CN105232679A

CN105232679A - 一种利用亚临界水同时提取山楂中熊果酸和齐墩果酸的方法

Info

Publication number: CN105232679A
Application number: CN201510766063.2A
Authority: CN
Inventors: 刘静; 胡鑫; 祁祺; 刘旺衢; 雷建都; 何静; 王璐莹
Original assignee: Beijing Forestry University
Current assignee: Beijing Forestry University
Priority date: 2015-11-11
Filing date: 2015-11-11
Publication date: 2016-01-13

Abstract

本发明公开一种利用亚临界水同时提取山楂中熊果酸和齐墩果酸的方法，属于天然活性成分提取领域。先将山楂干粉碎，后过20～80目筛，然后放入亚临界水提取装置，在温度100～160℃、压力0.5～2.5MPa、亚临界水与山楂粉末的液固比为10～45mL/g条件下，提取10～50min，提取1～3次，静置后离心得到的沉淀，将乙醇与沉淀以15～45mL/g的比例混合，充分震荡后离心，将上清液通过旋转蒸发浓缩和柱层析法得到熊果酸和齐墩果酸。本发明采用先进的亚临界水提取技术提取山楂中的熊果酸和齐墩果酸，提取时间短，提取效率高，该方法绿色无污染，对设备要求低，易于工业化生产。

Description

一种利用亚临界水同时提取山楂中熊果酸和齐墩果酸的方法

技术领域

本发明涉及一种利用亚临界水同时提取山楂中熊果酸和齐墩果酸的方法，属于天然活性成分提取领域。

背景技术

山楂为蔷微科山楂属植物山里红GrataeguspinnatifidaBungevar.majorN.E.Br或山楂GrataeguspinnatifidaBunge的干燥成熟果实，具有消食化积、活血化瘀的功效。化学成分分析显示，山楂中熊果酸的平均质量分数为2.393mg/g，齐墩果酸的平均质量分数为0.449mg/g，（丁银花，孙永成，王振中，等．不同产地山楂中熊果酸和齐墩果酸量的差异分析[J]．中草药，2014，45(14)：1367-1373．）。药理学研究表明，熊果酸的药理作用主要表现抗糖尿病、抗爱滋病以及抗肿瘤等方面（王鹏，张忠义，吴忠．熊果酸在药用植物中的分布及药理作用[J]．中草药，2000，23(11)：717-722．），齐墩果酸具有消炎，增强免疫力，抑制血小板降集，降糖等多方面的临床药理作用（王立新，韩广轩，刘文庸，等．齐墩果酸的化学及药理研究[J]．药学实践杂志，2001，19(2)：104-107．）。

目前山楂中熊果酸和齐墩果酸的提取方法主要是采用水提法、回流提取法、超声波/微波提取法、酶提取法等。翁彩珠等人（翁彩珠，巨敏，刘军海．微波辅助提取山楂中熊果酸的工艺研究[J]．天津化工，2011，25(1)：33-36．）应用微波辅助提取技术，乙醇质量分数为85%、提取温度为55℃、微波时间为4min、液料比为16∶1、微波功率300W，在此条件下的熊果酸提取率为3.42%。孙协军等人（孙协军，刘羽纯，潘龙飞，等．山楂中齐墩果酸和熊果酸超声提取工艺研究[J]．工艺技术，2015，36(14)：321-326．）利用超声工艺，在乙醇体积分数90%，液固比35∶1mL/g，超声波功率352W，提取时间为4.6min的条件下超声波辅助提取山楂齐墩果酸和熊果酸，其含量之和为2.87mg/g。虽然提取时间缩短，但超声条件对设备要求较高，很难实现工业化生产。

