CN107509722B - 样本保存液 - Google Patents

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CN107509722B CN201710765571.8A CN201710765571A CN107509722B CN 107509722 B CN107509722 B CN 107509722B CN 201710765571 A CN201710765571 A CN 201710765571A CN 107509722 B CN107509722 B CN 107509722B
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    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
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    • A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
    • A01N1/02—Preservation of living parts
    • A01N1/0205—Chemical aspects
    • A01N1/021—Preservation or perfusion media, liquids, solids or gases used in the preservation of cells, tissue, organs or bodily fluids

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Abstract

本发明提供一种样本保存液，它包含缓冲液、防腐剂、亚硫酸钠、稳定剂、渗透压维持剂和固定剂，其中亚硫酸钠质量百分比为0.02％‑1％。本发明提供的样本保存液无毒环保、对血细胞、白细胞和粘液的处理效果好、保存时间长。

Description

样本保存液
技术领域
本发明涉及临床医学病理检测技术领域，特别涉及一种样本保存液。
背景技术
传统的细胞学检查方法是使用巴氏涂片法，细胞在涂片过程中大量损失，制得的涂片细胞大量重叠，并且涂片还含有大量的红细胞、白细胞、粘液及脱落坏死组织等杂质，使得结果的读取非常困难，而且会出现的假阴性率高，大大的降低了检测结果的准确性。
液基薄层细胞学检测技术(TCT)改变了以往巴氏涂片的操作方法，标本取出后立即放入样本保存液中，在需要观察室，对保存液中的细胞进行程序化处理，随机取样制成薄层涂片，该方法避免了常规巴氏涂片过程中，遗留在取材器上的细胞随取材器丢弃和细胞过度干燥的现象，湿性的细胞核结构更清晰，在薄片中的不正常细胞更容易被观察和鉴别，可以检测出较多的低级病变和一些更严重的病变，是目前国际上比较流行的新技术，具有传统涂片无法比拟的优点。
然而，样本中的细胞一旦脱离原来的生存环境，其固有细胞形态和结构都将会发生改变，大大影响观察结果，只有通过正确的样本保存方法才能确保细胞形态和结构的完整性，得到正确的诊断结果。目前常用的样本保存方法为冷冻保存或保存液保存，其中冷冻保存需要专门的冷冻设备，且细胞在冷冻、解冻的过程中同样可能受到损伤，发生变形，不利于观察检测，现有的样本保存液常用40～50％的醇类、醛类、生理盐水对细胞标本进行保存，然而高浓度的醇类虽然能够固定细胞，但是同时也会导致细胞成团，蛋白质粘液结块沉积，样本转移和观察效果差，同时容易导致细胞表面变形，而醇类浓度过低时，又无法长时间固定细胞，容易导致细胞退化，且其中多数醇类、醛类都有毒性，对于操作者不安全的同时对细胞也有一定的损伤。同时，由于样本中存在的血液、粘液、炎症等因素，导致样本中存在大量红细胞、白细胞或者视野模糊，现有技术中即便采用预处理的方式去除这些干扰物质，也很难有效处理干净，难以准确观察到目标细胞的形态，影响后续观察结果。
发明内容
为解决现有技术中存在的问题，本发明提供一种无毒环保、对血细胞、白细胞和粘液的处理效果好、保存时间长的样本保存液。
本发明提供的样本保存液，包含缓冲液、防腐剂、亚硫酸钠、稳定剂、渗透压维持剂和固定剂，其中所述亚硫酸钠质量百分比为0.02％-1％，优选为0.05％-0.5％，进一步优选为0.1％。
