所述混合物中氨基环丙烷羧酸、马来酸酐、浓硫酸的质量比为2:14-16:0.8-1.2;
所述混合物与初步改性高岭石粉的质量比为1:8-12。
所述制备环糊精包埋角鲨烯复合物,将三聚磷酸钠溶解于去离子水,然后加入磷酸溶液调节pH至6.0-7.0,然后加入环糊精搅拌40-50min后抽滤,再用无水乙醇淋洗后继续抽滤,干燥至滤饼含水量至5-10%得到改性环糊精备用,将改性环糊精分散于角鲨烯的丙酮溶液中搅拌200-300min,然后蒸发溶剂干燥并粉碎至80-120目得到环糊精包埋角鲨烯复合物,包埋量为70-80mg/g;
所述三聚磷酸钠与去离子水的质量比为1:8-10;
所述环糊精与三聚磷酸钠的质量比为3-5:1;
所述角鲨烯的丙酮溶液中角鲨烷与丙酮的质量比为1:250-350;
所述改性环糊精与角鲨烯的丙酮溶液的质量比为40-60:1。
所述制备细胞修复液,将鲟鱼小分子多肽营养液、腐殖酸、改性高岭石超细粉、氨基三乙酸、木瓜多酚、环糊精包埋角鲨烯复合物、豆甾醇、丙烯酰二甲基牛磺酸钠、透明质酸钠、白芨提取物、杏仁提取物、牛蒡粉、螺旋藻多糖、吐温-80、水混合均匀得到细胞修复液。
一种细胞修复液在物细胞修复中的应用。
与现有技术相比,本发明取得以下有益效果:
本发明的细胞修复液可以降低作物烂根以及其他病害发病率, 轻度污染土壤中西红柿烂根率为10.58%,叶霉病发病率为12.37%,早疫病发病率为9.62%;
本发明的细胞修复液可以提高作物产量, 轻度污染土壤中西红柿产量为1800斤/亩;
本发明的细胞修复液可以降低重金属在植物体内的富集,作物茎叶中重金属含量低,轻度污染土壤中西红柿果实中镉含量<0.05mg/kg,铅含量<0.1mg/kg,低于国家蔬菜重金属限量值。
具体实施方式
实施例1
(1)连续酶解制备鲟鱼小分子多肽营养液
a、前处理
成年鲟鱼宰杀后除去头部和内脏,剩余部分破碎后进行冻干除去水分,再粉碎至100目得到干燥的鲟鱼肉骨粉备用;
头部和内脏清洗后,粗略粉碎至大小为2-3cm的块状,并在100℃下蒸煮30min,得到鲟鱼熟内脏备用;
b、一步酶解
将鲟鱼熟内脏与去离子水混合并调节pH为8.5,加入枯草杆菌蛋白酶和抗坏血酸,辅以100W功率的微波辐照下于55℃下酶解30min,过滤得到一步酶解液;
所述鲟鱼熟内脏与去离子水的质量比为2:5;
所述枯草杆菌蛋白酶的酶活力为9.2*105U/g;
所述枯草杆菌蛋白酶与鲟鱼熟内脏的质量比为1:300;
所述抗坏血酸与鲟鱼熟内脏的质量比1:1000。
c、二步酶解
一步酶解液加入鲟鱼肉骨粉,再加入一定量的去离子水,调节pH为6.5,加入木瓜蛋白酶和丝氨酸蛋白酶的组合酶A,于55℃下酶解40min,得到二步酶解液;
所述鲟鱼肉骨粉与一步酶解液的质量比为1:2;
所述去离子水与一步酶解液的质量比为1:2;
所述组合酶A中木瓜蛋白酶和丝氨酸蛋白酶的质量比为2:3;
所述木瓜蛋白酶的酶活力为7.5*105U/g;
所述丝氨酸蛋白酶的酶活力为8.7*105U/g;
所述组合酶A与一步酶解液的质量比为1:100。
d、三步酶解
二步酶解液加入鲟鱼肉骨粉,再加入一定量的去离子水,调节pH为2.0,加入胃蛋白酶于35℃下酶解20min,然后调节pH为7.5,再加入胰蛋白酶于35℃下酶解40min得到三步酶解液,同时三步酶解全程辅以间隔的超声,超声功率250W、频率40kHz,每间隔5min辅助超声5min,三步酶解液在95℃下灭活20min,并调节pH为中性,最后过滤离心取上清液得到鲟鱼小分子多肽营养液;
所述鲟鱼小分子多肽营养液中多肽分子量为1.2-1.4kDa,硒含量为137mg/L,锰含量为53 mg/L,锶含量为38 mg/L,锌含量为185 mg/L;
所述鲟鱼肉骨粉与二步酶解液的质量比为1:1;
所述去离子水与二步酶解液的质量比为1:2;
所述胃蛋白酶与二步酶解液的质量比为1:250;
所述丝氨酸蛋白酶的酶活力为3.5*105U/g;
所述胰蛋白酶与二步酶解液的质量比为1:150;
所述丝氨酸蛋白酶的酶活力为2.8*105U/g。
(2)制备改性高岭石超细粉
将高岭石粉碎至50μm,分散于无水乙醇形成均匀的分散液,并调节pH至3.5,缓慢滴加3-氨基丙烷三乙氧基硅烷,3min内滴加完成,搅拌60min,过滤后将滤渣清洗至中性,在120℃下干燥240min得到初步改性高岭石粉,将初步改性高岭石粉与石榴籽油混合,在75℃下搅拌30min,再加入氨基环丙烷羧酸、马来酸酐、浓硫酸的混合物,在110℃下搅拌350min,然后水洗至中性并干燥,最后气流粉碎至粒径为8μm得到改性高岭石超细粉;
所述高岭石与无水乙醇的质量比为1:60;
