CN102318597B - 一种液基细胞保存液组合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
一种液基细胞保存液组合物，其特征在于包括以下重量百分比的组分：细胞固定剂：甲醛2～15％，防腐剂：双乙酸钠0.1～5％，抗凝剂：枸橼酸钠2～10％，缓冲剂：氯化钠0.5～2％，螯合剂：EDTA0.002～0.5％，溶血剂：冰醋酸0.5～10％，水：纯水5～80％，其中：所述甲醛为分析纯试剂，含量37～40％；双乙酸钠为食品添加剂级；枸橼酸钠为分析纯试剂，氯化钠为分析纯试剂，NaCl＞99.5％；EDTA为分析纯试剂和冰醋酸为分析纯试剂，H2COOH＞99.5％。本发明的液基细胞保存液组合物具有可最大限度保持细胞形态，提高诊断准确率和使标本在室温下保持细胞形态无显著性差异至少3个月的优点。
Description
技术领域
本发明涉及一种液基薄层细胞检测使用的试剂，具体地说，是一种液基细胞保存液组合物及其制备方法。
背景技术
在液基薄层细胞检测技术领域中，目前美国赛迪公司生产的全自动膜式液基超薄细胞制备系统新柏氏TCT2000处理器及其配套专用试剂细胞保存液（PreserveCyt Solution）被誉为液基细胞学检测的金标准。中国实用新型专利号200620141836于2006年12月30日也公开了一种膜式液基细胞制片机，包括存放细胞液基的溶液瓶、收集溶液瓶内细胞的细胞收集装置和控制器，所述的细胞收集装置包括过滤器和给过滤器提供压力的压力供给装置，所述的过滤器上设有用于监测过滤器压力的过滤器压力传感器，所述的过滤器压力传感器和压力供给装置都与控制器相连。因此，人们不难发现在膜式液基超薄细胞制备系统都存在着与自然沉淀法将标本中的黏液、血液和炎性细胞分离相反的“过滤器和给过滤器提供压力的压力供给装置”。
中国专利申请号200910034575.4于2010年3月10日公开了一种液基细胞保存液，供进口或国产膜式液基细胞制片机制片配套使用，它由醇类、双蒸水、磷酸盐、灭菌剂苯酚、粘液分解剂N-甲基-N-环己基-2-氨基-3，5-二澳苯甲胺盐酸盐组成。该发明的目的是提供一种液基细胞保存液，供进口或国产膜式液基细胞制片机制片配套使用。由于这种液基细胞保存液专门用于膜式液基细胞制片机制片配套使用，因此它不可能达到自然沉淀法将标本中的黏液、血液和炎性细胞分离所达到制得涂片的更高质量及更高效率；而且这种液基细胞保存液仅能将所制标本保存四周无变化，这对于一些疑难杂症，需要重复制得涂片的标本显得勉为其难，不能符合病案研究的需要，不利于患者治疗。
因此已知的液基细胞保存液存在着上述种种不便和问题。
发明内容
本发明的目的，在于提出一种使医疗资源和资金匮乏的边远地区可以使用最新的液基薄层细胞制片技术及进行大批量基层体检的液基细胞保存液组合物及其制备方法。
本发明的另一目的，在于提出一种使用相配套的简易快速薄层液基细胞学细胞涂片制备方法、分离粘附液、粘液分解液和自然沉降装置，根据不同细胞比重的不同，把干扰诊断的有形成分隔离在分离液中丢弃，让需观察的细胞有效沉降在玻片上，使制备的涂片背景更清晰的液基细胞保存液组合物及其制备方法。
本发明的又一目的，在于提出一种可重复制片，制片质量高，使标本在室温下保持细胞形态无显著性差异至少3个月的液基细胞保存液组合物及其制备方法。
为实现上述目的，本发明的技术解决方案是：
一种液基细胞保存液组合物，其特征在于包括以下重量百分比的组分：
细胞固定剂：甲醛 2～15%
防腐剂：双乙酸钠 0.1～5%
抗凝剂：枸橼酸钠 2～10%
缓冲剂：氯化钠 0.5～2%
