CN105837668A - 一种糖基化水飞蓟分离蛋白的制备方法 - Google Patents
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Abstract
一种糖基化水飞蓟分离蛋白的制备方法,涉及一种蛋白的制备方法,所述方法包括以下过程:取水飞蓟分离蛋白,溶于去离子水,使其质量浓度为1.2g/100mL;用0.1mol/L NaOH调(1)的pH值至11,然后加热到50℃,磁力搅拌30min,于室温下冷却;按配比加入糖,搅拌30min后用0.1mol/L HCl溶液调体系pH值,直至产生沉淀;再磁力搅拌30min后,离心,去上清的沉淀进行冷冻干燥,得到水飞蓟蛋白与糖混合物冻干粉;将冻干粉置于干燥器内,干燥器内装有饱和KI溶液,反应后取样,即为水飞蓟蛋白糖基化复合物。本发明具有操作简单、反应条件温和,蛋白质与糖接枝效果明显等特点。该发明可以增加水飞蓟蛋白质的附加值、提高资源综合利用率、减少浪费。
Description
技术领域
本发明涉及一种蛋白质制备方法,特别是涉及一种糖基化水飞蓟分离蛋白的制备方法。
背景技术
水飞蓟,Silybum marianum(L.)Gaertn,别名水飞雉、奶蓟,为菊科一至二年生草本植物。水飞蓟蛋白是一种优质植物蛋白,不仅蛋白质含量高且氨基酸种类齐全,具有较高的营养价值,其效价介于大豆蛋白和小麦蛋白之间。研究中发现,水飞蓟蛋白质的部分功能性质表现不是特别优秀,如溶解性、起泡性等。基于此点,拟对水飞蓟蛋白质进行改性,以期改善其部分功能性质,使其更好地应用与推广。
糖基化改性蛋白质是基于美拉德反应,将碳水化合物以共价键与蛋白质分子上的a-或ɛ-氨基相连接而形成糖基化蛋白的化学反应,属于化学改性范畴,但反应中不需添加任何化学试剂,仅加热反应就能自发进行,属于“绿色加工工艺”。蛋白质-糖的接枝物对于外部条件具有较高的稳定性,与蛋白质-糖非共价复合物相比,接枝物不受热或pH值的变化而破坏。因糖链的引入,整个分子的功能性质得到显著提高。
本发明主要是对水飞蓟分离蛋白进行糖基化改性,通过测定接枝度和褐变指数,研究物料比、反应时间、反应温度对糖基化改性的影响,进而用响应面法优化制备糖基化水飞蓟分离蛋白的工艺。
发明内容
本发明的目的在于提供一种糖基化水飞蓟分离蛋白的制备方法,该方法通过单因素及响应面实验,优化糖基化水飞蓟分离蛋白的制备工艺;该制备方法为干法糖基化制备工艺,操作简单、反应条件温和,蛋白质与糖接枝效果明显。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的:
一种糖基化水飞蓟分离蛋白的制备方法,所述方法包括以下过程:
(1)取水飞蓟分离蛋白,溶于去离子水,使其质量浓度为1.2g/100mL;
(2)用0.1mol/L NaOH调(1)的pH值至11,然后加热到50℃,磁力搅拌30min,于室温下冷却;
(3)按配比加入糖,搅拌30min后用0.1mol/L HCl溶液调体系pH值,直至产生沉淀;
(4)再磁力搅拌30min后,离心,去上清的沉淀进行冷冻干燥,得到水飞蓟蛋白与糖混合物冻干粉;
(5)将冻干粉置于干燥器内,干燥器内装有饱和KI溶液,反应后取样,即为水飞蓟蛋白糖基化复合物。
所述的一种糖基化水飞蓟分离蛋白的制备方法,所述步骤(1)中的水飞蓟分离蛋白为纯化后产品。
所述的一种糖基化水飞蓟分离蛋白的制备方法,所述步骤(3)中糖为单糖、双糖和多糖中的一种或一种以上。
所述的一种糖基化水飞蓟分离蛋白的制备方法,所述单糖为葡萄糖、果糖或半乳糖;双糖为乳糖;多糖为葡聚糖、卡拉胶和可溶性淀粉中的一种或一种以上。
所述的一种糖基化水飞蓟分离蛋白的制备方法,其特征在于,步骤(4)中的离心条件为低温(4℃)冷冻离心4000r/min,离心20min。
所述的一种糖基化水飞蓟分离蛋白的制备方法,提取过程中浸泡原料用水、缓冲液的配置用水均为去离子水。
