CN106589167B - 高效价粗品肝素钠的制备方法及其生产装置 - Google Patents

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Abstract

本发明属于生物技术领域领域，具体涉及一种高效价粗品肝素钠的制备方法及其生产装置。本发明提供了一种用于制备粗品肝素钠的试剂组合物，所述试剂组合物包括以下试剂：低盐洗涤试剂A：质量体积百分比为2～5％的氯化钠水溶液；中盐洗涤试剂B：质量体积百分比为3～6％的氯化钠溶液；高盐洗涤试剂C：质量体积百分比为4～7％的氯化钠水溶液；洗脱试剂D：质量体积百分比为8～20％的氯化钠水溶液；沉淀试剂E：20～40°的肝素钠乙醇水溶液。本发明利用不同盐度的洗涤试剂进行梯度洗涤，结合低盐度洗脱和低乙醇度沉淀的制备方法制备的粗品肝素钠杂质低、肝素钠分子结构保存完整，生物活性接近或达到肝素钠注射级水平。

Description

高效价粗品肝素钠的制备方法及其生产装置
技术领域
本发明属于生物技术领域领域，具体涉及一种高效价粗品肝素钠的制备方法及其生产装置。
背景技术
肝素钠(Heparin Sodium)肝素钠是粘多糖硫酸酯类抗凝血药。肝素钠是由猪或牛的肠粘膜中提取的硫酸氨基葡聚糖的钠盐，属粘多糖类物质。在动物体内多以肝素钠-蛋白质复合物的形式存在。医学上，肝素钠在体内外均有抗凝血作用，可延长凝血时间、凝血酶原时间和凝血酶时间，常用于输血时预防血液凝固及血库保存鲜血等体外抗凝剂。临床上具有抗凝血、降血脂、保护内皮细胞、抗血小板积聚和释放、促纤溶、抑制动脉平滑肌细胞增殖、降低血液粘度、降血脂和抗炎等作用，可用于治疗各种疾病并发的播散性血管内凝血早期，预防动、静脉血栓和肺栓塞，治疗动、静脉血栓和肺栓塞，缺血性脑卒中，不稳定型心绞痛(减轻症状、预防心肌梗塞)，急性心肌梗塞(防止早期再梗塞和梗塞区延展，降低病死率)；在人工心肺、腹膜透析或血液透析时作为抗凝血药物。
目前提取粗品肝素钠的方法有很多种，普通常用的主要有盐解法、酶解法等。常规提取工艺首先将猪粘膜或初级肝素钠水溶解，经氯化钠或酶解离，大孔阴离子树脂吸附，洗脱，乙醇沉淀、脱水得粗品肝素钠。常规生产方法使用饱和盐水造成盐的大量浪费和环境污染，而且得到的肝素钠粗品含大量蛋白核酸杂，硫酸皮肤素和硫酸软骨素等有机杂质，生物活性低。
因此需要开发一种新的肝素钠制备工艺来制备低杂质、高效价的肝素钠粗品。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种用于提高粗品肝素钠纯度的试剂组合物及用所述试剂组合物制备粗品肝素钠的方法，本发明的方法制备的肝素钠粗品杂质低、生物活性接近到达肝素钠注射剂生物活性，使肝素钠注射级的生产变得极其容易。
为实现上述目的，本发明的技术方案为：
用于提高粗品肝素钠纯度的试剂组合物，包括以下试剂：
试剂A：质量体积百分比为2～5％的氯化钠水溶液；
试剂B：质量体积百分比为3～6％的氯化钠水溶液；
试剂C：质量体积百分比为4～7％的氯化钠水溶液；
试剂D：质量体积百分比为8～20％的氯化钠水溶液；
试剂E：乙醇肝素钠水溶液，所述乙醇肝素钠水溶液中乙醇的浓度为20～40°。
所述试剂组合物能有效去除杂质、提高肝素钠的活性；所得粗品肝素钠抗IIa活性效价接近或达到肝素钠精品要求，极大方便肝素钠生产的质量控制。
猪粘膜可以通过生猪屠宰厂采购猪小肠，然后采用自动肠衣清洗生产线获得，一般来说1根猪小肠生产约1～1.5公斤粘膜。
初级肝素钠可以是市售常规生产工艺生产的含有大量杂质活性低的肝素钠粗品。
