CN104560948A - 核酸扩增方法、核酸提取用设备、核酸扩增反应用筒以及核酸扩增反应用试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本发明提供核酸扩增方法、核酸提取用设备、核酸扩增反应用筒以及核酸扩增反应用试剂盒。该核酸扩增方法包括在含有核酸的试样中混合含有促溶物质的吸附液和微粒，使上述核酸吸附于上述微粒的吸附工序；用第1清洗液清洗吸附有上述核酸的微粒的清洗工序；使吸附于上述微粒的核酸溶出到溶出液中的溶出工序；以及对上述溶出液中的核酸进行核酸扩增反应的核酸扩增工序，其中，上述吸附液含有醇，第1清洗液为酸性，该核酸提取用设备、核酸扩增反应用筒和核酸扩增反应用试剂盒能够实施该方法。

Description

核酸扩增方法、核酸提取用设备、核酸扩增反应用筒以及核酸扩增反应用试剂盒
技术领域
本发明涉及核酸扩增方法、核酸提取用设备、核酸扩增反应用筒以及核酸扩增反应用试剂盒。 
背景技术
近年来，由于基因利用技术的发展，基因诊断、基因治疗等利用基因的医疗备受注目。另外，在农业和畜牧业领域也开发了很多将基因用于鉴别品种、改良品种的方法。作为用于利用基因的技术，PCR(Polymerase Chain Reaction：聚合酶链式反应)等技术广泛普及。如今，PCR在生物体物质的信息解析中成为必不可少的技术。PCR是通过对含有作为扩增对象的核酸(靶核酸)和试剂的溶液(反应液)实施热循环来扩增靶核酸的方法。作为PCR的热循环，普遍的是以2个梯度或3个梯度的温度实施热循环的方法。 
另一方面，关于医疗领域中以流行性感冒为代表的感染症的诊断，现状是使用免疫层析试剂盒等简易检查试剂盒的诊断成为主流。但是这样的简易检查中，有时精度不充分，希望将能够期待更高的检查精度的PCR应用于感染症的诊断。另外，医疗机构的普通门诊患者等由于诊察时间受限的关系，所以能够花费于检查的时间被限制在短时间内。因此，例如流行性感冒的检查的现状是牺牲检查的精度，通过简易的免疫层析试剂盒等的检查而以短时间进行。 
鉴于上述情况，医疗领域中，为了实现利用能够期待更高精度的PCR进行检查，必须缩短反应所需时间。作为用于以短时间进行PCR反应的装置，例如在专利文献1中，公开了一种生物体试样反应装置，其通过使填充有反应液和不与反应液混合且比重小于反应液的液体的生物体试样反应用芯片在水平方向的旋转轴的周围旋转，从而使反应液移动而实施热循环(专利文献1)。另外，作为PCR的一个方法，公开 了使用磁珠的方法(专利文献2)、和通过使用磁珠作为液滴的移动机构并使在基板上的温度变化区域的液滴移动而进行PCR热循环的方法(专利文献3)等。 
专利文献1：日本特开2009-136250号公报 
专利文献2：日本特开2009-207459号公报 
专利文献3：日本特开2008-012490号公报 
发明内容
本发明的目的在于提供核酸扩增方法、核酸提取用设备、核酸扩增反应用筒以及核酸扩增反应用试剂盒。 
本发明的一个实施方式涉及的核酸扩增方法包括在含有核酸的试样中混合含有促溶物质的吸附液和微粒，使上述核酸吸附于上述微粒的吸附工序，用第1清洗液清洗吸附有上述核酸的微粒的清洗工序，使吸附于上述微粒的核酸溶出到溶出液中的溶出工序，以及对上述溶出液中的核酸进行核酸扩增反应的核酸扩增工序，上述吸附液含有醇，第1清洗液为酸性。 
本发明的另一个实施方式涉及的核酸扩增方法包括在含有核酸的试样中混合含有促溶物质的吸附液和微粒，使上述核酸吸附于上述微粒的吸附工序，用第2清洗液清洗吸附有上述核酸的微粒的清洗工序，用第1清洗液清洗用上述第2清洗液清洗后的吸附有上述核酸的微粒的清洗工序，使吸附于上述微粒的核酸溶出到溶出液中的溶出工序以及将上述核酸扩增的核酸扩增工序，其中，上述第2清洗液含有醇或乙腈，第1清洗液为酸性。 
在上述任一种的核酸扩增方法中，上述醇可以为甲醇或乙醇。另外，上述吸附液中的醇浓度可以为40％～50％。另外，上述核酸可以是核糖核酸(RNA)，上述核酸扩增方法可以包括将溶出到上述溶出液中的上述核糖核酸逆转录并合成cDNA的逆转录工序，核酸扩增工序中扩增的核酸可以是经合成的上述cDNA。另外，核酸扩增工序中的反应液可以含有50％以上的上述溶出液，特别是核酸扩增工序中的反应液可以是上 述溶出液。 
本发明的一个实施方式涉及的核酸提取用设备具有管和容器，所述管具有长边方向，内部依次具备由油构成的第1塞子、由与油发生相分离且清洗结合有核酸的微粒的第1清洗液构成的第2塞子、由油构成的第3塞子、由与油发生相分离且从结合有上述核酸的微粒溶出上述核酸的溶出液构成的第4塞子以及由油构成的第5塞子，上述容器能够与上述管的配置有上述第1塞子的一侧连接并连通，且包含使上述核酸吸附于上述微粒的吸附液，其中，上述吸附液含有醇，上述第1清洗液为酸性。 
本发明的另一个实施方式涉及的核酸提取用设备具有管和储液部，所述管具有长边方向，内部依次具备由油构成的第1塞子、由与油发生相分离且清洗结合有核酸的微粒的第1清洗液构成的第2塞子、由油构成的第3塞子、由与油发生相分离且从结合有上述核酸的微粒溶出上述核酸的溶出液构成的第4塞子以及由油构成的第5塞子，所述储液部与上述管的配置有上述第1塞子的一侧连通，且包含使上述核酸吸附于上述微粒的吸附液，其中，上述吸附液含有醇，上述第1清洗液为酸性。 
在上述任一个的核酸提取用设备中，上述醇可以为甲醇或乙醇。另外，上述吸附液中的醇浓度可以为40％～50％。 
本发明的又一个实施方式涉及的核酸提取用设备具有管，该管具有长边方向，内部依次具备由油构成的第1塞子、由与油发生相分离且清洗结合有核酸的微粒的第2清洗液构成的第6塞子、由油构成的第7塞子、由与油发生相分离且清洗用上述第2清洗液清洗过的结合有上述核酸的微粒的第1清洗液构成的第2塞子、由油构成的第3塞子、由与油发生相分离且从结合有上述核酸的微粒溶出上述核酸的溶出液构成的第4塞子以及由油构成的第5塞子，其中，上述第2清洗液含有醇或乙腈，上述第1清洗液为酸性。在此，上述核酸提取用设备可以具有能够与上述管的配置有上述第1塞子的一侧连接及连通，且包含使上述核酸吸附于上述微粒的吸附液的容器，上述吸附液可以含有醇，或者，可以具有与上述管的配置有上述第1塞子的一侧连通，且包含使上述核酸吸附于上述微粒的吸附液的储液部，上述吸附液可以含有醇。应予说明，上述第2清洗液所含的醇可以为甲醇或乙醇，其浓度可以为 70％～100％。 
本发明的一个实施方式涉及的核酸扩增反应用筒具备上述任一个的核酸提取用设备和与上述管的配置有上述第5塞子的一侧连通，且包含油的核酸扩增反应用容器。核酸扩增反应中的反应液可以含有50％以上的溶出有上述核酸的溶出液，核酸扩增反应中的反应液可以是上述溶出液。另外，可以具备与上述管的配置有上述第1塞子的一侧连通且向上述管导入上述微粒的罐。 
本发明的一个实施方式涉及的核酸扩增反应用试剂盒具备核酸提取用设备和向上述管导入上述微粒的罐，所述核酸提取用设备具有管，该管具有长边方向，内部依次具备由油构成的第1塞子、由与油发生相分离且清洗结合有核酸的微粒的第2清洗液构成的第6塞子、由油构成的第7塞子、由与油发生相分离且清洗用上述第2清洗液清洗过的结合有上述核酸的微粒的第1清洗液构成的第2塞子、由油构成的第3塞子、由与油发生相分离且从结合有上述核酸的微粒溶出上述核酸的溶出液构成的第4塞子以及由油构成的第5塞子，其中，上述第2清洗液含有醇或乙腈，上述第1清洗液的pH为酸性。 
附图说明
图1是示意性地表示一个实施方式涉及的核酸提取用设备的主要部件的图。 
图2是示意性地表示一个实施方式涉及的核酸提取用设备的主要部件的图。 
图3是示意性地表示一个实施方式涉及的核酸提取用设备的主要部件的图。 
图4A是示意性地表示一个实施方式涉及的核酸提取用设备的图。 
图4B是示意性地表示一个实施方式涉及的核酸提取用设备的图。 
图5是示意性地表示一个实施方式涉及的核酸提取用设备的主要部件的图。 
图6是示意性地表示一个实施方式涉及的核酸提取用盒的核酸扩增反应用容器的图。 
图7A是示意性地表示一个实施方式涉及的核酸提取用试剂盒的一个例子的图。 
图7B是示意性地表示一个实施方式涉及的核酸提取用试剂盒的一个例子的图。 
图8是示意性地表示一个实施方式涉及的核酸提取用盒的一个例子的图。 
图9是用于说明一个实施方式涉及的核酸提取方法的变型例的示意图。 
图10是表示一个实施方式涉及的核酸提取用装置的一个例子的立体图。 
图11是表示一个实施方式涉及的核酸提取用装置的一个例子的立体图。 
图12是表示分批处理的实验例1和2的一个结果的图。 
图13是表示使用核酸提取用设备的实验例3和4的一个结果的图。 
图14是表示使用核酸提取用设备的一个实施例的结果的图。 
具体实施方式
以下对本发明的几个实施方式进行说明。以下说明的实施方式说明本发明的例子。本发明完全不限于以下的实施方式，还包括在不变更本发明主旨的范围内实施的各种变型方式。应予说明，以下说明的构成不一定全部是本发明的必需构成要素。 
