CN111084179A - 一种细胞保存液及其制备方法 - Google Patents

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张辉
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Abstract

本发明涉及细胞生物学领域，具体涉及一种细胞保存液及其制备方法。所述细胞保存液包括以下重量份的组分：甲醇的含量为15.00％‑40.00％，EDTA的含量为10％‑15％，醋酸盐缓冲液的含量为10％‑20％，NaCl的含量为0.05％‑1％，KCl的含量为0.05％‑1％，ProClin300的含量为0.01％‑0.35％，吐温20的含量为0.01％‑0.1％。总之，本发明能较好的保持细胞的形态，提高后续检测结果的准确性。

Description

一种细胞保存液及其制备方法
技术领域
本发明涉及细胞生物学领域，具体涉及一种细胞保存液及其制备方法。
背景技术
为了进行细胞检测，需要将细胞用细胞保存液保存下来，细胞保存液具有稀释作用，能将包埋在粘液中的有检测价值的更多地细胞分离出来，为后续的检测过程提供充足的细胞数量，为检验结果的准确提供充分地保证，目前市场上虽然已经有了各种各样的细胞保存液，但这些保存液不能较好的维持细胞的形态和内部结果，影响后续的检测结果。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供一种细胞保存液，能较好的保持细胞的形态，提高后续检测结果的准确性。
为了解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：
一种细胞保存液，所述细胞保存液包括以下重量份的组分：甲醇的含量为15.00％-40.00％，EDTA的含量为10％-15％，醋酸盐缓冲液的含量为10％-20％，NaCl的含量为0.05％-1％，KCl的含量为0.05％-1％，ProClin300的含量为0.01％-0.35％，吐温20的含量为0.01％-0.1％。
优选地，所述细胞保存液中甲醇的含量为30％-40.00％。
优选地，所述细胞保存液中EDTA的含量为12％-14％。
优选地，所述细胞保存液中醋酸盐缓冲液的含量为15％-20％。
优选地，所述细胞保存液中NaCl的含量为0.05％-0.5％，KCl的含量为0.05％-0.5％。
优选地，所述细胞保存液中ProClin300的含量为0. 1％-0.35％。
优选地，所述细胞保存液中吐温20的含量为0.03％-0.8％。
本发明还公开了一种细胞保存液的制备方法，包括以下步骤：
（1）将EDTA、醋酸盐缓冲液、NaCl、KCl以及ProClin300用去离子水溶解、搅拌均匀；
（2）在25℃下，调整步骤（1）混合的溶液的pH值为7.8±0.2；
（3）向步骤（2）获得的溶液中加入甲醇、吐温20，搅拌均匀后灭菌。
相对于现有技术，本发明的有益效果为： 甲醇可以固定细胞中流动性强的DNA和蛋白质的完整性，防止细胞中的DNA和蛋白质被降解，影响后续检测结果；醋酸盐缓冲液能保持细胞保存液中的pH值稳定，保持细胞的形态完整，使细胞在细胞保存液中充分悬浮及分散；EDTA可抑制核酸酶的活性，防止细胞中的核酸被酶降解；NaCl和KCl维持细胞保存液中的离子浓度，保持细胞形态；ProClin300具有广谱抗菌性，作用速度快，化学稳定性好，可以防止细胞保存液中细菌、芽胞、病毒等微生物滋生，使待检测细胞不被破坏，从而使后续检测结果更加精确；吐温20分离细胞收集液中的黏液，是细胞更多的分离出来。总之，本发明能较好的保持细胞的形态，提高后续检测结果的准确性。
具体实施方式
为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例，基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：本实施例中公开的一种细胞保存液，所述细胞保存液包括以下重量份的组分：甲醇的含量为15.00％-40.00％，EDTA的含量为10％-15％，醋酸盐缓冲液的含量为10％-20％，NaCl的含量为0.05％-1％，KCl的含量为0.05％-1％，ProClin300的含量为0.01％-0.35％，吐温20的含量为0.01％-0.1％。
本实施例所述的一种细胞保存液的制备方法，包括以下步骤：
（1）将EDTA、醋酸盐缓冲液、NaCl、KCl以及ProClin300用去离子水溶解、搅拌均匀；
（2）在25℃下，调整步骤（1）混合的溶液的pH值为7.8±0.2；
（3）向步骤（2）获得的溶液中加入甲醇、吐温20，搅拌均匀后灭菌。
实施例2：本实施例中公开的一种细胞保存液，所述细胞保存液包括以下重量份的组分：所述细胞保存液中甲醇的含量为30％-40.00％，EDTA的含量为12％-14％，醋酸盐缓冲液的含量为15％-20％，NaCl的含量为0.05％-0.5％，KCl的含量为0.05％-0.5％，ProClin300的含量为0. 1％-0.35％，吐温20的含量为0.03％-0.8％。
本实施例所述的一种细胞保存液的制备方法，包括以下步骤：
（1）将EDTA、醋酸盐缓冲液、NaCl、KCl以及ProClin300用去离子水溶解、搅拌均匀；
（2）在25℃下，调整步骤（1）混合的溶液的pH值为7.8±0.2；
（3）向步骤（2）获得的溶液中加入甲醇、吐温20，搅拌均匀后灭菌。
实施例3：本实施例中公开的一种细胞保存液，所述细胞保存液包括以下重量份的组分：所述细胞保存液中甲醇的含量为35％，EDTA的含量为13％，醋酸盐缓冲液的含量为18％，NaCl的含量为0.1％，KCl的含量为0.1％，ProClin300的含量为0. 2％，吐温20的含量为0.5％。
本实施例所述的一种细胞保存液的制备方法，包括以下步骤：
（1）将EDTA、醋酸盐缓冲液、NaCl、KCl以及ProClin300用去离子水溶解、搅拌均匀；
（2）在25℃下，调整步骤（1）混合的溶液的pH值为8；
（3）向步骤（2）获得的溶液中加入甲醇、吐温20，搅拌均匀后灭菌。
本文中应用了具体个例对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。

