CN104045743A

CN104045743A - 一种精品达肝素钠的制备方法

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Publication number: CN104045743A
Application number: CN201410289479.5A
Authority: CN
Inventors: 周翔; 金晶; 叶鸿萍
Original assignee: CHANGZHOU QIANHONG BIOPHARMA Co Ltd
Current assignee: CHANGZHOU QIANHONG BIOPHARMA Co Ltd
Priority date: 2014-06-26
Filing date: 2014-06-26
Publication date: 2014-09-17
Anticipated expiration: 2034-06-26
Also published as: CN104045743B

Abstract

本发明涉及一种精品达肝素钠的制备方法，包括：①降解：将肝素钠溶解，调节pH，加入亚硝酸钠，搅拌；②还原：加入氢氧化物溶液至终止降解反应，再加入硼氢化钠还原，调节pH；③酒精沉淀：用酒精依次进行一次酒精沉淀和二次酒精沉淀，得二次酒精沉淀溶解液；④超滤：将二次酒精沉淀溶解液用截留分子量为10000的超滤膜进行超滤，在内液浓缩到原体积的45％时，停止超滤；⑤除菌；⑥冻干。采用本发明方法得到的达肝素钠，其质量明显高于EP现行版药典标准，且肝素收率明显提高，方法简单易行。此外，该方法生产用时少，条件温和，成本低，适宜工业化生产，具有重要的应用前景。

Description

一种精品达肝素钠的制备方法

技术领域

本发明涉及医药和化学领域中的一种药用化学药品的制备，具体涉及一种高质量的精品达肝素钠的制备方法。

背景技术

达特肝素钠是一种低分子肝素钠盐，达特肝素钠为低分子量的肝素，适用于血液透析的预防凝血和深静脉血栓的治疗；不稳定型冠状动脉疾病；预防与手术有关的血栓形成。于1996年被FDA批准用于预防进行了髋关节置换术或进行了腹腔手术患者深度静脉栓塞的发生。也用于与阿司匹林同时应用，以预防不稳定型心绞痛患者局部缺血性心脏并发症和非Q波心肌梗塞的发作。临床研究的数据显示，达特肝素对老年患者的疗效及安全性与年轻患者无总体差别。

与普通肝素比，达特肝素在药理学和药代动力学方面都有诸多优势，包括：可预测抗凝效果；高生物利用度和长的血浆半衰期；每日皮下注射1～2次，根据体重计算的恒定剂量，无需监测；剂量可靠，安全性好等。

目前国内在达特肝素钠的纯化技术上主要有离子交换层析法，分子排阻法，以及超滤等方法。离子交换层析与分子排阻法得到的达特肝素钠虽然产品质量较高，但操作步骤繁琐，纯化周期长，成本高，仅适用于少量的达特肝素钠进行纯化，无法实现工业化生产。

发明内容

本发明的目的是提供一种精品达肝素钠的制备方法，采用本发明方法得到的达肝素钠精品，其质量明显高于EP现行版药典标准，且肝素收率明显提高，方法简单易行。此外，该方法生产用时少，条件温和，成本低，适宜工业化生产，具有重要的应用前景。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现：