本发明的目的之二在于提供一种用所述试剂组合物制备粗品肝素钠的方法，具体包括以下步骤：
1)溶解：将猪粘膜置于水介质中混溶，加入氯化钠，至其全部溶解得溶液；
2)酶解：在步骤1)所述溶液中加入蛋白酶进行酶解，灭活后得酶解液；
3)吸附：用碱性阴离子交换树脂对步骤2)所述酶解液保温吸附；
4)洗涤：依次用上述试剂A、试剂B和试剂C对步骤3)碱性阴离子交换树脂进行梯度洗涤；
5)洗脱：用试剂D对步骤4)洗涤后的碱性阴离子交换树脂进行两次洗脱，收集两次的洗脱液；
6)沉淀干燥：在步骤5)所述的洗脱液中加入乙醇得到试剂E进行沉淀，去掉上清液后对沉淀进行干燥，得高效价粗品肝素钠。
常规生产方法在对肝素钠溶液进行酶解后，使用工艺用水洗涤得到低活性的粗品肝素钠(初级肝素钠)；这种方法基本上无法去除起始物料中的大量有机和无机杂质。本发明采用不同浓度的氯化钠溶液：低盐洗涤试剂A、中盐洗涤试剂试剂B和高盐洗涤试剂试剂C作为洗涤液对吸附后碱性阴离子交换树脂进行梯度洗涤以去除大量无极性或低极性的各种无机杂质和大量低极性的有机杂质如蛋白质和核酸包括酶解过程中使用的蛋白酶。
本发明还首次在商业化生产中引进了离子交换树脂装柱进行动态离子交换进行吸附洗涤或洗脱生产粗品肝素钠。动态离子交换工艺比传统静态离子交换工艺去除杂质效果更好。
常规生产方法一般都是用饱和氯化钠水溶液将在离子交换树脂上绑定的肝素洗脱下来。这种方法导致大量氯化钠的浪费，而且造成严重的盐碱地环境污染。本发明采用低离子强度的试剂D将肝素洗脱下来，既节约氯化钠使用量，对环境友好；而且可以将其他大分子多糖相关物质阻止在粗品肝素钠产品中，减少污染可能性。
常规生产方法在洗脱液中加入大量乙醇使洗脱液中乙醇含量高达50°以上，导致肝素钠沉淀出来的同时也把大量的相关杂质如硫酸软骨素和硫酸皮肤素沉淀出来。本发明采用低乙醇含量沉淀提取肝素钠，将有关杂质基本完全去掉，大大提高肝素钠纯度，同时节约乙醇使用量，增加生产安全性。
作为一种优选，步骤1)所述混溶的温度为10～70℃，混溶2-24小时。
作为一种优选，步骤1)所述混溶的温度为50～60℃，混溶4-6小时。
进一步，步骤1)所述加入氯化钠在混合溶液中质量体积百分数为1～7％的氯化钠。
作为一种优选，步骤1)所述加入氯化钠在混合溶液中质量体积百分数为2～4％的氯化钠溶液。
进一步，步骤2)所述蛋白酶与步骤1)所述混溶溶液的质量体积百分比为0.05～0.5％。
作为一种优选，步骤2)所述蛋白酶与步骤1)所述混溶溶液的质量体积百分比为0.05～0.2％，所用蛋白酶为碱性蛋白酶。
进一步，步骤2)所述酶解的温度为30～70℃，酶解的时间为1～10小时。
作为一种优选，步骤2)所述酶解的温度为40～60℃，酶解的时间为2～4小时。
作为一种优选，步骤2)中灭活为酶解后升温到80～100℃，保温10-120分钟。
作为一种优选，步骤2)中灭活为酶解后升温到85～95℃，保温30-40分钟。
进一步，步骤3)所述碱性阴离子交换树脂为大孔强碱性阴离子交换树脂，所述保温吸附的温度为30～80℃。
作为一种优选，步骤3)所述碱性阴离子交换树脂为AmberliteTM FPA98CL阴离子交换树脂，保温吸附的温度为40～65℃。
进一步，步骤3)所述保温吸附的速率为0.0008～0.004BV/分钟，步骤4)所述洗涤的速率为0.006～0.03BV/分钟；步骤5)所述洗脱的速率为0.004～0.009BV/分钟。
作为一种优选，步骤3)所述保温吸附的速率为0.0015～0.002BV/分钟，步骤4)所述洗涤的速率为0.008～0.02BV/分钟；步骤5)所述洗脱的速率为0.005～0.008BV/分钟。