亚临界水又称为高压热水，是指在压力大于1MPa时，将水加热到100℃以上，临界温度374℃以下，水体依然保持液体状态。同文献报道的提取方法相比，亚临界水提取效率高，溶解性与渗透能力强，其作用效果迅速且能量消耗较少，同时亚临界水会使蛋白质、淀粉等变性，给后续的分离纯化带来方便，非常适用于工业的大规模生产的提取。此种方法提取山楂中熊果酸和齐墩果酸价廉、无污染且提取率高，是一种绿色萃取技术，目前尚未见报道。

发明内容

本发明的目的是解决现有技术的不足和缺陷，提供一种前处理简单，提取溶剂绿色环保，同时又能保持有效成分结构与抗氧化活性的适应工业生产的亚临界水提取山楂中熊果酸和齐墩果酸的方法。

本发明提出的一种利用亚临界水同时提取山楂中熊果酸和齐墩果酸的方法，具体包括以下步骤：

（1）将山楂干洗净、烘干、碾碎，过20～80目筛，得到山楂粉末。

（2）将步骤（1）所得的山楂粉末装入亚临界水提取装置中，亚临界水与山楂末的液固比为10～45mL/g，提取压力为0.5～2.5MPa，提取温度为100～160℃，提取时间为10～50min，重复抽提1～3次，得到混合液A。

所述的亚临界水提取装置为TGYF-A型不锈钢高压提取器。

（3）将混合液A，放入离心机的离心管中，在转速3000～5000r/min下离心5～15min后，取下离心管，得到上清液A和沉淀物A。

（4）将沉淀物A放入试验瓶中，将无水乙醇与沉淀物A以固液比为15～45mL/g的比例混合，将试验瓶放入振荡器中，在震动频率1000～4000Hz下震动5～15min后，取下试验瓶，得到混合液B。

（5）将步骤（4）所得的混合液B，放入离心机的离心管中，在转速3000～5000r/min下离心5～15min后，取下离心管，得到上清液B和沉淀物B。

（6）采用旋转蒸发将上清液B浓缩，得到沉淀物C，然后用3～6倍体积的70%～100%（体积分数）的乙醇溶解，调pH值为7～10，过滤后得到上清液C。

（7）将步骤（6）所得上清液C中加入3%～10%的活性炭，回流20～60min，过滤后得到上清液D。

（8）将步骤（7）所得上清液D，调pH值为4～7，采用旋转蒸发将上清液D浓缩，在4～10℃下静置2～10h，过滤后得到熊果酸和齐墩果酸粗品。

（9）将步骤（8）所得粗品用2～4倍体积的无水乙醇溶解，上200～300目的硅胶柱层析，用石油醚-丙酮以4∶1～6∶1的体积比做为洗脱液洗脱，合并熊果酸和齐墩果酸的洗脱液，用旋转蒸发将洗脱液浓缩至干，得到熊果酸和齐墩果酸产品。

本发明提出的一种利用亚临界水同时提取山楂中熊果酸和齐墩果酸的方法，得到的产品中熊果酸收率2.53～3.05mg/g，齐墩果酸收率0.71～0.88mg/g。

本发明的优点如下：

（1）本发明提出的一种利用亚临界水同时提取山楂中熊果酸和齐墩果酸的方法，采用亚临界水提取山楂中熊果酸和齐墩果酸，提取率明显高于传统的热水浸提法，并且提取时间短，提取效率高。

（2）本发明提出的一种利用亚临界水同时提取山楂中熊果酸和齐墩果酸的方法，该工艺流程简单，生产周期短，绿色无污染，且设备要求低，易实现工业应用。

附图说明

图1：本发明提出的一种利用亚临界水同时提取山楂中熊果酸和齐墩果酸的方法的工艺流程图。

具体实施方式

下面将结合附图和实施例对本发明做进一步的详细说明。

本发明提出的一种利用亚临界水提取山楂中熊果酸的方法，如图1所示，具体包括以下步骤：

所述的亚临界水提取装置为TGYF-A型不锈钢高压提取器。

实施例1：

本发明提出的一种利用亚临界水提取山楂中熊果酸的方法，具体包括以下步骤：

（1）将山楂干洗净、烘干、碾碎，过60目筛，得到山楂粉末。

（2）将步骤（1）所得的山楂粉末装入亚临界水提取装置中，亚临界水与山楂末的液固比为20mL/g，提取压力为1.5MPa，提取温度为130℃，提取时间为30min，重复抽提1次，得到混合液A。