一种精品达肝素钠的制备方法，该制备方法包括以下步骤：

①降解：将肝素钠溶解并降解，得到肝素钠降解液；

②还原：将肝素钠降解液用还原剂进行还原，得到还原液；

③酒精沉淀：

S1：按还原液的重量∶酒精体积＝1∶0.5～1的比例加入酒精，在温度0～30℃下搅拌，静置，收集沉淀物得到一次沉淀物；

S2：用注射用水将S1中所收集的一次沉淀物溶解，此溶液即为一次酒精沉淀溶解液；

S3：按S2中所用注射用水体积∶酒精体积＝1∶0.5～1的比例向一次酒精沉淀溶解液中加入酒精，在温度0～30℃下搅拌，静止，收集沉淀物得到二次沉淀物；

S4：用注射用水将S3中所收集的二次沉淀物溶解，此溶液即为二次酒精沉淀溶解液；

④超滤：将二次酒精沉淀溶解液用截留分子量为10000的超滤膜进行超滤，控制超滤机进口压力不超过0.2Mpa，出口压力不超过0.15Mpa；

在内液浓缩到大于原体积的70％，且小于原体积的90％时，控制超滤机进口压力在0.3～0.4Mpa，出口压力在0.25Mpa～0.35Mpa；

在内液浓缩到大于原体积的50％，小于原体积的70％时，控制超滤机进口压力在0.4～0.5Mpa；

在内液浓缩到原体积的45％时，停止超滤；

⑤除菌：将停止超滤后的超滤内液进行除菌处理；

⑥冻干：将超滤内液在-40～-30℃下冻干，得到精品达肝素钠。

进一步优选地，步骤①中所述的降解的具体方法为：用注射用水将肝素钠全部溶解，调节PH至2.0～6.0，在31～70℃下加入亚硝酸钠，该亚硝酸钠为肝素钠重量的0.5～1％，室温搅拌，得到肝素钠降解液。

进一步优选地，步骤①中用注射用水将肝素钠全部溶解后用盐酸或醋酸调节PH至3.1～6.0。

进一步优选地，步骤②中所述的还原方法为：向肝素钠降解液中加入氢氧化钠或氢氧化钾溶液至pH为7.2～11.5终止降解反应，再加入还原剂还原2～4小时，然后调节PH至6.0～8.0，即得到还原液，所述还原剂的量为肝素钠重量的1～5％，该还原剂为硼氢化钠或亚硫酸氢钠。

进一步优选地，所述还原剂为硼氢化钠。

进一步优选地，优选向肝素钠降解液中加入氢氧化钠溶液至pH为7.2～11.5终止降解反应。

进一步优选地，步骤③中的S3中所述的注射用水体积∶酒精体积＝1∶0.5～0.7。

进一步优选地，步骤⑤中所述的除菌处理为除菌过滤。

本发明提供了一种精品达肝素钠的制备方法，其主要具有的有益效果为：

本发明通过两次酒精沉淀再采用截留量为10000的超滤膜进行纯化得到了完全符合使用要求的高质量高纯度的达肝素钠，其成品质量明显高于EP现行版药典标准，且肝素收率明显提高，方法简单易行。

此外，该方法生产用时少，条件温和，对设备要求低，成本低，方法中用到的多种化学药品均低于现有工业生产中的用量，非常适合应用于工业化生产中，具有重要的应用前景。

具体实施方式

本发明实施例所述的一种精品达肝素钠的制备方法，该制备方法包括以下步骤：①降解：用一定量的注射用水(即为重蒸馏水)将肝素钠溶解，常温搅拌直至全溶，即得溶解液，用盐酸或醋酸调节PH至2.0～6.0，优选调节至3.1～6.0，在温度为31～70℃下加入亚硝酸钠，该亚硝酸钠为肝素钠重量的0.5～1％，室温搅拌，得到肝素钠降解液；②还原：向肝素钠降解液中加入氢氧化钠溶液或氢氧化钾溶液至pH为7.2～11.5终止降解反应，优选氢氧化钠溶液；再加入硼氢化钠还原2～4小时，该硼氢化钠或亚硫酸氢钠的量为肝素钠重量的1～5％，优选硼氢化钠，并用氢氧化钠溶液或氢氧化钾溶液调节PH至6.0～8.0，即得到还原液；③酒精沉淀：S1：按还原液的重量(kg)∶酒精体积(L)＝1∶0.5～1的比例加入酒精，在温度0～30℃下搅拌，静置一段时间后，收集沉淀物得到一次沉淀物；S2：用注射用水将S1中所收集的一次沉淀物溶解，此溶液即为一次酒精沉淀溶解液；S3：按S2中所用注射用水体积(L)∶酒精体积(L)＝1∶0.5～1的比例向一次酒精沉淀溶解液中加入酒精，在温度0～30℃下搅拌，静止，收集沉淀物得到二次沉淀物；S4：用注射用水将S3中所收集的二次沉淀物溶解，此溶液即为二次酒精沉淀溶解液，上述所用的酒精优选为药用酒精；步骤S1和S3中优选注射用水体积(L)∶酒精体积(L)＝1∶0.5～0.7；④超滤：将二次酒精沉淀溶解液用截留分子量为10000的超滤膜进行超滤，控制超滤机进口压力不超过0.2Mpa，出口压力不超过0.15Mpa；在内液浓缩到大于原体积的70％，且小于原体积的90％时，控制超滤机进口压力在0.3～0.4Mpa，出口压力在0.25Mpa～0.35Mpa；在内液浓缩到大于原体积的50％，小于原体积的70％时，控制超滤机进口压力在0.4～0.5Mpa；在内液浓缩到原体积的45％时，停止超滤；⑤除菌：将停止超滤后的超滤内液进行除菌处理，该除菌处理优选为除菌过滤；⑥冻干：将超滤内液在-40～-30℃下冻干，得到精品达肝素钠。