作为一种优选，步骤4)梯度洗涤中，温度为10～60℃，优选室温。
作为一种优选，步骤4)梯度洗涤中试剂A洗涤至少2次。
作为一种优选，步骤5)所述洗脱温度为10～60℃，优选室温。
进一步，步骤6)所述沉淀的温度为10～60℃，沉淀的时间为2～24小时。
作为一种优选，步骤6)所述沉淀的温度为室温，沉淀的时间为12～24小时。
作为一种优选，步骤6)中沉淀后收集沉淀物在50～60℃真空烘干48小时得粗品肝素钠。
本发明的目的之三在于提供一种利用肝素钠的生产装置制备肝素钠的方法，所述生产装置包括反应罐1，吸附罐2，离子交换柱3，试剂配制罐4和沉淀罐5，所述反应罐1，吸附罐2，离子交换柱3和沉淀罐5从上至下顺序布置，所述反应罐1，吸附罐2，离子交换柱3和沉淀罐5之间通过管道连接，管道上设置有启闭阀门6；所述离子交换柱3的上端设有排气管31，在离子交换柱3的外侧壁上设置有放液管32；所述试剂配制罐4位于离子交换柱3上方，所述试剂配制罐4的底部设有两个出液管，出液管I 41与离子交换柱3的进液口I 33连接，出液管II 42与离子交换柱3的进液口II 34连接，所述出液管II 42设置有电泵7；所述出液管I 41和出液管II 42上也设置有启闭阀门6；所述反应罐1和吸附罐2内的底部设置有滤网11；所述反应罐1顶部设置有进液口12和进料口13；
利用该生产装置制备肝素钠的方法，包括以下步骤：
1)溶解：在反应罐1中加入粘膜或初级肝素钠及氯化钠后加入水介质混溶至其全部溶解得溶液；
2)酶解：溶解完全后在反应罐1中加入蛋白酶进行酶解，灭活后得酶解液，过滤或离心不溶杂质后转移到吸附罐2；
3)吸附：所述酶解液进入吸附罐2后上离子交换柱3中进行保温吸附；
4)洗涤：在试剂配制罐4中依次配制试剂A、试剂B和试剂C，控制上柱速率，上离子交换柱3进行正反洗涤，导出洗涤液；
5)洗脱：步骤4)洗涤后用试剂D对碱性阴离子交换树脂进行两次洗脱；
6)沉淀干燥：收集合并的洗脱液进入到沉淀罐5，加入乙醇得试剂E在沉淀，去掉上清液后对沉淀进行干燥，得纯度高的粗品肝素钠。
进一步，所述生产装置中反应罐1，吸附罐2，离子交换柱3，试剂配制罐4和沉淀罐5内设置有温度感应器和搅拌器8；所述反应罐1，吸附罐2，试剂配制罐4和沉淀罐5上设置有观察窗口9；所述反应罐1，吸附罐1和离子交换柱3可拆卸替换。
本发明的目的还在于提供一种所述的试剂组合物可在肝素钠生产工艺中应用。所述应用包括粗品肝素钠的制备和肝素钠精品的纯化。
本发明的有益效果在于：
1)本发明提供的用于提高粗品肝素钠纯度的试剂组合物能有效去除杂质、提高肝素钠的活性；所得粗品肝素钠抗IIa活性效价接近或达到肝素钠精品要求，极大方便肝素钠生产的质量控制。
2)发明制备肝素钠的方法不但大量节约氯化钠和乙醇用量而且绿色环保。
3)本发明制备方法的优点是采用物理方法去除所有杂质，保留了肝素钠分子结构的完整性。
4)本发明提供的肝素钠的生产装置的反应罐，吸附罐，离子交换柱，和沉淀罐，利用该生产装置制备肝素钠中料液在各个罐体之间的转移靠自身的重力作用即可达到，从而达到了减少投资、节约能源的目的；装置采用的从上而下的空间布置形式，占用厂房面积大大缩小；离子交换柱可进行正反洗涤，能有效去除杂质，杂质去除率高，利用本装置制得的产品品质高。
附图说明
图1为本发明肝素钠的生产装置的示意图。
附图标记释义：1.反应罐，11.滤网，12.进液口，13.进料口；2.吸附罐；3.离子交换柱，31.排气管，32.放液管，33.进液口I，34.进液口II；4.试剂配制罐，41.出液管I，42.出液管II；5.沉淀罐；6.启闭阀门；7.电泵；8.搅拌器；9.观察窗口。