1.核酸提取用设备 
本实施方式的核酸提取用设备1000具有管部100、第1塞子10、第2塞子20、第3塞子30、第4塞子40以及第5塞子50。 
图1是示意性地表示本实施方式的核酸提取用设备1000的主要部件的图。 
1.1.管部 
管部100构成核酸提取用设备1000的主要部件。核酸提取用设备1000除包含管部100之外，还可以包含各种构成。虽未图示，但核酸提取用设备1000例如可以包含与管部100连接的配管、容器、栓、接头、泵、控制装置等。 
管部100是内部具有空洞且能够使液体在该空洞内沿长边方向流通的筒状的部分。管部100具有长边方向，可以弯曲。就管部100的内部的空洞而言，只要收容于内部的液体能够在管部100内维持塞子形状，对其大小、形状均没有特别限定。另外，管部100的内部的空洞的大小、与长边方向垂直的截面的形状可以沿管部100的长边方向变化。关于液体是否能够在管部100内维持塞子形状，取决于管部100的材质、液体种类等条件，因此管部100的与长边方向垂直的截面的形状在能够将液体在管部100内维持塞子形状的范围内被适当地设计。 
管部100的外形的与长边方向垂直的截面的形状也没有限定。此外，管部100的壁厚(从内部的空洞的侧面到外部的表面的长度)也没有特别限定。管部100的内部的空洞的与长边方向垂直的截面为圆形时，管部100的内径(内部的空洞的与长边方向垂直的截面中的圆的直径)例如可以为0.5mm～3mm。如果管部100的内径为该范围，则在管部100的材质、液体种类广泛的范围内容易形成液体的塞子，所以优选。 
管部100的材质没有特别限定，例如，可以是玻璃、高分子、金属等。应予说明，如果对于管部100的材质选择玻璃、高分子等在可见光中具有透明性的材质，则能够从管部100的外部观察内部(空洞内)，所以优选。另外，如果对于管部100的材质选择透过磁力的物质、非磁性体，则使磁性粒子通过管部100时等，通过从管部100的外部施与磁力而使该通过的进行变得容易，所以更优选。 
在管部100的内部依次具备由第1油构成的第1塞子10、由与油混合时发生相分离且清洗结合有核酸的微粒的第1清洗液构成的第2塞子 20、由不与第1清洗液混合的第2油构成的第3塞子30、由与油混合时发生相分离且从结合有核酸的微粒溶出核酸的溶出液构成的第4塞子40以及由不与溶出液混合的第3油构成的第5塞子50。 
1.2.第1塞子、第3塞子和第5塞子 
第1塞子10、第3塞子30和第5塞子50均由油构成。第1塞子10、第3塞子30和第5塞子50的油可以是相互不同种类的油，也可以是相同种类的油。作为油，例如，可举出选自二甲基硅油等有机硅系油、石蜡系油和矿物油以及它们的混合物中的一种。另外，第1塞子10、第2塞子20、第3塞子30、第4塞子40和第5塞子50的形成相邻塞子的液体以相互不发生混合的方式选择。 
在第1塞子10与第3塞子30之间配置第2塞子20。在第1塞子10的与第2塞子20相反侧的区域可以配置其它液体的塞子。优选第1塞子10中没有气泡、其它液体，但只要吸附有核酸的粒子等能够通过第1塞子10，也可以存在气泡、其它液体。另外，优选在第1塞子10与第2塞子20之间没有气泡、其它液体，但只要吸附有核酸的粒子等能够从第1塞子10向第2塞子20通过，也可以存在气泡、其它液体。同样，优选在第2塞子20与第3塞子30之间没有气泡、其它液体，但只要吸附有核酸的粒子等能够从第2塞子20向第3塞子30通过，也可以存在气泡、其它液体。 
在第3塞子30与第5塞子50之间配置第4塞子40。在第5塞子50的与第4塞子40相反侧的区域可以配置其它液体的塞子。优选第3塞子30中没有气泡、其它液体，但只要吸附有核酸的粒子等能够通过第3塞子30，也可以存在气泡、其它液体。另外，优选在第3塞子30与第4塞子40之间没有气泡、其它液体，但只要吸附有核酸的粒子等能够从第3塞子30向第4塞子40通过，也可以存在气泡、其它液体。同样，优选在第4塞子40与第5塞子50之间没有气泡、其它液体，但只要吸附有核酸的粒子等能够从第4塞子40向第5塞子50通过，也可以存在气泡、其它液体。此外，优选第5塞子50中没有气泡、其它液体。 
第1塞子10、第3塞子30和第5塞子50的在管部100的长边方向 的长度只要是能够形成塞子的范围，均没有特别限定。作为第1塞子10、第3塞子30和第5塞子50的在管部100的长边方向的具体长度，可以为1mm～50mm，但为了不使粒子等的移动距离过大，优选为1mm～30mm，进一步优选为5mm～20mm。其中，如果使第3塞子30的在管部100的长边方向的长度长，则采用从管部100的第5塞子50侧的端部排出第4塞子40的方式时，会难以排出第2塞子20。这种情况下，作为第3塞子30的具体长度，可以为10mm～50mm。 
第1塞子10和第5塞子50具有即使管部100的至少一端开放，也可防止第1清洗液(第2塞子20)和溶出液(第4塞子40)与蒸发等的外部空气的物质交换或来自外部的污染的功能。因此，即使管部100的至少一端被开放在外部空气中，也能够将第1清洗液、溶出液的体积保持恒定，能够抑制各液体的浓度的变动、污染。由此，能够提高核酸提取中的核酸、各种药剂的浓度的精度。 
另外，第3塞子30具有抑制第1清洗液(第2塞子20)和溶出液(第4塞子40)相互混合的功能。另外通过使第3塞子30成为更高粘度的油，从而使粒子等在与第1清洗液(第2塞子20)的界面移动时，能够提高油所带来的“洗掉效果”。由此，使粒子等从第2塞子20的第1清洗液的塞子移动至油的第3塞子30时，能够使附着于粒子等的水溶性成分更难以被带入第3塞子30(油)中。 
1.3.第2塞子 
第2塞子20被配置在管部100内的第1塞子10与第3塞子30之间的位置。第2塞子20由清洗结合有核酸的微粒的第1清洗液构成。是与构成第1塞子10的油和构成第3塞子30的油均不混合的液体。 
第1清洗液是酸性溶液。特别优选为酸性水溶液，含有的酸没有特别限定，但优选柠檬酸、乙酸、甘氨酸盐酸盐等水溶液。可以含有EDTA(乙二胺四乙酸)、表面活性剂(Triton、Tween、SDS等)等，但更优选实质上不含有促溶物质的溶液。pH只要为酸性就没有特别限定，但关于下限，优选为1以上，更优选为2以上，进一步优选为3以上，最优选为4以上，关于上限，优选为6以下，进一步优选为5以下，最优选为4以下。通过采用这样的第1清洗液，从而即使在第1塞子的上游 侧，核酸、吸附有核酸的粒子与含有醇的溶液接触，即用后述的含有醇的吸附液提取核酸的情况下或在用含有醇的清洗液清洗吸附有核酸的粒子的情况下，也能够利用第1清洗液高效率地清洗吸附有核酸的粒子等，且能够防止醇被带入下游，即所谓醇被遗留。 
第2塞子20的体积没有特别限定，可以以吸附有核酸的粒子等的量等为指标适当地设定。例如，粒子等的体积为0.5μL时，第2塞子20的体积只要为10μL以上便足够，优选为20μL～50μL，进一步优选为20μL～30μL。只要第2塞子20的体积为该范围，则粒子等的体积为0.5μL时，能够充分地进行粒子等的清洗。应予说明，粒子等的清洗时，优选第2塞子20的体积更大，但可以考虑管部100的长度、粗度、依赖于此的第2塞子20在管部100的长边方向的长度等而适当地设定。 
第2塞子20可以被油的塞子分割而由多个塞子构成。第2塞子20由被油塞子分割的多个塞子构成时，形成多个第1清洗液的塞子。因此，第2塞子20被油塞子分割时，若清洗的对象为水溶性物质，则利用被分割的第1清洗液到达的水溶性物质的浓度比利用未被分割的同体积的第1清洗液到达的水溶性物质的浓度小，所以优选。第2塞子20被分割的数目任意，但若清洗的对象为水溶性物质，则例如以等体积分割成2份时，计算上能够使水溶性物质的浓度降低到未分割时的1/4的浓度。第2塞子20被分割的数目例如可以考虑管部100的长度、清洗的对象等被适当地设定。 
1.4.第4塞子 
第4塞子40被配置在管部100内的第3塞子30与第5塞子50之间的位置。第4塞子40由从结合有核酸的微粒溶出核酸的溶出液构成。 
作为溶出液，例如，可以使用灭菌水、蒸馏水、离子交换水等精制过的水或者缓冲液。只要溶出液为水或水溶液，则通过将吸附有核酸的粒子等浸渍于溶出液，就能够溶出吸附于粒子等的核酸。溶出液是与构成第3塞子30的油和构成第5塞子50的油均不混合的液体。 