所述3-氨基丙烷三乙氧基硅烷与高岭石的质量比为1:150;
所述石榴籽油与初步改性高岭石粉的质量比为2:5;
所述混合物中氨基环丙烷羧酸、马来酸酐、浓硫酸的质量比为2:15:1;
所述混合物与初步改性高岭石粉的质量比为1:10。
(3)制备环糊精包埋角鲨烯复合物
将三聚磷酸钠溶解于去离子水,然后加入磷酸溶液调节pH至6.5,然后加入环糊精搅拌45min后抽滤,再用无水乙醇淋洗后继续抽滤,干燥至滤饼含水量至8%得到改性环糊精备用,将改性环糊精分散于角鲨烯的丙酮溶液中搅拌240min,然后蒸发溶剂干燥并粉碎至100目得到环糊精包埋角鲨烯复合物,包埋量为75.3mg/g;
所述三聚磷酸钠与去离子水的质量比为1:9;
所述环糊精与三聚磷酸钠的质量比为4:1;
所述角鲨烯的丙酮溶液中角鲨烷与丙酮的质量比为1:300;
所述改性环糊精与角鲨烯的丙酮溶液的质量比为50:1。
(4)制备细胞修复液
所述细胞修复液按质量份计,包括以下组分:鲟鱼小分子多肽营养液15份、腐殖酸2份、改性高岭石超细粉5份、氨基三乙酸2份、木瓜多酚2份、环糊精包埋角鲨烯复合物5份、豆甾醇3份、丙烯酰二甲基牛磺酸钠1份、透明质酸钠3份、白芨提取物3份、杏仁提取物3份、牛蒡粉2份、螺旋藻多糖3份、吐温-80 15份、水300份;
所述细胞修复液的制备方法,将鲟鱼小分子多肽营养液、腐殖酸、改性高岭石超细粉、氨基三乙酸、木瓜多酚、环糊精包埋角鲨烯复合物、豆甾醇、丙烯酰二甲基牛磺酸钠、透明质酸钠、白芨提取物、杏仁提取物、牛蒡粉、螺旋藻多糖、吐温-80、水混合均匀得到细胞修复液。
实施例2
于土壤镉含量0.87mg/kg,铅含量为66mg/kg,pH为6.7的轻度污染土壤中,种植西红柿,分为正常水肥处理和正常水肥加使用细胞修复液处理,观察统计其生长情况;
所述正常水肥加使用细胞修复液处理,西红柿植株幼苗期开始,将细胞修复液的250倍液喷施于根部土壤,每亩使用修复液的250倍液8.5kg,间隔10天喷施一次,共喷施三次,开花坐果期开始,将细胞修复液的250倍液喷施于根部土壤,每亩使用修复液的250倍液5kg,喷施一次。
正常水肥处理西红柿烂根率为13.25%,叶霉病发病率为15.83%,早疫病发病率为11.75%,正常水肥加使用细胞修复液处理西红柿烂根率为4.35%,叶霉病发病率为5.47%,早疫病发病率为4.88%;
正常水肥处理西红柿产量为1700斤/亩,正常水肥加使用细胞修复液处理西红柿产量为2100斤/亩;
正常水肥处理西红柿茎叶中镉含量为1.25mg/kg,铅含量为13.53mg/kg,果实中镉含量>0.05mg/kg,铅含量>0.1mg/kg,高于国家蔬菜重金属限量值,正常水肥加使用细胞修复液处理西红柿茎叶中镉含量为0.58 mg/kg,铅含量为4.33 mg/kg,果实中镉含量<0.05mg/kg,铅含量<0.1mg/kg,低于国家蔬菜重金属限量值。
对比例1
在实施例1的基础上,省去制备改性高岭石超细粉步骤,仅使用未改性的高岭石粉与石榴籽油混合后直接粉碎至粒径为8μm制得超细粉,其余步骤相同,制得细胞修复液,用实施例2中正常水肥加使用细胞修复液处理相同的方法,进行种植,观察统计西红柿生长情况;
西红柿烂根率为6.25%,叶霉病发病率为8.33%,早疫病发病率为5.13%;
西红柿产量为1950斤/亩;
西红柿茎叶中镉含量为0.93mg/kg,铅含量为10.35mg/kg,果实中镉含量>0.05mg/kg,铅含量>0.1mg/kg,高于国家蔬菜重金属限量值。
对比例2
在实施例1的基础上,省去连续酶解制备鲟鱼小分子多肽营养液步骤中三步酶解步骤,得到多肽分子量为13.5kDa,其余步骤相同,制得细胞修复液,用实施例2中正常水肥加使用细胞修复液处理相同的方法,进行种植,观察统计西红柿生长情况;
西红柿烂根率为10.58%,叶霉病发病率为12.37%,早疫病发病率为9.62%;
西红柿产量为1800斤/亩;
西红柿茎叶中镉含量为0.85mg/kg,铅含量为9.37mg/kg,果实中镉含量<0.05mg/kg,铅含量<0.1mg/kg,低于国家蔬菜重金属限量值。
对比例3
在实施例1的基础上,省去制备环糊精包埋角鲨烯复合物步骤,直接添加角鲨烷制得细胞修复液,其余步骤相同,用实施例2中正常水肥加使用细胞修复液处理相同的方法,进行种植,观察统计西红柿生长情况;
西红柿烂根率为9.38%,叶霉病发病率为10.53%,早疫病发病率为8.71%;
西红柿产量为1800斤/亩;
西红柿茎叶中镉含量为0.72mg/kg,铅含量为5.35mg/kg,果实中镉含量>0.05mg/kg,铅含量>0.1mg/kg,高于国家蔬菜重金属限量值。
对比例4