具体实施方式
以下将对本发明的优选实施例进行详细描述。优选实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，所举实施例是为了更好地对本发明的内容进行说明，但并不是本发明的内容仅限于所举实施例。所以熟悉本领域的技术人员根据上述发明内容对实施方案进行非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。
以下实施例中猪小肠粘膜通过猪小肠在肠衣清洗生产线上挤压获得，初级肝素钠可以通过市售得到；或根据本领域技术人员所熟知的方法制得。
实施例1用于提高粗品肝素钠纯度的试剂组合物
用于提高肝素钠效价的试剂组合物，包括以下试剂：
试剂A：质量体积百分比为2％的氯化钠水溶液；
试剂B：质量体积百分比为3％的氯化钠水溶液；
试剂C：质量体积百分比为4％的氯化钠水溶液；
试剂D：质量体积百分比为8％的氯化钠水溶液；
试剂E：乙醇肝素钠水溶液，所述乙醇肝素钠水溶液中乙醇的浓度为20°。
实施例2用于提高粗品肝素钠纯度的试剂组合物
用于提高肝素钠效价的试剂组合物，包括以下试剂：
试剂A：质量体积百分比为5％的氯化钠水溶液；
试剂B：质量体积百分比为6％的氯化钠水溶液；
试剂C：质量体积百分比为7％的氯化钠水溶液；
试剂D：质量体积百分比为20％的氯化钠水溶液；
试剂E：乙醇肝素钠水溶液，所述乙醇肝素钠水溶液中乙醇的浓度为40°。
实施例3用于提高粗品肝素钠纯度的试剂组合物
用于提高肝素钠效价的试剂组合物，包括以下试剂：
试剂A：质量体积百分比为4％的氯化钠水溶液；
试剂B：质量体积百分比为5％的氯化钠水溶液；
试剂C：质量体积百分比为6％的氯化钠水溶液；
试剂D：质量体积百分比为14.5％的氯化钠水溶液；
试剂E：乙醇肝素钠水溶液，所述乙醇肝素钠水溶液中乙醇的浓度为30°。
以下实施例中质量体积百分比用w/v表示。
实施例4从猪小肠粘膜生产高效价初级肝素钠的生产工艺1
1)将18根猪小肠利用DAT生产的自动肠衣清洗线获得25L猪粘膜，加水稀释到100L；
2)酶解：加蛋白酶活20万/克的2709碱性蛋白酶80克，加3公斤氯化钠，升温55℃，搅拌保温4小时；酶解完后升温到95℃保温30分钟，4000rpm离心弃掉沉淀物；
3)离子交换吸附：加入2000ml的AmberliteTM FPA98CL阴离子交换树脂装柱，60℃上柱保温吸附，上柱速率5ml/minute；
4)洗涤：用2000ml盐水于25℃洗涤，上柱速率20ml/minute，上柱正洗一次，相同条件上柱反洗一次，重复正反洗3次，废弃洗涤液。盐水配制方法是将80克氯化钠充分溶解于2000ml水(试剂A)中；
5)洗涤：用1000ml盐水于25℃洗涤，上柱速率10ml/minute，上柱正洗一次，废弃洗涤液。盐水配制方法是将55克氯化钠充分溶解于1000ml水(试剂B)中；
6)洗涤：用1000ml盐水于25℃洗涤，上柱速率10ml/minute，上柱正洗一次，废弃洗涤液。盐水配制方法是将65克氯化钠充分溶解于1000ml水(试剂C)中；
7)洗脱：加入100ml盐水于25℃洗脱，上柱速率1ml/minute；重复洗脱一次，收集合并二次洗脱液。洗脱液配制方法是将15克氯化钠充分溶解于100ml水(试剂D)中；
8)沉淀：加97ml乙醇入合并的洗脱液，于25℃沉淀15小时，虹吸上清液弃掉；
9)沉淀干燥：加20ml乙醇洗脱，虹吸上清液弃掉。收集沉淀物在55℃真空烘干48小时得5.8克粗品肝素钠，肝素钠抗IIa活性效价为179iu/mg。
