CN104302648A

CN104302648A - 琥珀酸盐的晶形

Info

Publication number: CN104302648A
Application number: CN201380014918.5A
Authority: CN
Inventors: C·豪沙姆; C·林登伯格; A·佩尔伯格; N·图菲利
Original assignee: Novartis AG
Current assignee: Novartis AG
Priority date: 2012-03-19
Filing date: 2013-03-15
Publication date: 2015-01-21
Anticipated expiration: 2033-03-15
Also published as: CY1117410T1; MX2014011294A; JP6134378B2; IN2014DN07461A; KR101686311B1; WO2013140319A1; HRP20160420T1; EP2828261B1; PH12014502064B1; US8809340B2; MX352185B; EA201491719A1; HUE028761T2; SG11201405105TA; EP2828261A1; CO7071138A2; AU2013237073A1; KR20140122281A; PH12014502064A1; JO3184B1

Abstract

本发明涉及上皮钠通道(ENaC)阻滞剂3-(3-{2-[(E)-3,5-二氨基-6-氯-吡嗪-2-羰基亚氨基]-1,3,8-三氮杂-螺[4.5]癸烷-8-羰基}-苯磺酰氨基)-丙酸二丙基氨基甲酰甲基酯琥珀酸盐的新晶形、包含所述晶形的药物组合物、所述晶形和药物组合物的用途以及用于制备所述晶形的方法。

Description

琥珀酸盐的晶形

技术领域

本发明涉及上皮钠通道(ENaC)阻滞剂3-(3-{2-[(E)-3,5-二氨基-6-氯-吡嗪-2-羰基亚氨基]-1,3,8-三氮杂-螺[4.5]癸烷-8-羰基}-苯磺酰氨基)-丙酸二丙基氨基甲酰甲基酯的琥珀酸盐的新晶形、包含所述晶形的药物组合物、所述晶形和药物组合物的用途以及用于制备所述晶形的方法。

背景

国际专利申请公开文本WO 2012/035158(PCT/EP2011/066151)公开了制备ENaC阻滞剂3-(3-{2-[(E)-3,5-二氨基-6-氯-吡嗪-2-羰基亚氨基]-1,3,8-三氮杂-螺[4.5]癸烷-8-羰基}-苯磺酰氨基)-丙酸二丙基氨基甲酰甲基酯和其琥珀酸盐的方法。

通过阻断上皮钠通道介导的疾病包括与调节通过上皮膜的流体体积相关的疾病。例如，气道表面液体的体积是粘膜纤毛清除和保持肺健康的关键调节因素。阻断上皮钠通道会促进气道上皮粘膜一侧的流体蓄积，由此促进粘液清除和防止粘液和痰在呼吸组织(包括肺气道)中的蓄积。这类疾病包括：呼吸系统疾病，如囊性纤维化、原发性纤毛运动障碍、慢性支气管炎、慢性阻塞性肺病(COPD)、哮喘、呼吸道感染(急性和慢性；病毒性和细菌性)和肺癌。通过阻断上皮钠通道介导的疾病除了呼吸系统疾病，还包括与异常的通过上皮的流体调节相关的疾病(可能涉及其表面上的保护性表面液体的异常生理学)，例如口腔干燥症(口干燥)或雄性角膜结膜炎(干眼)。此外，阻断肾的上皮钠通道可以用于促进利尿并由此诱导降血压作用。

附图的描述

图1显示对晶形A(实施例3)记录的x-射线粉末衍射图，并且其在采用CuKα辐射的Bruker^TMD8衍射仪上记录。

图2显示晶形A(实施例3)的示差扫描量热法(DSC)迹线，并且其在具有铝盘的Perkin Elmer Diamond DSC仪器(Perkin Elmer,型号BO14-3018)上记录；加热速率20K/min，温度范围：30至250℃。

图3显示晶形A(实施例3)的红外光谱，并且其在Bruker Alpha仪器上以衰减全反射(ATR)方式记录。测量参数如下：范围400-4000cm^-1，分辨率2cm^-1，64次扫描，速率7.5kHz，切趾法:Blackman-Harris 3-term。

图4显示对晶形A(实施例1、2)记录的x-射线粉末衍射图，并且其在采用CuKα辐射的Bruker^TMD8衍射仪上记录。

图5显示晶形A(实施例1、2)的示差扫描量热法(DSC)迹线，并且其在具有铝盘的Perkin Elmer Diamond DSC仪器(Perkin Elmer,型号BO14-3018)上记录；加热速率20K/min,温度范围:30至250℃。

图6显示对晶形B(实施例4、5、6、7)记录的x-射线粉末衍射图，并且其在采用CuKα辐射的Bruker^TMD8衍射仪上记录。

图7显示对晶形C(实施例10)记录的x-射线粉末衍射图，并且其在采用CuKα辐射的Bruker^TMD8衍射仪上记录。

图8显示晶形C(实施例10)的示差扫描量热法(DSC)迹线，并且其在具有铝盘的Perkin Elmer Diamond DSC仪器(Perkin Elmer,型号BO14-3018)上记录；加热速率20K/min,温度范围:30至250℃。

图9显示晶形C(实施例10)的红外光谱，并且其在Bruker Alpha仪器上以衰减全反射(ATR)方式记录。测量参数如下：范围400-4000cm^-1，分辨率2cm^-1，64次扫描，速率7.5kHz，切趾法:Blackman-Harris 3-term。

图10显示对晶形C(实施例8、9)记录的x-射线粉末衍射图，并且其在采用CuKα辐射的Bruker^TMD8衍射仪上记录。

图11显示晶形C(实施例8、9)的DSC迹线，并且其在具有铝盘的Perkin Elmer Diamond DSC仪器(Perkin Elmer,型号BO14-3018)上记录；加热速率20K/min,温度范围:30至250℃。

实施方案的描述

本文公开了ENaC阻滞剂3-(3-{2-[(E)-3,5-二氨基-6-氯-吡嗪-2-羰基亚氨基]-1,3,8-三氮杂-螺[4.5]癸烷-8-羰基}-苯磺酰氨基)-丙酸二丙基氨基甲酰甲基酯的琥珀酸盐(3-(3-{2-[(E)-3,5-二氨基-6-氯-吡嗪-2-羰基亚氨基]-1,3,8-三氮杂-螺[4.5]癸烷-8-羰基}-苯磺酰氨基)-丙酸二丙基氨基甲酰甲基酯:琥珀酸＝1:1)的三种多晶型物(晶形A、B和C)。制备晶形A和B的方法已在国际专利申请公布WO 2012/035158(PCT/EP2011/066151)中描述。

因此，在第一方面中，本发明提供了下式的3-(3-{2-[(E)-3,5-二氨基-6-氯-吡嗪-2-羰基亚氨基]-1,3,8-三氮杂-螺[4.5]癸烷-8-羰基}-苯磺酰氨基)-丙酸二丙基氨基甲酰甲基酯琥珀酸盐的晶形

其包含晶形C。

在第一方面的一个实施方案中，所述晶形基本上由晶形C组成。

在第一方面的另一实施方案中，所述晶形包含晶形C，其中所述晶形C是基本上纯的形式的。

在第一方面的另一实施方案中，所述晶形由在21-26℃ ℃温度的包含四个或更多个2-θ值的x-射线粉末衍射图表征，所述2-θ值选自7.0°±0.2、10.6°±0.2、14.3°±0.2、18.2°±0.2、18.6°±0.2、19.2°±0.2、21.2°±0.2、21.8°±0.2、24.7°±0.2、29.0°±0.2和31.5°±0.2。

在第一方面的另一实施方案中，所述晶形由在21-26℃ ℃温度的包含六个或更多个2-θ值的x-射线粉末衍射图表征，所述2-θ值选自7.0°±0.2、10.6°±0.2、14.3°±0.2、18.2°±0.2、18.6°±0.2、19.2°±0.2、21.2°±0.2、21.8°±0.2、24.7°±0.2、29.0°±0.2和31.5°±0.2。

在第一方面的另一实施方案中，所述晶形具有基本上与如图7所示的x-射线粉末衍射光谱相同的x-射线粉末衍射光谱。

在第一方面的另一实施方案中，所述晶形具有基本上与如图8所示的相同的示差扫描量热法热谱图。

如本文所使用，与特定多晶型物相关的术语“基本上纯的”意指所述多晶型物包含小于10％、优选小于5％、更优选小于3％、最优选小于1％重量的该化合物的任何其它物理形式(多晶型物)。

