CN104045744A

CN104045744A - 达肝素钠的制备方法

Info

Publication number: CN104045744A
Application number: CN201410289506.9A
Authority: CN
Inventors: 周翔; 金晶; 陶翎; 费清清
Original assignee: CHANGZHOU QIANHONG BIOPHARMA Co Ltd
Current assignee: CHANGZHOU QIANHONG BIOPHARMA Co Ltd
Priority date: 2014-06-26
Filing date: 2014-06-26
Publication date: 2014-09-17
Anticipated expiration: 2034-06-26
Also published as: CN104045744B

Abstract

本发明涉及一种达肝素钠的制备方法，包括：①肝素钠的降解：将肝素钠溶解并降解，得到降解液；②降解液的还原：将降解液加入硼氢化钠进行还原，得到降解还原液；③采用阴离子交换树脂进行层析，收集洗脱液；④向洗脱液中加入酒精进行沉淀；⑤除菌；⑥冻干后得到成品达肝素钠。该方法通过采用阴离子交换树脂层析等得到平均分子量分布范围符合要求，质量稳定可控，高纯度、高活性的达肝素钠产品，质量明显高于EP现行版药典标准；且该方法简单易行，自动化程度较高，操作便捷，收率高，具有重要的工业应用前景。

Description

达肝素钠的制备方法

技术领域

本发明涉及医药和化学领域中的一种药用化学药品的制备，具体涉及一种高质量高纯度的精品达肝素钠的制备方法。

背景技术

达特肝素钠是一种低分子肝素钠盐，适用于血液透析的预防凝血和深静脉血栓的治疗；不稳定型冠状动脉疾病；预防与手术有关的血栓形成。于1996年被FDA批准用于预防进行了髋关节置换术或进行了腹腔手术患者深度静脉栓塞的发生。也用于与阿司匹林同时应用，以预防不稳定型心绞痛患者局部缺血性心脏并发症和非Q波心肌梗塞的发作。临床研究的数据显示，达特肝素对老年患者的疗效及安全性与年轻患者无总体差别。

与普通肝素比，达特肝素在药理学和药代动力学方面都有诸多优势，包括：可预测抗凝效果；高生物利用度和长的血浆半衰期；每日皮下注射1～2次，根据体重计算的恒定剂量，无需监测；剂量可靠，安全性好等。

目前，国内有采用酒精分级沉淀、超滤膜分离、分子筛和凝胶过滤层析的方法来控制小分子肝素钠的分子量，酒精分级沉淀技术落后，超滤膜分离损失大量收率，分子筛效率低，凝胶吸附分离法代价昂贵，目前工艺得到的收率一般低于20％，且这些方法自动化程度低，不适合大规模生产，限制了产能的提升。

发明内容

本发明的目的是提供一种达肝素钠的制备方法，该方法通过采用阴离子交换树脂层析等得到平均分子量分布范围符合要求，质量稳定可控，高纯度、高活性的达肝素钠产品，质量明显高于EP现行版药典标准；且该方法简单易行，自动化程度较高，操作便捷，收率高，具有重要的工业应用前景。

本发明通过肝素钠经过降解、还原，还原液再采用阴离子交换树脂，分布洗脱收集液，得到平均分子量分布范围符合要求，质量稳定可控，高纯度、高活性的达肝素钠产品，质量明显高于EP现行版药典标准；该方法简单易行，自动化程度较高，操作便捷，为提升产能提供了有力保障，最重要的是其收率较高，在实际工业化生产中，将生产达肝素钠的收率从30％以下提高到50％以上，该制备达肝素钠的方法具有重要的工业应用前景。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现：

一种达肝素钠的制备方法，该制备方法包括以下步骤：

①肝素钠的降解：将肝素钠溶解，调节pH至酸性，然后加入亚硝酸钠，搅拌反应3～6小时，得到降解液；

②降解液的还原：将降解液的pH调节至中性，加入硼氢化钠，10℃～30℃搅拌反应0.5～1小时后升温至50℃～65℃继续搅拌24～48小时，得到降解还原液；

③阴离子交换层析调节分子量：采用阴离子交换树脂，按25-35mg低分子肝素钠/ml-resin上样，温度为室温，检测波长为UV215nm，上样结束后先用300～500mmol/L的氯化钠溶液洗涤，再用1～2mol/L的氯化钠溶液洗脱，洗脱终点为215nm紫外吸收降至基线平稳，收集洗脱液；