溶出液为了进行逆转录反应，可以含有逆转录酶、dNTP和逆转录酶用引物(寡聚核苷酸)，为了进行聚合酶反应，可以进一步含有DNA 聚合酶和DNA聚合酶用引物(寡聚核苷酸)，也可以含有TaqMan探针、分子信标(Molecular Beacon)、循环探针等实时PCR用探针，SYBR绿等嵌入剂用荧光色素。此外，作为反应阻碍防止剂，优选含有BSA(牛血清白蛋白)或明胶。溶剂优选为水，更优选实质上不含有乙醇、异丙醇等有机溶剂和促溶物质。另外，优选含有盐以形成逆转录酶用缓冲液和/或DNA聚合酶用缓冲液。用于形成缓冲液的盐只要不阻碍酶反应，就没有特别限定，优选使用Tris、HEPES、PIPES、磷酸等盐。逆转录酶没有特别限定，例如，可以使用来自禽成髓细胞瘤病毒(AvianMyeloblast Virus)、Ras相关病毒2型(Ras Associated Virus2型)、莫洛尼小鼠白血病病毒(Mouse Molony Murine Leukemia Virus)、人类免疫缺陷病毒1型(Human Immunodefficiency Virus1型)的逆转录酶等，但优选耐热性的酶。DNA聚合酶也没有特别限定，优选耐热性的酶、PCR用酶，例如，有Taq聚合酶、Tfi聚合酶、Tth聚合酶或者它们的改良型等非常多的市售品，但优选进行热启动的DNA聚合酶。 
DNA聚合酶用引物能够针对要检测的DNA容易地决定适当的序列。通常，为了扩增1种DNA，包含5’侧引物和3’侧引物的引物对即可。应予说明，为了扩增多种DNA，通过预先含有用不同的荧光色素标识的多种引物对，也能够对应多重PCR。这种情况下，使TaqMan探针也适当地为多个即可。 
反应液所含的dNTP、盐的浓度成为适合所使用的酶的浓度即可，通常，可以使dNTP为10～1000μM，优选为100～500μM，使Mg2+为1～100mM，优选为5～10mM，使Clˉ为1～2000mM，优选为200～700mM即可，总离子浓度没有特别限定，可以为高于50mM的浓度，优选为高于100mM的浓度，更优选为高于120mM的浓度，进一步优选为高于150mM的浓度，更进一步优选为高于200mM的浓度。上限优选为500mM以下，更优选为300mM以下，进一步优选为200mM以下。引物用寡聚核苷酸分别可使用0.1～10μM，优选使用0.1～1μM。BSA或明胶的浓度为1mg/mL以下时，反应阻碍防止效果小，如果为10mg/mL以上，则可能阻碍逆转录反应或其后的酶反应，因此优选为1～10mg/mL。使用明胶时，其来源可例示牛皮、猪皮、牛骨，没有特别限定。明胶难以溶解时，可以加热使其溶解。 
溶出液塞子40的体积可以将吸附有核酸的粒子等的量、进行核酸扩增反应时的反应液的量等作为指标而适当地设定。例如，粒子等的体积为0.5μL时，溶出液塞子40的体积只要为0.5μL以上便足够，例如，使用原理日本特开2012-115208中被公开的旋转式PCR装置进行核酸扩增反应时，优选向核酸扩增反应容器导入的溶出液塞子40的体积小，优选为5μL以下。即，溶出液塞子40的体积优选为0.5μL～5μL，进一步优选为1μL～3μL。只要溶出液塞子的体积为这些范围，则例如，即使微粒的体积为0.5μL，也能够使核酸从微粒中充分溶出，即使利用旋转式PCR装置进行核酸扩增反应时也能够高速地进行核酸扩增。 
1.5.核酸提取用设备的构成等 
本实施方式的核酸提取用设备具有管部100、第1塞子10、第2塞子20、第3塞子30、第4塞子40以及第5塞子50，但是可以包含附加其它功能的构成。本实施方式的核酸提取用设备可以包含以下说明的构成的组合或各构成的变型方式。 
1.5.1.管部的端部 
图2是示意性地表示作为核酸提取用设备的变型例的一种的核酸提取用设备1010的图。本实施方式的核酸提取用设备可以使例如管部100的第5塞子50侧的端部开放。即，如图2所示，核酸提取用设备1010中，管部100的第5塞子50侧的端部成为开放的状态。根据核酸提取用设备1010，通过从管部100的第1塞子10侧向管部100的内部施加压力，能够依次排出第5塞子50和第4塞子40。由此，使用核酸提取用设备1010，能够将含有靶核酸的溶出液(第4塞子40)容易地分注到用于例如PCR的反应容器等。 
1.5.2.栓 
图3是示意性地表示作为核酸提取用设备的变型例的一种的核酸提取用设备1020的图。本实施方式的核酸提取用设备如图所示，进一步具有例如将管部100的第5塞子50侧的端部密封的可自由拆卸的栓110。栓110可以由例如橡胶、弹性体、高分子等形成。用栓110密封管部100时，栓110可以与第5塞子50接触，或者在第5塞子50与栓 110之间配置空气等气体。另外，栓110是可自由拆卸的，其机构没有特别限定。在图3的例子中，示出了栓110的一部分被插入到管部100的内部而固定的方式，但栓110也可以是帽状的。 
核酸提取用设备1020中，取下栓110时，管部100的第5塞子50侧的端部开放而成为上述图2的核酸提取用设备1010的方式，使用核酸提取用设备1020，能够将含有靶核酸的溶出液(第4塞子40)容易地分注到用于例如PCR的反应容器等。另外，如果为管部100的第5塞子50侧的端部被栓110密封的状态(图3所示的状态)，则可得到抑制各塞子在管部100内的移动的效果，由此，例如，使粒子等在管部100内移动时，能够抑制塞子伴随着粒子等的移动而移动。 
1.5.3.容器 
图4A是示意性地表示作为核酸提取用设备的构成的一个例子的核酸提取用设备1030的图。如图4A例示，核酸提取用设备1030进一步具有可自由拆卸的容器120，其能够使内部与管部100的第1塞子10侧的上游端连通而连接。 
容器120可以形成为独立的部件。容器120能够在内部收容液体。容器120具有能够使液体、固体出入的开口121。另外，在图4A的例子中，容器120的开口121成为使内部与管部100的第1塞子10侧的端部连通地连接的方式。另外，容器120可以具有多个开口121，可以使这种情况下的开口121中的1个形成为使内部与管部100的第1塞子10侧的端部连通地连接的方式。 
容器120的内容积没有特别限定，例如，可以为0.1mL～100mL。容器120的开口121根据需要而可以形成为能够被盖122密封的结构。容器120的材质没有特别限定，可以为高分子、金属等。 
容器120的开口121可以与管部100的第1塞子10侧的端部连接，只要容器120与管部100之间的连接是内容物不漏出的方式就没有特别限定。容器120与管部100连接时，可以使容器120的内部与管部100的内部连通。另外，容器120可以根据需要而从管部100取下。 
像核酸提取用设备1030这样，通过具备容器120，从而能够在容器 120内收容例如粒子等、吸附液和试样，使核酸吸附于粒子等。其后，只要将容器120与管部100的第1塞子10侧的端部连接，就能够成为将该粒子等从管部100的第1塞子10侧容易地导入到管部100内的状态。 
吸附液是指使核酸吸附于作为核酸结合性固相载体的微粒(例如磁性粒子M)的液体。吸附液只要含有促溶物质就没有特别限定，但是出于破坏细胞膜或者使细胞中含有的蛋白质变性的目的，可以含有表面活性剂。作为该表面活性剂，只要是一般被用于从细胞等提取核酸的表面活性剂就没有特别限定，具体而言，可举出Triton-X等Triton系表面活性剂、Tween20等Tween系表面活性剂之类的非离子型表面活性剂，N-月桂酰肌氨酸钠(SDS)等阴离子型表面活性剂，特别优选使非离子型表面活性剂成为0.1～2％的范围而使用。此外，优选吸附液中含有2-巯基乙醇或二硫苏糖醇等还原剂。吸附液可以为缓冲液，优选为pH6～8的中性。考虑这些因素，具体而言，优选含有3～7M的胍盐、0～5％的非离子型表面活性剂、0～0.2mM的EDTA、0～0.2M的还原剂等。 
促溶物质只要是在水溶液中产生促溶离子(离子半径大的1价阴离子)、具有增加疏水性分子的水溶性的作用、有助于核酸对微粒的吸附的物质就没有特别限定。具体而言，可举出硫氰酸胍、盐酸胍、碘化钠、碘化钾、高氯酸钠等，其中，优选蛋白质变性作用强的硫氰酸胍或盐酸胍。这些促溶物质的使用浓度因各物质不同而异，例如，使用硫氰酸胍时，优选以3～5.5M的范围使用，使用盐酸胍时，优选以5M以上使用。 
优选该吸附液含有醇或乙腈。这种情况下，醇等的浓度没有特别限定，下限可以为10％以上、20％以上、30％以上，最优选为40％以上。上限可以为80％以下、70％以下、60％以下，最优选为50％以下。醇的种类没有特别限定，可例示甲醇、乙醇、丙醇等。通过向吸附液添加醇等，能够提高将核酸吸附于粒子等的效果，从核酸提取用设备的角度来看时，能够提高核酸的提取效率。 
容器120在不与管部100连接的状态下能够振摇，能够充分搅拌容器120内的液体。由此，能够使核酸迅速吸附于粒子等。容器120可以具有密封开口121的盖122。此外，通过适当地变更导入到容器120的试样量和管部100内的液体(尤其是第4塞子40)的体积，还能够使试 样中的核酸在第4塞子40的溶出液中定量浓缩。 
如果对于容器120的材质选择橡胶、弹性体、高分子等具有挠性的材料，则在将容器120与管部100连接的状态下，通过使容器120变形，能够对管部100的内部加压。由此，在将第4塞子40的溶出液从管部100的第5塞子50侧的端部排出时，容易从管部100的第1塞子10侧施加压力。由此，能够将溶出液分注到例如用于PCR的反应容器等。 
1.5.4.储液部 
