CN104861081A - 一种利用亚临界水提取石斛多糖的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种利用亚临界水提取石斛多糖的方法，属于天然活性成分提取领域。先将石斛原料粉碎，脱脂，干燥后放入亚临界水提取装置，在温度100～160℃、压力0.5～2.0MPa、亚临界水与石斛粉末的液固比为15～45mL/g条件下，提取5～30min，提取1～3次，然后收集提取液，加入无水乙醇，静置后离心得到的沉淀即为粗品，再依次通过无水乙醇、丙酮和乙醚洗涤得到石斛多糖。本发明采用先进的亚临界水提取技术提取石斛多糖，提取时间短，提取效率高，得到的石斛多糖具有显著的抗氧化活性，该方法绿色无污染，对设备要求低，易于工业化生产。
Description
技术领域
本发明涉及一种利用亚临界水提取石斛多糖的方法，属于天然活性成分提取领域。
背景技术
石斛是兰科石斛属植物，我国76种石斛属植物中有30多种作为药用，中国药典2005版收载3种常用品种金钗石斛、铁皮石斛、马鞭石斛。在《神农本草经》中，石斛被列为上品，具有滋阴清热、生津益胃、润肺止咳、明目强身等功效。化学成分分析显示，石斛中的多糖成分含量在3%-30%之间，是石斛中的主要活性成分（朱华，黄学萃，杨海广，等．石斛属多糖的研究进展[J]．医药导报，2007，26(12)：1476-1479．）。药理学研究表明，石斛多糖的药理作用主要表现在免疫、降血糖以及强壮等方面（陈璋辉，陈云龙，吴涛．细茎石斛多糖DMP4a-1的结构特性及免疫活性研究[J]．中国药学杂志，2005，4(25)：1781-1784．）。
目前石斛多糖的提取方法主要是采用水提法、回流提取法、超声波/微波提取法、酶提取法、超高压提取法等。刘文等人（刘文，熊耀康．微波辅助提取金钗石斛多糖的工艺研究[J]．中华中医药学刊，2009，27(6)：1315-1317．）应用微波辅助提取技术，在微波频率1470MHz，料液比1:30条件下，浸提3h后微波10min，得到金钗石斛多糖收率为4.23%。纵伟等人（纵伟，李翠翠．石斛多糖超高压提取工艺条件的优化[J]．郑州轻工业学院学报，2012，27(4)：36-39．）采用超高压方法提取铁皮石斛中的多糖成分，在固液比1:20，采用300MPa的压力提取6min后，石斛多糖的得率达到19.27%。虽然提取时间缩短，但超高压条件对设备要求较高，很难实现工业化生产。
亚临界水又称为高压热水，是指在压力大于 1MPa 时，将水加热到 100℃以上，临界温度374℃以下，水体依然保持液体状态。同文献报道的提取方法相比，亚临界水提取效率高，溶解性与渗透能力强，其作用效果迅速且能量消耗较少，同时亚临界水会使蛋白质、淀粉等变性，给后续的分离纯化带来方便，非常适用于工业的大规模生产的提取。此种方法提取石斛多糖价廉、无污染且提取率高，是一种绿色萃取技术，目前尚未见报道。
发明内容
本发明的目的是解决现有技术的不足和缺陷，提供一种前处理简单，提取得率高，同时又能保持有效成分结构与抗氧化活性的适应工业生产的亚临界水提取石斛多糖的方法。本发明的技术方案概述如下：
本发明提出的一种利用亚临界水提取石斛多糖的方法，具体包括以下步骤：
（1）将石斛粉碎，过20～80目筛，得到石斛粉末。
（2）将步骤（1）所得的石斛粉末用80%～95%乙醇浸泡，在70～90℃下回流脱脂30～60min，得到混合液A。
（3）将混合液A，放入离心机的离心管中，在转速3000～5000r/min下离心5～15min后，取下离心管，得到上清液A和沉淀物A。
（4）将残渣A放于70～105℃电热恒温鼓风干燥箱中干燥5～10h，得到脱脂后的石斛粉末。
（5）将步骤（4）所得的脱脂后的石斛粉末装入亚临界水提取装置中，亚临界水与石斛粉末的液固比为15～45mL/g，提取压力为 0.5～2.0MPa，提取温度为 100～160℃，提取时间为 5～30min，提取1～3次，得到混合液B。
所述的亚临界水提取装置为TGYF-A型不锈钢高压提取器。
（6）将混合液B，放入离心机的离心管中，在转速3000～5000r/min下离心5～15min后，取下离心管，得到上清液B和沉淀物B。
（7）将3～6倍体积的无水乙醇加入上清液B，在温度为1～5℃下静置5-10h，得到混合液C。
（8）将混合液C，放入离心机的离心管中，在转速3000～5000r/min下离心5～15min后，取下离心管，得到上清液C和沉淀物C。
（8）将沉淀物C依次用3～6倍体积的无水乙醇、丙酮和乙醚洗涤，得到石斛多糖。
本发明提出的一种利用亚临界水提取石斛多糖的方法，得到的石斛多糖收率为20.67～23.36%，纯度为91.50～98.21%。
