CN102466730A - 一种新的配制血型反定型试剂的方法 - Google Patents

一种新的配制血型反定型试剂的方法 Download PDF

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王礼文
詹小勇
李晓兰
张文丽
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Abstract

一种新的配制血型反定型试剂的方法，可保持人红细胞A及B血型抗原以及其他自身红细胞抗原的完整性和原有的免疫反应性，属于医学实验领域。方法为采集标准的双份A、B、O型健康人的红细胞，按A、B、O型类别将红细胞加入保存液中；保存液含有EDTA-2K盐类抗凝剂、甘油类红细胞膜保护剂，维生素C类抗氧化剂、磷酸盐类PH缓冲剂等，并使其渗透压、PH等指标在规定的范围；这样可使红细胞保存达半年以上，并保持其原有的抗原性不变。可作为手工法及半自动、全自动血型配血鉴定系统做血型反定型用试剂。

Description

一种新的配制血型反定型试剂的方法
技术领域：用一种新的配制血型反定型试剂的方法，可保持人红细胞A及B血型抗原以及其他自身红细胞抗原的完整性和原有的免疫反应性，试剂保存期长，可作为手工法及半自动、全自动血型配血鉴定系统做血型反定型用的试剂。该发明属医学实验领域。
背景技术：在抢救患者及医学治疗等方面输血是一项重要的治疗手段，血型鉴定十分重要，不能有差错，这是关系到生命安全的大事，因此除做正血型定型试验外，还需要做反定型试验，这样才能保险。因此做血型鉴定规定要做正反定型试验。正定型是受试者的红血球和标准的A、B型血清做凝结免疫反应；反定型则用标准的A、B、O型红细胞和受试者血清做凝结免疫反应。做血型反定型实验时，标准的A、B、O型红细胞往往由实验室工作人员自己配制，该试剂保存时间不长，存放4℃普通冰箱只能一周左右，试剂专门供应商提供的这类试剂也只能保存一个月左右，这给血型反定型实验带来不便。如能将血型反定型实验中标准的A、B、O型红细胞试剂保存期延长达半年以上，并仍能保持其抗原性，并将此用于半自动和全自动化血型配血系统，可解决该类试剂标准化和保存问题。
发明内容：采集标准的双份A、B、O型健康人的红细胞，按A、B、O型类别将红细胞加入保存液中。保存液含有EDTA-2K盐类抗凝剂、甘油类红细胞膜保护剂，维生素C类抗氧化剂、抗生素类防腐剂、醛类稳定剂及磷酸盐类PH缓冲剂等，将上述成分按一定比例配制，保持渗透压、PH等指标在规定的范围，这样可使红细胞保存达半年以上，并保持其原有的抗原性不变。
具体实施方式：
1.保存液的配制
1.1 细胞保养液
烧杯用自来水清洗干净，并用纯净水荡洗后，取800毫升蒸溜水于烧杯内，按下例成分和重量加入水中。
试剂配方
  名称   纯度   分子量   CAS No.   含量
  氯化钠   分析纯   58.5   7647-14-5   65mmol/L
  甘露醇   分析纯   295   182.17   64mmol/L
  葡萄糖   分析纯   180   51312-42-6   35mmol/L
  甘油   分析纯   92.09   56-81-5   0.112％(V/V)
  磷酸氢二钠   分析纯   159.99   7588-79-4   22mmol/L
  磷酸二氢钠   分析纯   137.99   83-07-8   2.72mmol/L
  EDTA-2K   分析纯   404.45   25102-12-9   1.04mmol/L
  海藻糖   -----   342.30   6138-23-4   4.38mmol/L
  海藻酸钠   化学纯   (198)n   9005-38-3   0.375g/L
首先加入海藻糖、海藻酸钠，加热溶解。之后加入磷酸氢二钠、磷酸二氢钠，放在磁力搅拌器上搅拌5min后，依次加入固体氯化钠、甘露醇、葡萄糖，再加入液体甘油、EDTA-2K，定容至1000毫升。溶液温度20℃，调整PH为7.1-7.2，渗透压为280-282mOsm/Kg。于盐水瓶内121KP，30min高压灭菌备用。
1.2 保存液配制
配制时将细胞保养液加入下例表中的成分和量即为保存液
Figure BSA00000351539900021
Figure BSA00000351539900031
2 血型反定型标准红细胞试剂的配制
将采集新鲜的标准双份EDTA-2K抗凝A、B、O型健康人血液，再次进行血型鉴定后，按A、B、O型类别混合后作6000g/min离心2min，吸去上清血浆，加入保养液至初始量，再加入与初始血液等量的固定液。4℃冰箱过夜。第二天再作6000g/min离心2min，去掉上清到原始量，即为标准的A、B、O型反定型红细胞试剂。
具体实例：
血型反定型鉴定法：
1.试剂
血型反定型用的标准A、B、O型红细胞试剂
2.血型反定型方法
将受试者的抗凝血液离心，取上清血桨0.5ml一小试管内，然后加入血型反定型用的3标准A、B、O型红细胞3％悬液试剂0.5ml，6000g/min离心2min，观察凝集反应，其结果应符合正定型血型鉴定所得的一致结果。
3.血型反定型用的标准A、B、O型红细胞试剂保存期观察
将血型反定型用的标准A、B、O型红细胞试剂于4℃冰箱保存一个月、三个月、六个月后再用该标准A、B、O型红细胞试剂和新鲜配制的标准A、B、O型红细胞试剂做血型反定型试验。一次同时做A、B、O型受试者血液各10份，并进行比较。4℃冰箱保存一个月、三个月、六个月的标准A、B、O型红细胞试剂所做结果与刚配制的标准A、B、O型红细胞试剂实验结果一致，其抗原性无变化，符合率达到100％。

Claims (2)

1.一种新的配制血型反定型试剂的方法是用于血型反定型实验的标准A、B、O型红细胞试剂的一种配制方法。将A、B、O型类别的健康人新鲜血的红细胞加入配制的保存液中即为该反定型试剂。该保存液的特点是含有EDTA-2K盐类抗凝剂、甘油类红细胞膜保护剂，维生素C类抗氧化剂、抗生素类防腐剂、醛类稳定剂和磷酸盐类PH缓冲剂等。并有一定比例和浓度，该保存液配制后可使红细胞保存达半年以上，并保持其原有的抗原性不变。
2.按照权利要求1所述，该保存液醛类稳定剂是由甲醛、戊二醛、多聚甲醛三种醛类构成。其各种醛浓度在0.01至0.15％范围；甘油类红细胞膜保护剂浓度在0.05至0.2％范围；海藻糖浓度在0.2至0.6％范围；抗氧化剂维生素C浓度在0.1至0.4‰范围。
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