在实施例1的基础上,制备细胞修复液中,省去添加豆甾醇、丙烯酰二甲基牛磺酸钠、透明质酸钠,其余步骤相同,制得细胞修复液,用实施例2中正常水肥加使用细胞修复液处理相同的方法,进行种植,观察统计西红柿生长情况;
西红柿烂根率为10.58%,叶霉病发病率为11.87%,早疫病发病率为9.24%;
西红柿产量为1700斤/亩;
西红柿茎叶中镉含量为0.73mg/kg,铅含量为6.71mg/kg,果实中镉含量<0.05mg/kg,铅含量<0.1mg/kg,低于国家蔬菜重金属限量值。

Claims (3)

1. 一种细胞修复液,其特征在于,所述细胞修复液按质量份计,包括以下组分:鲟鱼小分子多肽营养液14-16份、腐殖酸1.5-2.5份、改性高岭石超细粉4-6份、氨基三乙酸1.5-2.5份、木瓜多酚1.5-2.5份、环糊精包埋角鲨烯复合物4-6份、豆甾醇2.5-3.5份、丙烯酰二甲基牛磺酸钠0.8-1.2份、透明质酸钠2.5-3.5份、白芨提取物2.5-3.5份、杏仁提取物2.5-3.5份、牛蒡粉1.5-2.5份、螺旋藻多糖2.5-3.5份、吐温-80 10-20份、水250-350份;
所述鲟鱼小分子多肽营养液的制备步骤包括前处理、一步酶解、二步酶解、三步酶解;
所述前处理,鲟鱼除去头部和内脏,剩余部分破碎后冻干,再粉碎至80-120目得到鲟鱼肉骨粉备用; 头部和内脏粉碎至大小为2-3cm,在100℃下蒸煮20-40min,得到鲟鱼熟内脏备用;
所述一步酶解,将鲟鱼熟内脏与去离子水混合并调节pH为8.0-9.0,加入枯草杆菌蛋白酶和抗坏血酸,辅以80-120W功率的微波辐照下于50-60℃下酶解25-35min,过滤得到一步酶解液;
所述鲟鱼熟内脏与去离子水的质量比为2:4-6;
所述枯草杆菌蛋白酶的酶活力为9.0-9.5×105U/g;
所述枯草杆菌蛋白酶与鲟鱼熟内脏的质量比为1:250-350;
所述抗坏血酸与鲟鱼熟内脏的质量比1:800-1200;
所述二步酶解,一步酶解液加入鲟鱼肉骨粉,再加入一定量的去离子水,调节pH为6.0-7.0,加入木瓜蛋白酶和丝氨酸蛋白酶的组合酶A,于50-60℃下酶解30-50min,得到二步酶解液;
所述鲟鱼肉骨粉与一步酶解液的质量比为1:1.5-2.5;
所述去离子水与一步酶解液的质量比为1: 1.5-2.5;
所述组合酶A中木瓜蛋白酶和丝氨酸蛋白酶的质量比为2:2-4;
所述木瓜蛋白酶的酶活力为7.0-8.0×105U/g;
所述丝氨酸蛋白酶的酶活力为8.0-9.0×105U/g;
所述组合酶A与一步酶解液的质量比为1:80-120;
所述三步酶解,二步酶解液加入鲟鱼肉骨粉,再加入一定量的去离子水,调节pH为1.8-2.2,加入胃蛋白酶于30-40℃下酶解15-25min,然后调节pH为7.0-8.0,再加入胰蛋白酶于30-40℃下酶解30-50min得到三步酶解液,同时三步酶解全程辅以间隔的超声,超声功率200-300W、频率30-50kHz,每间隔3-7min辅助超声3-7min,三步酶解液灭活并调节pH为中性,过滤离心取上清液得到鲟鱼小分子多肽营养液;
所述鲟鱼小分子多肽营养液中多肽分子量为1.2-1.4kDa,硒含量为130-140mg/L,锰含量为50-60 mg/L,锶含量为30-40 mg/L,锌含量为180-190 mg/L;
所述鲟鱼肉骨粉与二步酶解液的质量比为1:0.8-1.2;
所述去离子水与二步酶解液的质量比为1:1.5-2.5;
所述胃蛋白酶与二步酶解液的质量比为1:200-300;
所述丝氨酸蛋白酶的酶活力为3.0-4.0×105U/g;
所述胰蛋白酶与二步酶解液的质量比为1:100-200;
所述丝氨酸蛋白酶的酶活力为2.0-3.0×105U/g;
所述改性高岭石超细粉的制备步骤为,将高岭石粉碎至40-60μm,分散于无水乙醇形成均匀的分散液,并调节pH至3.0-4.0,缓慢滴加3-氨基丙烷三乙氧基硅烷,2-4min内滴加完成,搅拌50-70min,过滤后将滤渣清洗至中性,在105-130℃下干燥200-300min得到初步改性高岭石粉,将初步改性高岭石粉与石榴籽油混合,在73-80℃下搅拌25-35min,再加入氨基环丙烷羧酸、马来酸酐、浓硫酸的混合物,在105-120℃下搅拌300-400min,然后水洗至中性并干燥,最后粉碎至粒径为5-10μm得到改性高岭石超细粉;
所述高岭石与无水乙醇的质量比为1:50-70;
所述3-氨基丙烷三乙氧基硅烷与高岭石的质量比为1:100-200;
所述石榴籽油与初步改性高岭石粉的质量比为2:4-6;
所述混合物中氨基环丙烷羧酸、马来酸酐、浓硫酸的质量比为2:14-16:0.8-1.2;
所述混合物与初步改性高岭石粉的质量比为1:8-12;