本发明的优点与效果是:
1.本发明对水飞蓟分离蛋白进行糖基化改性,以接枝度和褐变指数为指标,研究物料比、反应时间、反应温度等因素对糖基化改性的影响,进而用响应面法优化制备糖基化水飞蓟分离蛋白的工艺。
2.本发明方法,具有操作简单、反应条件温和,蛋白质与糖接枝效果明显等特点。该发明可以增加水飞蓟蛋白质的附加值、提高资源综合利用率、减少浪费。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进行详细说明。
一种糖基化水飞蓟分离蛋白的制备方法,采用以下步骤制备 :
(1)取水飞蓟蛋白,溶于去离子水,使其质量浓度为1.2g/100mL。
(2)用0.1mol/L NaOH调(1)的pH值至11,然后加热到50℃,磁力搅拌30min,于室温下冷却。
(3)按配比加入糖,搅拌30min后用0.1mol/L HCl溶液调体系pH值,直至产生沉淀。
(4)再磁力搅拌30min后,离心,去上清的沉淀进行冷冻干燥,得到水飞蓟蛋白与糖混合物冻干粉。
(5)将冻干粉置于干燥器内(装有饱和KI溶液),反应一段时间后取样,即为水飞蓟蛋白糖基化复合物。
步骤(1)中所述的水飞蓟分离蛋白为纯化后产品。
步骤(3)中所述的糖为单糖、双糖和多糖中的一种或一种以上。
单糖为葡萄糖、果糖或半乳糖;所述双糖为乳糖;所述多糖为葡聚糖、卡拉胶和可溶性淀粉中的一种或一种以上。
步骤(4)中所述的离心条件为低温(4℃)冷冻离心4000r/min,离心20min。
提取过程中浸泡原料用水、缓冲液的配置用水均为去离子水。
本发明可以用于按上述方法制备糖基化水飞蓟分离蛋白,也可用于提供上述糖基化水飞蓟蛋白的应用领域。
以下实施例中所用糖类物质为葡聚糖。
实施例1
将温度定为60℃、物料质量比(水飞蓟蛋白/葡聚糖)为1:3、反应时间为30h的条件下,按照权利要求1-7中所述方法制备糖基化水飞蓟分离蛋白。所得产品外观色泽较好,复合物接枝度最高。
实施例2
结合单因素试验,通过响应面分析,得到了糖基化水飞蓟蛋白优化制备条件为:物料质量比(水飞蓟蛋白/葡聚糖)为1:3.02、反应时间42.98h、反应温度59.82℃,在此条件下所得的糖基化复合物接枝度为42.55%,褐变指数为0.931。
Claims (6)
1.一种糖基化水飞蓟分离蛋白的制备方法,其特征在于,所述方法包括以下过程:
(1)取水飞蓟分离蛋白,溶于去离子水,使其质量浓度为1.2g/100mL;
(2)用0.1mol/L NaOH调(1)的pH值至11,然后加热到50℃,磁力搅拌30min,于室温下冷却;
(3)按配比加入糖,搅拌30min后用0.1mol/L HCl溶液调体系pH值,直至产生沉淀;
(4)再磁力搅拌30min后,离心,去上清的沉淀进行冷冻干燥,得到水飞蓟蛋白与糖混合物冻干粉;
(5)将冻干粉置于干燥器内,干燥器内装有饱和KI溶液,反应后取样,即为水飞蓟蛋白糖基化复合物。
2.根据权利要求1所述的一种糖基化水飞蓟分离蛋白的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)中的水飞蓟分离蛋白为纯化后产品。
3.根据权利要求1所述的一种糖基化水飞蓟分离蛋白的制备方法,其特征在于,所述步骤(3)中糖为单糖、双糖和多糖中的一种或一种以上。
4.根据权利要求1所述的一种糖基化水飞蓟分离蛋白的制备方法,其特征在于,所述单糖为葡萄糖、果糖或半乳糖;双糖为乳糖;多糖为葡聚糖、卡拉胶和可溶性淀粉中的一种或一种以上。
5.根据权利要求1所述的一种糖基化水飞蓟分离蛋白的制备方法,其特征在于,步骤(4)中的离心条件为低温(4℃)冷冻离心4000r/min,离心20min。
6.根据权利要求1所述的一种糖基化水飞蓟分离蛋白的制备方法,其特征在于,提取过程中浸泡原料用水、缓冲液的配置用水均为去离子水。
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