实施例5从低效价初级肝素钠制备高效价粗品肝素钠的制备方法1
高效价粗品肝素钠的制备方法，具体包括以下步骤：
1)溶解：将100克效价为60iu/mg的初级肝素钠置于600ml纯化水中，加24克氯化钠，混溶的温度为50℃，混溶6小时，至其全部溶解得溶液；
2)酶解：在所述溶液中加入600毫克蛋白酶活为3xEP的胰酶在40～50℃进行酶解4小时，灭活后升温到95℃保温30分钟得酶解液；
3)吸附：冷却离心后收集清液，利用PS多糖纯化系统将酶解清液上柱吸附，装柱树脂量1200ml，吸附温度30～50℃，上柱速率为2ml/分钟；
4)洗涤：依次分别用含45.6克氯化钠的1200ml水溶液(试剂A)，含60克氯化钠的1200ml水溶液(试剂B)和含72克氯化钠的1200毫升水溶液(试剂C)，在室温上柱对步骤3)吸附后的碱性阴离子交换树脂进行梯度洗涤，洗涤上柱速率为10毫升/分钟，试剂A洗涤5次，试剂B和C个洗涤一次；
5)洗脱：用含156克氯化钠的1200毫升水溶液(试剂D)在室温上柱对步骤4)洗涤后的碱性阴离子交换树脂进行洗脱，洗脱的速率为7豪升/分钟。重复洗脱一次。收集两次的洗脱液；
6)沉淀干燥：合并步骤5)所述的洗脱液，加入1060毫升的95°乙醇得试剂D进行沉淀过夜，去掉上清液收集沉淀物在55℃真空烘干48小时得2克粗品肝素钠，所得粗品肝素钠抗IIa活性效价达205iu/mg。
实施例6从猪小肠粘膜生产高效价初级肝素钠的生产工艺2
1)将18根猪小肠利用DAT生产的自动肠衣清洗线获得25L猪粘膜，加水稀释到100L；
2)酶解：加蛋白酶活20万/克的2709碱性蛋白酶80克，加3公斤氯化钠，升温55℃，搅拌保温4小时；酶解完后升温到95℃保温30分钟，用200目尼龙过滤袋过滤，弃掉沉淀物；
3)离子交换吸附：加入2000ml的AmberliteTM FPA98CL阴离子交换树脂于过滤液中于65℃保温搅拌吸附8小时后过滤收集树脂；
4)洗涤：加2000ml盐水到上述吸附树脂中，在室温搅拌洗涤2小时，重复正反洗4次，废弃洗涤液。盐水配制方法是将78克氯化钠充分溶解于2000ml水(试剂A)中；
5)洗涤：加2000ml盐水到上述吸附树脂中，在室温搅拌洗涤2小时，重复正反洗4次，废弃洗涤液。盐水配制方法是将106克氯化钠充分溶解于2000ml水(试剂A)中；
6)洗涤：加2000ml盐水到上述吸附树脂中，在室温搅拌洗涤2小时，重复正反洗4次，废弃洗涤液。盐水配制方法是将124克氯化钠充分溶解于2000ml水(试剂A)中；
7)洗脱：加入1000ml盐水于25℃洗脱3小时；重复洗脱一次，收集合并二次洗脱液。洗脱液配制方法是将140克氯化钠充分溶解于100ml水(试剂D)中；
8)沉淀：加920ml乙醇入合并的洗脱液，于25℃沉淀15小时，虹吸上清液弃掉。
9)沉淀干燥：加20ml乙醇洗脱，虹吸上清液弃掉。收集沉淀物在55℃真空烘干48小时得5.9克肝素钠，肝素钠抗IIa活性效价为169iu/mg。
实施例7从低效价初级肝素钠制备高效价粗品肝素钠的制备方法2
高效价粗品肝素钠的制备方法，具体包括以下步骤：
1)溶解：将100克效价为60iu/mg的初级肝素钠置于600ml纯化水中，加24克氯化钠，混溶的温度为50℃，混溶6小时，至其全部溶解得溶液；
2)酶解：在所述溶液中加入600毫克蛋白酶活为3xEP的胰酶在40～50℃进行酶解4小时，灭活后升温到95℃保温30分钟得酶解液；
3)吸附：冷却到65℃，加入1200ml树脂，搅拌吸附10小时吸附温度30～50℃，收集树脂，废弃吸附残液；