所述环糊精包埋角鲨烯复合物的制备步骤为,将三聚磷酸钠溶解于去离子水,然后加入磷酸溶液调节pH至6.0-7.0,然后加入环糊精搅拌40-50min后抽滤,再用无水乙醇淋洗后继续抽滤,干燥至滤饼含水量至5-10%得到改性环糊精备用,将改性环糊精分散于角鲨烯的丙酮溶液中搅拌200-300min,然后蒸发溶剂干燥并粉碎至80-120目得到环糊精包埋角鲨烯复合物,包埋量为70-80mg/g;
所述三聚磷酸钠与去离子水的质量比为1:8-10;
所述环糊精与三聚磷酸钠的质量比为3-5:1;
所述角鲨烯的丙酮溶液中角鲨烷与丙酮的质量比为1:250-350;
所述改性环糊精与角鲨烯的丙酮溶液的质量比为40-60:1。
2.根据权利要求1所述的一种细胞修复液的制备方法,其特征在于:所述制备细胞修复液,将鲟鱼小分子多肽营养液、腐殖酸、改性高岭石超细粉、氨基三乙酸、木瓜多酚、环糊精包埋角鲨烯复合物、豆甾醇、丙烯酰二甲基牛磺酸钠、透明质酸钠、白芨提取物、杏仁提取物、牛蒡粉、螺旋藻多糖、吐温-80、水混合均匀得到细胞修复液。
3.根据前权利要求1所述的一种细胞修复液在植物细胞修复中的应用。
CN202111599445.2A 2021-12-24 2021-12-24 一种细胞修复液、制备方法及其应用 Active CN114395401B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111599445.2A CN114395401B (zh) 2021-12-24 2021-12-24 一种细胞修复液、制备方法及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111599445.2A CN114395401B (zh) 2021-12-24 2021-12-24 一种细胞修复液、制备方法及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN114395401A CN114395401A (zh) 2022-04-26
CN114395401B true CN114395401B (zh) 2023-11-24

Family

ID=81226058

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202111599445.2A Active CN114395401B (zh) 2021-12-24 2021-12-24 一种细胞修复液、制备方法及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN114395401B (zh)

Citations (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5980912A (en) * 1997-03-25 1999-11-09 Zonagen, Inc. Chitosan induced immunopotentiation
AU2004205272A1 (en) * 2003-09-04 2005-03-24 Reposo S.A.I.C. A N-(phosphonomethyl)glycine(glyphosate) salt, a preparation process thereof, a concentrate composition and a phytotoxic formulation comprising it, and a method to combat weeds in a crop with a formulation thereto
CN101861860A (zh) * 2010-06-22 2010-10-20 北京农学院 一种角鲨烯植物杀真菌剂及其用途
CN104529613A (zh) * 2014-11-29 2015-04-22 沈阳金尔露生物科技有限公司 有机生物复配液体肥料及盐碱地改良施用方法
CN104907327A (zh) * 2015-06-24 2015-09-16 黑龙江省科学院自然与生态研究所 一种石墨矿区土壤重金属污染修复剂及其制备和使用方法
WO2016029731A1 (zh) * 2014-08-27 2016-03-03 中国水稻研究所 一种土壤重金属活化剂及其制备方法
CN106433664A (zh) * 2016-08-26 2017-02-22 黄建辉 一种用于治理重金属贡、镉污染的土壤修复剂
