CN1844165A

CN1844165A - 粗品肝素钠分离纯化为高纯度肝素钠的方法

Info

Publication number: CN1844165A
Application number: CN 200610039006
Authority: CN
Inventors: 唐明龙
Original assignee: JIANYOU BIOLOGICAL CHEMICAL PHARMACEUTICLA CO Ltd NANJING
Current assignee: JIANYOU BIOLOGICAL CHEMICAL PHARMACEUTICLA CO Ltd NANJING
Priority date: 2006-03-22
Filing date: 2006-03-22
Publication date: 2006-10-11

Abstract

本发明涉及一种粗品肝素钠分离纯化为高纯度肝素钠的方法，用于生产抗凝血的注射级高纯度肝素钠，本方法以粗品肝素钠为原料，通过离子交换层析、高锰酸钾氧化、超滤和有机溶剂分级沉淀生产高纯度肝素钠原料药。先通过离子交换层析浓缩肝素钠溶液，除去大部分杂质，然后通过超滤除去小分子锰离子、重金属离子及色素等杂质，获得符合注射级要求的低分子肝素钠。本方法在离子交换层析的吸附、洗涤、洗脱各步骤中选择了不同的浓度的NaCl溶液作为洗涤液，从而确保肝素钠与杂质有效分离，并减小对肝素钠收率的影响，生产成本低，质量稳定，产品得率较高，分子量分布合理，适于规模生产。

Description

粗品肝素钠分离纯化为高纯度肝素钠的方法

技术领域

本发明涉及将粗品肝素钠分离纯化为注射用高纯度低分子肝素钠的方法。

背景技术

肝素钠作为抗凝血药物用于临床已有60年的历史。早年的肝素钠是从狗肝中分离出，故名“肝素”。以后发现牛肺中肝素含量更高，二次大战后改由肠粘膜为原料提取肝素。自上世纪80年代开始，通过化学修饰肝素钠分子，研制出了治疗和预防血栓的低分子肝素。目前，世界上前四强制药公司都有低分子肝素产品。2005年全球肝素类系列产品的销售额已超过40亿美元。

目前全国有数以万计的人从事小肠粘膜处理加工肝素钠的粗品生产。从肠粘膜提取肝素经过酶解、加热过滤、离子交换树脂吸附、乙醇沉淀、脱水干燥等步骤获得肝素钠粗品。中国肝素钠粗品产量占全球总量的50％。肝素钠粗品必须经过进一步纯化加工才能达到药用标准。高纯度肝素钠不仅作为未分离肝素钠用于临床上抗凝血治疗，而且作为低分子肝素的原料，被进一步加工成各种规格的低分子肝素。

由于市场对肝素的需求越来越大，肝素钠的纯化技术受到重视。50年代的肝素钠由于纯化技术不高，病人使用肝素后有时会出现发热、怕冷等过敏反应。随着发现长链季铵盐可以结合肝素，通过季铵盐结合—解离工艺把肝素钠纯化技术向强推进了一步。

目前国内用于肝素钠粗品纯化的技术主要是不同PH条件下除杂质，高锰酸钾和(或)双氧水氧化，有机溶剂分级沉淀。这一传统工艺生产周期长，产品收率低，质量不稳定。

低分子肝素市场的快速发展对肝素钠纯化提出了迫切的要求。其迫切性表现在两个方面，一是用于加工低分子肝素的注射级肝素钠原料的质量要求非常高，二是市场的扩大要求生产工艺更适合大规模生产。

发明内容

本发明的目的是提供一种将粗品肝素钠分离纯化为注射级肝素钠的方法，其纯化得到的肝素钠能达到注射级肝素钠原料的质量要求，而且能适合大规模生产，达到生产周期短、产品收率高、质量稳定的良好效果。

本方法以粗品肝素钠为原料，通过离子交换层析、高锰酸钾氧化、超滤和有机溶剂分级沉淀生产高纯度肝素钠原料药。

具体步骤如下：

①.肝素钠粗品溶于重量浓度为1％的NaCl溶液中，离心分离除去不溶物。

②.步骤①所得澄清液补加NaCl，使澄清液中NaCl浓度达0.5～0.8M；

③.步骤②所得澄清液用强硷性阴离子交换树脂(例如Amberlite树脂或Lewatit树脂系列)吸附其中的肝素钠，吸附过程中检测液相中肝素钠抗凝效价，直至USPu＜50iu/ml时，弃去废液；