本发明优点如下：
（1）本发明提出的一种利用亚临界水提取石斛多糖的方法，采用亚临界水提取石斛多糖，提取率明显高于传统的热水浸提法，并且提取时间短，提取效率高。
（2）本发明提出的一种利用亚临界水提取石斛多糖的方法，得到的石斛多糖具有显著的抗氧化活性，对羟基自由基、ABTS自由基和超氧阴离子自由基均显示较强的清除能力。
（3）本发明提出的一种利用亚临界水提取石斛多糖的方法，该工艺流程简单，生产周期短，绿色无污染，且设备要求低，易实现工业应用。
附图说明
图1：本发明提出的一种利用亚临界水提取石斛多糖的方法的工艺流程图。
具体实施方式
下面将结合附图和实施例对本发明做进一步的详细说明。
本发明提出的一种利用亚临界水提取石斛多糖的方法，具体包括以下步骤：
（1）将石斛粉碎，过20～80目筛，得到石斛粉末。
（2）将步骤（1）所得的石斛粉末用80%～95%乙醇浸泡，在70～90℃下回流脱脂30～60min，得到混合液A。
（3）将混合液A，放入离心机的离心管中，在转速3000～5000r/min下离心5～15min后，取下离心管，得到上清液A和沉淀物A。
（4）将残渣A放于70～105℃电热恒温鼓风干燥箱中干燥5～10h，得到脱脂后的石斛粉末。
（5）将步骤（4）所得的脱脂后的石斛粉末装入亚临界水提取装置中，亚临界水与石斛粉末的液固比为15～45mL/g，提取压力为 0.5～2.0MPa，提取温度为 100～160℃，提取时间为 5～30min，提取1～3次，得到混合液B。
所述的亚临界水提取装置为TGYF-A型不锈钢高压提取器。
（6）将混合液B，放入离心机的离心管中，在转速3000～5000r/min下离心5～15min后，取下离心管，得到上清液B和沉淀物B。
（7）将3～6倍体积的无水乙醇加入上清液B，在温度为1～5℃下静置5-10h，得到混合液C。
（8）将混合液C，放入离心机的离心管中，在转速3000～5000r/min下离心5～15min后，取下离心管，得到上清液C和沉淀物C。
（8）将沉淀物C依次用3～6倍体积的无水乙醇、丙酮和乙醚洗涤，得到石斛多糖。
本发明提出的一种利用亚临界水提取石斛多糖的方法，得到的石斛多糖收率为20.67～23.36%，纯度为91.50～98.21%，体外抗氧化活性测定结果显示，在石斛多糖浓度为1.0mg/mL时，对羟基自由基和ABTS自由基清除能力最强，清除率达到了100%，对超氧阴离子自由基清除率达到了60%以上。
实 施 例 1：
一种利用亚临界水提取石斛多糖的方法，具体包括以下步骤：
（1）将石斛粉碎，过40目筛，得到石斛粉末。
（2）将步骤（1）所得的石斛粉末用85%乙醇浸泡，在90℃下回流脱脂30min，得到混合液A。
（3）将混合液A，放入离心机的离心管中，在转速5000r/min下离心5min后，取下离心管，得到上清液A和沉淀物A。
（4）将残渣A放于80℃电热恒温鼓风干燥箱中干燥9h，得到脱脂后的石斛粉末。
（5）将步骤（4）所得的脱脂后的石斛粉末装入亚临界水提取装置中，亚临界水与石斛粉末的液固比为25mL/g，提取压力为 1.0MPa，提取温度为 140℃，提取时间为 20min，提取2次，得到混合液B。
所述的亚临界水提取装置为TGYF-A型不锈钢高压提取器。
（6）将混合液B，放入离心机的离心管中，在转速5000r/min下离心5min后，取下离心管，得到上清液B和沉淀物B。
（7）将4倍体积的无水乙醇加入上清液B，在温度为4℃下静置8h，得到混合液C。
（8）将混合液C，放入离心机的离心管中，在转速5000r/min下离心5min后，取下离心管，得到上清液C和沉淀物C。
（8）将沉淀物C依次用4倍体积的无水乙醇、丙酮和乙醚洗涤，得到石斛多糖。
本发明提出的一种利用亚临界水提取石斛多糖的方法，得到的石斛多糖收率为23.36%，纯度为98.21%，体外抗氧化活性测定结果显示，在石斛多糖浓度为1.0mg/mL时，对羟基自由基和ABTS自由基清除能力最强，清除率达到了100%，对超氧阴离子自由基清除率达到了60%以上。
实 施 例 2：
一种利用亚临界水提取石斛多糖的方法，具体包括以下步骤：
（1）将石斛粉碎，过60目筛，得到石斛粉末。
（2）将步骤（1）所得的石斛粉末用90%乙醇浸泡，在80℃下回流脱脂45min，得到混合液A。
（3）将混合液A，放入离心机的离心管中，在转速4000r/min下离心10min后，取下离心管，得到上清液A和沉淀物A。
（4）将残渣A放于90℃电热恒温鼓风干燥箱中干燥7h，得到脱脂后的石斛粉末。