CN106619873A (zh) * 2016-12-29 2017-05-10 华宝香精股份有限公司 一种提高木瓜皮多酚抗氧化活性的hpef提取方法
CN107259582A (zh) * 2017-07-06 2017-10-20 长沙爱扬医药科技有限公司 大鲵蛋白肽粉产品及其制备方法
CN107557018A (zh) * 2017-10-11 2018-01-09 广西南宁荣威德新能源科技有限公司 一种土壤改良剂的制备方法
CN107653290A (zh) * 2017-11-14 2018-02-02 湖北澳肽生物科技有限公司 一种鲟鱼蛋白肽的制备方法
CN107879846A (zh) * 2017-11-22 2018-04-06 宿州市逢源生物科技有限公司 一种采煤沉陷地植被修复剂及其制备方法
WO2018140790A1 (en) * 2017-01-27 2018-08-02 Cytozyme Animal Nutrition, Inc. Animal nutrition compositions and related methods
CN109678598A (zh) * 2018-09-29 2019-04-26 江西省农业科学院土壤肥料与资源环境研究所 一种土壤修复肥料及其制备方法
CN110051602A (zh) * 2019-05-14 2019-07-26 东方爱堡(北京)母婴健康科技有限公司 一种润肤保湿修复乳液及其制备方法
CN110178964A (zh) * 2019-05-31 2019-08-30 湖北清江鲟龙渔业有限公司 鲟鱼蛋白肽的制备工艺
CN110250226A (zh) * 2019-06-11 2019-09-20 管天球 一种油茶树叶病害防护液及其制备和使用方法
US10456817B1 (en) * 2018-12-10 2019-10-29 China University Of Petroleum (East China) Environment-friendly and in situ immobilized method of renovating heavy metal contaminated soil with humic acid substance
CN110755669A (zh) * 2019-10-31 2020-02-07 河南亚都实业有限公司 一种医用胶原创面修复膜
CN110885690A (zh) * 2019-12-12 2020-03-17 河南省科学院生物研究所有限责任公司 一种原位修复土壤重金属污染的稳定剂及其应用
CN110894174A (zh) * 2018-09-12 2020-03-20 蔡敬海 离子修复液的制备方法
CN111154493A (zh) * 2019-12-26 2020-05-15 湖南省和清环境科技有限公司 用于镉砷污染水稻种植的土壤修复药剂配方及其制备方法
AU2020102307A4 (en) * 2020-09-17 2020-11-05 Institute Of Agricultural Resources And Environment, Shandong Academy Of Agricultural Sciences Compound plant stress resistance agent and preparation method and applications thereof
CN111919852A (zh) * 2020-08-20 2020-11-13 河南喜夫农生物科技有限公司 一种种子处理悬浮剂及其制备方法和应用
CN112516060A (zh) * 2020-11-25 2021-03-19 郑楠 一种胎盘复合乳液修复液及其制备方法
CN113133466A (zh) * 2020-01-19 2021-07-20 运城市嘉乐肥业有限公司 豆甾醇抗逆促长剂及其制备方法
CN113234706A (zh) * 2021-04-30 2021-08-10 神究富硒农业发展(山东)有限公司 一种利用菌草酸生物多酶解技术提取小分子硒的方法

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040106199A1 (en) * 2002-12-02 2004-06-03 Eliseev Alexey V. Charged cyclodextrin derivatives and their use in plant cell and tissue culture growth media