Claims (8)

1.一种细胞保存液，其特征在于：所述细胞保存液包括以下重量份的组分：甲醇的含量为15.00％-40.00％，EDTA的含量为10％-15％，醋酸盐缓冲液的含量为10％-20％，NaCl的含量为0.05％-1％，KCl的含量为0.05％-1％，ProClin300的含量为0.01％-0.35％，吐温20的含量为0.01％-0.1％。
2.根据权利要求1所述的细胞保存液，其特征在于：所述细胞保存液中甲醇的含量为30％-40.00％。
3.根据权利要求1所述的细胞保存液，其特征在于：所述细胞保存液中EDTA的含量为12％-14％。
4.根据权利要求1所述的细胞保存液，其特征在于：所述细胞保存液中醋酸盐缓冲液的含量为15％-20％。
5.根据权利要求1所述的细胞保存液，其特征在于：所述细胞保存液中NaCl的含量为0.05％-0.5％，KCl的含量为0.05％-0.5％。
6.根据权利要求1所述的细胞保存液，其特征在于：所述细胞保存液中ProClin300的含量为0. 1％-0.35％。
7.根据权利要求1所述的细胞保存液，其特征在于：所述细胞保存液中吐温20的含量为0.03％-0.8％。
8.一种制备权利要求1-7任意一条权利要求所述细胞保存液的制备方法，包括以下步骤：
（1）将EDTA、醋酸盐缓冲液、NaCl、KCl以及ProClin300用去离子水溶解、搅拌均匀；
（2）在25℃下，调整步骤（1）混合的溶液的pH值为7.8±0.2；
（3）向步骤2获得的溶液中加入甲醇、吐温20，搅拌均匀后灭菌。
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