本发明提供的样本保存液，其中所述稳定剂的质量百分比为0.01％-0.1％，优选为0.01％-0.08％，进一步优选为0.02％。
本发明提供的样本保存液，其中所述缓冲液的质量百分比为0.05％-10％，优选为0.2％-6％，进一步优选为0.5％。
本发明提供的样本保存液，其中所述防腐剂的质量百分比为0.01％-0.5％，优选为0.1％-0.4％，进一步优选为0.2％。
本发明提供的样本保存液，其中所述渗透压维持剂的质量百分比为0.1％-0.8％，优选为0.15％-0.4％，进一步优选为0.2％。
本发明提供的样本保存液，其中所述固定剂的体积百分比为20％-40％，优选为25％-35％，进一步优选为30％。
本发明提供的样本保存液，其主要成分为：
缓冲液 0.05％-10％
防腐剂 0.01％-0.5％
亚硫酸钠 0.02％-1％
硼氢化钠 0.01％-0.1％
渗透压维持剂 0.1％-0.8％
固定剂 20％-40％
其中固定剂含量为体积百分比，其余组分含量为质量百分比。
本发明提供的样本保存液，优选其主要成分为：
缓冲液 0.2％-6％
防腐剂 0.1％-0.4％
亚硫酸钠 0.05％-0.5％
硼氢化钠 0.01％-0.08％
渗透压维持剂 0.15％-0.4％
固定剂 25％-35％
其中固定剂含量为体积百分比，其余组分含量为质量百分比。本发明提供的样本保存液，更优选其主要成分为：
缓冲液 0.5％
防腐剂 0.2％
亚硫酸钠 0.1％
硼氢化钠 0.02％
渗透压维持剂 0.2％
固定剂 30％
其中固定剂含量为体积百分比，其余组分含量为质量百分比。
本发明提供的样本保存液，其中所述缓冲液选自Tris缓冲液、HEPES缓冲液、磷酸缓冲液、醋酸缓冲液中的一种或多种；所述防腐剂选自ProClin系列防腐剂、叠氮钠、苯酚、咪唑烷基脲(IZU)的一种或多种，其中所述ProClin系列防腐剂优选为ProClin300；所述渗透压维持剂选自NaCl、KCl、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠中的一种或多种；所述固定剂选自中乙醇、乙二醇、丙三醇中的一种或多种；所述稳定剂为硼氢化钠、硼氢化钾、草酸、氯化亚锡、硫酸亚铁。
本发明提供的样本保存液，其主要成分为：
Tris缓冲液 0.05％-10％
ProClin300 0.01％-0.5％
NaCl 0.1％-0.8％
乙醇 5％-40％
乙二醇 0-15％
亚硫酸钠 0.02％-1％
硼氢化钠 0.01％-0.1％
其中乙醇、乙二醇含量为体积百分比，其余组分含量为质量百分比。
本发明提供的样本保存液，优选其主要成分为：
Tris缓冲液 0.2％-6％
NaCl 0.15％-0.4％
ProClin300 0.1％-0.4％
乙醇 15％-30％
乙二醇 5％-10％
亚硫酸钠 0.05％-0.5％
硼氢化钠 0.01％-0.08％
其中乙醇、乙二醇含量为体积百分比，其余组分含量为质量百分比。
本发明提供的样本保存液，更优选其主要成分为：
Tris缓冲液 0.5％
NaCl 0.2％
ProClin300 0.2％
乙醇 25％
乙二醇 5％
亚硫酸钠 0.1％
硼氢化钠 0.02％
其中乙醇、乙二醇含量为体积百分比，其余组分含量为质量百分比。
本发明提供的样本保存液，其中缓冲液的PH值为6.00-8.00。
本发明提供的样本保存液，其溶剂为纯化水。
本发明还提供上述样本保存液的使用方法，包括以下步骤：
(a)按照组分含量配制好试剂；
(b)将待测样本放入装有样本保存液的标本瓶中，使其充分作用；
(c)手工操作或者使用制片机进行制片染色后显微镜观察。
与现有技术相比较，本发明的有益效果在于：
1、样本保存液可以有效软化和分解样本中的粘液，检测背景清晰干净，细胞形态观察清楚。
2、对红细胞和白细胞的裂解效果好，能够有效避免其对观察结果的干扰。
3、样本保存液保存时间长、检测效果稳定。
4、环保无毒，对目标细胞没有损害，且无需预处理步骤，配方简单，操作简便，保存成本较低。
本发明中所涉及到的具体试剂如下：
Figure GDA0002486863400000041
Figure GDA0002486863400000051
本发明中使用的仪器如下：
名称 厂家及型号
显微镜 Olympus BX41