所述的亚临界水提取装置为TGYF-A型不锈钢高压提取器。

（3）将混合液A，放入离心机的离心管中，在转速4000r/min下离心10min后，取下离心管，得到上清液A和沉淀物A。

（4）将沉淀物A放入试验瓶中，将无水乙醇与沉淀物A以固液比为15mL/g的比例混合，将试验瓶放入振荡器中，在震动频率3000HZ下震动5min后，取下试验瓶，得到混合液B。

（5）将步骤（4）所得的混合液B，放入离心机的离心管中，在转速4000r/min下离心5min后，取下离心管，得到上清液B和沉淀物B。

（6）采用旋转蒸发将上清液B浓缩，得到沉淀物C，然后用3倍体积的95%（体积分数）的乙醇溶解，调pH值为9，过滤后得到上清液C。

（7）将步骤（6）所得上清液C中加入6%的活性炭，回流40min，过滤后得到上清液D。

（8）将步骤（7）所得上清液D，调pH值为6，采用旋转蒸发将上清液D浓缩，在4℃下静置5h，过滤后得到熊果酸和齐墩果酸粗品。

（9）将步骤（8）所得粗品用3倍体积的无水乙醇溶解，上200目的硅胶柱层析，用石油醚-丙酮以5∶1的体积比做为洗脱液洗脱，合并熊果酸和齐墩果酸的洗脱液，用旋转蒸发将洗脱液浓缩至干，得到熊果酸和齐墩果酸产品。

本发明提出的一种利用亚临界水同时提取山楂中熊果酸和齐墩果酸的方法，得到的产品中熊果酸收率3.05mg/g，齐墩果酸收率0.88mg/g。

实施例2：

（2）将步骤（1）所得的山楂粉末装入亚临界水提取装置中，亚临界水与山楂末的液固比为25mL/g，提取压力为2MPa，提取温度为130℃，提取时间为30min，重复抽提3次，得到混合液A。

所述的亚临界水提取装置为TGYF-A型不锈钢高压提取器。

（3）将混合液A，放入离心机的离心管中，在转速4000r/min下离心5min后，取下离心管，得到上清液A和沉淀物A。

（6）采用旋转蒸发将上清液B浓缩，得到沉淀物C，然后用5倍体积的85%（体积分数）的乙醇溶解，调pH值为8，过滤后得到上清液C。

（7）将步骤（6）所得上清液C中加入4%的活性炭，回流60min，过滤后得到上清液D。

（8）将步骤（7）所得上清液D，调pH值为5，采用旋转蒸发将上清液D浓缩，在10℃下静置10h，过滤后得到熊果酸和齐墩果酸粗品。

（9）将步骤（8）所得粗品用2倍体积的无水乙醇溶解，上300目的硅胶柱层析，用石油醚-丙酮以4∶1的体积比做为洗脱液洗脱，合并熊果酸和齐墩果酸的洗脱液，用旋转蒸发将洗脱液浓缩至干，得到熊果酸和齐墩果酸产品。

本发明提出的一种利用亚临界水同时提取山楂中熊果酸和齐墩果酸的方法，得到的产品中熊果酸收率2.79mg/g，齐墩果酸收率0.71mg/g。

实施例3：

（1）将山楂干洗净、烘干、碾碎，过40目筛，得到山楂粉末。

（2）将步骤（1）所得的山楂粉末装入亚临界水提取装置中，亚临界水与山楂末的液固比为30mL/g，提取压力为1.2MPa，提取温度为140℃，提取时间为30min，重复抽提2次，得到混合液A。

