CN111328798A - 一种尿液稳定保护剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种尿液稳定保护试剂，包括：NaCI，固定剂，防腐剂，抗氧化剂，曲酸和/或黄酮，乙二胺四乙酸二钾、枸橼酸钠、肝素中的一种。本发明的尿液稳定试剂，一是能够有效的保存尿液中的有形成分不易聚集和破解，抑制酶的降解，给细胞或酶类检测提供了保障；二是控制了微生物的繁殖生长，防止了人体代谢物与外环境接触后过早的降解或氧化，也给各项检测的准确度提供了条件。三是本发明注意到了尿液的自然酸度的保护，为尿液酸度测量做了保护性调配。总之，本发明为尿液样本的稳定保存提供了一种新的可靠方法。

Description

一种尿液稳定保护剂及其制备方法

技术领域

本申请涉及尿液标本保存领域，特别是涉及一种的尿液稳定保护试剂及其制备方法。

背景技术

尿液获取简便,能被无创性收集并能提供大量生理上变化发展进程的信息。尿(urine)由肾脏生成，经输尿管，膀胱排出的含有大量代谢终产物的液体。其成分：水占96％-97％，其他为尿素，尿酸，肌酐，氨等非蛋白氮化合物、硫酸盐等。尿呈淡黄色，比重1.015-1.025。尿的酸碱度受食物性质的影响，变动很大，一般为pH5.0-7.0，最大变动范围可达pH4.5-8.0。正常人每昼夜排出的尿量在1000～2000ml之间，每日尿量约1500毫升，其中500毫升为基本排水量，在异常情况下，每昼夜的尿量可显著增多或减少，伴随代谢产物排出(每日尿量少于500毫升，即为少尿)，余为机动排水量，随进水量的增减而变动。尿的比重随尿量而变动，一般介于1.015～1.025之间，最大变动范围为1.001～1.035。

尿液含有多种有机、无机类等代谢产物；许多微生物能够在尿液中快速繁衍。另外，尿液中存在许多潜在生物标记物,包括了某些代谢物质、细胞、蛋白、核酸等，许多因素对尿液中的生物标记物会产生一定的影响，诸如存储温度、存储时间、酸碱度、反复冻融等因素，使得尿液中的苯丙氨酸、乙酰乙酸、异亮氨酸、丙氨酸以及马尿酸和蛋白等代谢物的含量会发生明显变化，同时，外在因素对尿液储存稳定性的影响及稳定性的方法仍存在一定争议。

随着组学技术的发展，利用尿液开展代谢组学和蛋白质组学分析也日益增多，进一步拓宽了外在因素影响尿液存储稳定性的研究。目前，有关尿液的存储稳定性、及其防腐剂和稳定剂的研究有一定的报道，大都是对于临床尿液指标检测常见的有肌酐、尿酸、蛋白、离子有大量的研究，但是，许多影响因素对尿液中的生物代谢标志物的影响因素细节仍然不够完善，尤其是代谢性疾病、肿瘤等多种指标，临床已有的尿液常用稳定防腐剂为甲醛、甲苯、盐酸等物质，虽然解决了部分标本的检测需要，但是，对于多项检测需要尚存在一定问题，干扰或不稳定性因素依然存在。

为此本发明研发了一种尿液稳定保护试剂，对于尿液中的细胞、酸度、尿液中的代谢物检测等都有很好的稳定作用，解决了上述存在的问题。

发明内容

为解决尿液中嘌呤、尿酸等代谢物的检测过程中，因为尿液成分复杂，在2个小时后代谢物自身的氧化或降解在外界环境中，极易发生变化的技术问题。本发明提供一种新的尿液稳定保护试剂，通过防腐抗氧化及减少背景干扰物增加等的处理，克服了不利因素，有效的避免了代谢物的分解或变化，给临床留取尿液标本带来了便利，含量的保护给检测准确性提高了保障，避免了因标本留取时间相对过长而达不到检测准确度的要求。

本发明的目的通过以下技术方案来实现：一种尿液稳定保护试剂，包括：NaCI，固定剂，防腐剂，抗氧化剂，曲酸和/或黄酮，乙二胺四乙酸二钾(EDTA-2K)所述NaCl的浓度为0.5～0.8％；