图4B是示意性地表示作为核酸提取用设备的构成的一个例子的核酸提取用设备1040的图。如图4B例示，核酸提取用设备1040在管部100的第1塞子10侧的端部形成有与管部100连通的储液部130。储液部130的内部与管部100的内部连通。 
储液部130能够在内部收容液体。储液部130具有能够从外部向储液部130内部导入物质的开口131。储液部130中的形成开口131的位置没有特别限定。储液部130可以具有多个开口131。储液部130的内容积没有特别限定，例如，可以为0.1mL～100mL。储液部130的材质没有特别限定，可以为高分子、金属等，可以与管部100的材质相同。 
像核酸提取用设备1040这样，通过具备储液部130，从而能够在储液部130内收容例如粒子等、吸附液和试样，使核酸吸附于粒子等。而且，能够将该粒子等从管部100的第1塞子10侧容易地导入到管部100内。 
另外，储液部130可以与管部100一起振摇，可以充分搅拌储液部130内的液体。由此，能够使核酸迅速吸附于粒子等。此外，通过适当地变更导入到储液部130的试样量和管部100内的液体的体积，能够使试样中的核酸在溶出液中定量地浓缩。 
像核酸提取用设备1040这样具有储液部130时，可以进一步具有密封储液部130的开口131的可自由拆卸的盖132。而且，如果储液部130的材质选择橡胶、弹性体、高分子等具有挠性的材料，则在储液部130安装盖132的状态下，通过使储液部130变形，能够对管部100的内部加压。 
由此，在将溶出核酸的第4塞子40的溶出液从管部100的第5塞子50侧的端部排出时，能够从管部100的第1塞子10侧容易地施加压力。由此，能够从向容器120导入试样的工序进行到将溶出液容易地分注至例如用于PCR的反应容器等的工序。另外，如果安装盖132，则能够抑制将储液部130与管部100一起振摇时的漏液，因此能够进一步提高使核酸吸附于粒子等的效率。 
1.5.5.第6塞子和第7塞子 
本实施方式的核酸提取用设备在管部的内部可以具有第6塞子和第7塞子。图5是示意性地表示在管部100的内部具有第6塞子60和第7塞子70的核酸提取用设备1100的图。 
核酸提取用设备1100具有在上述核酸提取用设备的管部100的内部的第1塞子10与第2塞子20之间从第1塞子10侧依次追加由与油混合时发生相分离且清洗结合有核酸的微粒的第2清洗液构成的第6塞子60和由第4油构成的第7塞子70而成的结构。 
第6塞子60由第2清洗液构成。第2清洗液60只要是与构成第1塞子的油10和构成第7塞子的油70混合时均不发生相分离的液体即可。第2清洗液60优选为水或低盐浓度水溶液，为低盐浓度水溶液时，优选为缓冲液。低盐浓度水溶液的盐浓度优选为100mM以下，更优选为50mM以下，最优选为10mM以下。另外，低盐浓度水溶液的下限没有特别限制，优选为0.1mM以上，进一步优选为0.5mM以上，最优选为1mM以上。另外，该溶液可以含有Triton、Tween、SDS等表面活性剂，pH没有特别限定。用于制备缓冲液的盐没有特别限定，优选使用Tris、HEPES、PIPES、磷酸等盐。可以含有促溶物质。 
此外，为了提高清洗效果，该清洗液优选含有醇。特别是为了提高使第1清洗液为酸性溶液的效果，优选至少吸附液和第2清洗液均含有醇。这种情况下，醇浓度没有特别限定，下限可以为50％以上、60％以上，最优选为70％以上。醇浓度的上限可以为90％以下、80％以下，最优选为70％以下。醇的种类没有特别限定，可例示甲醇、乙醇、丙醇、乙腈等。应予说明，从核酸和吸附有核酸的粒子等的清洗这样的观点考虑，只要上述吸附液或第2清洗液中的至少一方含有醇，就能够提高清 洗效果，但如果吸附液和第2清洗液这双方含有醇，则能够进一步提高清洗效果，所以优选。 
第6塞子60的体积没有特别限定，可以将吸附有核酸的粒子等的量等作为指标而适当地设定。例如，粒子等的体积为0.5μL时，第6塞子60的体积只要为10μL以上便足够，优选为20μL～50μL，进一步优选为20μL～30μL。如果第6塞子60的体积为该范围，则粒子等的体积为0.5μL时能够充分地进行粒子等的清洗。应予说明，粒子等清洗时，优选第6塞子60的体积更大，但是可以考虑管部100的长度、粗度、依赖于此的第6塞子60在管部100的长边方向的长度等而适当地设定。 
第6塞子60可以由被油的塞子分割的多个塞子构成。第6塞子60由被油塞子分割的多个塞子构成时，各塞子的清洗液的构成可以相同也可以不同，没有特别限定，如上所述优选含有醇。 
第7塞子70由与相邻的第6塞子60和第2塞子20的液体不混合的油构成。第7塞子70的油可以是与第1塞子10、第3塞子30和第5塞子50的油相同种类的油，也可以是不同种类的油。作为油，可以是与第1塞子10等中例示的油相同的油。 
优选第7塞子70中没有气泡、其它液体，但只要吸附有核酸的粒子等能够通过第7塞子70，也可以存在气泡、其它液体。另外，优选在第7塞子70与相邻的第2塞子20和第6塞子60之间没有气泡、其它液体，但只要吸附有核酸的粒子等能够在管部100内移动，也可以存在气泡、其它液体。 
第7塞子70在管部100的长边方向的长度只要为能够形成塞子的范围，就没有特别限定。作为第7塞子70在管部100的长边方向的具体长度，为1mm～50mm，但为了不使粒子等的移动距离过大，优选为1mm～30mm，进一步优选为5mm～20mm。 
另外，第7塞子70具有抑制第2清洗液(第6塞子60)和第1清洗液(第2塞子20)相互混合的功能。另外，通过使第7塞子70成为更高粘度的油，从而使粒子等在与第2清洗液(第6塞子60)的界面移动时，能够提高油所带来的“洗掉效果”。由此，粒子等从第6塞子60 的第2清洗液的塞子移动至油的第7塞子70时，能够使附着于粒子等的水溶性成分会难以被带入第7塞子70。 
根据核酸提取用设备1100，能够将吸附有核酸的粒子等在第2塞子20以及第6塞子60中清洗。由此，能够进一步提高粒子等的清洗效率。 
另外，在核酸提取用设备1100中，第6塞子60的第2清洗液可以含有促溶剂。例如，如果第2清洗液含有盐酸胍，则在第6塞子60中，能够维持或强化吸附于粒子等的核酸的吸附并且清洗粒子等。作为第6塞子60中含有盐酸胍时的浓度，例如，可以为3mol/L～10mol/L，优选为5mol/L～8mol/L。如果盐酸胍的浓度为该范围，则能够使被吸附于粒子等的核酸更稳定地吸附，并且清洗其它杂质等。 
而且，如上所述，通过使第2塞子20的第1清洗液成为酸性溶液，能够用第2塞子20高效率地清洗第6塞子60中吸附于粒子等的醇，能够减少在溶出液或其后的逆转录反应液、核酸扩增反应液中醇的带入。 
可以容易理解，即便是管部100的内部具有第6塞子60和第7塞子70的核酸提取用设备1100，也可以在构成上附加上述栓、容器、储液部等，并且可得到与上述相同的效果。 
1.5.6.核酸扩增反应用容器 
本发明的核酸提取用设备可以形成为具备与管的下游端连通且含有油的核酸扩增反应用容器的核酸扩增反应用筒这样的构成。图6中示出核酸扩增反应用容器的构成的一个例子，图8中示出核酸扩增反应用筒的整体构成的一个例子。 
图6A是初始状态的说明图。图6B是溶出液被从管200挤出后的状态的说明图。核酸扩增反应用容器230是接收从管200挤出的液体的容器并且是热循环处理时收容溶出液249的容器。 
核酸扩增反应用容器230具有密封形成部231和流路形成部235。密封形成部231是插入管200的部分，是抑制从流路形成部235溢出的油泄漏到外部的部位。流路形成部235是密封形成部231的下游侧的部分，是形成液滴状的溶出液249移动的流路的部位。核酸扩增反应用容 器230以密封形成部231的上密封部234A和下密封部234B这2个位置被固定于管200。 
密封形成部231具有油收容部232和阶梯部233。 
油收容部232是筒状的部位，作为收容从流路形成部235溢出的油的腔室而发挥功能。在油收容部232的内壁与管200的外壁之间存在缝隙，该缝隙成为收容从流路形成部235溢出的油的油收容空间232A。 
通过使油收容部232的上游侧的内壁与管200的环状的凸部接触，形成上密封部234A。上密封部234A是允许空气通过且抑制油收容空间232A的油泄漏到外部的密封部件。上密封部234A以油不因油的表面张力而泄漏的程度形成通气口。上密封部234A的通气口可以是管200的凸部与油收容部232的内壁之间的缝隙，也可以是形成于管200的凸部的孔、槽或切口。另外，可以利用吸收油的油吸收材料形成上密封部234A。 
阶梯部233是被设置在油收容部232的下游侧的有阶梯的部位。阶梯部233的下游部的内径小于油收容部232的内径。阶梯部233的内壁与管200的下游侧的外壁接触。通过使阶梯部233的内壁与管200的外壁接触，形成下密封部234B。下密封部234B是允许流路形成部235的油向油收容空间232A流入且对该流入进行阻挡的密封部件。因在下密封部234B的压力损失，使得流路形成部235的压力高于外部空气压，因此即使热循环处理时流路形成部235的液体被加热，也不易在流路形成部235的液体中产生气泡。 