下面以具体实验案例为例来说明具体实施方式，应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

实施例1

一种精品达肝素钠的制备方法：①向反应罐中加入精确称取30kg的肝素钠精品，再加入100L注射用水使其全溶，用1mol/L的醋酸调节PH至6.0，温度控制在70℃，加入150g亚硝酸钠，室温下搅拌反应5小时，得到肝素降解液。②向肝素降解液中加入适量氢氧化钠溶液调体系pH至8终止降解反应，再加入300g硼氢化钠还原2小时，反应结束后用适量氢氧化钠溶液将体系PH调至7.0，出料，即得到还原液。③按还原液的重量(kg)∶酒精体积(L)＝1∶0.5的比例在步骤②中的还原液中加入0.5倍量体积的酒精，在20℃下搅拌5小时后，静止1小时，收集得到一次沉淀物。④在上述的一次沉淀物中加入100L注射用水将沉淀物溶解，此溶液为一次酒精沉淀溶解液。⑤按步骤④中所用注射用水体积(L)∶酒精(L)＝1∶0.5的比例向步骤④中的一次酒精沉淀溶解液中加入50L酒精，在20℃下搅拌5小时后，静止1小时后，收集到沉淀物即为二次沉淀物。⑥在上述第⑤步二次沉淀物中加入100L注射用水将沉淀物溶解，此溶液为二次酒精沉淀溶解液。⑦将⑥中所述的第二次酒精沉淀溶解液用截留分子量为10000的超滤膜进行超滤，起始时控制超滤机进口压力不得超过0.2Mpa，出口压力不得超过0.15Mpa；当内液浓缩到大于原体积的70％，且小于原体积的90％时，控制超滤机进口压力在0.3～0.4Mpa，出口压力在0.25Mpa～0.35Mpa；当内液浓缩到大于原体积的50％，小于原体积的70％时，控制超滤机进口压力在0.4～0.5Mpa；当内液浓缩到原体积的45％时，停止超滤；再将内液进行除菌过滤即得到精品达肝素钠溶液。⑧将上述的精品达肝素钠溶液在-40～-30℃条件下冻干得到达肝素钠成品20kg。