4)洗涤：依次分别用含47克氯化钠的1200ml水溶液(试剂A)，含65克氯化钠的1200ml水溶液(试剂B)和含75.6克氯化钠的1200毫升水溶液(试剂C)，在室温到步骤3)吸附后的碱性阴离子交换树脂中进行搅拌洗涤2小时，试剂A洗涤5次，试剂B和C个洗涤一次，废弃洗涤液；
5)洗脱：用含162克氯化钠的1200毫升水溶液(试剂D)在室温到步骤4)洗涤后的碱性阴离子交换树脂进行洗脱4小时，重复洗脱一次，收集两次的洗脱液；
6)沉淀干燥：合并步骤5)所述的洗脱液，加入1100毫升的95°乙醇得试剂E进行沉淀过夜，去掉上清液收集沉淀物在55℃真空烘干48小时得2.5克粗品肝素钠，所得粗品肝素钠抗IIa活性效价达172iu/mg。
实施例8从低效价初级肝素钠制备高效价粗品肝素钠的制备方法3
高效价粗品肝素钠的制备方法，具体包括以下步骤：
1)溶解：将10公斤效价为60iu/mg的初级肝素钠加入100升反应罐1中，加入60升纯化水中，加2.4公斤氯化钠，溶解温度为50℃，混溶4小时；
2)酶解：在所述溶液中加入60克蛋白酶活为3xEP的胰酶在40～50℃进行酶解4小时，灭活后升温到95℃保温30分钟得酶解液；
3)吸附：离心后收集清液到吸附罐2，在离子交换柱4中装柱树脂量120L。当酶解液温度冷却到65℃以下后将酶解液放入离子交换柱4进行吸附，温度30～50℃，上柱速率为200ml/分钟；
4)洗涤：事先在试剂配制罐3配制好含23.9公斤氯化钠的600L水溶液(试剂A)、含6.4公斤氯化钠的120L水溶液(试剂B)，和含7.6公斤氯化钠的120L水溶液(试剂C)，在室温上柱对步骤3)吸附后的碱性阴离子交换树脂进行梯度洗涤，洗涤上柱速率为1升/分钟，试剂A洗涤5次，试剂B和C个洗涤一次，废弃洗涤液；
5)洗脱：用含32.5公斤的240升水溶液(试剂D)在室温分两次上柱对步骤4)洗涤后的碱性阴离子交换树脂进行洗脱，洗脱的速率为0.7升/分钟，收集两次的洗脱液于沉淀罐5；
6)沉淀干燥：合并步骤5)所述的洗脱液，加入110升的95°乙醇入沉淀罐5得试剂E进行沉淀过夜，去掉上清液收集沉淀物在55℃真空烘干48小时得2公斤粗品肝素钠，所得粗品肝素钠抗IIa活性效价达210iu/mg。
实施例9肝素钠的生产装置及利用该该生产装置肝素钠的方法
肝素钠的生产装置，所述生产装置包括反应罐1，吸附罐2，离子交换柱3，试剂配制罐4和沉淀罐5，所述反应罐1，吸附罐2，离子交换柱3和沉淀罐5从上至下顺序布置，所述反应罐1，吸附罐2，离子交换柱3和沉淀罐5之间通过管道连接，管道上设置有启闭阀门6；所述离子交换柱3的上端设有排气管31，在离子交换柱3的外侧壁上设置有放液管32；所述试剂配制罐4位于离子交换柱3上方，所述试剂配制罐4的底部设有两个出液管，出液管I 41与离子交换柱3的进液口I33连接，出液管II 42与离子交换柱3的进液口II 34连接，所述出液管II 42设置有电泵7；所述出液管I 41和出液管II 42上也设置有启闭阀门6；所述反应罐1和吸附罐2内的底部设置有滤网11；所述反应罐1顶部设置有进液口12和进料口13；
利用该生产装置肝素钠的方法，包括以下步骤：
1)溶解：在反应罐1中加入粘膜或初级肝素钠及氯化钠后加入水介质混溶至其全部溶解得溶液；
2)酶解：溶解完全后在反应罐1中加入蛋白酶进行酶解，灭活后得酶解液，过滤或离心不溶杂质后转移到吸附罐2；
3)吸附：所述酶解液进入吸附罐2后上离子交换柱3中进行保温吸附4-24小时；
4)洗涤：在试剂配制罐4中依次配制试剂A、试剂B和试剂C，控制上柱速率，上离子交换柱3进行正反洗涤，导出洗涤液；