④.用浓度为0.85～1.2M的NaCl溶液洗涤树脂，弃去洗涤液；

⑤.用2.2～2.6M的NaCl溶液洗脱树脂，洗脱液为肝素钠溶液，收集洗脱液；

⑥.洗脱液中加高锰酸钾使肝素钠氧化，板框过滤除去杂质和二氧化锰，得肝素钠溶液；

⑦.肝素钠溶液用3000Da超滤膜超滤，除去小分子和杂质；

⑧.用0.4-0.6倍体积的无水乙醇分级沉淀、脱水、干燥，经无菌处理得到注射级肝素钠。

本发明综合使用了离子交换层析、超滤等技术进行肝素钠的分离、纯化。本方法中，离子交换层析各步骤中选择了不同的浓度的NaCl溶液作为洗涤液，肝素钠吸附液吸附步骤中采用含有0.5～0.8M NaCl有利于肝素钠溶液中部分杂质不被树脂吸附；洗涤步骤中洗涤液含有0.85～1.2M NaCl有利于从树脂上洗脱去大部分杂质，特别是可除去硫酸皮肤素；洗脱步骤中，用浓度为2.2～2.6M的NaCl溶液有利于肝素钠从树脂上被洗脱，从而确保肝素钠与杂质有效分离。本方法的离子交换和超滤过程不会改变肝素钠的分子结构，不仅生产成本低，质量稳定，而且所得的高纯度肝素钠产品的得率较高，分子量分布合理，适于规模生产，和传统的主要依靠高强度氧化剂氧化工艺相比，产品的平均分子量较高，较少产生低分子“碎片”，使肝素钠产品在国内外市场具有竞争力。

具体实施方式

实施例一

1、抗凝效价为110亿肝素钠粗品溶于1500升1％NaCl溶液中；

2、溶液经高速离心机分离除去不溶物，在所得的澄清溶液中补加NaCl至NaCl浓度达0.5M；

3、溶液置于1200升Amberlite 958树脂中混匀，使肝素钠被吸附。

4、检测液相USP u＜50iu/ml时，说明其中肝素钠已被完全被树脂吸附，弃去废液。

5、配制1.0M NaCl溶液600L，洗涤树脂，直至洗涤液中抗凝效价达50-400u/ml，弃去洗涤液(或收集用于制类肝素钠原料)。

6.上述树脂先以2.2M的NaCl溶液800L搅拌洗脱4小时，收集洗脱液；继续用2.2M NaCl溶液600L再次洗脱，收集洗脱液。

7、合并二次洗脱液，加入4.5公升KMO₄氧化。

8、氧化反应完成后，用板框过滤去除杂质和锰离子，滤液经超滤膜超滤浓缩，得超滤浓缩液500L左右。

9、将超滤浓缩液用0.4-0.6倍体积无水乙醇分级沉淀，沉淀物用1％(重量浓度)氯化钠溶液溶解，经除菌过滤，乙醇沉淀、脱水、干燥、粉碎、包装为注射级肝素钠。

产品测定主要指标如下：

抗凝效价：172uspu/mg(旋光49°，硫酸皮肤素＜1％)，光吸收及各项药检、理化指标达到药典标准。

本工艺所用的离子交换树脂是指强硷性阴离子交换树脂，如美国RohmHass生产的Amberlite系列、德国拜耳公司生产的Lewatit系列。

Claims

1.粗品肝素钠分离纯化为高纯度肝素钠的方法，其特征是按如下步骤：

①.肝将素钠粗品溶于重量浓度为1％的NaCl溶液中，离心分离除去不溶物；

②.步骤①所得澄清液中补加NaCl，使NaCl浓度达0.5～0.8M；

③.步骤②所得澄清液用强硷性阴离子交换树脂吸附其中的肝素钠，弃去废液；

④.步骤③吸附了肝素树脂用浓度为0.85～1.2M的NaCl溶液洗涤，弃去洗涤液。

⑤.用2.2～2.6M的NaCl溶液洗脱树脂，收集洗脱液；

⑥.洗脱液中加高锰酸钾使肝素钠氧化，用板框过滤除去杂质和二氧化锰，得肝素钠溶液；

⑦.肝素钠溶液用3,000Da超滤膜超滤，除去小分子杂质；

⑧.用0.4-0.6倍体积的无水乙醇沉淀、脱水、干燥，经无菌处理得到注射级肝素钠。

2.根据权利要求1的粗品肝素钠分离纯化为高纯度肝素钠的方法，其特征是所述的步骤⑤的NaCl溶液洗脱树脂过程重复进行二次，合并二次的洗脱液。

3.根据权利要求1的粗品肝素钠分离纯化为高纯度肝素钠的方法，其特征是所说的步骤③的吸附过程中检测液相中肝素钠抗凝效价，直至USP u＜50iu/ml时，弃去废液。

4.根据权利要求1或2或3的粗品肝素钠分离纯化为高纯度肝素钠的方法，其特征是所说的强硷性阴离子交换树脂可选自Amberlite树脂，Lewatit树脂系列或其他强硷性阴离子交换树脂。