实施例2

一种精品达肝素钠的制备方法：①向反应罐中加入精确称取30kg的肝素钠精品，再加入100L注射用水，常温搅拌直至全溶，即得溶解液；用1mol/L的醋酸调节PH至3.5，温度控制在70℃，加入170g亚硝酸钠，室温下搅拌反应4.5小时，得到肝素降解液。②向上述肝素降解液中加入适量氢氧化钾溶液调体系pH至8.5终止降解反应，再加入320g硼氢化钠还原2小时，反应结束后用适量氢氧化钾溶液将体系PH调至6.2，即得到还原液。③按还原液的重量(kg)∶酒精体积(L)＝1∶0.5的比例在步骤②中的还原液中加入0.5倍量体积的酒精，在25℃下搅拌4小时后，静止1小时，收集得到一次沉淀物。④在上述的一次沉淀物中加入100L注射用水将沉淀物溶解，此溶液为一次酒精沉淀溶解液。⑤按步骤④中所用注射用水体积(L)∶酒精(L)＝1∶0.5的比例向步骤④中的一次酒精沉淀溶解液中加入50L酒精，在25℃下搅拌4小时后，静止1小时后，收集到沉淀物即为二次沉淀物。⑥在上述第⑤步二次沉淀物中加入100L注射用水将沉淀物溶解，此溶液为二次酒精沉淀溶解液。⑦将⑥中所述的第二次酒精沉淀溶解液用截留分子量为10000的超滤膜进行超滤，起始时控制超滤机进口压力不得超过0.2Mpa，出口压力不得超过0.15Mpa；当内液浓缩到大于原体积的70％，且小于原体积的90％时，控制超滤机进口压力在0.3～0.4Mpa，出口压力在0.25Mpa～0.35Mpa；当内液浓缩到大于原体积的50％，小于原体积的70％时，控制超滤机进口压力在0.4～0.5Mpa；当内液浓缩到原体积的45％时，停止超滤；再将内液进行除菌过滤即得到精品达肝素钠溶液。⑧将上述的精品达肝素钠溶液在-40～-30℃条件下冻干得到达肝素钠成品20.4kg。

实施例3

一种精品达肝素钠的制备方法：①向反应罐中加入精确称取30kg的肝素钠精品，再加入100L注射用水，常温搅拌直至全溶，即得溶解液；用1mol/L的醋酸调节PH至2.5，温度控制在70℃，加入200g亚硝酸钠，室温下搅拌反应4.5小时，得到肝素降解液。②向上述肝素降解液中加入适量氢氧化钠溶液调体系pH至9.5终止降解反应，再加入400g硼氢化钠还原2小时，反应结束后用适量氢氧化钠溶液将体系PH调至6.8，即得到还原液。③按还原液的重量(kg)∶酒精体积(L)＝1∶0.6的比例在步骤②中的还原液中加入18L的酒精，在15℃下搅拌5小时后，静止1小时，收集得到一次沉淀物。④在上述的一次沉淀物中加入注射用水将沉淀物溶解，此溶液为一次酒精沉淀溶解液。⑤按步骤④中所用注射用水体积(L)∶酒精(L)＝1∶0.6的比例向步骤④中的一次酒精沉淀溶解液中加入48L酒精，在15℃下搅拌5小时后，静止1小时后，收集到沉淀物即为二次沉淀物。⑥在上述第⑤步二次沉淀物中加入100L注射用水将沉淀物溶解，此溶液为二次酒精沉淀溶解液。⑦将⑥中所述的第二次酒精沉淀溶解液用截留分子量为10000的超滤膜进行超滤，起始时控制超滤机进口压力不得超过0.2Mpa，出口压力不得超过0.15Mpa；当内液浓缩到大于原体积的70％，且小于原体积的90％时，控制超滤机进口压力在0.3～0.4Mpa，出口压力在0.25Mpa～0.35Mpa；当内液浓缩到大于原体积的50％，小于原体积的70％时，控制超滤机进口压力在0.4～0.5Mpa；当内液浓缩到原体积的45％时，停止超滤；再将内液进行除菌过滤即得到精品达肝素钠溶液。⑧将上述的精品达肝素钠溶液在-40～-30℃条件下冻干得到达肝素钠成品19.1kg。