流路形成部235是管状的部位，成为形成液滴状的溶出液249移动的流路的容器。流路形成部235中填充有油。流路形成部235的上游侧被管200的末端封闭，使得管200的末端向流路形成部235开口。流路形成部235的内径大于管200的内径，且大于溶出液249成为球状时的外径。优选流路形成部235的内壁具有水溶性的溶出液249不附着的程度的疏水性。 
如图6A所示，在初始状态下，核酸扩增反应用容器230的流路形成部235中填充有油。油的界面位于油收容空间232A的较下游侧。 
如图6B所示，即使溶出液249被从管200挤出，由于在流路形成部235预先填充有油，所以气体不会流入流路形成部235。 
在溶出液249被从管200挤出前，首先，位于管200的最下游的油塞子内的油流入流路形成部235，流入部分的油从流路形成部235流入油收容空间232A，油收容空间232A的油界面上升。此时，因下密封部234B的压力损失，使得流路形成部235的液体的压力增大。在位于最下游的油塞子被从管200挤出后，溶出液249从管200流入流路形成部235。溶出液塞子249中含有扩增的核酸和进行核酸扩增反应的试剂时，流入的溶出液塞子249成为液滴状，直接用于PCR。 
这样的一体式的核酸扩增反应用筒可适用于原理在例如日本特开2012-115208中被公开的旋转式PCR装置。 
2.核酸提取用试剂盒 
图7A是表示本实施方式的核酸提取用试剂盒的一个例子的示意图。图7A中例示的核酸提取用试剂盒2000包含构成上述核酸提取用设备的主要部件的部件。对于“1.核酸提取用设备”的项目中说明的构成同样的构成标注相同的符号并省略其详细说明。 
本实施方式的核酸提取用试剂盒2000包含管200和能够使内部与管200的第1塞子10侧的端部连通地连接的容器120，所述管200内部依次配置有由油构成的第1塞子10、由不与油混合的第1清洗液构成的第2塞子20、由油构成的第3塞子30、由不与油混合的溶出液构成的第4塞子40以及由油构成的第5塞子50。 
管200是核酸提取用设备1000的管部100的两端开放的方式，内部具有空洞，且具有能够使液体在该空洞内沿长边方向流通的筒状的形状。管200的内部形状、外形形状、大小、性质、材质等与核酸提取用设备1000的管部100同样。被配置于管200的内部的塞子与被配置于核酸提取用设备1000的管部100的塞子同样。另外，管200的两端可以被可自由拆卸的栓110密封。管200的两端被栓110密封时，例如核酸提取用试剂盒2000的保存、移送变得更容易。此外，在使用管200时，如果形成栓110将管200的第5塞子50侧的端部密封的状态，则 使粒子等在管200的内部移动时，能够抑制各塞子在管200内的移动，因此能够使清洗、提取更容易。在此基础上，由于该栓110是可自由拆卸的，所以能够使管200的第5塞子50侧的端部开放，容易将溶出有核酸的第4塞子40的溶出液从管200的第5塞子50侧的端部排出。 
容器120与核酸提取用设备1000的项目中说明的容器120同样。 
在图7A的例子中，管200的两端被可自由拆卸的栓110密封。另外，核酸提取用试剂盒2000可以包含可自由拆卸地密封容器120的开口121的盖122，容器120的开口121可以被可自由拆卸的盖122密封。此外，在核酸提取用试剂盒2000中，吸附液的成分的一部分或全部可以收容在容器120中。 
另外，在核酸提取用试剂盒2000中，容器120可以收容吸附液和磁性粒子。由此，将试样导入容器120中时，能够在容器120中进行使试样所含的核酸吸附于磁性粒子的工序。由此，不需要准备其它容器，能够更迅速地进行PCR的前处理。另外，这种情况下，容器120的开口121根据需要而可以被可自由拆卸的盖122密封。对于磁性粒子，后面详述。 
另外，如果如上所述使容器120成为具有挠性的材质，则在将容器120与管200连接的状态下，通过使容器120变形，能够对管200的内部加压。由此，在将溶出有核酸的第4塞子40的溶出液从管200的第5塞子50侧的端部排出时，能够从管200的第1塞子10侧容易地施加压力。由此，能够将溶出液容易地分注到例如用于PCR的反应容器等。 
核酸提取用试剂盒2000除包含管200和容器120之外，例如还可以包含栓、盖、操作说明书、试剂、箱体等其它的构成。另外，可以容易理解，在此示出了管200内配置有5个塞子的例子，但是与“1.6.核酸提取用设备”的项目中说明的同样地在管200(管部100)内可以根据需要配置第6塞子60、第7塞子70等其它塞子。 
本实施方式的核酸提取用试剂盒2000由于具有能够使内部与管200的第1塞子10侧的端部连通地连接的容器120，所以只要在容器120内收容粒子等和试样，就能够将核酸吸附于粒子等，只要将容器120与 管200的第1塞子10侧的端部连接，就能够将该粒子等容易地从管200的第1塞子侧导入管200内。另外，本实施方式的核酸提取用试剂盒2000由于具有容器120，所以可以振摇容器120，可以将容器120内的液体充分搅拌。由此，能够使核酸迅速吸附于粒子等。 
另外，通过将容器120与管200连接，容易将吸附有核酸的粒子等从管200的第1塞子10侧的端部导入并使之移动至第4塞子40。由此，能够在极短时间内容易进行核酸的提取。核酸提取用试剂盒2000通过使吸附有核酸的粒子等在管200内移动，从而能够得到以高纯度含有核酸的溶出液。因此，根据核酸提取用试剂盒2000，能够大幅减少为了进行PCR的前处理所需的时间和精力。 
3.核酸提取方法 
上述核酸提取用设备、核酸提取用试剂盒及它们的变型方式以及后述的核酸提取用装置均可适用于本实施方式的核酸提取方法。以下，作为本实施方式的核酸提取方法的一个例子，叙述采用上述核酸提取用试剂盒2000的方法。 
本实施方式的核酸提取方法包括如下工序：向收容磁性粒子M等微粒和吸附液的具有挠性的容器120导入含有核酸的试样的工序，摇动容器120而使核酸吸附于磁性粒子M的工序，在管200的第1塞子10侧的端部使容器120内部与管200内部连通而连接容器120的工序，施加磁力使磁性粒子M从容器120内部通过管200内部移动至第4塞子40的位置，从而用第1清洗液清洗吸附有核酸的微粒，使核酸在第4塞子40的溶出液中从微粒溶出的工序，其中，上述管200的内部配置依次配置有由油构成的第1塞子10、由不与油混合的第1清洗液构成的第2塞子20、由油构成的第3塞子30、由不与油混合的溶出液构成的第4塞子40以及由油构成的第5塞子50。 
在本实施方式的核酸提取方法中，只要是能够利用吸附液吸附核酸且能够在管200内移动的粒子，就可以使用各种(例如二氧化硅粒子、聚合物粒子、磁性粒子等)粒子，但是在以下说明的核酸提取方法的一个实施方式中，使用含有磁性体且能够在粒子表面吸附核酸的磁性粒子M。应予说明，使磁性粒子M以外的粒子等在管内移动时，例如可以 利用重力或电位差来执行此动作。 
在本实施方式的核酸提取方法中，对于容器120和管200，选择透过磁力的材质，通过从容器120和管200的外部施加磁力而使磁性粒子M在容器120和管200的内部移动。 
试样中含有成为靶的核酸。以下，有时将其简称为靶核酸。靶核酸是利用本实施方式的核酸提取方法从试样中提取的，溶出到溶出液后，例如如果核酸为mRNA，则被逆转录成cDNA，被用作PCR的模板，如果核酸为cDNA、基因组DNA，则被直接用作PCR的模板。作为试样，除血液、鼻腔粘液、口腔粘膜、各种生物体试样之外，也可以是被部分精制的核酸溶液等。 
3.1.向容器导入试样的工序 
向容器120导入试样的工序可以通过例如使试样附着于棉棒，从容器120的开口121插入该棉棒，将其浸渍在吸附液中来进行。另外，试样可以利用移液管等从容器120的开口121导入。另外，如果试样为糊状、固体状，则例如可以从容器120的开口121利用匙、镊子等使其在容器120的内壁附着等而投入。 
3.2.使磁性粒子吸附于核酸的工序 
使核酸吸附的工序通过摇动容器120进行。如果有密封容器120的开口121的盖122，则使用该盖122密封容器120进行时能够更有效率地进行。通过该工序，靶核酸因促溶剂的作用而被吸附于磁性粒子M的表面。该工序中，除靶核酸之外，靶核酸以外的核酸、蛋白质也可以吸附在磁性粒子M的表面。 
作为摇动容器120的方法，可以使用旋涡式振动筛等装置，也可以用操作者的手振摇混合。另外，可以利用磁性粒子M的磁性，边从外部赋予磁场边摇动容器120。摇动容器120的时间可适当地设定，例如容器120的大致形状是直径为20mm且高度为30mm左右的圆筒状时，在用手将容器120振摇10秒钟的程度下充分搅拌，核酸吸附于磁性粒子M的表面。 
3.3.将容器与管连接的工序 