下面通过具体的实验方案对本发明作进一步说明：
实验一、亚硫酸钠的用量研究
按照下表中的配方1-10，配制1L试剂，将待测样本放入装有样本保存液的标本瓶中，使其充分作用，手工操作或者使用制片机进行制片染色后显微镜观察，观察结果见图1-10。
表1亚硫酸钠的用量研究配方
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Tris缓冲液(％) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
NaCl(％) 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2
ProClin300(％) 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1
乙醇(％) 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3
亚硫酸钠(％) 0.01 0.02 0.05 0.1 0.3 0.5 0.7 1.0 0.11 0.12
硫酸亚铁(％) 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05
注：其余溶剂为纯化水。
通过上述实验结果可以看出，当亚硫酸钠质量百分比为0.02％-1％时，观察结果细胞形态保存较好，细胞结构较清晰，着色分明，有少量背景不清晰；当亚硫酸钠质量百分比为0.05％-0.5％时，观察结果细胞形态保存较好，细胞结构较清晰，着色分明，有极少背景不清晰；当亚硫酸钠质量百分比为0.1％时，观察结果细胞形态保存好，细胞结构清晰，着色分明，检测效果最好。
实验二稳定剂的用量研究
按照下表中的配方11-20，配制1L试剂，将待测样本放入装有样本保存液的标本瓶中，使其充分作用，手工操作或者使用制片机进行制片染色后显微镜观察，观察结果见图11-20。
表2稳定剂的用量研究配方
11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
Tris缓冲液(％) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
NaCl(％) 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2
ProClin300(％) 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1
乙醇(％) 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3
亚硫酸钠(％) 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1
硼氢化钠(％) 0 0.01 0.02 0.03 0.04 0.06 0.08 0.1 0.11 0.12
注：其余溶剂为纯化水。
通过上述实验结果可以看出，当硼氢化钠质量百分比为0.01％-0.1％时，观察结果细胞形态保存较好，细胞结构较清晰，着色分明，有少量背景不清晰；当硼氢化钠质量百分比为0.01％-0.08％时，观察结果细胞形态保存较好，细胞结构较清晰，着色分明，有极少背景不清晰；当硼氢化钠质量百分比为0.02％时，观察结果细胞形态保存好，细胞结构清晰，着色分明，检测效果最好。
附图说明
附图1-10实验一中配方1-10的样本观察结果；
附图11-20实验二中配方11-20的样本观察结果；
附图21实施例1中样本观察结果；
附图22实施例2中样本观察结果；
附图23实施例3中样本观察结果；
附图24实施例4中样本观察结果；
附图25实施例5中样本观察结果；
附图26实施例6中样本观察结果；
附图27实施例7中样本观察结果；
附图28实施例8中样本观察结果；
附图29实施例9中样本观察结果；
附图30实施例10中样本观察结果；
附图31实施例11中样本观察结果；
附图32实施例12中样本观察结果；
附图33实施例13中样本观察结果；
附图34实施例14中样本观察结果。
实施方式
为了使本领域技术人员更好地理解本申请中的技术方案，下面结合实施例对本发明作进一步说明，显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本申请保护的范围。