如本文所使用，“多晶型物”涉及具有相同的化学组成但是形成晶体的分子、原子和/或离子具有不同空间排布的晶形(crystalline forms)。

除非上下文中另外要求，否则在整个本说明书和权利要求中，词语“包含”或变化形式诸如“含有”或“包括”应理解为意指包括所述的整体或步骤或整体或步骤的组，但并不排除任意其它的整体或步骤或整体或步骤的组。

如本文所使用，术语“本发明的晶形”是指在第一方面或第一方面的任何实施方案中所定义的晶形。

在第二方面，提供了包含第一方面或第一方面的任何实施方案所述的晶形和药学上可接受的载体或稀释剂的药物组合物。

在第二方面的一实施方案中，其中晶形C是基本上纯的形式的。

在第二方面的另一实施方案中，药物组合物是可吸入形式的。

在第三方面，提供了与一种或更多种另外的活性成分组合的第二方面或第二方面的一个实施方案药所述的物组合物。

在第四方面，提供了第一方面或第一方面的任何实施方案所述的晶形和第二方面或第二方面的任何实施方案所述的药物组合物，其用于治疗呼吸系统疾病，如囊性纤维化、原发性纤毛运动障碍、慢性支气管炎、慢性阻塞性肺病(COPD)、哮喘、呼吸道感染(急性和慢性；病毒性和细菌性)和肺癌。

在第五方面，提供了第一方面或第一方面的任何实施方案所述的晶形或第二方面或第二方面的任何实施方案所述的组合物在制备用于治疗以下疾病的药物中的用途：呼吸系统疾病，如囊性纤维化、原发性纤毛运动障碍、慢性支气管炎、慢性阻塞性肺病(COPD)、哮喘、呼吸道感染(急性和慢性；病毒性和细菌性)和肺癌。

在第六方面，提供治疗呼吸系统疾病，如囊性纤维化、原发性纤毛运动障碍、慢性支气管炎、慢性阻塞性肺病(COPD)、哮喘、呼吸道感染(急性和慢性；病毒性和细菌性)和肺癌的方法，其包括向有其需要的患者施用有效量的第一方面或第一方面的任何实施方案所述的晶形和第二方面或第二方面的任何实施方案所述的药物组合物。

在第七方面，提供了吸入装置，其含有并适于通过肺施用递送第一方面或第一方面的任何实施方案所述的晶形。在某些优选的实施方案中，吸入装置是干粉吸入器，例如吸入装置。

3-(3-{2-[(E)-3,5-二氨基-6-氯-吡嗪-2-羰基亚氨基]-1,3,8-三氮杂-螺[4.5]癸烷-8-羰基}-苯磺酰氨基)-丙酸二丙基氨基甲酰甲基酯琥珀酸盐的新多晶型的晶形C已显示出在热力学上比晶形A更稳定。

晶形B是一类在晶形A结晶期间作为暂时的晶形在混悬液中出现的同晶的溶剂化物。一旦干燥晶形B转化为晶形A。

可以通过任何适宜的途经施用本发明的活性剂，例如，以片剂或胶囊的形式口服施用；例如，通过例如静脉内，进行胃肠外施用；皮肤局部施用；通过鼻内施用，例如用于治疗过敏性鼻炎；或者，优选地通过吸入施用，特别是用于治疗阻塞性或炎症性气道疾病。具体而言，本发明的活性剂可以作为可吸入制剂进行递送，用于治疗COPD、囊性纤维化或哮喘。

可将该药物组合物配制用于特定施用途径，例如口服施用、胃肠外施用和直肠施用等。此外，可将本发明的药物组合物制成固体形式(包括但不限于胶囊、片剂、丸剂、颗粒、粉末或栓剂)，或液体形式(包括但不限于溶液、混悬液或乳剂)。该药物组合物可进行常规药物操作，例如灭菌和/或可以包含常规的惰性稀释剂、润滑剂或缓冲剂，以及辅助剂，例如防腐剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂和缓冲剂等。

通常情况下，该药物组合物是片剂或明胶胶囊，包含活性成分以及

a)稀释剂，例如乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露糖、山梨醇、纤维素和/或甘氨酸；

b)润滑剂，例如硅石、滑石粉、硬脂酸(其镁或钙盐)和/或聚乙二醇；片剂还包含

c)粘合剂，例如硅酸镁铝、淀粉糊、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮；如果需要，还包含

d)崩解剂，例如淀粉、琼脂、海藻酸或其钠盐，或泡腾合剂；和/或

e)吸收剂、着色剂、矫味剂和增甜剂。

可以根据本领域已知的方法，将片剂包薄膜衣或包肠溶衣。

用于口服施用的适合的组合物包含有效量的本发明的晶形，其是片剂、锭剂、水性或油性混悬液、可分散粉末或颗粒、乳剂、硬或软胶囊，或糖浆剂或酏剂形式的。旨在用于口服使用的组合物是按照本领域制备药物组合物的任何已知的方法制备，并且此类组合物可以包含一种或多种选自增甜剂、矫味剂、着色剂和防腐剂的物质，目的是为了提供药学上美观且适口的制剂。片剂可以包含与适用于片剂制备的无毒的药学上可接受的赋形剂混合的活性成分。这些赋形剂是例如惰性稀释剂，如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；制粒和崩解剂，例如玉米淀粉或海藻酸；粘合剂，例如淀粉、明胶或阿拉伯胶；以及润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉。所述片剂是不包衣的，或者按照常规技术包衣以延迟其在胃肠道的崩解和吸收，并因此提供较长时期的持续作用。例如，可以使用时间延迟材料如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。口服使用的制剂可以以硬明胶胶囊的形式存在，其中活性成分与惰性固体稀释剂混合，惰性固体稀释剂例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土，或者软明胶胶囊，其中活性成分与水或油介质混合，油介质例如花生油、液体石蜡或橄榄油。

某些可注射的组合物是水性等渗溶液或混悬液，且栓剂有利地从脂肪乳状液或混悬液制备。所述组合物可以灭菌和/或包含辅助剂，例如防腐剂、稳定剂、润湿剂或乳化剂、溶解促进剂、用于调节渗透压的盐和/或缓冲剂。此外，其还可以包含其它有治疗价值的物质。所述组合物是分别按照常规混合、制粒或包衣的方法制备，并且包含约0.1-75％，或包含约1-50％的活性成分。

用于透皮应用的适合的组合物包含有效量的本发明的晶形和适合的载体。适用于透皮递送的载体包括可吸收的药学上可接受的溶剂以辅助通过宿主皮肤。例如，透皮装置是以绷带的形式，其包含衬层、含有任选带有载体的化合物的贮库、任选地速率控制屏障(使化合物在较长时间期间以可控的或预设的速率向宿主皮肤递送)以及保障该装置附着皮肤的手段。

用于局部应用(例如用于皮肤和眼睛)的适合的组合物包括水性溶液、混悬液、软膏、乳膏剂、凝胶剂或可喷雾的制剂如用于经气雾剂等递送。该局部递送系统特别适合用于皮肤应用，例如用于治疗皮肤癌，例如用于在防晒乳、洗剂、喷雾等中的预防性使用。因此，它们特别适合用于局部，包括用于化妆品、本领域熟知的制剂中。其可以包含增溶剂、稳定剂、张度增强剂、缓冲剂和防腐剂。

如本文所用的局部应用还涉及吸入或鼻内应用。其可以方便地以干粉的形式(单独的，作为混合物例如与乳糖的干混合物，或例如与磷脂的混合的组分颗粒)从干粉吸入器中或以气雾喷雾剂形式从加压的容器、泵、喷雾机、喷雾器或雾化器中(使用或不适用适合的抛射剂)递送。