接下来如图7B所示，在管200的第1塞子10侧的端部连接容器120。即使取下第1塞子10侧的栓110，但由于有第7塞子70侧的栓110，所以管200内的各塞子也难以在管200内移动。在管200的第1塞子10侧的端部安装栓110时，取下该栓110来进行。而且，容器120和管200以内容物不漏出的方式连接，以内容物不能够在容器120内部与管200的内部之间流通的方式连通。 
3.4.使磁性粒子移动的工序 
经过上述工序后，成为容器120内的吸附有核酸的磁性粒子M能够流通到管200的状态。作为将吸附有核酸的磁性粒子M导入管200的方法，可以采用利用重力、离心力的方法，没有特别限制，在本实施方式中从容器120和管200的外部施加磁力进行。磁力可以利用例如永磁铁、电磁铁等施加，但是从不产生发热等这点考虑，更优选使用永磁铁施加。另外，使用永磁铁时，可以用操作者的手移动磁铁来进行，也可以利用机械装置等进行。由于磁性粒子M具有受磁力吸引的性质，所以利用该性质，使容器120和管200与永磁铁的相对配置变化，从容器120内移动至管200。由此，磁性粒子M从第1塞子10依次通过各塞子移动至第4塞子40。磁性粒子M通过各塞子时在各塞子的滞留时间没有特别限定，可以按在相同塞子内沿管200的长边方向往返的方式移动。 
3.5.使核酸溶出的工序 
如果磁性粒子M到达第4塞子40，则因溶出液的作用，吸附于磁性粒子M的核酸溶出到第4塞子40的溶出液。经过本工序后，成为核酸从试样向溶出液溶出，从试样中提取出核酸的状态。 
3.6.作用效果 
根据本实施方式的核酸提取方法，能够在极短时间内容易地进行核酸的提取。本实施方式的核酸提取方法通过使吸附有核酸的磁性粒子M在管200内移动，能够得到以高纯度含有核酸的溶出液。根据本实施方式的核酸提取方法，能够大幅减少为了进行PCR的前处理所需的时间 和精力。 
3.7.从管排出第4塞子的工序 
本实施方式的核酸提取方法可以包括使容器120变形而将第5塞子50和第4塞子40从管200的与连接容器120端相反侧的端部排出的工序。 
本工序可以在“3.5.使核酸溶出的工序”后，通过使容器120变形来进行。排出第4塞子40时第5塞子50先排出。应予说明，密封管200的第5塞子50侧的栓110在本工序之前除去，预先使管200的第5塞子50侧的端部开放。 
如果以对容器120施加外力而增大内压的方式变形，则因压力而使各塞子从管200的第1塞子10侧向第5塞子50侧移动。由此，第5塞子50和第4塞子40依次从管200的第5塞子50侧的端部排出。第3塞子30可以被排出，但不排出第2塞子20。这种情况下，例如，如果将第3塞子30的体积设定成比其它塞子大，并增大第3塞子30在管200的长边方向的长度，则容易防止第2塞子20排出。 
第4塞子40和第5塞子50被排出到例如用于PCR的反应容器。因此，溶出液和油被分注到用于PCR的反应容器，但是通常由于油对PCR的反应不造成影响，所以例如也可以在PCR的反应容器中预先收容与第5塞子50的油同种类的油。另外，这种情况下，如果在管200的前端位于油内的状态下进行本工序，则能够将含有靶核酸的溶出液在不与外部空气接触的情况下导入PCR的反应容器。本实施方式的核酸提取方法包括本工序时，能够将含有靶核酸的溶出液容易地分注到例如用于PCR的反应容器等。 
使用该溶出液扩增cDNA时，如果逆转录工序和/或核酸扩增工序中的反应液含有大量的含有溶出的核酸的溶出液，则微量含有的核酸也容易扩增。因此，这些反应液优选含有50％以上的溶出液，更优选含有70％以上，进一步含有90％以上，最优选含有100％，即，向用于溶出核酸的溶出液中预先添加用于反应的试剂。 
通常，随着反应液中的溶出液的比例增大，即将进行清洗工序之前 使用的溶液，例如吸附液和/或第2清洗液所含的乙醇的带入阻碍后面的逆转录反应、核酸扩增反应，最终的cDNA的回收量下降，但是本发明的核酸扩增方法中，通过使第1清洗液为酸性溶液，能够防止回收量的下降。 
3.8.变型例 
3.8.1.使磁性粒子移动的工序的变型 
图9是用于说明本实施方式的核酸提取方法的一个变型方式的示意图。 
上述“3.4.使磁性粒子移动的工序”中，对于通过从外部对磁性粒子M施加磁力使磁性粒子M从第1塞子10依次通过各塞子而移动至第4塞子40的过程进行了说明。但是，也可以在磁性粒子M被移动到第2塞子20时，使从外部施加的磁力变化，使磁性粒子M在第2塞子20内振动，或者反复扩散凝聚来进行。由此，能够提高由第2塞子20的第1清洗液带来的磁性粒子M的清洗效果。 
具体而言，如图9的A、B所示，使用一对永磁铁410作为外加磁力的机构时，利用永磁铁410使磁性粒子M从容器120移动，通过第1塞子10，磁性粒子M到达第2塞子20时，使一方的永磁铁410远离管200，使另一方的永磁铁410从对置侧向管200靠近，能够使磁性粒子M在第2塞子20内沿与管200的长边方向交叉的方向振动(图中A、B的方式的反复)。由此，能够提高由第2塞子20的第1清洗液带来的磁性粒子M的清洗效果。这样的磁性粒子M的清洗在将第2塞子20分割的情况、管200内配置第6塞子60的情况下，可以适用于多个第2塞子20、第6塞子60。 
另外，如图9的C所示，通过简单地使永磁铁410远离管200，能够使磁性粒子M在第2塞子20内扩散。由于磁性粒子M的表面为亲水性，所以即使减弱磁力而使其扩散在例如第2塞子20中，也难以进入第1塞子10、第3塞子30的油，因此可以形成为这样的方式。 
具体而言，利用永磁铁410使磁性粒子M从容器120移动，通过第1塞子10，磁性粒子M到达第2塞子20时，使永磁铁410远离管200， 使磁性粒子M在第2塞子20内扩散。然后，可以再次利用永磁铁410的磁力使磁性粒子M移动，通过第3塞子30，导入到第4塞子40。 
这样的使从外部施加的磁力变化而使磁性粒子M振动或反复扩散凝聚的方式在磁性粒子M存在于容器120内的吸附液中的状态下或在磁性粒子M存在于第4塞子40(溶出液)的状态下适用。 
3.8.2.使核酸溶出的工序的变型 
上述“3.5.使核酸溶出的工序”中，可以加热第4塞子40而进行。作为加热第4塞子40的方法，例如，可例示使与管200的第4塞子40对应的位置与加热块等热介质接触的方法、使用加热器等热源的方法、利用电磁加热的方法等。 
加热第4塞子40时，第4塞子40以外的塞子也可以被加热，但是在吸附有核酸的磁性粒子M存在于清洗液的塞子的状态下，优选该塞子不被加热。作为加热第4塞子40时的达到温度，从溶出效率的观点以及溶出液含有PCR的酶时抑制该酶的失活的观点考虑，优选为35℃～85℃，更优选为40℃～80℃，进一步优选为45℃～75℃。 
在使核酸溶出的工序中，如果将第4塞子40加热，则能够使被吸附于磁性粒子M的核酸更有效率地溶出到溶出液。另外，即使第1清洗液或第2清洗液与溶出液的组成相同或类似，没溶出到清洗液而残留吸附在磁性粒子M的核酸也能够溶出到溶出液中。即，将吸附有核酸的磁性粒子M利用第1清洗液或第2清洗液清洗之后，也能够使核酸进一步溶出到溶出液。由此，即使清洗液的组成与溶出液的组成相同或类似，也能够兼得充分的清洗和以充分的浓度到向溶出液的溶出。 
3.8.3.从管排出第4塞子的工序的变型 
采用上述“3.7.从管排出第4塞子的工序”时，在该工序中，将吸附的核酸溶出到溶出液的磁性粒子M可以存在于第4塞子40内，但也可以进一步通过施加磁力而使其移动至第1塞子10、第2塞子20、第3塞子30中的任一个塞子或容器120中后进行。由此，能够在溶出液不含磁性粒子M的状态下，从管200排出第4塞子40。另外，如果使磁性粒子M移动的位置为第2塞子20或容器120，则即使除去磁力，磁 性粒子M也难以进入第3塞子30的油内，因此能够将第4塞子40更容易地从管200排出。 
4.核酸提取用装置 
本实施方式的核酸提取用装置可适用于上述说明的核酸提取用设备、核酸提取用试剂盒以及核酸提取方法。以下，对将安装核酸提取用试剂盒2000进行核酸提取的核酸提取用装置3000作为一个实施方式进行说明。图10是示意性地表示本实施方式的核酸提取装置3000的立体图。 
本实施方式的核酸提取用装置3000包括安装管的安装部300、在安装部300安装管200时从管200的侧面施加磁力的磁力施加部400和使安装部300和磁力施加部400的相对配置沿管200的长边方向变化的移动机构500，其中，所述管200具有长边方向，内部依次配置有由油构成的第1塞子10、由不与油混合的第1清洗液构成的第2塞子20、由油构成的第3塞子30、由不与油混合的溶出液构成的第4塞子40以及由油构成的第5塞子50。 
被安装于核酸提取用装置3000的安装部300的管200是上述管200。核酸提取用装置3000具有安装管200的安装部300。应予说明，例示了管200内配置有第1塞子10～第5塞子50的例子，但也可以配置上述第6塞子60、第7塞子70。 