实施例1
原料 用量
Tris缓冲液 0.05％
NaCl 0.1％
ProClin300 0.01％
乙醇 5％
乙二醇 15％
亚硫酸钠 0.02％
硼氢化钠 0.01％
其溶剂为纯化水 /
实施例2
Figure GDA0002486863400000071
Figure GDA0002486863400000081
实施例3
原料 用量
Tris缓冲液 0.5％
NaCl 0.2％
ProClin300 0.2％
乙醇 25％
乙二醇 5％
亚硫酸钠 0.1％
硼氢化钠 0.02％
其溶剂为纯化水 /
实施例4
原料 用量
Tris缓冲液 6％
NaCl 0.4％
ProClin300 0.4％
乙醇 30％
乙二醇 5％
亚硫酸钠 0.5％
硼氢化钠 0.08％
其溶剂为纯化水 /
实施例5
原料 用量
Tris缓冲液 10％
NaCl 0.8％
ProClin300 0.5％
乙醇 40％
亚硫酸钠 1％
硼氢化钠 0.1％
其溶剂为纯化水 /
实施例6
Figure GDA0002486863400000082
Figure GDA0002486863400000091
实施例7
原料 用量
磷酸缓冲液 4％
NaCl 0.3％
叠氮钠 0.2％
乙醇 35％
亚硫酸钠 0.3％
硼氢化钠 0.04％
其溶剂为纯化水 /
实施例8
原料 用量
磷酸缓冲液 8％
KCl 0.4％
NaCl 0.2％
MIT 0.2％
乙二醇 30％
亚硫酸钠 0.7％
硼氢化钠 0.09％
其溶剂为纯化水 /
实施例9
原料 用量
醋酸缓冲液 9％
NaCl 0.5％
IZU 0.2％
叠氮钠 0.3％
乙醇 40％
亚硫酸钠 0.8％
硼氢化钠 0.06％
其溶剂为纯化水 /
实施例1-9检测结果：
按照实施例1-9的组分含量配制好1L试剂，其中固定剂为体积百分比，其余试剂为质量百分比。将待测样本放入装有样本保存液的标本瓶中，使其充分作用，手工操作或者使用制片机进行制片染色后显微镜观察，观察结果见图21-29。从图中可以看出，本发明中的样本保存液可以有效软化和分解样本中的粘液，检测背景清晰干净，细胞形态观察清楚，且对红细胞和白细胞的裂解效果好，能够有效避免其对观察结果的干扰。
实施例10亚硫酸钠替换为硫代甘油样本保存液配方及结果
原料 用量
Tris缓冲液 0.5％
NaCl 0.2％
ProClin300 0.2％
乙醇 25％
乙二醇 5％
硫代甘油 0.1％
硼氢化钠 0.02％
其溶剂为纯化水 /
实施例11亚硫酸钠替换为DTT样本保存液配方及结果
原料 用量
Tris缓冲液 0.5％
NaCl 0.2％
ProClin300 0.2％
乙醇 25％
乙二醇 5％
DTT 0.1％
硼氢化钠 0.02％
其溶剂为纯化水 /
实施例12无亚硫酸钠样本保存液配方及结果
原料 用量
Tris缓冲液 0.5％
NaCl 0.2％
ProClin300 0.2％
乙醇 25％
乙二醇 5％
硼氢化钠 0.02％
其溶剂为纯化水 /
实施例10-12检测结果：
按照实施例10-12的组分含量配制好1L试剂，其中固定剂为体积百分比，其余试剂为质量百分比。将待测样本放入装有样本保存液的标本瓶中，使其充分作用，手工操作或者使用制片机进行制片染色后显微镜观察，观察结果见图30-32，从图中可以看出，粘液丝较多，导致背景不清晰，影响目标细胞观察。
实施例13市售样本保存液(奥华)观察结果
购买奥华的样本保存液试剂盒，按照其说明书步骤进行操作，得到观察结果33，从图中可以看出，白细胞较多，影响目标细胞观察。
实施例14市售样本保存液(安必平)观察结果
购买安必平的样本保存液试剂盒，按照其说明书步骤进行操作，得到观察结果34，从图中可以看出，粘液丝较多，导致背景不清晰，影响目标细胞观察。

Claims (20)

1.一种样本保存液，包含缓冲液、防腐剂、亚硫酸钠、稳定剂、渗透压维持剂和固定剂，其中所述亚硫酸钠质量百分比为0.02%- 1%；
所述稳定剂的质量百分比为0.01%- 0.1%；
所述缓冲液的质量百分比为0.05%-10%；
所述防腐剂的质量百分比为0.01%-0.5%；
所述渗透压维持剂的质量百分比为0.1%- 0.8%；
所述固定剂的体积百分比为20%- 40%；