④酒精沉淀：向洗脱液中加入酒精在3～15℃下进行沉淀，静置过夜，弃去上清液，沉淀再加酒精进行脱水，弃去上清，得到沉淀，在沉淀中加入纯化水溶解，得溶解液；

⑤除菌：将步骤④中所述的溶解液进行除菌；

⑥冻干：在-40～-10下冻干，得到成品达肝素钠。

进一步优选地，步骤①中所述的肝素钠的降解过程为：将肝素钠溶解于是其10～30倍重量的纯化水中，再加入重量为肝素钠10％～20％的醋酸，调节pH至酸性，然后加入重量为肝素钠2％～5％的亚硝酸钠，在10℃～30℃下搅拌反应3～6小时，得到降解液。更进一步优选地，用醋酸将pH调节至3.5～6。

进一步优选地，上述亚硝酸钠的加入量为肝素钠重量的2％～2.3％。

进一步优选地，步骤②中将所述的降解液的pH调节至6.5～8。

进一步优选地，步骤②中硼氢化钠的加入量为肝素钠重量的0.5％～2％。

进一步优选地，步骤④中所述的洗脱液中加入体积为洗脱液2倍的酒精在5～8℃下进行沉淀。

进一步优选地，步骤⑤中所述的除菌为通过除菌膜进行除菌。

本发明提供了一种达肝素钠的制备方法，其主要具有的有益效果为：本发明通过肝素钠经过降解、还原，还原液再采用阴离子交换树脂，分布洗脱收集液，得到平均分子量分布范围符合要求，质量稳定可控，高纯度、高活性的精品达肝素钠产品，质量明显高于EP现行版药典标准；且本发明通过阴离子交换层析来控制低分子肝素钠的分子量，使得分子量能在1％以内精确控制；此外，该方法简单易行，自动化程度较高，操作便捷，为提升产能提供了有力保障，最重要的是其收率较高，在实际工业化生产中，将生产达肝素钠的收率从30％以下提高到50％以上，该制备达肝素钠的方法具有重要的工业应用前景。

具体实施方式

本发明实施例所述的一种达肝素钠的制备方法，下面以具体实验案例为例来说明具体实施方式，应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

实施例1

一种达肝素钠的制备方法：S1：肝素钠的降解：称取30kg肝素钠，溶解于10～30倍纯化水中，用醋酸将pH调节至3.5，加入0.6kg的亚硝酸钠，保温10℃～30℃搅拌反应3～6小时的降解液。S2：降解液的还原：将降解液的pH调至7，加入150的硼氢化钠，10℃～30℃搅拌反应0.5～1小时后升温至50℃～65℃继续搅拌24～48小时，得到降解还原液。S3：阴离子交换层析调节分子量：采用GE healthcare公司生产的Q Sepharose FF阴离子交换树脂，按25-35mg低分子肝素钠/mL-resin上样，温度为室温，检测波长为UV215nm，上样结束后先用300～500mmol/L的氯化钠溶液洗涤，再用1～2mol/L的氯化钠溶液洗脱，洗脱终点为215nm紫外吸收降至基线平稳，收集洗脱液。S4：酒精沉淀：向洗脱液中加入两倍体积的酒精进行沉淀，开启冷媒，静置过夜，第二天弃去上清液，沉淀再加一倍酒精进行脱水，弃去上清，加入一定量的纯化水溶解，得到溶解液。S5：除菌：将上述溶解液溶解液过除菌膜。S5：将除菌后的溶解液放入冰箱冻干，收得最终产品16.3kg。

实施例2

一种达肝素钠的制备方法：称取30kg肝素钠，溶解于10～30倍纯化水中，加入醋酸将pH调节至酸性，加入0.7kg的亚硝酸钠，保温10℃～30℃搅拌反应3～6小时的降解液；将降解液的pH调至6.7，加入170g的硼氢化钠，10℃～30℃搅拌反应0.5～1小时后升温至50℃～65℃继续搅拌24～48小时，得到降解还原液；然后采用GE healthcare公司生产的Q Sepharose FF阴离子交换树脂，按25-35mg低分子肝素钠/mL-resin上样，温度为室温，检测波长为UV215nm，上样结束后先用300～500mmol/L的氯化钠溶液洗涤，再用1～2mol/L的氯化钠溶液洗脱，洗脱终点为215nm紫外吸收降至基线平稳，收集洗脱液；再向洗脱液中加入两倍体积的酒精进行沉淀，开启冷媒，静置过夜，第二天弃去上清液，沉淀再加一倍酒精进行脱水，弃去上清，加入一定量的纯化水溶解，得到溶解液；将该溶解液溶解液过除菌膜；将除菌后的溶解液放入冰箱冻干，收得最终产品18.6kg。