所述的亚临界水提取装置为TGYF-A型不锈钢高压提取器。

（3）将混合液A，放入离心机的离心管中，在转速3000r/min下离心8min后，取下离心管，得到上清液A和沉淀物A。

（4）将沉淀物A放入试验瓶中，将无水乙醇与沉淀物A以固液比为20mL/g的比例混合，将试验瓶放入振荡器中，在震动频率3000HZ下震动5min后，取下试验瓶，得到混合液B。

（5）将步骤（4）所得的混合液B，放入离心机的离心管中，在转速3000r/min下离心5min后，取下离心管，得到上清液B和沉淀物B。

（6）采用旋转蒸发将上清液B浓缩，得到沉淀物C，然后用4倍体积的100%（体积分数）的乙醇溶解，调pH值为10，过滤后得到上清液C。

（7）将步骤（6）所得上清液C中加入8%的活性炭，回流20min，过滤后得到上清液D。

（8）将步骤（7）所得上清液D，调pH值为4，采用旋转蒸发将上清液D浓缩，在7℃下静置7h，过滤后得到熊果酸和齐墩果酸粗品。

（9）将步骤（8）所得粗品用4倍体积的无水乙醇溶解，上200目的硅胶柱层析，用石油醚-丙酮以6∶1的体积比做为洗脱液洗脱，合并熊果酸和齐墩果酸的洗脱液，用旋转蒸发将洗脱液浓缩至干，得到熊果酸和齐墩果酸产品。

本发明提出的一种利用亚临界水同时提取山楂中熊果酸和齐墩果酸的方法，得到的产品中熊果酸收率2.81mg/g，齐墩果酸收率0.79mg/g。

Claims

1.一种利用亚临界水同时提取山楂中熊果酸和齐墩果酸的方法，其特征在于该方法具体包括以下步骤：

（1）将山楂干洗净、烘干、碾碎，过20～80目筛，得到山楂粉末；

（2）将步骤（1）所得的山楂粉末装入亚临界水提取装置中，亚临界水与山楂末的液固比为10～45mL/g，提取压力为0.5～2.5MPa，提取温度为100～160℃，提取时间为10～50min，重复抽提1～3次，得到混合液A；

（3）将混合液A，放入离心机的离心管中，在转速3000～5000r/min下离心5～15min后，取下离心管，得到上清液A和沉淀物A；

（4）将沉淀物A放入试验瓶中，将无水乙醇与沉淀物A以固液比为15～45mL/g的比例混合，将试验瓶放入振荡器中，在震动频率1000～4000Hz下震动5～15min后，取下试验瓶，得到混合液B；

（5）将步骤（4）所得的混合液B，放入离心机的离心管中，在转速3000～5000r/min下离心5～15min后，取下离心管，得到上清液B和沉淀物B；

（6）采用旋转蒸发将上清液B浓缩，得到沉淀物C，然后用3～6倍体积的70%～100%（体积分数）的乙醇溶解，调pH值为7～10，过滤后得到上清液C；

（7）将步骤（6）所得上清液C中加入3%～10%的活性炭，回流20～60min，过滤后得到上清液D；

（8）将步骤（7）所得上清液D，调pH值为4～7，采用旋转蒸发将上清液D浓缩，在4～10℃下静置2～10h，过滤后得到熊果酸和齐墩果酸粗品；

2.根据权利要求1所述的一种利用亚临界水同时提取山楂中熊果酸和齐墩果酸的方法，其特征在于所述的亚临界水提取装置为TGYF-A型不锈钢高压提取器。

3.根据权利要求1所述的一种利用亚临界水同时提取山楂中熊果酸和齐墩果酸的方法，其特征在于得到的产品中熊果酸收率2.53～3.05mg/g，齐墩果酸收率0.71～0.88mg/g。