螯合剂：乙二胺四乙酸（EDTA） 0.002～0.5%
溶血剂：冰醋酸 0.5～10%
水：纯水 5～80%
其中：所述甲醛为分析纯试剂，含量37～40%；双乙酸钠为食品添加剂级；枸橼酸钠为分析纯试剂，氯化钠为分析纯试剂，NaCl>99.5%；EDTA为分析纯试剂，冰醋酸为分析纯试剂，CH2COOH>99.5%；所述冰醋酸由国药集团化学试剂有限公司生产。
本发明的液基细胞保存液组合物还可以采用以下的技术措施来进一步实现。
前述的液基细胞保存液组合物，其中还包括加快固定细胞作用的乙醇20～95wt%。
前述的液基细胞保存液组合物，其中所述缓冲剂还包括氯化钾0.01～0.2wt%。
前述的液基细胞保存液组合物，其中所述缓冲剂还包括碳酸氢钠0.2～5wt%，系南昌白云药业有限公司生产的粉剂。
一种液基细胞保存液组合物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
a、在搅拌下将碳酸氢钠粉剂加入到纯水中溶解；
b、在步骤a的溶液中加EDTA搅拌溶解；
c、在搅拌下依次加入甲醛、双乙酸钠、枸橼酸钠、氯化钠和冰醋酸，直到搅拌均匀。
在本发明的液基细胞保存液组合物的制备方法中，除了上述组分之外，可在不背离本发明宗旨的范围内增加少量粘液分解液，所述粘液分解液包含二硫苏糖醇（DTT）和具有加速分解的氯化钙，使需检测的细胞最大限度的从粘液中分离出来，分离粘附液根据不同细胞比重的不同，把干扰诊断的有形成分隔离在分离液中丢弃，让需观察的细胞有效沉降在玻片上。DTT由上海金璐贸易有限公司生产，纯度>99.4%，其为强还原剂，可裂解二硫键。在标本中还可加入粘附分离液，所述粘附分离液包含乙醇，氯化钠，EDTA和碳酸氢钠，且用冰醋酸调节pH到5.0～7.0。
本发明的液基细胞保存液组合物可用于宫颈细胞、鼻咽细胞、痰液、尿液、胸腹水和脑脊液等人体脱落细胞的处理。
采用上述技术方案后，本发明的液基细胞保存液组合物及其制备方法具有以下优点：
1、可以最大限度保持细胞形态，提高诊断准确率；
2、所用设备简单，操作方法便捷，大幅度提高工作效率；
3、可以使标本在室温下保持细胞形态无显著性差异至少3个月。
具体实施方式
以下通过具体实施例进一步说明本发明。
实施例1
液基细胞保存液组合物，包括以下重量百分比的组分：
细胞固定剂：甲醛 2%
防腐剂：双乙酸钠 0.1%
抗凝剂：枸橼酸钠 2%
缓冲剂：氯化钠 0.5%
螯合剂：EDTA 0.002%
溶血剂：冰醋酸 0.5%
水：纯水 75%
其中：所述甲醛为分析纯试剂，含量37%；双乙酸钠为食品添加剂级；枸橼酸钠为分析纯试剂，氯化钠为分析纯试剂，NaCl>99.5%；EDTA为分析纯试剂，冰醋酸为分析纯试剂，CH2COOH>99.5%；所述冰醋酸由国药集团化学试剂有限公司生产。
在上述组分中还可加入加快固定细胞作用的乙醇20wt%。
在上述缓冲剂氯化钠组分中还可加入缓冲剂氯化钾0.01wt%和由南昌白云药业有限公司生产的粉剂缓冲剂碳酸氢钠0.2wt%，使它们三者组成高效缓冲体系结构。本实施例操作便捷，提高诊断准确率，还可以使标本在室温下保持细胞形态无显著性差异至少3个月。
实施例2
液基细胞保存液组合物，包括以下重量百分比的组分：
细胞固定剂：甲醛 2.5%
防腐剂：双乙酸钠 0.4%
抗凝剂：枸橼酸钠 2.5%
缓冲剂：氯化钠 0.7%
螯合剂：EDTA 0.005%
溶血剂：冰醋酸 0.9%
水：纯水 76%
其中：所述甲醛为分析纯试剂，含量40%；双乙酸钠为食品添加剂级；枸橼酸钠为分析纯试剂，氯化钠为分析纯试剂，NaCl>99.5%；EDTA为分析纯试剂和冰醋酸为分析纯试剂，CH2COOH>99.5%，由国药集团化学试剂有限公司生产。