5)洗脱：步骤4)洗涤后用试剂D对碱性阴离子交换树脂进行两次洗脱；
6)沉淀干燥：收集合并的洗脱液进入到沉淀罐5，加入乙醇得试剂E在沉淀，去掉上清液后对沉淀进行干燥，得纯度高的粗品肝素钠。
所述反应罐1，吸附罐2，离子交换柱3，试剂配制罐4和沉淀罐5内设置有温度感应器和搅拌器8；所述反应罐1，吸附罐2，试剂配制罐4和沉淀罐5上设置有观察窗口9；所述反应罐1，吸附罐1和离子交换柱3可拆卸替换。反应罐和吸附罐替换便于替换清洗，反应罐和吸附罐也可以互换使用，离子交换柱设置至少4个便于树脂保养。
最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims (8)

1.利用肝素钠的生产装置制备粗品肝素钠的方法，其特征在于，所述生产装置包括反应罐(1)，吸附罐(2)，离子交换柱(3)，试剂配制罐(4)和沉淀罐(5)，所述反应罐(1)，吸附罐(2)，离子交换柱(3)和沉淀罐(5)从上至下顺序布置，所述反应罐(1)，吸附罐(2)，离子交换柱(3)和沉淀罐(5)之间通过管道连接，管道上设置有启闭阀门(6)；所述离子交换柱(3)的上端设有排气管(31)，在离子交换柱(3)的外侧壁上设置有放液管(32)；所述试剂配制罐(4)位于离子交换柱(3)上方，所述试剂配制罐(4)的底部设有两个出液管，出液管I(41)与离子交换柱(3)的进液口I(33)连接，出液管II(42)与离子交换柱(3)的进液口II(34)连接，所述出液管II(42)设置有电泵(7)；所述出液管I(41)和出液管II(42)上也设置有启闭阀门(6)；所述反应罐(1)内的底部设置有滤网(11)；所述反应罐(1)顶部设置有进液口(12)和进料口(13)；
利用该生产装置制备肝素钠的方法，包括以下步骤：
1)溶解：在反应罐(1)中加入粘膜或初级肝素钠及氯化钠后加入水介质混溶至其全部溶解得溶液；
2)酶解：溶解完全后在反应罐(1)中加入蛋白酶进行酶解，灭活后得酶解液，过滤或离心不溶杂质后转移到吸附罐(2)；
3)吸附：所述酶解液进入吸附罐(2)后上离子交换柱(3)中进行保温吸附；
4)洗涤：在试剂配制罐(4)中依次配制试剂A、试剂B和试剂C，控制上柱速率，上离子交换柱(3)进行正反洗涤，导出洗涤液；
5)洗脱：步骤4)洗涤后用试剂D对碱性阴离子交换树脂进行两次洗脱；
6)沉淀干燥：收集合并的洗脱液进入到沉淀罐(5)，加入乙醇得试剂E再沉淀，去掉上清液后对沉淀进行干燥，得粗品肝素钠；
其中试剂A：质量体积百分比为2～5％的氯化钠水溶液；
试剂B：质量体积百分比为3～6％的氯化钠水溶液；
试剂C：质量体积百分比为4～7％的氯化钠水溶液；
试剂D：质量体积百分比为8～20％的氯化钠水溶液；
试剂E：乙醇肝素钠水溶液，所述乙醇肝素钠水溶液中乙醇的浓度为20～40°。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)所述氯化钠加入质量体积百分比为1～7％。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)所述蛋白酶与步骤1)得到的溶液的质量体积比为0.5～5g：1L。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)所述酶解的温度为30～70℃，酶解的时间为1～10小时。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)所述保温吸附的温度为≤65℃，上柱速率为0.0008～0.004BV/分钟。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤4)所述洗涤的速率为0.006～0.03BV/分钟；步骤5)所述洗脱的速率为0.004～0.009BV/分钟；所述碱性阴离子交换树脂为大孔强碱性阴离子交换树脂。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤6)所述沉淀的温度为10～60℃，沉淀的时间为2～24小时。