所述稳定剂选自硼氢化钠、硼氢化钾、草酸、氯化亚锡、硫酸亚铁中的一种或多种；所述缓冲液选自Tris缓冲液、HEPES缓冲液、磷酸缓冲液、醋酸缓冲液中的一种或多种；所述防腐剂选自ProClin300、叠氮钠、苯酚、咪唑烷基脲的一种或多种；所述渗透压维持剂选自NaCl、KCl、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠中的一种或多种；所述固定剂选自乙醇、乙二醇、丙三醇中的一种或多种；
所述缓冲液的pH值为6.00-8.00。
2.根据权利要求1所述的样本保存液，其特征在于，所述亚硫酸钠质量百分比为0.05%-0.5%。
3.根据权利要求2所述的样本保存液，其特征在于，所述亚硫酸钠质量百分比为0.1%。
4.根据权利要求1所述的样本保存液，其特征在于，所述稳定剂的质量百分比为0.01%-0.08%。
5.根据权利要求4所述的样本保存液，其特征在于，所述稳定剂的质量百分比为0.02%。
6.根据权利要求1所述的样本保存液，其特征在于，所述缓冲液的质量百分比为0.2%-6%。
7.根据权利要求6所述的样本保存液，其特征在于，所述缓冲液的质量百分比为0.5%。
8.根据权利要求1所述的样本保存液，其特征在于，所述防腐剂的质量百分比为0.1%-0.4%。
9.根据权利要求8所述的样本保存液，其特征在于，所述防腐剂的质量百分比为0.2%。
10.根据权利要求1所述的样本保存液，其特征在于，所述渗透压维持剂的质量百分比为0.15%- 0.4%。
11.根据权利要求10所述的样本保存液，其特征在于，所述渗透压维持剂的质量百分比为0.2%。
12.根据权利要求1所述的样本保存液，其特征在于，所述固定剂的体积百分比为25%-35%。
13.根据权利要求12所述的样本保存液，其特征在于，所述固定剂的体积百分比为30%。
14.根据权利要求1所述的样本保存液，其特征在于，其主要成分为：
缓冲液 0.05%-10%
防腐剂 0.01%-0.5%
亚硫酸钠 0.02%-1%
硼氢化钠 0.01%-0.1%
渗透压维持剂 0.1%-0.8%
固定剂 20%-40%
其中固定剂为体积百分比，其余组分为质量百分比。
15.根据权利要求14所述的样本保存液，其特征在于，其主要成分为：
缓冲液 0.2%-6%
防腐剂 0.1%-0.4%
亚硫酸钠 0.05%-0.5%
硼氢化钠 0.01%-0.08%
渗透压维持剂 0.15%-0.4%
固定剂25%-35%
其中固定剂为体积百分比，其余组分为质量百分比。
16.根据权利要求14所述的样本保存液，其特征在于，其主要成分为：
缓冲液 0.5%
防腐剂 0.2%
亚硫酸钠 0.1%
硼氢化钠 0.02%
渗透压维持剂 0.2%
固定剂 30%
其中固定剂为体积百分比，其余组分为质量百分比。
17.根据权利要求1所述的样本保存液，其特征在于，其主要成分为：
Tris缓冲液 0.05%- 10%
ProClin300 0.01%- 0.5%
NaCl 0.1%- 0.8%
乙醇 5%- 40%
乙二醇 0- 15%
亚硫酸钠 0.02%- 1%
硼氢化钠 0.01%- 0.1%
其中乙醇、乙二醇为体积百分比，其余组分为质量百分比。
18.根据权利要求17所述的样本保存液，其特征在于，其主要成分为：
Tris缓冲液 0.2%- 6%
NaCl 0.15%-0.4%
ProClin300 0.1%-0.4%
乙醇 15%- 30%
乙二醇 5%- 10%
亚硫酸钠 0.05%- 0.5%
硼氢化钠 0.01%-0.08%
其中乙醇、乙二醇为体积百分比，其余组分为质量百分比。
19.根据权利要求18所述的样本保存液，其特征在于，其主要成分为：
Tris缓冲液 0.5%
NaCl 0.2%
ProClin300 0.2%
乙醇 25%
乙二醇 5%
亚硫酸钠 0.1%
硼氢化钠 0.02%
其中乙醇、乙二醇为体积百分比，其余组分为质量百分比。
20.一种样本保存液的使用方法，包括如下步骤：
（a）按照权利要求1-19中任一项所述的组分含量配制好试剂；
（b）将待测样本放入装有样本保存液的标本瓶中，使其充分作用；
（c）手工操作或者使用制片机进行制片染色后显微镜观察。
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