所述固定剂的浓度为0.7～2％；

所述防腐剂的浓度为0.02～0.05％；

所述抗氧化剂的浓度为0.5～1.6％；

所述曲酸黄酮的浓度为0.4～1.20％；

所述乙二胺四乙酸二钾(EDTA-2K)、枸橼酸钠或肝素的浓度为0.08-0.1％。

本发明所述尿液稳定保护试剂含有浓度为0.5～0.8％的NaCI，浓度为0.7～2％的固定剂，浓度为0.02～0.05％的防腐剂，浓度为0.5～1.6％的抗氧化剂，0.4～1.20％浓度为曲酸和/或黄酮，浓度为0.08～0.1％的乙二胺四乙酸二钾(EDTA-2K)、枸橼酸钠、肝素中的一种。

本发明所述尿液稳定保护试剂成分涉及的浓度为质量体积浓度。

根据上文技术方案，优选的情况下，所述固定剂为甲醇、甲醛、戊二醛、多聚甲醛中的一种以上。

根据上文技术方案，优选的情况下，所述防腐剂为麝香草酚。

根据上文技术方案，优选的情况下，所述抗氧化剂为对苯二酚、硫代双酚、焦性没食子酸中的一种。

根据上文技术方案，优选的情况下，所述尿液稳定保护剂的pH为6.5～7.7，优选为pH为7.0±0.1。

根据上文技术方案，优选的情况下，可使用氢氧化钠调整尿液稳定保护剂的pH，即使用用氢氧化钠将尿液稳定保护剂的pH调整为6.5-7.7，优选为pH为7.0±0.1。

本发明还涉及保护上述尿液稳定保护试剂的制备方法，包括如下步骤：

(1)将NaCI溶于大部分蒸馏水中，得到NaCl的溶液；

(2)将乙二胺四乙酸二钾(EDTA-2K)、枸橼酸钠或肝素固体溶于步骤(1)得到的NaCl的溶液中，再依次加入抗氧化剂、曲酸和/或黄酮，混合，得到混匀后的混合物；

(3)将步骤(2)得到的混匀后的混合物与甲醇、麝香草酚混合，用氢氧化钠调节pH至6.5～7.7，之后加小部分蒸馏水；

其中，所述大部分蒸馏水的体积与大部分蒸馏水和小部分蒸馏水总体积的比值为(8-9):10。

本发明的尿液稳定保护试剂，固定剂可以对尿液中的细胞成份进行一定的保护，能维持尿液中的白细胞或其它脱落细胞的稳定性。防腐剂主要是保护蛋白等代谢物质不被破坏，还与抗氧化剂协同防止代谢物的降解反应。EDTA-2K、枸橼酸钠或肝素对尿液中的金属离子可以进行螯合，有防止细胞凝聚的作用，同时，还与曲酸类物质、黄酮可以抑制尿液中多种酶的活性，固定剂用于固定尿液中的细胞，使得细胞维持自身形态结防构，避免其内容物被释放出来。

总之，以上各组分相互配合，能起到尿液标本多种物质维持自身的结构稳定、保持生物学性能的目的。本发明的尿液稳定试剂能够将尿液在常温下(15-25℃)保存3天，在2-8℃的环境下保存至少12天，而且其中的尿酸、嘌呤等代谢物基本不发生检测影响；在-20℃可以保存一年，-80℃下可以保存2年以上，但是，应尽量避免反复冻融。

本发明的有益效果：本发明的尿液稳定试剂，一是能够有效的保存尿液中的有形成分不易聚集和破解，抑制酶的降解，给细胞或酶类检测提供了保障；二是控制了微生物的繁殖生长，防止了人体代谢物与外环境接触后过早的降解或氧化，也给各项检测的准确度提供了条件。三是本发明注意到了尿液的自然酸度的保护，为尿液酸度测量做了保护性调配。总之，本发明为尿液样本的稳定保存提供了一种新的可靠方法。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本申请作进一步详细说明。同时需要说明的是下述实施例不是对本申请的应用范围限制。

实施例1:对于尿酸、嘌呤、及pH稳定性测定的稳定保护剂应用及验证试验

本实施例的尿液稳定保护试剂包括NaCl 0.67％、固定剂甲醇2％，麝香草酚0.02％，焦性没食子酸中0.6％，曲酸0.7％，EDTA-2K 0.08％。用氢氧化钠调节尿液稳定保护试剂的pH值测量值7.0。

上述尿液稳定保存试剂的制备方法如下：

在一个容器A中把0.67g NaCI溶于90ml蒸馏水中，得到NaCl的溶液；将80mg EDTA-2K固体溶于上述NaCl的溶液中，再依次加入焦性没食子酸0.6g、曲酸0.7g，混合。在容器B中加入2g甲醇和20mg麝香草酚。将容器A中混匀后的混合物倒入容器B后混合，用氢氧化钠调节pH为7.0，然后倒入100ML量筒中加蒸馏水到100ml完成。然后进行G4漏斗的过滤，所得滤液即得到本实施例的尿液稳定保护试剂。

对于尿酸及pH稳定性测定的实验步骤：

取尿液10份(类别为1-10)，每份分成2组，其中一组不加稳定保护剂，另一组加稳定保护剂(每10ml尿液加0.2ml)。对尿酸及pH值在常温(16-24℃)带盖试管密闭存放情况下2小时内分别测量一次，结果见表1；3天后再次分别测量一次，结果见表2。

表1 2小时内稳定试验结果表

注：表中A为自然尿液，不加稳定保护剂；B为加保护剂的尿液。

表2 3天内的稳定试验结果表

注：表中A为自然尿液，不加稳定保护剂；B为加保护剂的尿液。

从上述两表(表1和表2)的结果看，2小时内不加稳定保护剂尿液的稳定性尚可，随时间的延长，尿酸水平下降，pH值升高。尿中的成份随着时间的增加会发生较大的变化。而加稳定保护剂的尿液pH和尿酸的结果基本不受影响。

我们又通过放置2-8℃冰箱中进行类似的存放试验，12天内结果与上述3天的试验结果基本一致，12天内加稳定保护剂的尿液结果基本不受影响。

对于任何熟悉本领域的技术人员而言，在不脱离本发明技术方案范围情况下，都可利用上述揭示的技术内容对本发明技术方案作出许多可能的变动和修饰，或修改为等同变化的等效实施例。因此，凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所做的任何简单修改、等同变化及修饰，均应仍属于本发明技术方案保护的范围内。

Claims (7)

1.一种尿液稳定保护试剂，其特征在于，包括：NaCI，固定剂，防腐剂，抗氧化剂，曲酸和/或黄酮，乙二胺四乙酸二钾、枸橼酸钠、肝素中的一种；

所述NaCl的浓度为0.5～0.8％；

所述固定剂的浓度为0.7～2％；

所述防腐剂的浓度为0.02～0.05％；

所述抗氧化剂的浓度为0.5～1.6％；

所述曲酸和/或黄酮的浓度为0.4～1.20％；

所述乙二胺四乙酸二钾、枸橼酸钠或肝素的浓度为0.08-0.1％。

2.根据权利要求1所述的尿液稳定保护试剂，其特征在于，所述固定剂为甲醇、甲醛、戊二醛、多聚甲醛中的一种以上。

3.根据权利要求1所述的尿液稳定保护试剂，其特征在于，所述防腐剂为麝香草酚。

4.根据权利要求1所述的尿液稳定保护试剂，其特征在于，所述抗氧化剂为对苯二酚、硫代双酚、焦性没食子酸中的一种。

5.根据权利要求1所述的尿液稳定保护试剂，其特征在于，所述尿液稳定保护剂的pH为6.5-7.7。

6.根据权利要求5所述的尿液稳定保护试剂，其特征在于，使用氢氧化钠调整尿液稳定保护剂的pH。

7.一种权利要求1-6中任意一项所述的尿液稳定保护试剂的制备方法，包括如下步骤：

(1)将NaCI溶于大部分蒸馏水中，得到NaCl的溶液；

(2)将乙二胺四乙酸二钾、枸橼酸钠或肝素溶于步骤(1)得到的NaCl的溶液中，再依次加入抗氧化剂、曲酸和/或黄酮，混合，得到混匀后的混合物；

(3)将步骤(2)得到的混匀后的混合物与甲醇、麝香草酚混合，用氢氧化钠调节pH至6.5～7.7，之后加小部分蒸馏水；

其中，所述大部分蒸馏水的体积与大部分蒸馏水和小部分蒸馏水总体积的比值为8-9:10。