实施例3

一种达肝素钠的制备方法：称取30kg肝素钠，溶解于10～30倍纯化水中，加入醋酸将pH调节至5，加入0.68kg的亚硝酸钠，保温10℃～30℃搅拌反应3～6小时的降解液；将降解液的pH调至7.3，加入200g的硼氢化钠，10℃～30℃搅拌反应0.5～1小时后升温至50℃～65℃继续搅拌24～48小时，得到降解还原液；然后采用GE healthcare公司生产的Q Sepharose FF阴离子交换树脂，按25-35mg低分子肝素钠/ml-resin上样，室温，检测波长为UV215nm，上样结束后先用300～500mmol/L的氯化钠溶液洗涤，再用1～2mol/L的氯化钠溶液洗脱，洗脱终点为215nm紫外吸收降至基线平稳，收集洗脱液；向洗脱液中加入两倍体积的酒精，在5℃下静置过夜，去上清液，沉淀再加一倍酒精，弃上清，沉淀用纯化水溶解，并将溶解液过除菌膜除菌，在-30℃下冻干，得16.1kg高纯度的达肝素钠。

实施例4

一种达肝素钠的制备方法：称取30kg肝素钠，溶解于10～30倍纯化水中，加入3～6kg的醋酸将pH调节至4，加入1kg的亚硝酸钠，保温10℃～30℃搅拌反应3～6小时的降解液；将降解液的pH调至7，加入500g的硼氢化钠，10℃～30℃搅拌反应0.5～1小时后升温至50℃～65℃继续搅拌24～48小时，得到降解还原液；然后采用GE healthcare公司生产的Q Sepharose FF阴离子交换树脂，按25-35mg低分子肝素钠/ml-resin上样，温度为室温，检测波长为UV215nm，上样结束后先用300～500mmol/L的氯化钠溶液洗涤，再用1～2mol/L的氯化钠溶液洗脱，洗脱终点为215nm紫外吸收降至基线平稳，收集洗脱液；再向洗脱液中加入两倍体积的酒精进行沉淀，开启冷媒，静置过夜，第二天弃去上清液，沉淀再加一倍酒精进行脱水，弃去上清，加入一定量的纯化水溶解，得到溶解液；将该溶解液溶解液过除菌膜；将除菌后的溶解液放入冰箱冻干，收得最终产品15.8kg。

实施例5

本发明创造了一种通过阴离子交换层析技术制备达肝素钠的工艺，肝素钠经过降解、还原，还原液再采用阴离子交换树脂，分布洗脱收集液，得到平均分子量分布范围符合要求，质量稳定可控，高纯度、高活性的达肝素钠产品，质量明显高于EP现行版药典标准(见下表)；该达肝素钠具有抗凝血、抗血栓、抗肿瘤、抗炎、抗过敏等作用和调节血脂的功效，广泛用于预防普通外科、神经外科的术前和术后的血栓形成，疗效显著。

本发明不局限于上述最佳实施方式，任何人在本发明的启示下所作的有关本发明的任何修饰或变更，凡是具有与本申请相同或相近似的技术方案，均落在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种达肝素钠的制备方法，其特征在于：该制备方法包括以下步骤：

③阴离子交换层析：采用阴离子交换树脂，按25-35mg低分子肝素钠上样，温度为室温，检测波长为UV215nm，上样结束后先用300～500mmol/L的氯化钠溶液洗涤，再用1～2mol/L的氯化钠溶液洗脱，洗脱终点为215nm紫外吸收降至基线平稳，收集洗脱液；

⑤除菌：将步骤④中所述的溶解液进行除菌；

⑥冻干：在-40～-10下冻干，得到成品达肝素钠。

2.根据权利要求1所述的达肝素钠的制备方法，其特征在于：步骤①中所述的肝素钠的降解过程为：将肝素钠溶解于是其10～30倍重量的纯化水中，再加入重量为肝素钠10％～20％的醋酸，调节pH至酸性，然后加入重量为肝素钠2％～5％的亚硝酸钠，在10℃～30℃下搅拌反应3～6小时，得到降解液。

3.根据权利要求2所述的达肝素钠的制备方法，其特征在于：用醋酸将pH调节至3.5～6。

4.根据权利要求2所述的达肝素钠的制备方法，其特征在于：亚硝酸钠的加入量为肝素钠重量的2％～2.3％。

5.根据权利要求1所述的达肝素钠的制备方法，其特征在于：步骤②中将所述的降解液的pH调节至6.5～8。

6.根据权利要求1所述的达肝素钠的制备方法，其特征在于：步骤②中硼氢化钠的加入量为肝素钠重量的0.5％～2％。

7.根据权利要求1所述的达肝素钠的制备方法，其特征在于：步骤④中所述的洗脱液中加入体积为洗脱液2倍的酒精在5～8℃下进行沉淀。

8.根据权利要求1所述的达肝素钠的制备方法，其特征在于：步骤⑤中所述的除菌为通过除菌膜进行除菌。