当活性成分的可吸入形式是气雾剂组合物时，该吸入装置可以是具有适于递送计量剂量(例如10-100μl，如25-50μl)组合物的阀门的气雾剂小瓶，即称为计量吸入器的装置。在压力下将气雾剂组合物装入其中的适合的气雾剂小瓶和操作是吸入疗法领域内技术人员熟知的。例如，气雾剂组合物可以从包被的小罐中施用，例如EP-A-0642992中所述。当活性成分的可吸入形式是可喷雾的水性、有机或水/有机分散体时，该吸入装置可以是已知的雾化器，例如常规的气动雾化器如空气喷嘴雾化器，或超声波雾化器，其可以包含例如1-50ml，通常1-10ml的分散体；或者手持的雾化器，通常是指软的轻雾或软的喷雾吸入器，例如电子控制的装置如AERx(Aradigm,US)或Aerodose(Aerogen)，或者机械装置例如RESPIMAT(Boehringer Ingelheim)雾化器，其可以提供比常规雾化器更小的雾化体积，例如10-100μl。当活性成分的可吸入形式是微细化的颗粒形式时，该吸入装置可以是例如适于从装有包含(A)和/或(B)的剂量单位的干粉的胶囊或泡罩中递送干粉的干粉吸入装置，或者多剂量干粉吸入(MDPI)装置，其适于每次启动递送例如3-25mg包含(A)和/或(B)的剂量单位的干粉。该干粉组合物优选地包含稀释剂或载体，例如乳糖，以及有助于保护避免由于潮湿引起的产品性能变质的化合物，如硬脂酸镁。适合的此类干粉吸入装置包括US 3991761(包括AEROLIZER^TM装置)、WO 05/113042(包括BREEZHALER^TM装置)、WO 97/20589(包括CERTIHALER^TM装置)、WO 97/30743(包括TWISTHALER^TM装置)、WO 05/37353(包括GYROHALER^TM装置)、US6536427(包括DISKUS^TM装置)、WO 97/25086(包括DISKHALER^TM装置)、WO 95/14089(包括GEMINI^TM装置)、WO03/77979(包括PROHALER^TM装置)中公开的装置，以及还有如WO08/51621、WO 09/117112和US 2005/0183724中公开的装置。

本发明还包括(A)可吸入形式的本发明的晶形；(B)可吸入药物，其包含可吸入形式的本发明的晶形以及可吸入形式的药学上可接受的载体；(C)包含可吸入形式的本发明的晶形与吸入装置的药物产品；以及(D)包含可吸入形式的本发明的晶形的吸入装置。

在实施本发明中所用的本发明的活性剂剂量当然根据例如治疗的特定病症、期望的效果以及施用模式而不同。一般而言，吸入施用的适当的每日剂量是0.0001-30mg/kg水平，通常每位患者0.01-10mg，而对于口服施用，适当的每日剂量是0.01-100mg/kg水平。

由于水可以促进某些化合物的降解，所以本发明还提供了包含作为活性成分的本发明的晶形的无水药物组合物和剂型。

本发明的无水药物组合物和剂型可以使用无水或低含水量的成分在低含水量或低湿度条件下制备。可以制备和储存无水药物组合物，以便使其保持无水特性。因此，无水组合物是使用已知防止暴露于水的材料进行包装，所以它们可以包含于适合的制剂盒中。适合的包装的实例包括但不限于密封的铝箔、塑料、单位剂量容器(如小瓶)、泡罩包装和分条包装。

本发明还提供了包含一种或多种降低作为活性成分的本发明的晶形的分解速率的物质的药物组合物和剂型。此类物质，其在本文指作“稳定剂”，包括但不限于抗氧化剂如抗坏血酸、pH缓冲剂或盐缓冲剂等。

本发明的晶形可以与一种或多种其它治疗药物同时或在之前或之后施用。本发明的晶形可以经相同或不同的施用途径单独施用，或与其它药物一起在相同的药物组合物中施用。

在一项实施方案中，本发明提供了包含本发明的晶形和至少一种其它治疗药物的产品，其作为组合制剂用于在治疗中同时、分别或依次使用。在一项实施方案中，所述治疗是由阻断上皮钠通道所介导的疾病或病症的治疗。作为组合制剂提供的产品包括包含本发明的晶形和其它治疗药物一起在同一药物组合物中的组合物，或者包含独立形式(例如药盒形式)的本发明的晶形与其它治疗药物的组合物。

在一项实施方案中，本发明提供了包含本发明的晶形和其它治疗药物的药物组合物。任选地，该药物组合物可以包含药学上可接受的赋形剂，如上文所述。

在一项实施方案中，本发明提供了包含两种或更多种独立的药物组合物的药盒，至少其中之一包含本发明的晶形。在一项实施方案中，该药盒包含独立保存所述组合物的用具，例如容器、分开的小瓶或分开的铝箔包装。该药盒的一项实例是如通常用于包装片剂、胶囊等的泡罩包装。

本发明的药盒可以用于施用不同的剂型，例如口服或胃肠外施用，用于在不同剂量间隔施用独立的组合物，或者相互之间剂量调整独立的组合物。为了有助于顺应性，本发明的药盒通常包含施用说明。

具体而言，本发明的晶形在人血浆中表现出有利的稳定性曲线。由于提供了在人血浆中表现出有利的稳定性曲线的化合物，本发明提供了具有改善的药代动力学的有效地阻断上皮钠通道(ENaC)的化合物。

在本发明的组合治疗中，本发明的晶形和其它治疗药物可以由相同或不同的生产商制备和/或配制。此外，本发明的晶形和其它治疗药物可以通过下述方式一起形成组合治疗：(i)在向医师提供组合产品之前(例如在包含本发明的晶形和其它治疗药物的药盒的情况下)；(ii)在将要施用前由医师自己组合(或在医师的指导下组合)；(iii)患者自己组合，例如在本发明化合物和其它治疗药物的依次施用期间。

因此，本发明提供了本发明的晶形用于治疗由阻断上皮钠通道所介导的疾病或病症的用途，其中所述的药物被制备用于与其它治疗药物一起施用。本发明还提供了其它治疗药物用于治疗由阻断上皮钠通道所介导的疾病或病症的用途，其中所述的药物是与本发明的晶形一起施用。

本发明还提供了用于治疗由阻断上皮钠通道所介导的疾病或病症的方法中的本发明的晶形，其中本发明的晶形被制备用于与其它治疗药物一起施用。本发明还提供了用于治疗由阻断上皮钠通道所介导的疾病或病症的方法中的其它治疗药物，其中其它治疗药物被制备用于与本发明的晶形一起施用。

本发明还提供了本发明的晶形用于治疗由阻断上皮钠通道所介导的疾病或病症的用途，其中患者已经预先(例如24小时内)用其它治疗药物治疗过。本发明还提供了其它治疗药物用于治疗由阻断上皮钠通道所介导的疾病或病症的用途，其中患者已经预先(例如24小时内)用本发明的晶形治疗过。

在一项实施方案中，所述其它治疗药物选自抗炎药、支气管扩张药、抗组胺药、解充血药和镇咳药物，特别是用于治疗囊性纤维化或阻塞性或炎性气道疾病(例如上文提到的那些疾病)中，例如作为此类药物治疗活性的增强剂或者作为降低此类药物的所需剂量或潜在的副作用的手段。

因此，作为其它方面，本发明包含本发明的上皮钠通道阻断剂与以下物质的组合：渗透剂(高张生理盐水、葡聚糖、甘露糖、木糖醇)、野生型和突变型CFTR功能调节剂(修正剂或增强剂)(例如在WO 2007/021982、WO 2006/099256、WO 2006/127588、WO 2004/080972、WO 2005/026137、WO 2005/035514、WO 2005/075435、WO 2004/111014、WO 2006/101740、WO 2004/110352、WO 2005/120497和US 2005/0176761中所述那些)、抗炎药、支气管扩张药、抗组胺药、镇咳药、抗生素或DNA酶药物，所述上皮钠通道阻断剂和所述药物是在相同或不同的药物组合物中。

适合的CFTR功能调节剂包括CFTR增强剂，特别是下式的化合物VX-770

适合的抗生素包括大环内酯类抗生素，例如妥布霉素(TOBI^TM)。

适合的DNA酶药物包括阿法链道酶(Pulmozyme^TM)、高度纯化的重组人脱氧核糖核酸酶I(rh DNase)溶液，其选择性的裂解DNA。阿法链道酶是用于治疗囊性纤维化。

其它上皮钠通道阻断剂与抗炎药物的有用的组合是那些与趋化因子受体拮抗剂的组合，所述趋化因子受体例如CCR-1、CCR-2、CCR-3、CCR-4、CCR-5、CCR-6、CCR-7、CCR-8、CCR-9和CCR10、CXCR1、CXCR2、CXCR3、CXCR4、CXCR5，特别是CCR-5拮抗剂，例如先灵-葆雅公司的拮抗剂SC-351125、SCH-55700和SCH-D；武田公司的拮抗剂，例如N-[[4-[[[6,7-二氢-2-(4-甲基-苯基)-5H-苯并-环庚烯-8-基]羰基]氨基]苯基]-甲基]四氢-N,N-二甲基-2H-吡喃-4-氯化铵(TAK-770)；和CCR-5拮抗剂，如USP 6,166,037(特别是权利要求18和19)、WO 00/66558(特别是权利要求8)、WO 00/66559(特别是权利要求9)、WO 04/018425和WO 04/026873中所述。

