CN104041484B - 一种细胞保存液 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种细胞保存液，它由氯化钠、乙二胺四乙酸二钠、PEG10000、Proclin300、甲醇、醋酸‑醋酸钠缓冲液组成，本专利降低了使用成本，真正有效的保护了细胞的完整性和固定性，避免细胞溶解和膨胀，易推广，兼容性强，节省了制备样品的时间。
Description
技术领域
本发明涉及生物制剂技术领域；具体涉及一种细胞保存液。
背景技术
目前，正常人体活细胞在脱落前是具有生理学功能、生物学活性及完整的细胞形态，在生物学研究和医学检验中具有重要的价值。若是离开人体，脱落的细胞其生理学功能、生物学活性及细胞形态结构也将发生改变。因此，如何有效保存脱落细胞形态和结构是细胞学检测中需要考虑的问题。主要从传统和常规上有以下几种检查方法：
在传统的细胞学检查方法巴氏涂片法(即宫颈刮片)制成的涂片，存在大量细胞重叠现象，并且存在一些无检验价值的杂细胞，这给病理结果带来了一定的误差。
而在常规的宫颈癌筛查中，有液基薄层细胞学、PCR、bDNA等技术方法。液基薄层细胞学检查(英文简称TCT)是常用的技术手段之一，目前在欧美和我国的大中城市，越来越广泛的应用于宫颈细胞学筛查中。TCT是一种现代化的宫颈细胞学涂片技术，通过采集人体宫颈表面的脱落细胞，经染色后用显微镜观察这些细胞的形态和结构，并做出诊断。PCR和bDNA技术是采用宫颈上皮细胞分别进行DNA和RNA的检测。但是从上述几种方法中可以看出都是采用宫颈脱落细胞样品进行检测，因而细胞保存液是检测前细胞保存的关键。目前，美国新柏氏(Thinprep cytologic test)细胞保存液是与其仪器(Thinpreper-2000)配套使用的专用试剂，但是价格昂贵，加重患者的治疗成本。
因此，本发明是在主要解决目前现有技术存在以上不足的基础上研发出来的。
发明内容
发明的目的是解决以上技术问题，特别提出一种降低成本、兼容性强、有效的对脱落细胞样品进行固定保存的细胞保存液。
基于上述目的，本发明所解决的技术问题采用以下技术方案来实现：
一种细胞保存液，它由氯化钠、乙二胺四乙酸二钠、PEG10000、Proclin300、甲醇、醋酸-醋酸钠缓冲液组成，按重量百分比计，其中
氯化钠：0.12-0.14％ 乙二胺四乙酸二钠：0.05-0.42％
PEG10000：0.15-0.20％ Proclin300：0.01-0.20％
甲醇：10.0-45.0％ 醋酸-醋酸钠缓冲液：64.0-88.0％。
进一步，所述重量比为：
氯化钠：0.12g 乙二胺四乙酸二钠：0.42g
PEG10000：0.15ml Proclin300：0.01ml
甲醇：10.0g 醋酸-醋酸钠缓冲液：88.0ml。
本发明组分的技术原理:
氯化钠：是一种渗透压维持剂。
乙二胺四乙酸二钠：是一种抗聚集试剂，能避免细胞堆积。
PEG10000：是一种非渗透性大分子物质，能保护细胞骨架的完整性，防止细胞水肿。
Proclin300：是一种防腐剂，能有效地杀灭样品中的细菌、真菌、酵母菌等病原体，延长保存液的保存时间，同时能保护工作环境及工作人员健康。
甲醇：固定剂，能快速对样品中的白细胞、上皮细胞等有检验价值的细胞进行固定保存，有效保存细胞形态完好，同时也可以维持细胞内核酸的完整性。
醋酸-醋酸钠缓冲液：缓冲液PH4.4，可有效维持细胞形态特征。
本发明的有益效果是：1.该细胞保存液中包括ｐＨ缓冲剂、渗透压维持剂，能有效保存细胞形态结构完整，无细胞溶解和细胞肿胀现象，该细胞保存液含有细胞固定剂成分，可有效快速对样品中的上皮脱落细胞、白细胞等脱落细胞进行固定保存，防止细胞发生自溶。
2、该细胞保存液能有效降低核酸降解，易于后续核酸的检测研究。
3、兼容性强：保存的细胞可同时进行免疫细胞化学、TCT、HPV-PCR、bDNA等分子生物技术检测，无需多次采样。
4、成分简单、价格低廉、易于推广。
5、使用简单，操作方便，大大节省了制备样品的时间。
具体实施方式
以下通过具体的实施方式，进一步阐述本发明。
一种细胞保存液，它由氯化钠、乙二胺四乙酸二钠、PEG10000、Proclin300、甲醇、醋酸-醋酸钠缓冲液组成，按重量百分比计，其中
氯化钠：0.12-0.14％ 乙二胺四乙酸二钠：0.05-0.42％；
PEG10000：0.15-0.20％ Proclin300：0.01-0.20％；
甲醇：10.0-45.0％ 醋酸-醋酸钠缓冲液：64.0-88.0％。
实施例1，本发明的细胞保存液配制方法为，
氯化钠：0.12g 乙二胺四乙酸二钠：0.42g；
PEG10000：0.15ml Proclin300：0.01ml；
甲醇：10.0g 醋酸-醋酸钠缓冲液：88.0ml。
让上述各组分均匀搅拌溶解即可。
实施例2，本发明的细胞保存液配制方法为，
氯化钠：0.14g 乙二胺四乙酸二钠：0.05g；
PEG10000：0.20ml Proclin300：0.15ml；
甲醇：30.0g 醋酸-醋酸钠缓冲液：64.0ml。
让上述各组分均匀搅拌溶解即可。
实施例3，本发明的细胞保存液配制方法为，
氯化钠：0.14g 乙二胺四乙酸二钠：0.30g；
PEG10000：0.18ml Proclin300：0.20ml；
甲醇：40.0g 醋酸-醋酸钠缓冲液：70.0ml。
让上述各组分均匀搅拌溶解即可。
通过以上实施例配制出的细胞保存液，使用过程中，降低了使用成本，真正有效的保护了细胞的完整性和固定性，避免细胞溶解和膨胀，易推广，兼容性强，节省了制备样品的时间。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不限制本发明应用领域。凡在本发明精神和原则之内所做的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (2)
1.一种细胞保存液，其特征在于，它由氯化钠、乙二胺四乙酸二钠、PEG10000、Proclin300、甲醇、醋酸-醋酸钠缓冲液组成，按重量百分比计，其中
氯化钠：0.12-0.14％ 乙二胺四乙酸二钠：0.05-0.42％；
PEG10000：0.15-0.20％ Proclin300：0.01-0.20％；
甲醇：10.0-45.0％ pH为4.4的醋酸-醋酸钠缓冲液：64.0-88.0％。
2.根据权利要求1所述的细胞保存液，其特征在于，所述以下重量比为：
氯化钠：0.12g 乙二胺四乙酸二钠：0.42g；
PEG10000：0.15ml Proclin300：0.01ml；
甲醇：10.0g pH为4.4的醋酸-醋酸钠缓冲液：88.0ml。
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