8.根据权利要求1所述的利用肝素钠的生产装置制备粗品肝素钠的方法，其特征在于，所述生产装置中反应罐(1)，吸附罐(2)，离子交换柱(3)，试剂配制罐(4)和沉淀罐(5)内设置有温度感应器和搅拌器(8)；所述反应罐(1)，吸附罐(2)，试剂配制罐(4)和沉淀罐(5)上设置有观察窗口(9)；所述反应罐(1)，吸附罐(1)和离子交换柱(3)可拆卸替换。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109847809A (zh) * 2018-12-28 2019-06-07 河北常山生化药业股份有限公司 一种去除粗品肝素钠中蛋白质和核酸等杂质的装置及其使用方法
CN112552426B (zh) * 2020-12-14 2022-03-18 江苏万力生物科技有限公司 一种提取猪小肠粘膜中肝素钠方法及设备
CN113698501B (zh) * 2021-07-14 2024-04-12 河北常山生化药业股份有限公司 一种牛源肝素钠的提取精制方法
CN113731523B (zh) * 2021-09-23 2022-08-19 潢川县鹏升畜产品有限公司 肝素钠粗品提取用实验台
CN114137113B (zh) * 2021-11-26 2024-07-02 重庆伊诺生化制品有限公司 一种多糖中脂肪酸含量的检测方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1844165A (zh) * 2006-03-22 2006-10-11 南京健友生物化学制药有限公司 粗品肝素钠分离纯化为高纯度肝素钠的方法
CN104387504A (zh) * 2014-12-20 2015-03-04 山东绅联生物科技有限公司 一种利用猪小肠制备肝素钠的方法
CN104725531A (zh) * 2013-12-24 2015-06-24 安徽宝迪肉类食品有限公司 一种高效提取肝素钠的生产工艺
CN104829752A (zh) * 2015-05-26 2015-08-12 苏州鸿洋医药科技有限公司 高纯度低分子量肝素钠的制备方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1844165A (zh) * 2006-03-22 2006-10-11 南京健友生物化学制药有限公司 粗品肝素钠分离纯化为高纯度肝素钠的方法
CN104725531A (zh) * 2013-12-24 2015-06-24 安徽宝迪肉类食品有限公司 一种高效提取肝素钠的生产工艺
CN104387504A (zh) * 2014-12-20 2015-03-04 山东绅联生物科技有限公司 一种利用猪小肠制备肝素钠的方法
CN104829752A (zh) * 2015-05-26 2015-08-12 苏州鸿洋医药科技有限公司 高纯度低分子量肝素钠的制备方法

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