适合的抗炎药物包括甾类，具体而言，糖皮质激素，例如布地奈德、丙酸倍氯米松、丙酸氟替卡松、环索奈德或糠酸莫米松，或者甾类，如WO 02/88167、WO 02/12266、WO 02/100879、WO 02/00679(尤其是在实施例3、11、14、17、19、26、34、37、39、51、60、67、72、73、90、99和101中的那些)、WO 03/35668、WO 03/48181、WO 03/62259、WO03/64445、WO 03/72592、WO 04/39827和WO 04/66920中所述；非甾类糖皮质激素受体激动剂，如DE 10261874、WO 00/00531、WO 02/10143、WO 03/82280、WO 03/82787、WO 03/86294、WO 03/104195、WO03/101932、WO 04/05229、WO 04/18429、WO 04/19935和WO 04/26248中所述的那些；LTD4拮抗剂，例如孟鲁司特和扎鲁司特；PDE4抑制剂，例如西洛司特(GlaxoSmithKline)、罗氟司特(Byk Gulden)、V-11294A(Napp)、BAY19-8004(Bayer)、SCH-351591(Schering-Plough)、阿罗茶碱(Almirall Prodesfarma)、PD189659/PD168787(Parke-Davis)、AWD-12-281(Asta Medica)、CDC-801(Celgene)、SelCID(TM)CC-10004(Celgene)、VM554/UM565(Vernalis)、T-440(Tanabe)、KW-4490(KyowaHakko Kogyo)，和在WO 92/19594、WO 93/19749、WO 93/19750、WO93/19751、WO 98/18796、WO 99/16766、WO 01/13953、WO 03/104204、WO 03/104205、WO 03/39544、WO 04/000814、WO 04/000839、WO 04/005258、WO 04/018450、WO 04/018451、WO 04/018457、WO 04/018465、WO 04/018431、WO 04/018449、WO 04/018450、WO04/018451、WO 04/018457、WO 04/018465、WO 04/019944、WO 04/019945、WO 04/045607和WO 04/037805中所述的那些；腺苷A2B受体拮抗剂，如WO 02/42298中所述的那些；以及β-2肾上腺受体激动剂，例如沙丁胺醇(舒喘灵)、奥西那林、特布他林、沙美特罗、非诺特罗、丙卡特罗，以及尤其是福莫特罗、卡莫特罗及其药学上可接受的盐，和WO 0075114的式(I)化合物(游离或盐或溶剂化物形式)，该文献引入本文作为参考，优选其实施例的化合物，尤其是下式化合物：

与茚达特罗及其药学上可接受的盐相对应，以及WO 04/16601的式(I)化合物(游离或盐或溶剂化物形式)，和EP 1440966、JP 05025045、WO 93/18007、WO 99/64035、USP 2002/0055651、WO 01/42193、WO 01/83462、WO02/66422、WO 02/70490、WO 02/76933、WO 03/24439、WO 03/42160、WO 03/42164、WO 03/72539、WO 03/91204、WO 03/99764、WO 04/16578、WO 04/22547、WO 04/32921、WO 04/33412、WO 04/37768、WO 04/37773、WO 04/37807、WO 04/39762、WO 04/39766、WO 04/45618、WO 04/46083、WO 04/80964、WO 04/108765和WO 04/108676中的化合物。

适合的支气管扩张药包括抗胆碱能药或抗毒蕈碱药，尤其是异丙托溴铵、氧托溴铵、噻托溴铵盐和CHF 4226(Chiesi)，以及格隆溴铵，还有如EP 424021、USP 3,714,357、USP 5,171,744、WO 01/04118、WO 02/00652、WO 02/51841、WO 02/53564、WO 03/00840、WO 03/33495、WO 03/53966、WO 03/87094、WO 04/018422和WO 04/05285中所述的那些。

适合的双重抗炎及支气管扩张药包括双重β-2肾上腺受体激动剂/毒蕈碱拮抗剂，如USP 2004/0167167、WO 04/74246和WO 04/74812中所公开的那些。

适合的抗组胺药物包括盐酸西替利嗪、醋氨酚、富马酸氯马斯汀、异丙嗪、氯雷他定、地氯雷他定、苯海拉明和盐酸非索非那定、阿伐斯汀、阿司咪唑、氮卓斯汀、依巴斯汀、依匹斯汀、咪唑斯汀和特非那定，以及JP 2004107299、WO 03/099807和WO 04/026841中公开的那些。

如本文所用的术语“药学上可接受的载体”包括任何和全部的溶剂、分散介质、包衣、表面活性剂、抗氧化剂、防腐剂(例如抗菌剂、抗真菌剂)、等渗剂、吸收延迟物质、盐类、防腐剂、药物、药物稳定剂、粘合剂、赋形剂、崩解剂、润滑剂、增甜剂、矫味剂、染料等及其组合，如本领域技术人员已知(参见例如Remington's Pharmaceutical Sciences,第18版.Mack Printing Company,1990,pp.1289-1329)。除了任何与活性成分不相容的常规载体外，其在治疗组合物或药物组合物中的使用都是可考虑的。

术语本发明的晶形的“治疗有效量”是指导致个体的生物学或医学响应的本发明的晶形的量，所述生物学或医学响应例如降低或抑制酶或蛋白质活性，或缓解症状、减轻病症、减缓或延迟疾病发展，或预防疾病等。在一项非限定性的实施方案中，术语“治疗有效量”是指当向个体施用时，对以下情况是有效的本发明的晶形的量，即：(1)至少部分地减轻、抑制、预防和/或缓解病症、或障碍或疾病，其是(i)由上皮钠通道介导的，或(ii)与上皮钠通道活性相关联的，或(iii)通过上皮钠通道的活性(正常或异常)来表征的；或者(2)降低或抑制上皮钠通道的活性。在另一项非限定性的实施方案中，术语“治疗有效量”是指当向细胞、或组织、或非细胞生物物质、或介质施用时，对至少部分地降低或抑制上皮钠通道活性有效的本发明的晶形的量。

如本文所用的术语“个体”是指动物。通常该动物是哺乳动物。个体还指例如，灵长类(如人)、牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、兔、大鼠、小鼠、鱼、鸟类等。在某些实施方案中，该个体是灵长类。在其它实施方案中，该个体是人。

如本文所用的术语“抑制”是指减少或压抑既有病症、症状、或障碍、或疾病，或者生物学活性或进程中基线活性的显著降低。

如本文所用，术语任何疾病或障碍的“治疗”是指在一项实施方案中，缓解疾病或障碍(即，减缓或阻止或减少疾病或其至少一种临床症状的发展)。在另一项实施方案中，“治疗”是指减缓或缓和至少一种身体参数，包括那些可能未被患者识别的参数。在另一项实施方案中，“治疗”是指从身体上(例如稳定可识别的症状)、生理上(例如稳定身体参数)、或两者同时来调节疾病或障碍。在另一项实施方案中，“治疗”是指预防或延迟疾病或障碍的发作或发展或进展。

如本文所用的，如果该个体将从该治疗中在生物学、医学或在生活质量上受益，则个体是“需要”治疗的。

如本文所用的，除非在本文中另外指出或者与本文清楚地相矛盾以外，在本发明(尤其是在权利要求的全文中)的上下文中所用的术语“一种/一项(a/an)”“该(the)”及类似术语是解释为涵盖了单数和复数。

实验

一般条件：

采用电喷雾离子化在LCMS系统上运行质谱。这些是Agilent 1100HPLC/Micromass Platform质谱仪组合，或者Agilent 1200HPLC/Agilent6130Quadropole质谱仪组合，或者Waters Acquity UPLC与SQD质谱仪。[M+H]⁺是指单同位素的分子量。

NMR谱是在开放入口的Bruker AVANCE 400NMR波谱仪上采用ICON-NMR进行的。谱图是在298K测定并使用溶剂峰作为参照。由于其可交换共振的非常宽的性质，某些质子未被直接观察到。

如果没有另外指明，分析型HPLC条件如下文所述：

方法(i)

方法(ii)

方法2minLC_v003

缩写：

Br 宽的

d 双峰

DCM 二氯甲烷

DSC 差示扫描量热法

DMF N,N-二甲基甲酰胺

DMI 1,3-二甲基-2-咪唑烷酮

DMSO 二甲基亚砜

EDCI N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基碳二亚胺

EtOAc 乙酸乙酯

h 小时

HOBt 1-羟基苯并三唑

HPLC 高压液相色谱

LC-MS 液相色谱和质谱

MeOH 甲醇

MS 质谱

m 多重峰

2-meTHF 2-甲基四氢呋喃

min 分钟

ml 毫升

m/m 质质比

m/z 质荷比

NMR 核磁共振

iPrOH 异丙醇

ppm 百万分之

PS 聚合物支持的

PEAX PE-阴离子交换(例如来自Biotage 的

PE-AX柱)

Rt 保留时间

s 单峰

SCX-2 强阳离子交换(例如来自Biotage的

柱)

t 三重峰

TEA 三乙胺

TFA 三氟乙酸

THF 四氢呋喃

制备1:3-(3-{2-[(E)-3,5-二氨基-6-氯-吡嗪-2-羰基亚氨基]-1,3,8-三氮杂-螺[4.5]癸烷-8-羰基}-苯磺酰氨基)-丙酸二丙基氨基甲酰甲基酯

标题化合物可以通过方法A或B制备

方法A:

向搅拌的3-(2-二丙基氨基甲酰甲氧基羰基-乙基氨磺酰基)-苯甲酸(可以如制备2所述制备；6.1g,12.60mmol)的THF(50ml)溶液中连续地加入水(25ml)、N-甲基吗啉(7ml,63mmol)和HOBt水合物(2.9g,18.9mmol)。将内温保持在≤20℃。加入3,5-二氨基-6-氯-吡嗪-2-甲酸[1,3,8-三氮杂-螺[4.5]癸-(2E)-亚基]-酰胺盐酸盐(WO09/074575,实施例38,123页)(65％纯度,6.3g,12.6mmol)并搅拌直至形成澄清的溶液。加入EDCI.HCl(3.6g,18.9mmol)，并将反应在RT下搅拌24h。将2-MeTHF(200ml)和2％aq.Na₂CO₃(150ml)加入到反应混合物中。将各层分离，并将水相用另外的2-MeTHF(100ml)洗涤。将合并的有机层用2％aq.Na₂CO₃(200ml)和水(2x 200ml)洗涤。加入乙腈(100ml)，并将溶液在30℃下浓缩至70ml体积。加入乙腈(300ml)，并将溶液再在30℃下浓缩至150ml体积。将溶液加热至50℃并将马来酸(1.62g)加入到得到的溶液中。立即形成类白色沉淀物，历经1h将温度冷却至RT。通过过滤收集固体获得为马来酸盐的3-(3-{2-[(E)-3,5-二氨基-6-氯-吡嗪-2-羰基亚氨基]-1,3,8-三氮杂-螺[4.5]癸烷-8-羰基}-苯磺酰氨基)-丙酸二丙基氨基甲酰甲基酯；加入DCM(200ml)和2％aq.Na₂CO₃(200ml)并搅拌直至固体完全溶解。将有机层分离，用水(2x 100ml)洗涤并在真空下浓缩获得标题化合物。LC-MS 722.1[M+H]⁺,方法(i)；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.12-7.57(4H,br),7.88(1H,m),7.77(1H,m),7.70(1H,m),7.68(1H,m),7.05-6.50(2H,br s),6.95-6.20(1H,br s),4.73(2H,s),3.81-3.39(2H,m),3.61-3.31(2H,m),3.43(2H,br s),3.15-3.11(4H,m),3.04(2H,t),2.51(2H,t),1.79-1.69(m,4H),1.51-1.43(4H,m),0.84(3H,t),0.78(3H,t)

方法B:

向搅拌的3-(2-二丙基氨基甲酰甲氧基羰基-乙基氨磺酰基)-苯甲酸(Int.AA)(6.1g,12.60mmol)的THF(50ml)溶液中连续地加入水(25ml)、N-甲基吗啉(7ml,63mmol)和HOBt水合物(2.9g,18.9mmol)。将内温保持在≤20℃。加入3,5-二氨基-6-氯-吡嗪-2-甲酸[1,3,8-三氮杂-螺[4.5]癸-(2E)-亚基]-酰胺盐酸盐(WO09074575,Ex.38,123页)(65％纯度,6.3g,12.6mmol)并搅拌直至形成澄清的溶液。加入EDCI.HCl(3.6g,18.9mmol)，并将反应在RT下搅拌24h。将2-MeTHF(200ml)和2％aq.Na₂CO₃(150ml)加入到反应混合物中。将层分离，并将水相用另外的2-MeTHF(100ml)洗涤。将合并的有机层用2％aq.Na₂CO₃(200ml)和水(2x 200ml)洗涤。加入乙腈(100ml)，并将溶液在30℃下浓缩至体积为70ml。加入乙腈(300ml)，并将溶液再在30℃下浓缩至体积为150ml。将溶液加热至50℃并将马来酸(1.62g)加入到得到的溶液中。立即形成类白色沉淀物，历经1h将温度冷却至RT。通过过滤收集固体获得为马来酸盐的3-(3-{2-[(E)-3,5-二氨基-6-氯-吡嗪-2-羰基亚氨基]-1,3,8-三氮杂-螺[4.5]癸烷-8-羰基}-苯磺酰氨基)-丙酸二丙基氨基甲酰甲基酯；加入DCM(200ml)和2％aq.Na₂CO₃(200ml)并搅拌直至固体完全溶解。将有机层分离，用水(2x 100ml)洗涤并在真空下浓缩获得标题化合物。LC-MS 722.1[M+H]⁺,方法(i).；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.12-7.57(4H,br),7.88(1H,m),7.77(1H,m),7.70(1H,m),7.68(1H,m),7.05-6.50(2H,br s),6.95-6.20(1H,br s),4.73(2H,s),3.81-3.39(2H,m),3.61-3.31(2H,m),3.43(2H,br s),3.15-3.11(4H,m),3.04(2H,t),2.51(2H,t),1.79-1.69(m,4H),1.51-1.43(4H,m),0.84(3H,t),0.78(3H,t)

制备2：3-(2-二丙基氨基甲酰甲氧基羰基-乙基氨磺酰基)-苯甲酸

标题化合物可以通过方法A或B制备：

方法A:

步骤1:3-苄氧基羰基氨基-丙酸二丙基氨基甲酰甲基酯

向苄氧基羰基氨基-丙酸(22.3g,99.9mmol)的DMF(150ml)溶液中加入碳酸钾(19.3g,139.9mmol)。历经30min加入2-氯-N,N-二丙基-乙酰胺(17.7g,99.9mmol)，并将反应混合物加热至60℃并搅拌2.5h。将反应混合物冷却至RT并用水(500ml)稀释并用乙酸异丙酯(总计500ml)萃取。将合并的有机相用水(3x 200ml)洗涤，获得3-苄氧基羰基氨基-丙酸二丙基氨基甲酰甲基酯的乙酸异丙酯溶液，其没有进一步分离。LC-MS；365.2[M+H]⁺方法(i)

步骤2:3-氨基-丙酸二丙基氨基甲酰甲基酯三氟乙酸盐

将3-苄氧基羰基氨基-丙酸二丙基氨基甲酰甲基酯的乙酸异丙酯(33.2g,91.0mmol，在129.9g溶液总质量中)溶液用TFA(7.05ml,92.0mmol)处理，同时将内温保持在20℃，然后用10％Pd/C(3.3g,50％湿的)处理，并在H₂(3atm)气氛下搅拌3.5h获得3-氨基-丙酸二丙基氨基甲酰甲基酯三氟乙酸盐。该溶液没有分离直接用于下一反应。

步骤3:3-(2-二丙基氨基甲酰甲氧基羰基-乙基氨磺酰基)-苯甲酸苄基酯

将3-氨基-丙酸二丙基氨基甲酰甲基酯三氟乙酸盐(25.4g 73.8mmol)的乙酸异丙酯溶液冷却至0℃并用N-甲基吗啉(26.3g,221.5mmol)、水(40ml)和DMAP(90.4mg,0.74mmol)处理。加入3-氯磺酰基-苯甲酸苄基酯(24.1g,77.5mmol)的乙酸异丙酯(44ml)溶液，并将反应混合物在0-5℃下搅拌2h。将层分离并将有机相用饱和NaHCO₃水溶液(3x 26ml)洗涤，用水(10ml)稀释，用1N HCl溶液调节pH至6，并用盐水洗涤。将得到的溶液浓缩，得到3-(2-二丙基氨基甲酰甲氧基羰基-乙基氨磺酰基)-苯甲酸苄基酯的乙酸异丙酯溶液，其没有分离即用于进一步反应。LC-MS；[M+H]⁺505.1 方法(i)

步骤4:3-(2-二丙基氨基甲酰甲氧基羰基-乙基氨磺酰基)-苯甲酸的合成

将3-(2-二丙基氨基甲酰甲氧基羰基-乙基氨磺酰基)-苯甲酸苄基酯(5g,33.25mmol)的乙酸异丙酯溶液(82ml)用10％Pd/C(0.84g,50％湿的)处理，并在H₂(3atm)搅拌过夜。通过过滤除去催化剂。向滤液中加入10％Pd/C(1.68g,50％湿的)，并将反应在H₂(3atm)下搅拌18h。过滤除去催化剂并再加入10％Pd/C(1.68g,50％湿的)，并将反应在H₂(1atm)下搅拌18h。过滤除去催化剂并用乙酸异丙酯(20ml)洗涤。将合并的滤液在真空下浓缩并将庚烷加入到该溶液中，并在RT下搅拌2hr然后在-2℃下搅拌4h。通过过滤收集形成的固体并在真空、40℃下干燥，获得标题化合物；LC-MS；415.1[M+H]⁺,方法(i)。

方法B:

步骤1:3-叔丁氧基羰基氨基-丙酸二丙基氨基甲酰甲基酯

在60℃、N₂下，向搅拌的Boc-Beta-Ala-OH(40.0g,211mmol)的DMF(200ml)混悬液中加入碳酸钾(40.0g,289mmol)。向该混合物中加入2-氯-N,N-二丙基-乙酰胺(36.7g,207mmol)的DMF(75ml)溶液。将反应混合物在60℃下搅拌过夜。将反应冷却至RT，并用DCM(400ml)然后用水(500ml)稀释。将有机层分离并用盐水(200ml)洗涤，用MgSO₄干燥并在真空下浓缩，产生淡黄色油状物。向该油状物中加入正庚烷(500ml)(用于DMF的共沸)，将其在真空下浓缩获得标题化合物；LC-MS Rt 1.14mins；331.3[M+H]⁺,方法2minLC_v003。

步骤2:3-氨基-丙酸二丙基氨基甲酰甲基酯

在N₂下，向冷却的搅拌的3-叔丁氧基羰基氨基-丙酸二丙基氨基甲酰甲基酯(步骤1)(36.5g,110mmol)的干燥二氧六环溶液中滴加4N HCl的二氧六环溶液(18.12ml,597mmol)。将得到的混合物升温至RT并搅拌过夜。真空下除去溶剂并将粗产物混悬在EtOAc(500ml)中并超声1h。将得到的白色沉淀物通过过滤分离并在真空、40℃下干燥1h，获得淡黄色固体。从EtOAc中重结晶获得标题化合物；LC-MS Rt 0.77mins；231.2[M+H]⁺,方法2minLC_v003。

步骤3:3-(2-二丙基氨基甲酰甲氧基羰基-乙基氨磺酰基)-苯甲酸

在0℃、N₂下，向搅拌的3-氨基-丙酸二丙基氨基甲酰甲基酯(步骤2)(20.1g,75mmol)的DCM(240ml)溶液中加入DMAP(0.46g,3.76mmol)，然后加入TEA(38.8ml,278mmol)。将反应混合物用3-氯磺酰基苯甲酸(16.6g,75mmol)的DCM(200ml)溶液处理。将混合物在0℃下搅拌1h，然后升温至RT持续1h。加入水(200ml)并用1N HCl(100ml)调节pH。将有机层分离，用MgSO₄干燥并在真空下浓缩。通过C18反相色谱法纯化，用MeCN/水(1％HCl)洗脱获得标题产物；LC-MS Rt 1.01mins；415.2[M+H]⁺,方法2minLC_v003。

实施例1:3-(3-{2-[(E)-3,5-二氨基-6-氯-吡嗪-2-羰基亚氨基]-1,3,8-三氮杂-螺[4.5]癸烷-8-羰基}-苯磺酰氨基)-丙酸二丙基氨基甲酰甲基酯琥珀酸盐：晶形A的制备

在50℃下，将2.5g的3-(3-{2-[(E)-3,5-二氨基-6-氯-吡嗪-2-羰基亚氨基]-1,3,8-三氮杂-螺[4.5]癸烷-8-羰基}-苯磺酰氨基)-丙酸二丙基氨基甲酰甲基酯(可以如制备1所述制备；3.47mmol)溶解在25mL乙腈和1.5mL水中。加入409mg琥珀酸(3.47mmol)。该酸立即溶解并历经30分钟将澄清的溶液冷却至室温。大约在30℃时发生结晶，然后将该浆体在室温下搅拌大约16h。过滤收集晶体。将滤饼用9ml乙腈/水95:5v/v分次洗涤，并在50℃、在约10mbar下干燥16h。

实施例2:3-(3-{2-[(E)-3,5-二氨基-6-氯-吡嗪-2-羰基亚氨基]-1,3,8-三氮杂-螺[4.5]癸烷-8-羰基}-苯磺酰氨基)-丙酸二丙基氨基甲酰甲基酯琥珀酸盐:晶形A的制备

将包含琥珀酸(0.50g,4.23mmol)和丙酮(20g)的混合物加热至45℃直至形成澄清的溶液，然后过滤(0.2μm PTFE过滤器)。

在第二个反应管中，将3-(3-{2-[(E)-3,5-二氨基-6-氯-吡嗪-2-羰基亚氨基]-1,3,8-三氮杂-螺[4.5]癸烷-8-羰基}-苯磺酰氨基)-丙酸二丙基氨基甲酰甲基酯(制备1,方法B)(3.00g,4.16mmol)和丙酮(30g)加热至45℃直至形成澄清的溶液，然后过滤(0.2μm PTFE过滤器)。

将琥珀酸(0.50g,4.23mmol)的丙酮溶液(20ml)在45℃下加热1h并用一部分3-(3-{2-[(E)-3,5-二氨基-6-氯-吡嗪-2-羰基亚氨基]-1,3,8-三氮杂-螺[4.5]癸烷-8-羰基}-苯磺酰氨基)-丙酸二丙基氨基甲酰甲基酯的丙酮溶液(1.62g溶液)处理10min。将得到的混合物用3-(3-{2-[(E)-3,5-二氨基-6-氯-吡嗪-2-羰基亚氨基]-1,3,8-三氮杂-螺[4.5]癸烷-8-羰基}-苯磺酰氨基)-丙酸二丙基氨基甲酰甲基酯琥珀酸盐(采用实施例1的制备方法制备,20mg)的晶种的丙酮(300mg)混悬液处理，并在45℃下搅拌30min。将剩下的3-(3-{2-[(E)-3,5-二氨基-6-氯-吡嗪-2-羰基亚氨基]-1,3,8-三氮杂-螺[4.5]癸烷-8-羰基}-苯磺酰氨基)-丙酸二丙基氨基甲酰甲基酯的丙酮溶液(31.38g)历经5h加入到混合物中并在45℃下持续加热1h。将混悬液历经1h冷却至25℃并再搅拌1h。将混悬液通过玻璃料(glass frit)过滤并将滤饼用丙酮(2x 5g)洗涤。将滤饼在50℃下干燥获得标题化合物；HPLC Rt 4.02min,方法ii；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.87(1H,m),7.78(1H,m),7.69(1H,m),7.68(1H,m),6.85(2H,br s),4.73(2H,s),3.84-3.20(6H和水,br驼峰),3.17-3.09(4H,m),3.04(2H,t),2.53(2H,在DMSO下),2.39(4H,s),1.80(2H,br s),1.70(2H,br s),1.55-1.37(4H,m),0.85(3H,t),0.78(3H,t)(请注意：由于可交换共振的非常宽的性质，没有直接观察到两个可交换的琥珀酸盐质子和3-4个酸性NH共振；熔化温度T_m(DSC)＝149℃。

实施例3:3-(3-{2-[(E)-3,5-二氨基-6-氯-吡嗪-2-羰基亚氨基]-1,3,8-三氮杂-螺[4.5]癸烷-8-羰基}-苯磺酰氨基)-丙酸二丙基氨基甲酰甲基酯琥珀酸盐:晶形A的制备

将3g的3-(3-{2-[(E)-3,5-二氨基-6-氯-吡嗪-2-羰基亚氨基]-1,3,8-三氮杂-螺[4.5]癸烷-8-羰基}-苯磺酰氨基)-丙酸二丙基氨基甲酰甲基酯琥珀酸盐(可以如实施例1或2所示制备)装载到配置有锚式搅拌器(150rpm)、冷凝器、定量加料单元(dosing unit)和浊度探针的100ml反应器中。加入20g的丙酮/水混合物(92.5/7.5m/m)，并整体加热至50C并搅拌直至全部溶解。然后将反应混合物冷却至45C。加入混悬在300mg丙酮的30mg的晶种(可以如实施例1或2所示制备)。然后将反应混合物历经1小时冷却至25C。整体搅拌3.5小时。然后历经2小时加入28ml EtOAc。将反应混合物历经1小时进一步冷却至0C，然后整体搅拌过夜。将反应混合物通过玻璃料过滤，然后将得到的固体用5ml丙酮洗涤两次，并在40C、1mbar下干燥24小时。