（5）将步骤（4）所得的脱脂后的石斛粉末装入亚临界水提取装置中，亚临界水与石斛粉末的液固比为35mL/g，提取压力为 2.0MPa，提取温度为 110℃，提取时间为 30min，提取1次，得到混合液B。
所述的亚临界水提取装置为TGYF-A型不锈钢高压提取器。
（6）将混合液B，放入离心机的离心管中，在转速4000r/min下离心10min后，取下离心管，得到上清液B和沉淀物B。
（7）将6倍体积的无水乙醇加入上清液B，在温度为3℃下静置6h，得到混合液C。
（8）将混合液C，放入离心机的离心管中，在转速4000r/min下离心10min后，取下离心管，得到上清液C和沉淀物C。
（8）将沉淀物C依次用5倍体积的无水乙醇、丙酮和乙醚洗涤，得到石斛多糖。
本发明提出的一种利用亚临界水提取石斛多糖的方法，得到的石斛多糖收率为20.67%，纯度为91.50%，体外抗氧化活性测定结果显示，在石斛多糖浓度为1.0mg/mL时，对羟基自由基和ABTS自由基清除能力最强，清除率达到了100%，对超氧阴离子自由基清除率达到了60%以上。
实 施 例 3：
一种利用亚临界水提取石斛多糖的方法，具体包括以下步骤：
（1）将石斛粉碎，过80目筛，得到石斛粉末。
（2）将步骤（1）所得的石斛粉末用80%乙醇浸泡，在70℃下回流脱脂60min，得到混合液A。
（3）将混合液A，放入离心机的离心管中，在转速3000r/min下离心15min后，取下离心管，得到上清液A和沉淀物A。
（4）将残渣A放于105℃电热恒温鼓风干燥箱中干燥5h，得到脱脂后的石斛粉末。
（5）将步骤（4）所得的脱脂后的石斛粉末装入亚临界水提取装置中，亚临界水与石斛粉末的液固比为15mL/g，提取压力为 0.5MPa，提取温度为 160℃，提取时间为 10min，提取3次，得到混合液B。
所述的亚临界水提取装置为TGYF-A型不锈钢高压提取器。
（6）将混合液B，放入离心机的离心管中，在转速3000r/min下离心15min后，取下离心管，得到上清液B和沉淀物B。
（7）将3倍体积的无水乙醇加入上清液B，在温度为5℃下静置10h，得到混合液C。
（8）将混合液C，放入离心机的离心管中，在转速3000r/min下离心15min后，取下离心管，得到上清液C和沉淀物C。
（8）将沉淀物C依次用3倍体积的无水乙醇、丙酮和乙醚洗涤，得到石斛多糖。
本发明提出的一种利用亚临界水提取石斛多糖的方法，得到的石斛多糖收率为22.84%，纯度为95.77%，体外抗氧化活性测定结果显示，在石斛多糖浓度为1.0mg/mL时，对羟基自由基和ABTS自由基清除能力最强，清除率达到了100%，对超氧阴离子自由基清除率达到了60%以上。
Claims (3)
1.一种利用亚临界水提取石斛多糖的方法，其特征在于该方法具体包括以下步骤：
（1）将石斛粉碎，过20～80目筛，得到石斛粉末；
（2）将步骤（1）所得的石斛粉末用80%～95%乙醇浸泡，在70～90℃下回流脱脂30～60min，得到混合液A；
（3）将混合液A，放入离心机的离心管中，在转速3000～5000r/min下离心5～15min后，取下离心管，得到上清液A和沉淀物A；
（4）将残渣A放于70～105℃电热恒温鼓风干燥箱中干燥5～10h，得到脱脂后的石斛粉末；
（5）将步骤（4）所得的脱脂后的石斛粉末装入亚临界水提取装置中，亚临界水与石斛粉末的液固比为15～45mL/g，提取压力为 0.5～2.0MPa，提取温度为 100～160℃，提取时间为 5～30min，提取1～3次，得到混合液B；
（6）将混合液B，放入离心机的离心管中，在转速3000～5000r/min下离心5～15min后，取下离心管，得到上清液B和沉淀物B；
（7）将3～6倍体积的无水乙醇加入上清液B，在温度为1～5℃下静置5-10h，得到混合液C；
（8）将混合液C，放入离心机的离心管中，在转速3000～5000r/min下离心5～15min后，取下离心管，得到上清液C和沉淀物C；
（9）将沉淀物C依次用3～6倍体积的无水乙醇、丙酮和乙醚洗涤，得到石斛多糖。
2.根据权利要求1所述的一种利用亚临界水提取石斛多糖的方法，其特征在于，所述的亚临界水提取装置为TGYF-A型不锈钢高压提取器。
3.根据权利要求1所述的一种利用亚临界水提取石斛多糖的方法，其特征在于，得到的石斛多糖收率为20.67～23.36%，纯度为91.50～98.21%。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20150826 |
|
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |