CN104634628B - 一种血液稳定剂及其应用 - Google Patents

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本发明涉及一种血液稳定剂及其应用，用于稳定血液样品。本发明的血液稳定剂包括以下浓度的组分：β‑环糊精10～300μmol/L、色甘酸二钠15～350μmol/L、重铬酸钾0.01～0.5％、三氟柳5～150μmol/L、卵磷脂0.05～1.5％、EDTA三钾盐2.5～5.0μmol/L；其中，所述重铬酸钾和卵磷脂的浓度为质量百分比浓度。本发明的血液稳定剂能稳定血细胞，防止有核细胞破裂而释放细胞中的DNA，能避免血细胞外DNA浓度增加；同时，本发明的血液稳定剂还能防止DNA在体外降解并防止血液凝固。

Description

一种血液稳定剂及其应用
技术领域
本发明涉及一种血液稳定剂及其应用，具体涉及一种既可保护血细胞膜又能抗DNA降解的血液稳定剂及其应用。
背景技术
稳定血液样品对于血样品的运输和临床试验流程的操作极为重要。全血样品采集时加入普通抗血液抗凝试剂后，6小时内(最多不超过12小时)需对血液进行分析或者其他处理。
甲醛作为一种固定剂，它是临床和研究组织与生物样品保存的支柱。甲醛用作固定剂的原理是：在结构组织蛋白与脂蛋白和糖蛋白的蛋白部分之间形成交联的倾向。甲醛作为固定剂，存在一些弊端。首先，甲醛的缓慢渗透会使样品中的DNA/RNA被降解得无法利用；甲醛除了增强DNA/RN降解之外，交联最终形成时会掩蔽DNA/RNA，使其不受为了原位杂交或聚合酶链反应而使用的探针和引物的作用。结构上结合在DNA和RNA的大分子中的蛋白质与样品中存在的其他蛋白质的交联作用损害了从组合和其它分析用生物样品中提取DNA。
另外，市面上虽然有多种形式的甲醛溶液出售，但它们含有少量的甲酸和甲醇，会对被固定的样品产生不良影响。并且，甲醛极易挥发、毒性大，对皮肤有硬化作用，长时间接触可能导致皮肤破裂、皮炎或是过敏症状，还会影响呼吸道。
因此，仍然迫切需要一种不含甲醛和其它交联剂的组织学固定剂。过去已经开发了不含甲醛的固定剂，例如Kryofix，它是乙醇和聚乙二醇的混合物。虽然Kryofix已被成功使用，但是其不能提供DNA/RNA变性的充分保护。
由此，在稳定血液样品过程，DNA保存-保守-降解、提取和扩增等相关问题亟待解决。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的缺陷而提供一种既可保护血细胞膜又能抗DNA降解的血液稳定剂；同时，本发明还提供了所述血液稳定剂在稳定血液中的应用。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种血液稳定剂，包以下浓度的组分：
其中，所述重铬酸钾和卵磷脂的浓度为质量百分比浓度。
作为本发明所述血液稳定剂的更优选实施方式，所述血液稳定剂包括以下浓度的组分：
作为本发明所述血液稳定剂的最佳实施方式，所述血液稳定剂包括以下浓度的组分：
本实施例所述血液稳定剂的制备方法为：首先，根据血液稳定剂中组分的摩尔浓度与分子量、血液稳定剂的体积计算β-环糊精(分子量为1135)、色甘酸二钠(分子量为248.3)、三氟柳(分子量为248.2)、EDTA三钾盐(分子量为406.5)的质量，并根据血液稳定剂的总质量和其组分的质量百分比浓度计算重铬酸钾与卵磷脂的质量；然后，根据计算结果称取血液稳定剂中的各组分；最后，将称取的各组分加入容量瓶中，加水溶解，并定容。
β-环糊精浓度为10～300μmol/L、色甘酸二钠浓度为15～350μmol/L、重铬酸钾质量百分比浓度为0.01～0.5％、三氟柳浓度为5～150μmol/L、卵磷脂质量百分比为0.05～1.5％时，本发明的血液稳定剂能稳定血细胞膜，防止有核细胞破裂。
本发明还提供了所述血液稳定剂在稳定血液中的应用。优选地，所述血液稳定剂用于稳定血细胞膜、防止有核细胞破裂和抗DNA降解。
使用时，可以将本发明的血液稳定剂单独加至真空采血管中，也可以将其与血液抗凝试剂混合后一起加至真空采血管中，本发明的血液稳定剂使用上与普通抗凝采血管在采集全血样品、运输以及储存方面没有很大区别。
本发明的有益效果为：本发明的血液稳定剂能稳定血细胞，防止有核细胞破裂而释放细胞中的DNA，能避免血细胞外DNA浓度增加；同时，本发明的血液稳定剂还能防止DNA在体外降解并防止血液凝固。本发明的血液稳定剂能使全血样品稳定至少72小时，经处理的血液样品不会影响后续样品分子分析，可广泛应用于分析血浆样品中游离DNA。
附图说明
图1和图2为以装有本发明血液稳定剂的采血管或Streck管采取全血样品，采用磁珠法提取游离DNA的结果图。
图3为以装有本发明血液稳定剂的采血管采取全血样品，提取其中的游离DNA建立基因库的结果图。
具体实施方式
为了更好地说明本发明的目的、技术方案和有益效果，下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例1
本发明所述血液稳定剂的一种实施例，本实施例所述血液稳定剂包括以下浓度的组分：
其中，所述重铬酸钾和卵磷脂的浓度为质量百分比浓度。
本实施例所述血液稳定剂的制备方法为：首先，根据血液稳定剂中组分的摩尔浓度与分子量、血液稳定剂的体积计算β-环糊精(分子量为1135)、色甘酸二钠(分子量为248.3)、三氟柳(分子量为248.2)、EDTA三钾盐(分子量为406.5)的质量，并根据血液稳定剂的总质量和其组分的质量百分比浓度计算重铬酸钾与卵磷脂的质量；然后，根据计算结果称取血液稳定剂中的各组分；最后，将称取的各组分加入容量瓶中，加水溶解，并定容。
实施例2
本发明所述血液稳定剂的一种实施例，本实施例所述血液稳定剂包括以下浓度的组分：
其中，所述重铬酸钾和卵磷脂的浓度为质量百分比浓度。
本实施例所述血液稳定剂的制备方法同实施例1。
实施例3
本发明所述血液稳定剂的一种实施例，本实施例所述血液稳定剂包括以下浓度的组分：
其中，所述重铬酸钾和卵磷脂的浓度为质量百分比浓度。
本实施例所述血液稳定剂的制备方法同实施例1。
实施例4
本发明所述血液稳定剂的一种实施例，本实施例所述血液稳定剂包括以下浓度的组分：
其中，所述重铬酸钾和卵磷脂的浓度为质量百分比浓度。
本实施例所述血液稳定剂的制备方法同实施例1。
实施例5
本发明所述血液稳定剂的一种实施例，本实施例所述血液稳定剂包括以下浓度的组分：
其中，所述重铬酸钾和卵磷脂的浓度为质量百分比浓度。
本实施例所述血液稳定剂的制备方法同实施例1。
实施例6
本发明所述血液稳定剂的一种实施例，本实施例所述血液稳定剂包括以下浓度的组分：
其中，所述重铬酸钾和卵磷脂的浓度为质量百分比浓度。
本实施例所述血液稳定剂的制备方法同实施例1。
实施例7
为了考察本发明的血液稳定剂在保护血细胞膜、抗DNA降解中的作用，我们分别采用Streck管(Streck管可在市场上购买，其规格为：抽血量10.0mL、含有抗凝血剂K3EDTA和添加剂)和装有本发明血液稳定剂的采血管(其抽血量为10.0mL)抽取全血样品，混匀后在常温下保存或输送。抽取全血样品72小时后，采用磁珠法(磁珠法为现有技术)提取游离DNA，并用游离DNA样品建立基因库，游离DNA的提取和DNA样品建立基因库(采用IonLibrary kit建立基因库)的结果如下：
(1)游离DNA提取结果
以装有本发明血液稳定剂的采血管或Streck管采取全血样品，采用磁珠法提取游离DNA的结果见图1、2。图1表示游离DNA提取率的结果，图2表示提取DNA浓度的结果。
图1和图2中，“a”表示Streck管采取的全血样品，“b”表示装有本发明血液稳定剂的采血管采取的样品；图1和图2中，P1～P5表示的是不同病人的样品。
(2)建立基因库的结果
以装有本发明血液稳定剂的采血管采取全血样品，提取其中的游离DNA建立基因库的结果如图3所示。其中，建立基因库采用的仪器是安捷伦生物分析仪。
由图3可见，采用装有本发明血液稳定剂的采血管，提取的游离DNA其PCR扩增效率高，建立的DNA库干净，DNA片段完全达到预期效果。
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims (5)

1.一种血液稳定剂，其特征在于：所述血液稳定剂包括以下浓度的组分：
其中，所述重铬酸钾和卵磷脂的浓度为质量百分比浓度。
2.一种如权利要求1所述的血液稳定剂，其特征在于：所述血液稳定剂包括以下浓度的组分：
3.一种如权利要求2所述的血液稳定剂，其特征在于：所述血液稳定剂包括以下浓度的组分：
4.如权利要求1～3任一项所述血液稳定剂在稳定血液中的应用。
5.如权利要求4所述血液稳定剂在稳定血液中的应用，其特征在于：所述血液稳定剂用于稳定血细胞膜、防止有核细胞破裂和抗DNA降解。
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