实施例4:3-(3-{2-[(E)-3,5-二氨基-6-氯-吡嗪-2-羰基亚氨基]-1,3,8-三氮杂-螺[4.5]癸烷-8-羰基}-苯磺酰氨基)-丙酸二丙基氨基甲酰甲基酯琥珀酸盐:晶形B的制备

在50℃、配置有锚式搅拌器(150rpm)的100mL玻璃反应器中，将3g的3-(3-{2-[(E)-3,5-二氨基-6-氯-吡嗪-2-羰基亚氨基]-1,3,8-三氮杂-螺[4.5]癸烷-8-羰基}-苯磺酰氨基)-丙酸二丙基氨基甲酰甲基酯(可以如制备1所述制备)溶解在22.7g的丙酮中。将5mL的琥珀酸溶液(2.94重量％在丙酮中)加入到反应器中。将10mg的3-(3-{2-[(E)-3,5-二氨基-6-氯-吡嗪-2-羰基亚氨基]-1,3,8-三氮杂-螺[4.5]癸烷-8-羰基}-苯磺酰氨基)-丙酸二丙基氨基甲酰甲基酯琥珀酸盐，晶形A(可以如实施例1或2制备)混悬在0.2g丙酮中，超声，并加入到反应器中。历经20h将另外的40mL的琥珀酸溶液(2.94重量％在丙酮中)缓慢滴加入到反应器中。然后，将混合物冷却至20℃并进一步搅拌19h。将得到的混合物过滤并将滤饼用10g丙酮在室温下洗涤两次。

实施例5:3-(3-{2-[(E)-3,5-二氨基-6-氯-吡嗪-2-羰基亚氨基]-1,3,8-三氮杂-螺[4.5]癸烷-8-羰基}-苯磺酰氨基)-丙酸二丙基氨基甲酰甲基酯琥珀酸盐:晶形B的制备

在50℃、配置有锚式搅拌器(150rpm)的100mL玻璃反应器中，将3g的3-(3-{2-[(E)-3,5-二氨基-6-氯-吡嗪-2-羰基亚氨基]-1,3,8-三氮杂-螺[4.5]癸烷-8-羰基}-苯磺酰氨基)-丙酸二丙基氨基甲酰甲基酯(可以如制备1所述制备)和0.5g琥珀酸溶解在28.5g丙酮和1.5g水的混合物中。之后，将溶液冷却至20℃。将7mg的3-(3-{2-[(E)-3,5-二氨基-6-氯-吡嗪-2-羰基亚氨基]-1,3,8-三氮杂-螺[4.5]癸烷-8-羰基}-苯磺酰氨基)-丙酸二丙基氨基甲酰甲基酯琥珀酸盐，晶形A(可以如实施例1或2制备)混悬在0.18g丙酮/水95:5(v/v)中，超声并加入到反应器中。将混合物在20℃下搅拌15小时，然后在10min内冷却至0℃。将得到的混悬液过滤并将滤饼在室温下用10g丙酮/水95/5(v/v)洗涤。

实施例6:3-(3-{2-[(E)-3,5-二氨基-6-氯-吡嗪-2-羰基亚氨基]-1,3,8-三氮杂-螺[4.5]癸烷-8-羰基}-苯磺酰氨基)-丙酸二丙基氨基甲酰甲基酯琥珀酸盐:晶形B的制备

在50℃下在磁力搅拌的玻璃瓶中，将0.536g的3-(3-{2-[(E)-3,5-二氨基-6-氯-吡嗪-2-羰基亚氨基]-1,3,8-三氮杂-螺[4.5]癸烷-8-羰基}-苯磺酰氨基)-丙酸二丙基氨基甲酰甲基酯(可以如制备1所述制备)和0.12g琥珀酸溶解在15.25g 2-丙醇中。将溶液冷却至20℃，然后在该温度下搅拌过夜。将得到混悬液过滤。

实施例7:3-(3-{2-[(E)-3,5-二氨基-6-氯-吡嗪-2-羰基亚氨基]-1,3,8-三氮杂-螺[4.5]癸烷-8-羰基}-苯磺酰氨基)-丙酸二丙基氨基甲酰甲基酯琥珀酸盐:晶形B的制备

在60℃下、磁力搅拌的玻璃瓶中，将0.535g的3-(3-{2-[(E)-3,5-二氨基-6-氯-吡嗪-2-羰基亚氨基]-1,3,8-三氮杂-螺[4.5]癸烷-8-羰基}-苯磺酰氨基)-丙酸二丙基氨基甲酰甲基酯(可以如制备1所述制备)和0.12g琥珀酸溶解在7.27g甲基乙基酮中，将该溶液冷却至20℃并在该温度下搅拌过夜。将得到混悬液过滤。

实施例8:3-(3-{2-[(E)-3,5-二氨基-6-氯-吡嗪-2-羰基亚氨基]-1,3,8-三氮杂-螺[4.5]癸烷-8-羰基}-苯磺酰氨基)-丙酸二丙基氨基甲酰甲基酯琥珀酸盐:晶形C的制备

在60℃、在配置有锚式搅拌器(150rpm)的100mL玻璃反应器中，将3g的3-(3-{2-[(E)-3,5-二氨基-6-氯-吡嗪-2-羰基亚氨基]-1,3,8-三氮杂-螺[4.5]癸烷-8-羰基}-苯磺酰氨基)-丙酸二丙基氨基甲酰甲基酯(可以如制备1所述制备)溶解在80.3g乙醇中。将25mL的琥珀酸溶液(2.94重量％在乙醇中)加入到所述溶液中，然后加入2.5g水。将得到的混合物冷却至30℃。将5mg的3-(3-{2-[(E)-3,5-二氨基-6-氯-吡嗪-2-羰基亚氨基]-1,3,8-三氮杂-螺[4.5]癸烷-8-羰基}-苯磺酰氨基)-丙酸二丙基氨基甲酰甲基酯琥珀酸盐的晶种晶形A(可以采用实施例1或2的制备方法制备)混悬在0.1g乙醇中，超声，并加入到反应器中。将得到的混合物搅拌96h(150rpm)。之后，通过过滤收集晶体。在40℃和30mbar下将滤饼干燥24小时。

实施例9:3-(3-{2-[(E)-3,5-二氨基-6-氯-吡嗪-2-羰基亚氨基]-1,3,8-三氮杂-螺[4.5]癸烷-8-羰基}-苯磺酰氨基)-丙酸二丙基氨基甲酰甲基酯琥珀酸盐:晶形C的制备

在玻璃瓶中、在50℃下，将1g的3-(3-{2-[(E)-3,5-二氨基-6-氯-吡嗪-2-羰基亚氨基]-1,3,8-三氮杂-螺[4.5]癸烷-8-羰基}-苯磺酰氨基)-丙酸二丙基氨基甲酰甲基酯(可以如制备1所述制备)和0.18g琥珀酸溶解在7.97g甲醇中。将溶液冷却至0℃然后在该温度下搅拌24小时。之后，通过过滤收集晶体并在60℃和1mbar下干燥3小时。得到类白色至微黄色的晶形C的晶体。

实施例10:3-(3-{2-[(E)-3,5-二氨基-6-氯-吡嗪-2-羰基亚氨基]-1,3,8-三氮杂-螺[4.5]癸烷-8-羰基}-苯磺酰氨基)-丙酸二丙基氨基甲酰甲基酯琥珀酸盐:晶形C的制备

10.1晶种的制备:

在配置有锚式搅拌器(150rpm)、冷凝器、定量加料单元和浊度探针的100ml反应器中，将6g的3-(3-{2-[(E)-3,5-二氨基-6-氯-吡嗪-2-羰基亚氨基]-1,3,8-三氮杂-螺[4.5]癸烷-8-羰基}-苯磺酰氨基)-丙酸二丙基氨基甲酰甲基酯琥珀酸盐(可以如实施例1或2所示制备)混悬在27g的丙酮/水混合物(92.5/7.5m/m)中。将该混悬液加热至50C直至物质溶解。加入已超声5分钟的40mg的3-(3-{2-[(E)-3,5-二氨基-6-氯-吡嗪-2-羰基亚氨基]-1,3,8-三氮杂-螺[4.5]癸烷-8-羰基}-苯磺酰氨基)-丙酸二丙基氨基甲酰甲基酯琥珀酸盐(如实施例9所示制备)的600mg丙酮溶液，并将整个混合物搅拌6小时。历经4小时加入76ml的EtOAc，然后将反应混合物历经2小时冷却至25C。过滤沉淀并用10ml丙酮洗涤两次，然后在60C、10mbar下干燥过夜。然后将得到的固体用螺旋气流磨在5bar微粉化。