实施例4

一种精品达肝素钠的制备方法：①向反应罐中加入精确称取30kg的肝素钠精品，再加入100L注射用水，全溶后用1mol/L的盐酸调节PH至5.0，温度控制在70℃，加入180g亚硝酸钠，室温下搅拌反应4小时，得到肝素降解液。②向肝素降解液中加入适量氢氧化钠溶液调体系pH至11.5终止降解反应，再加入380g硼氢化钠还原1.5小时，反应结束后用适量氢氧化钠溶液将体系PH调至6.0，即得到还原液。③在步骤②中的还原液中加入15L的酒精，在5℃下搅拌4小时后，静止1小时，收集得到一次沉淀物。④在上述的一次沉淀物中加入110L注射用水将沉淀物溶解，此溶液为一次酒精沉淀溶解液。⑤按步骤④中所用注射用水体积(L)∶酒精(L)＝1∶0.6的比例向步骤④中的一次酒精沉淀溶解液中加入60L酒精，在5℃下搅拌4小时后，静止1小时后，收集到沉淀物即为二次沉淀物。⑥在上述第⑤步二次沉淀物中加入100L注射用水将沉淀物溶解，此溶液为二次酒精沉淀溶解液。⑦将⑥中所述的第二次酒精沉淀溶解液用截留分子量为10000的超滤膜进行超滤，起始时控制超滤机进口压力不得超过0.2Mpa，出口压力不得超过0.15Mpa；当内液浓缩到大于原体积的70％，且小于原体积的90％时，控制超滤机进口压力在0.3～0.4Mpa，出口压力在0.25Mpa～0.35Mpa；当内液浓缩到大于原体积的50％，小于原体积的70％时，控制超滤机进口压力在0.4～0.5Mpa；当内液浓缩到原体积的45％时，停止超滤；再将内液进行除菌过滤即得到精品达肝素钠溶液。⑧将上述的精品达肝素钠溶液在-40～-30℃条件下冻干得到达肝素钠成品20.2kg。

实施例5

为了解决现有的达特肝素钠纯化技术的操作繁琐，成本高，不适宜大规模生产的问题，本发明采用超滤的方法进行纯化得到精品达肝素钠，其成品质量明显高于EP(European Pharmacopeia，欧洲药典)现行版药典标准，具体指标见下表。该达肝素钠的有效分子量含量高，抗Xa因子效价和抗II a因子效价分别为135IU/mg和52IU/mg，且其活性高，亚硝酸、硼以及钠等含量均在欧洲药典规定的范围内，该达肝素钠完全符合使用标准，且由以上实施例可知，其产率高，操作简单，生产用时少，成本低，非常适合应用于工业化生产中。

本发明不局限于上述最佳实施方式，任何人在本发明的启示下所作的有关本发明的任何修饰或变更，凡是具有与本申请相同或相近似的技术方案，均落在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种精品达肝素钠的制备方法，其特征在于：该制备方法包括以下步骤：

①降解：将肝素钠溶解并降解，得到肝素钠降解液；

②还原：将肝素钠降解液用还原剂进行还原，得到还原液；

③酒精沉淀：

在内液浓缩到原体积的45％时，停止超滤；

⑤除菌：将停止超滤后的超滤内液进行除菌处理；

2.根据权利要求1所述的精品达肝素钠的制备方法，其特征在于：步骤①中所述的降解的具体方法为：用注射用水将肝素钠全部溶解，调节PH至2.0～6.0，在31～70℃下加入亚硝酸钠，该亚硝酸钠为肝素钠重量的0.5～1％，室温搅拌，得到肝素钠降解液。

3.根据权利要求2所述的精品达肝素钠的制备方法，其特征在于：步骤①中用注射用水将肝素钠全部溶解后用盐酸或醋酸调节PH至3.1～6.0。

4.根据权利要求1所述的精品达肝素钠的制备方法，其特征在于：步骤②中所述的还原方法为：向肝素钠降解液中加入氢氧化钠或氢氧化钾溶液至pH为7.2～11.5终止降解反应，再加入还原剂还原2～4小时，然后调节PH至6.0～8.0，即得到还原液，所述还原剂的量为肝素钠重量的1～5％，该还原剂为硼氢化钠或亚硫酸氢钠。

5.根据权利要求4所述的精品达肝素钠的制备方法，其特征在于：所述还原剂为硼氢化钠。

6.根据权利要求4所述的精品达肝素钠的制备方法，其特征在于：用氢氧化钠溶液将肝素钠降解液的pH调节为7.2～11.5终止降解反应。

7.根据权利要求1所述的精品达肝素钠的制备方法，其特征在于：步骤③中的S3中所述的注射用水体积∶酒精体积＝1∶0.5～0.7。

8.根据权利要求1所述的精品达肝素钠的制备方法，其特征在于：步骤⑤中所述的除菌处理为除菌过滤。