安装部300是安装管200的部位。在安装部300可以与管200一起安装与管200连接的容器120。就安装部300而言，在利用磁力施加部400能够对管200及根据需要对容器120施加磁力的范围内，可以适当地设计构成、用于安装的机构等。在管200具有挠性且弯曲的情况下等，安装部300可以构成为能够将管200拉伸成直线状的形状而安装。另外，在图示的例子中，安装部300具有以管200沿着的方式配置的支板310。支板310并非必需构成，但是如果设置支板310，则有时能够抑制管200的振动等。另外，在图示的例子中，安装部300具有夹子机构320，由此成为以2个位置固定管200的方式。 
安装部300被构成为使与磁力施加部400的位置关系在管200的长 边方向相对变化。因此，以不进行磁力施加部400的移动而使安装部300相对于磁力施加部400相对移动的方式设计时，如图所示，作为移动机构500，可以包括使安装部300移动的移动机构360而构成。另外，磁力施加部400包括移动机构时，有时安装部300不需要移动机构360。在图示的例子中，安装部300包括铰链330、导轨340、驱动带350、未图示的马达而构成。 
在核酸提取用装置3000的例子中，安装部300设置了一个，但也可以设置多个。这种情况下，磁力施加部400也可以设置多个，多个安装部300可以各自独立，也可以按连动的方式设置。 
在安装部300安装有管200时，磁力施加部400是对管200及根据需要对容器120施加磁力的构成。磁力施加部400包括例如永磁铁、电磁铁或它们的组合而构成。磁力施加部400具有至少一个磁铁等，但是磁铁等可以具备多个。如果磁力施加部400不使用电磁铁而使用永磁铁，则不易产生发热等，所以优选。作为永磁铁，例如，可以使用镍系、铁系、钴系、钐系、钕系的永磁铁。 
磁力施加部400具有对存在于容器120内和管200内的磁性粒子M施加磁力的功能。而且，通过使安装部300与磁力施加部400的相对位置关系变化，使磁性粒子M在容器120内和管200内移动。 
在图示的例子中，磁力施加部400具有夹持容器120和管200而对置设置的一对永磁铁410。一对永磁铁410间以大于管200的外径的间隔分离。永磁铁410的极性的朝向方向没有特别限定。磁力施加部400被构成为与安装部300的位置关系在管200的长边方向相对变化。因此，以不进行安装部300的移动而使磁力施加部400相对于安装部300相对移动的方式设计时，作为移动机构500，包括使磁力施加部400移动而移动机构而构成。 
另外，在图示的例子中，磁力施加部400以一对永磁铁410中的一方接近管200时另一方远离管200的方式配置。而且，可以利用马达420使一对永磁铁410以接近/远离管200的方式振动。通过马达420驱动，能够使磁性粒子M在管200内沿与管200的长边方向交叉的方向往返移动。 
在对容器120、管200的任意位置施加磁力时，均可以根据需要驱动马达420。但是，当永磁铁410的位置位于管200的第2塞子20、第4塞子40的位置时，如果驱动，则能够提高管200内的磁性粒子M的清洗效率、溶出效率。 
根据本实施方式的核酸提取用装置3000，能够将为了进行PCR的前处理自动化，能够大幅减少前处理所需的时间和精力。另外，根据本实施方式的核酸提取用装置3000，由于能够使磁力施加部400摇动，所以能够更有效率地进行吸附有核酸的磁性粒子M的清洗(精制)，能够进一步提高PCR的精度。 
图11是示意性地表示核酸提取用装置的变型例的核酸提取装置3100的立体图。核酸提取装置3100与上述核酸提取装置3000在具有加热部600这点上不同，除此之外与其同样，对于作用功能共同的部件，标注相同的符号并省略其说明。 
在安装部300安装有管200时，加热部600是加热管200的一部分的构成。作为加热部600，例如，可例示热源及加热块、加热器、电磁加热用的线圈等。作为加热部600的形状，是能够插入到管200的形状、或与管200的侧面接触的形状等，只要能够加热管200内的液体，就可以是任意的形状。 
被加热部600加热的管200的部分包括管200的长边方向中第4塞子40存在的部分。加热部600可以加热管200的其它部分，但优选不加热管200的长边方向中第2塞子20存在的部分。 
在图11所示的核酸提取装置3100中，作为加热部600，具备与支板310并列设置的、加热包括管200的第4塞子40的位置的加热器610。加热器610具有与管200的外周的一半左右接触的形状。 
核酸提取装置3100即使在通过用第2塞子20的第1清洗液和第6塞子60的第2清洗液中的至少一方进行的清洗而减少吸附于磁性粒子M的核酸的量的情况下，也能够使充分量的核酸溶出到第4塞子40的溶出液。由此，能够提高清洗效果，并且能够使对于PCR足够浓度的核酸溶出到溶出液中。 
5.分批处理 
如果使用如上所述的吸附液、第1清洗液、溶出液，而且任意使用第2清洗液，则即使在不使用如上所述的核酸提取用设备、核酸提取用装置的分批处理中，也能够高效率地进行逆转录反应、核酸扩增反应。 
例如向1根管中放入含有核酸的试样，混合含有促溶物质的吸附液和微粒，使核酸吸附于微粒。其后，进行离心而使微粒沉淀，除去上清液。向留在管中的吸附有核酸的微粒加入第1清洗液而使微粒悬浮，再次进行离心后，除去上清液，由此清洗微粒。可以在第1清洗液之前用第2清洗液清洗微粒。 
接下来，向管内的微粒加入溶出液，使吸附于微粒的核酸溶出到溶出液中。使用这样得到的溶出液，核酸为mRNA时，进行逆转录而合成cDNA，将合成的cDNA扩增，核酸为基因组DNA、cDNA时，可以直接将DNA扩增。 
6.实施例 
6.1.实验例1和2 
本实施例中，对采用分批处理的实验例进行说明。 
＜RNA的分离＞ 
首先，向容量为1.5mL的聚乙烯制容器中装入700μL的吸附液，再向其中装入含有流感A阳性检体(鼻腔擦拭液)的140μL的溶液和25μL的磁性微粒(磁珠具有直径为1～3μm的二氧化硅表面，浓度400mg/mL的吸附液)，用漩涡混合器充分搅拌5分钟。用磁铁吸引磁珠，除去吸附液。接下来，加入清洗液A，用漩涡混合器搅拌10秒钟。用磁铁吸引磁性微粒，除去清洗液A。利用清洗液A进行2次清洗后，用清洗液B同样地进行2次清洗。除去清洗液后，向磁珠中加入27.5μL水作为溶出液，用漩涡混合器轻轻搅拌5秒钟后，在65℃加热3分钟。最后，用磁铁吸引磁珠，回收溶出液，作为RNA溶液。 
[吸附液] 
实验例1：硫氰酸胍   60wt％ 
Triton X-100        2.0％ 
Tris pH7.2          0.6wt％ 
实验例2：硫氰酸胍   30wt％ 
乙醇                45％ 
Tris pH7.3          0.3wt％ 
[清洗液A] 
实验例1：硫氰酸胍   70wt％ 
Triton X-100        0.7％ 
Tris pH7.2          2.6wt％ 
实验例2：硫氰酸胍   30wt％ 
乙醇                57％ 
[清洗液B] 
实验例1：Tris pH7.5 3wt％ 
实验例2：Tris pH7.0 0.1wt％ 
乙醇                70％ 
＜RT-PCR＞ 
接下来，使用制备的RNA溶液进行RT-PCR。应予说明，RT-PCR是根据CDC protocol of realtime RTPCR for swine influenza A(H1N1)实施的。具体而言，制备8μL含有下述物质的溶液，向其中加入2μL溶出液搅拌后，按以下条件进行RT-PCR。将其结果示于图12。所述物质如下： 
0.8μM正向引物 
0.8μM反向引物 
0.2μM探针 
1 x SuperScriptIII RT/Platimun Taq Mix 
1 x PCR Master Mix 
所述条件如下： 
逆转录50℃30分钟 
Taq活性化95℃2分钟 
PCR 95℃15秒-55℃30秒50次循环 
如果比较实验例1和实验例2的结果，则可知实验例2中RT-PCR的荧光强度的上升快。这表示向吸附液以及清洗液A和清洗液B中添加醇时，提高RNA的回收效率。应予说明，使用甲醇或乙腈代替乙醇的情况下，也同样看到回收率的提高。 
6.2.实验例3和4 
＜RNA的分离＞ 
接下来，使用图7所示的核酸提取用试剂盒2000中管200的内部具有第6塞子60～第7塞子70的核酸提取用设备，进行RNA的提取。关于试剂，实验例3使用与6.1.的实验例1相同的试剂，实验例4使用与6.1.的实验例2相同的试剂，向溶出液中预先添加RT-PCR用试剂，再添加0.2wt％的牛血清白蛋白。应予说明，各塞子的试剂量如下。 
第6塞子：清洗液A       28μL 
第2塞子：清洗液B       22μL 
第4塞子：溶出液        1.6μL 
第1、3、5、7塞子：油   各10μL 