10.2晶形C的制备：

将3g的3-(3-{2-[(E)-3,5-二氨基-6-氯-吡嗪-2-羰基亚氨基]-1,3,8-三氮杂-螺[4.5]癸烷-8-羰基}-苯磺酰氨基)-丙酸二丙基氨基甲酰甲基酯琥珀酸盐(可以如实施例1或2所示制备)装载到配置有锚式搅拌器(150rpm)、冷凝器、定量加料单元(dosing unit)和浊度探针的100ml反应器中。加入29.5g的丙酮/水混合物(92.5/7.5m/m)并将整个混合物加热至50C并搅拌直至全部溶解。加入混悬在300mg丙酮中的90mg的晶种(参见10.1)，并将整个混合物搅拌4小时。历经4小时加入38ml EtOAc并将反应混合物搅拌2小时，然后历经2小时冷却至25C。将整个混合物搅拌过夜，然后通过玻璃料过滤。然后将得到的固体用5ml丙酮洗涤两次，并在40C、10mbar下干燥24小时。

3-(3-{2-[(E)-3,5-二氨基-6-氯-吡嗪-2-羰基亚氨基]-1,3,8-三氮杂-螺[4.5]癸烷-8-羰基}-苯磺酰氨基)-丙酸二丙基氨基甲酰甲基酯琥珀酸盐的晶形的鉴定：

以反射模式记录所有X-射线粉末衍射图。

晶形A:

a)X-射线粉末衍射

a1)在采用CuKα辐射的Bruker^TMD8衍射仪上记录X-射线粉末衍射图。由此测定的实施例3的X-射线衍射图显示在图1中，并且通过最重要线的反射线表示在下面的表1中。2-θ角的误差极限为±0.2°。

表1

a2)在采用CuKα辐射的Bruker^TMD8衍射仪上记录X-射线粉末衍射图。由此对实施例1或2测定的X-射线衍射图显示在图4中，并且通过最重要线的反射线表示在下面的表2中。2-θ角的误差极限为±0.2°。

表2

b)元素分析:

水含量(Karl Fischer滴定):<0.2％m/m表3

实验数据与由3-(3-{2-[(E)-3,5-二氨基-6-氯-吡嗪-2-羰基亚氨基]-1,3,8-三氮杂-螺[4.5]癸烷-8-羰基}-苯磺酰氨基)-丙酸二丙基氨基甲酰甲基酯和琥珀酸形成的1:1盐的预期数据相对应。

c)示差扫描量热法(DSC):

DSC迹线在具有铝盘的Perkin Elmer Diamond DSC仪器(PerkinElmer,型号BO14-3018)上记录；加热速率20K/min,温度范围:30至250℃。

图2显示晶形A的DSC迹线。熔化吸热:T_{起始(onset)}＝153.6℃,ΔH＝76.8J/g。

图5显示晶形A的DSC迹线。熔化吸热:T_起始＝152.5℃,ΔH＝74.5J/g。

c)红外光谱法：

图3显示晶形A(实施例3)的红外光谱，并且其在Bruker Alpha仪器上以衰减全反射(ATR)方式记录。测量参数如下：范围400-4000cm^-1，分辨率2cm^-1，64次扫描，速率7.5kHz，切趾法:Blackman-Harris 3-term。鉴定的主峰是1621.5cm^-1、1157.5cm^-1和1080.7cm^-1。

晶形B:

X-射线粉末衍射:

X-射线粉末衍射图在采用CuKα辐射的Bruker^TMD8衍射仪上记录。由此测定的X-射线衍射图显示在图6中，并且通过最重要线的反射线表示在下面的表4中。2-θ角的误差极限为±0.2°。

表4

晶形C:

a)X-射线粉末衍射:

a1)X-射线粉末衍射图在采用CuKα辐射的Bruker^TMD8衍射仪上记录。由此测定的X-射线衍射图显示在图7中，并且通过最重要线的反射线表示在下面的表5中。2-θ角的误差极限为±0.2°。

表5

a2)X-射线粉末衍射图在采用CuKα辐射的Bruker^TMD8衍射仪上记录。由此对实施例8或9测定的X-射线衍射图显示在图10中，并且通过最重要线的反射线表示在下面的表6中。2-θ角的误差极限为±0.2°。

表6

在记录XRPD数据期间的实验室温度在21至26℃。

b)示差扫描量热法(DSC):

图8显示晶形C(实施例10)的DSC迹线。熔化吸热:T_起始＝165.7℃,ΔH＝102.2J/g。

图11显示晶形C(实施例8、9)的DSC迹线。熔化吸热:T_起始＝159.7℃,ΔH＝91.8J/g。

c)红外光谱法：

图9显示晶形C(实施例10)的红外光谱，并且其在Bruker Alpha仪器上以衰减全反射(ATR)方式记录。测量参数如下:范围400-4000cm^-1,分辨率2cm^-1，64次扫描，速率7.5kHz，切趾法:Blackman-Harris 3-term。鉴定的主峰为1626.5cm^-1、1155cm^-1和1084.7cm^-1。

Claims

1.下式的3-(3-{2-[(E)-3,5-二氨基-6-氯-吡嗪-2-羰基亚氨基]-1,3,8-三氮杂-螺[4.5]癸烷-8-羰基}-苯磺酰氨基)-丙酸二丙基氨基甲酰甲基酯琥珀酸盐的晶形，其包含晶形C

2.根据权利要求1所述的晶形，其基本上由晶形C组成。

3.根据权利要求1或2所述的晶形，其中所述晶形C是基本纯形式的。

4.根据权利要求1至3中任何一项所述的晶形，其由在21-26℃温度的包含4个或更多个2-θ值的x-射线粉末衍射图表征，所述2-θ值选自7.0°±0.2、10.6°±0.2、14.3°±0.2、18.2°±0.2、18.6°±0.2、19.2°±0.2、21.2°±0.2、21.8°±0.2、24.7°±0.2、29.0°±0.2和31.5°±0.2。

5.根据权利要求1至3中任何一项所述的晶形，其由在21-26℃温度的包含6个或更多个2-θ值的x-射线粉末衍射图表征，所述2-θ值选自7.0°±0.2、10.6°±0.2、14.3°±0.2、18.2°±0.2、18.6°±0.2、19.2°±0.2、21.2°±0.2、21.8°±0.2、24.7°±0.2、29.0°±0.2和31.5°±0.2。

6.根据权利要求1所述的晶形，其中x-射线粉末衍射图基本上与图7中所示的x-射线粉末衍射图相同。

7.根据权利要求1所述的晶形，其中示差扫描量热法温度记录图基本上与图8所示的相同。

8.药物组合物，其包含根据权利要求1至7中任何一项所述的晶形和药学上可接受的载体或稀释剂。

9.根据权利要求8所述的药物组合物以及一种或多种其它活性成分。

10.根据权利要求8或9所述的药物组合物，其是可吸入形式的。

11.根据权利要求1至7中任何一项所述的晶形，其用于治疗呼吸系统疾病，例如囊性纤维化、原发性纤毛运动障碍、慢性支气管炎、慢性阻塞性肺病(COPD)、哮喘、呼吸道感染(急性和慢性；病毒性和细菌性)和肺癌。

12.根据权利要求1至7中任何一项所述的晶形在制备用于治疗呼吸系统疾病例如囊性纤维化、原发性纤毛运动障碍、慢性支气管炎、慢性阻塞性肺病(COPD)、哮喘、呼吸道感染(急性和慢性；病毒性和细菌性)和肺癌的药物中的用途。

13.治疗呼吸系统疾病例如囊性纤维化、原发性纤毛运动障碍、慢性支气管炎、慢性阻塞性肺病(COPD)、哮喘、呼吸道感染(急性和慢性；病毒性和细菌性)和肺癌的方法，其包括向有其需要的患者施用有效量的根据权利要求1至7中任何一项所述的晶形。

14.吸入装置，其含有并适于通过肺施用递送根据权利要求1至7中任何一项所述的晶形。