US20100267658A1 (en) * 2009-04-15 2010-10-21 Sudzucker Aktiengesellschaft Mannheim/Ochsenfurt Trehalulose-containing composition, its preparation and use
CN103145495B (zh) * 2013-02-27 2015-02-25 谢超 一种高能复合肽化蛋白硒营养液、其制备方法和用途
US20210121538A1 (en) * 2019-10-23 2021-04-29 Nobelbiotix Research Institute Limited Interactional Biosystem

Patent Citations (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5980912A (en) * 1997-03-25 1999-11-09 Zonagen, Inc. Chitosan induced immunopotentiation
AU2004205272A1 (en) * 2003-09-04 2005-03-24 Reposo S.A.I.C. A N-(phosphonomethyl)glycine(glyphosate) salt, a preparation process thereof, a concentrate composition and a phytotoxic formulation comprising it, and a method to combat weeds in a crop with a formulation thereto
CN101861860A (zh) * 2010-06-22 2010-10-20 北京农学院 一种角鲨烯植物杀真菌剂及其用途
WO2016029731A1 (zh) * 2014-08-27 2016-03-03 中国水稻研究所 一种土壤重金属活化剂及其制备方法
CN104529613A (zh) * 2014-11-29 2015-04-22 沈阳金尔露生物科技有限公司 有机生物复配液体肥料及盐碱地改良施用方法
CN104907327A (zh) * 2015-06-24 2015-09-16 黑龙江省科学院自然与生态研究所 一种石墨矿区土壤重金属污染修复剂及其制备和使用方法
CN106433664A (zh) * 2016-08-26 2017-02-22 黄建辉 一种用于治理重金属贡、镉污染的土壤修复剂
CN106619873A (zh) * 2016-12-29 2017-05-10 华宝香精股份有限公司 一种提高木瓜皮多酚抗氧化活性的hpef提取方法
WO2018140790A1 (en) * 2017-01-27 2018-08-02 Cytozyme Animal Nutrition, Inc. Animal nutrition compositions and related methods
CN107259582A (zh) * 2017-07-06 2017-10-20 长沙爱扬医药科技有限公司 大鲵蛋白肽粉产品及其制备方法
CN107557018A (zh) * 2017-10-11 2018-01-09 广西南宁荣威德新能源科技有限公司 一种土壤改良剂的制备方法
CN107653290A (zh) * 2017-11-14 2018-02-02 湖北澳肽生物科技有限公司 一种鲟鱼蛋白肽的制备方法
CN107879846A (zh) * 2017-11-22 2018-04-06 宿州市逢源生物科技有限公司 一种采煤沉陷地植被修复剂及其制备方法
CN110894174A (zh) * 2018-09-12 2020-03-20 蔡敬海 离子修复液的制备方法
CN109678598A (zh) * 2018-09-29 2019-04-26 江西省农业科学院土壤肥料与资源环境研究所 一种土壤修复肥料及其制备方法
US10456817B1 (en) * 2018-12-10 2019-10-29 China University Of Petroleum (East China) Environment-friendly and in situ immobilized method of renovating heavy metal contaminated soil with humic acid substance