在上述组分中还可加入加快固定细胞作用的乙醇25wt%。
在上述缓冲剂氯化钠组分中还可加入缓冲剂氯化钾0.02wt%和由南昌白云药业有限公司生产的粉剂缓冲剂碳酸氢钠0.4wt%，使它们三者组成高效缓冲体系结构。本实施例操作便捷，提高诊断准确率，还可以使标本在室温下保持细胞形态无显著性差异至少3个月。
实施例3
液基细胞保存液组合物，包括以下重量百分比的组分：
细胞固定剂：甲醛 5%
防腐剂：双乙酸钠 2%
抗凝剂：枸橼酸钠 5%
缓冲剂：氯化钠 0.5%
螯合剂：EDTA 0.004%
溶血剂：冰醋酸 5%
水：纯水 80%
其中：所述甲醛为分析纯试剂，含量37%；双乙酸钠为食品添加剂级；枸橼酸钠为分析纯试剂，氯化钠为分析纯试剂，NaCl>99.5%；EDTA为分析纯试剂和冰醋酸为分析纯试剂，CH2COOH>99.5%，由国药集团化学试剂有限公司生产。
在上述组分中还可加入加快固定细胞作用的乙醇35wt%。
在上述缓冲剂氯化钠组分中还可加入缓冲剂氯化钾0.02wt%和由南昌白云药业有限公司生产的粉剂缓冲剂碳酸氢钠0.4wt%，使它们三者组成高效缓冲体系结构。本实施例操作便捷，让需观察的细胞有效沉降在玻片上，使制备的涂片背景更清晰，提高诊断准确率。
实施例4
一种液基细胞保存液组合物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
a、在搅拌下将规定量的碳酸氢钠粉剂加入到纯水中溶解；
b、在步骤a的溶液中加入规定量的EDTA搅拌溶解；
c、在搅拌下依次加入规定量的甲醛、双乙酸钠、枸橼酸钠、氯化钠和冰醋酸，直到搅拌均匀。本实施例方法操作简便、工作效率高。
以上实施例仅供说明本发明之用，而非对本发明的限制，有关技术领域的技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，还可以作出各种变换或变化。因此，所有等同的技术方案也应该属于本发明的范畴，应由各权利要求限定。
Claims (5)
1.一种液基细胞保存液组合物，其特征在于包括以下重量百分比的组分：
细胞固定剂：甲醛 2～15%
防腐剂：双乙酸钠 0.1～5%
抗凝剂：枸橼酸钠 2～10%
缓冲剂：氯化钠 0.5～2%
螯合剂：EDTA 0.002～0.5%
溶血剂：冰醋酸 0.5～10%
水：纯水 5～80%
其中：所述甲醛为分析纯试剂，含量37～40%；双乙酸钠为食品添加剂级；枸橼酸钠为分析纯试剂，氯化钠为分析纯试剂，NaCl>99.5%；EDTA为分析纯试剂，冰醋酸为分析纯试剂，CH2COOH>99.5%；所述冰醋酸由国药集团化学试剂有限公司生产。
2.如权利要求1所述的液基细胞保存液组合物，其特征在于，还包括加快固定细胞作用的乙醇20～95wt%。
3.如权利要求1所述的液基细胞保存液组合物，其特征在于，所述缓冲剂还包括氯化钾0.01～0.2wt%。
4.如权利要求1所述的液基细胞保存液组合物，其特征在于，所述缓冲剂还包括碳酸氢钠0.2～5wt%，系南昌白云药业有限公司生产的粉剂。
5.一种如权利要求4所述的液基细胞保存液组合物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
a、在搅拌下将碳酸氢钠粉剂加入到纯水中溶解；
b、在步骤a的溶液中加入EDTA搅拌溶解；
c、在搅拌下依次加入甲醛、双乙酸钠、枸橼酸钠、氯化钠和冰醋酸，直到搅拌均匀。
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