核酸提取用设备的操作方法如下所述。首先，向容量为3mL的聚 乙烯制容器120中装入700μL的吸附液。向其中装入含有流感A阳性检体(鼻腔擦拭液)的140μL的溶液和与6.1.相同的磁性微粒1μL。对容器加盖，用手振摇30秒钟进行搅拌。取下容器的盖，与管的第1塞子侧连接。用手移动永磁铁，将容器内的磁珠向管内导入。如图9所示，使磁珠边摇动到第6塞子边移动。磁珠在管内的各塞子存在的时间大致如下。应予说明，第5塞子中，没有进行摇动磁珠等操作。 
第1、7、3塞子：各3秒 
第6塞子：20秒 
第2塞子：30秒 
第4塞子：20秒 
接下来，在管的第4塞子加热到50℃，摇动30秒钟，将RNA从磁珠提取到溶出液中。其后，利用永磁铁移动磁珠，使其退避到第6塞子。取下管的第5塞子侧的栓，用手使容器变形，将第5塞子排出到容器，将第4塞子排出到日本特开2012-115208中公开的旋转式PCR装置，在油中形成液滴。 
＜RT-PCR＞ 
使用所得到的RNA溶液，按以下条件进行实时PCR。图13中示出其结果。 
逆转录50℃60秒 
Taq活性化100℃10秒 
PCR 100℃10秒-57℃30秒50次循环 
尽管实验例3中正常观察到DNA的扩增，但实验例4中无法检测到DNA的扩增。认为这是由于实验例4中乙醇进入了吸附液以及清洗液A和清洗液B，其遗留阻碍了PCR。 
6.3.实施例 
＜RNA的分离＞ 
RNA的分离采用与6.2.同样的装置和步骤，使用以下溶液进行。 
[吸附液]硫氰酸胍      30wt％ 
乙醇                  45％ 
Tris pH7.3            0.3wt％ 
[清洗液B]Tris pH7.0   0.1wt％ 
乙醇                  70％ 
[清洗液C]柠檬酸pH4.0  0.1wt％ 
本实施例中，省略了与6.2.的清洗液A对应的塞子，取而代之将清洗液C的塞子设在清洗液B的塞子的下游侧。应予说明，按照与实验2同样的步骤，在有无清洗液A的条件下进行RT-PCR，结果确认了RNA的回收效率没有变化。但是，使用杂质多等需要更多清洗的检体(试样)时，可以使用清洗液A。 
如图14所示，观察到了实验例4中没有被确认到的DNA的扩增。由此可见，通过用酸性溶液进行清洗工序，能够避免由乙醇的遗留所致的逆转录反应和/或核酸扩增反应的阻碍。应予说明，本实施例中，即使省略利用清洗液B进行的清洗工序，也能确认DNA扩增的发生。 
另外，确认了即使在6.1所述的分批处理中进行利用清洗液C实施的追加清洗，提取效率即实时PCR的扩增曲线的上升速度也与实施例2同等。即，通过使用酸性清洗液，能够实现提高由含有乙醇的试剂所带来的提取效率以及防止乙醇带入到溶出液这2个效果。 
本发明不限于上述实施方式，可以进一步进行各种变型。例如，本发明包括与实施方式中说明的构成实质上相同的构成(例如，功能、方法和结果相同的构成或目的和效果相同的构成)。另外，本发明包括将实施方式中说明的构成的非本质部分置换而得的构成。另外，本发明包括与实施方式中说明的构成起到相同的作用效果的构成或能够实现相同的目的的构成。另外，本发明包括向实施方式说明的构成中附加公知 技术而成的构成。 
符号说明 
10…第1塞子，20…第2塞子，30…第3塞子，40…第4塞子，50…第5塞子，60…第6塞子，70…第7塞子，100…管部，110…栓，120…容器，121…开口，122…盖，130…储液部，131…开口，132…盖，200…管，230…核酸扩增反应用容器，231…密封形成部，232…油收容部，232A…油收容空间，233…阶梯部，234A…上密封部，234B…下密封部，235…流路形成部，249…溶出液，300…安装部，310…支板，320…夹子机构，330…铰链，340…导轨，350…驱动带，360…移动机构，400…磁力施加部，410…永磁铁，420…马达，500…移动机构，600…加热部，610…加热器，1000、1020、1030、1040、1100…核酸提取用设备，2000…核酸提取用试剂盒，3000、3100…核酸提取用装置，M…磁性粒子。 

Claims (24)

1.一种核酸扩增方法，包括如下工序：
吸附工序，在含有核酸的试样中混合含有促溶物质的吸附液和微粒，使所述核酸吸附于所述微粒，
清洗工序，用第1清洗液清洗吸附有所述核酸的微粒，
溶出工序，使吸附于所述微粒的核酸溶出到溶出液中，以及
核酸扩增工序，对所述溶出液中的核酸进行核酸扩增反应；
所述吸附液含有醇，第1清洗液为酸性。
2.根据权利要求1所述的核酸扩增方法，其中，所述醇为甲醇或乙醇。
3.根据权利要求1或2所述的核酸扩增方法，其中，所述吸附液中的醇浓度为40％～50％。
4.一种核酸扩增方法，包括如下工序：
吸附工序，在含有核酸的试样中混合含有促溶物质的吸附液和微粒，使所述核酸吸附于所述微粒，
清洗工序，用第2清洗液清洗吸附有所述核酸的微粒，
清洗工序，用第1清洗液清洗用所述第2清洗液清洗后的吸附有所述核酸的微粒，
溶出工序，使吸附于所述微粒的核酸溶出到溶出液中，以及
核酸扩增工序，将所述核酸扩增；
所述第2清洗液含有醇或乙腈，第1清洗液为酸性。
5.根据权利要求4所述的核酸扩增方法，其中，所述醇为甲醇或乙醇。
6.根据权利要求4或5所述的核酸扩增方法，其中，所述醇浓度为70％～100％。
7.根据权利要求1～5中任1项所述的核酸扩增方法，其中，所述核酸为核糖核酸(RNA)，
所述核酸扩增方法包括将溶出到所述溶出液中的所述核糖核酸逆转录，合成cDNA的逆转录工序，
核酸扩增工序中扩增的核酸是合成的所述cDNA。
8.根据权利要求1～7中任1项所述的核酸扩增方法，其中，核酸扩增工序中的反应液含有50％以上的所述溶出液。
9.根据权利要求8所述的核酸扩增方法，其中，核酸扩增工序中的反应液是所述溶出液。
10.一种核酸提取用设备，具有管和容器，
所述管具有长边方向，内部依次具备：
由油构成的第1塞子，
由与油发生相分离且清洗结合有核酸的微粒的第1清洗液构成的第2塞子，
由油构成的第3塞子，
由与油发生相分离且从结合有所述核酸的微粒溶出所述核酸的溶出液构成的第4塞子，
由油构成的第5塞子；
所述容器能够与所述管的配置有所述第1塞子的一侧连接并连通，且包含使所述核酸吸附于所述微粒的吸附液；
所述吸附液含有醇，所述第1清洗液为酸性。
11.一种核酸提取用设备，具有管和储液部，
所述管具有长边方向，内部依次具备：
由油构成的第1塞子，
由与油发生相分离且清洗结合有核酸的微粒的第1清洗液构成的第2塞子，
由油构成的第3塞子，
由与油发生相分离且从结合有所述核酸的微粒溶出所述核酸的溶出液构成的第4塞子，以及
由油构成的第5塞子；
所述储液部与所述管的配置有所述第1塞子的一侧连通，且包含使所述核酸吸附于所述微粒的吸附液；
所述吸附液含有醇，所述第1清洗液为酸性。
12.根据权利要求10或11所述的核酸提取用设备，其中，所述溶解液的体积为0.8μL～5μL。
13.根据权利要求10～12中任1项所述的核酸提取用设备，其中，所述醇为甲醇或乙醇。
14.根据权利要求10～13中任1项所述的核酸提取用设备，其中，所述吸附液中的醇浓度为40％～50％。
15.一种核酸提取用设备，具有管，
所述管具有长边方向，内部依次具备：
由油构成的第1塞子，
由与油发生相分离且清洗结合有核酸的微粒的第2清洗液构成的第6塞子，
由油构成的第7塞子，
由与油发生相分离且清洗用所述第2清洗液清洗过的结合有所述核酸的微粒的第1清洗液构成的第2塞子，
由油构成的第3塞子，
由与油发生相分离且从结合有所述核酸的微粒溶出所述核酸的溶出液构成的第4塞子，以及
由油构成的第5塞子；
所述第2清洗液含有醇或乙腈，所述第1清洗液为酸性。
16.根据权利要求15所述的核酸提取设备，具有能够与所述管的配置有所述第1塞子的一侧连接，且包含使所述核酸吸附于所述微粒的吸附液的容器，
所述吸附液含有醇。
17.根据权利要求15所述的核酸提取设备，具有与所述管的配置有所述第1塞子的一侧连通，且包含使所述核酸吸附于所述微粒的吸附液的储液部，
所述吸附液含有醇。
18.根据权利要求15～17中任1项所述的核酸提取用设备，其中，所述第1清洗液所含的醇为甲醇或乙醇。
19.根据权利要求15～18中任1项所述的核酸提取用设备，其中，所述第1清洗液中的醇的浓度为70％～100％。
20.一种核酸扩增反应用筒，具备权利要求10～19中任1项所述的核酸提取用设备，和
与所述管的配置有所述第5塞子的一侧连通，且包含油的核酸扩增反应用容器。
21.根据权利要求20所述的核酸扩增反应用筒，其中，核酸扩增反应中的反应液含有50％以上的溶出有所述核酸的溶出液。
22.根据权利要求21所述的核酸扩增反应用筒，其中，核酸扩增反应中的反应液是所述溶出液。
23.根据权利要求20～22中任1项所述的核酸扩增反应用筒，具备与所述管的配置有所述第1塞子的一侧连通，且向所述管导入所述微粒的罐。
24.一种核酸扩增反应用试剂盒，具备权利要求15所述的核酸提取用设备和向所述管导入所述微粒的罐。
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