CN110051602A (zh) * 2019-05-14 2019-07-26 东方爱堡(北京)母婴健康科技有限公司 一种润肤保湿修复乳液及其制备方法
CN110178964A (zh) * 2019-05-31 2019-08-30 湖北清江鲟龙渔业有限公司 鲟鱼蛋白肽的制备工艺
CN110250226A (zh) * 2019-06-11 2019-09-20 管天球 一种油茶树叶病害防护液及其制备和使用方法
CN110755669A (zh) * 2019-10-31 2020-02-07 河南亚都实业有限公司 一种医用胶原创面修复膜
CN110885690A (zh) * 2019-12-12 2020-03-17 河南省科学院生物研究所有限责任公司 一种原位修复土壤重金属污染的稳定剂及其应用
CN111154493A (zh) * 2019-12-26 2020-05-15 湖南省和清环境科技有限公司 用于镉砷污染水稻种植的土壤修复药剂配方及其制备方法
CN113133466A (zh) * 2020-01-19 2021-07-20 运城市嘉乐肥业有限公司 豆甾醇抗逆促长剂及其制备方法
CN111919852A (zh) * 2020-08-20 2020-11-13 河南喜夫农生物科技有限公司 一种种子处理悬浮剂及其制备方法和应用
AU2020102307A4 (en) * 2020-09-17 2020-11-05 Institute Of Agricultural Resources And Environment, Shandong Academy Of Agricultural Sciences Compound plant stress resistance agent and preparation method and applications thereof
CN112516060A (zh) * 2020-11-25 2021-03-19 郑楠 一种胎盘复合乳液修复液及其制备方法
CN113234706A (zh) * 2021-04-30 2021-08-10 神究富硒农业发展(山东)有限公司 一种利用菌草酸生物多酶解技术提取小分子硒的方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN114395401A (zh) 2022-04-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104761375B (zh) 一种海藻生物肥及其制备方法
CN107155653B (zh) 一种枇杷的嫁接方法
CN105993756A (zh) 一种桑树的种植方法
CN111592408A (zh) 一种改良水稻种植的植物发酵提取物及其制备方法
CN111602687A (zh) 一种治理水稻根腐病的植物发酵提取物及其制备方法
CN108633650A (zh) 西瓜、甜瓜的沼液水肥一体化安全施用方法
CN111533621A (zh) 一种改良玉米种植的植物发酵提取物及其制备方法
CN103936528A (zh) 一种鱼腥草的栽培专用肥及其制备方法
CN114395401B (zh) 一种细胞修复液、制备方法及其应用
CN112136594B (zh) 一种猕猴桃低产园土壤改良方法
CN106699264A (zh) 一种蓝莓种植用有机肥及制备方法
CN108191566A (zh) 一种金刺梨果园土壤改良生物肥及土壤改良方法
CN106613245B (zh) 一种旱地荞麦高产栽培方法
CN107686405A (zh) 一种防治油菜根肿病液肥
CN115211439A (zh) 一种含腐植酸绿色环保农药及其制备方法
CN116375533A (zh) 一种水溶性烟草叶面肥
CN107896788A (zh) 一种沙糖桔的培育方法
CN113023905A (zh) 一种调节淡水水质的植物发酵提取物及其制备方法
CN113072406A (zh) 一种阻止水稻吸收重金属的植物发酵提取物及其制备方法
CN106278570A (zh) 一种苗木复壮肥料
CN113004097A (zh) 一种用于葡萄种植的植物发酵提取物及其制备方法
CN111763116A (zh) 一种调酸补镁预防植物黄化的有机无机复混肥料及其制备方法
CN110915571A (zh) 番茄有机栽培方法
CN109721434A (zh) 一种沼液复配的液体肥的制备工艺
CN106518239A (zh) 一种西山茶专用粪肥及其制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant