CN107202888B - 一种用于宫颈液基细胞的p16INK4a免疫标记显色试剂盒 - Google Patents
一种用于宫颈液基细胞的p16INK4a免疫标记显色试剂盒 Download PDFInfo
- Publication number
- CN107202888B CN107202888B CN201710562392.4A CN201710562392A CN107202888B CN 107202888 B CN107202888 B CN 107202888B CN 201710562392 A CN201710562392 A CN 201710562392A CN 107202888 B CN107202888 B CN 107202888B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- ink4a
- liquid
- cervical
- antibody
- reagent box
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000007788 liquid Substances 0.000 title claims abstract description 80
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims abstract description 25
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 24
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims abstract description 21
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 19
- 239000002981 blocking agent Substances 0.000 claims abstract description 16
- 239000013642 negative control Substances 0.000 claims abstract description 15
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 claims abstract description 13
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 19
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 14
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 claims description 14
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 claims description 11
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 claims description 11
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims description 10
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 210000003679 cervix uteri Anatomy 0.000 claims description 9
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 7
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 7
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 claims description 7
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 claims description 7
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 7
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 7
- 239000003109 Disodium ethylene diamine tetraacetate Substances 0.000 claims description 6
- ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L EDTA disodium salt (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].OC(=O)CN(CC([O-])=O)CCN(CC(O)=O)CC([O-])=O ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- 208000034254 Squamous cell carcinoma of the cervix uteri Diseases 0.000 claims description 6
- 201000006612 cervical squamous cell carcinoma Diseases 0.000 claims description 6
- 235000019301 disodium ethylene diamine tetraacetate Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 claims description 6
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 5
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 claims description 5
- 241001494479 Pecora Species 0.000 claims description 5
- KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N periodic acid Chemical compound OI(=O)(=O)=O KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 4
- 235000011330 Armoracia rusticana Nutrition 0.000 claims description 2
- 240000003291 Armoracia rusticana Species 0.000 claims description 2
- 229920002565 Polyethylene Glycol 400 Polymers 0.000 claims 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims 2
- OQUFOZNPBIIJTN-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid;sodium Chemical compound [Na].OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O OQUFOZNPBIIJTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N Ethylenediamine Chemical compound NCCN PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- LLJZKKVYXXDWTB-UHFFFAOYSA-N acetic acid;sodium Chemical compound [Na].[Na].CC(O)=O LLJZKKVYXXDWTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 claims 1
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 21
- 238000010186 staining Methods 0.000 abstract description 8
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 abstract description 7
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 abstract description 7
- 230000007170 pathology Effects 0.000 abstract description 4
- 238000004040 coloring Methods 0.000 abstract description 3
- 230000007547 defect Effects 0.000 abstract description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 51
- 102100024458 Cyclin-dependent kinase inhibitor 2A Human genes 0.000 description 17
- 208000019065 cervical carcinoma Diseases 0.000 description 14
- 241000701806 Human papillomavirus Species 0.000 description 13
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 12
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 9
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 9
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 8
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 8
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 7
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 7
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 6
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 5
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- WZUVPPKBWHMQCE-XJKSGUPXSA-N (+)-haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2C[C@]2(O)[C@H]1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-XJKSGUPXSA-N 0.000 description 3
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Natural products C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 3
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000013701 Cyclin-Dependent Kinase 4 Human genes 0.000 description 2
- 108010025464 Cyclin-Dependent Kinase 4 Proteins 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 208000037581 Persistent Infection Diseases 0.000 description 2
- 210000000270 basal cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 2
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 description 2
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 2
- 238000009595 pap smear Methods 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 2
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 2
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 1
- 206010008263 Cervical dysplasia Diseases 0.000 description 1
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000010190 G1 phase Effects 0.000 description 1
- 101000733249 Homo sapiens Tumor suppressor ARF Proteins 0.000 description 1
- 241000780272 Mammilla Species 0.000 description 1
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 102000043276 Oncogene Human genes 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241001631646 Papillomaviridae Species 0.000 description 1
- 101710132595 Protein E7 Proteins 0.000 description 1
- 230000018199 S phase Effects 0.000 description 1
- 108700025695 Suppressor Genes Proteins 0.000 description 1
- 102000044209 Tumor Suppressor Genes Human genes 0.000 description 1
- 108700025716 Tumor Suppressor Genes Proteins 0.000 description 1
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010046814 Uterine prolapse Diseases 0.000 description 1
- 206010046940 Vaginal prolapse Diseases 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 1
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000007951 cervical intraepithelial neoplasia Diseases 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000004996 female reproductive system Anatomy 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 1
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 208000026037 malignant tumor of neck Diseases 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- JGGQWILNAAODRS-UHFFFAOYSA-N n-methyl-4-[4-(methylamino)phenyl]aniline Chemical compound C1=CC(NC)=CC=C1C1=CC=C(NC)C=C1 JGGQWILNAAODRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002633 protecting effect Effects 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000004088 simulation Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 1
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57407—Specifically defined cancers
- G01N33/57442—Specifically defined cancers of the uterus and endometrial
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
- G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
- G01N33/535—Production of labelled immunochemicals with enzyme label or co-enzymes, co-factors, enzyme inhibitors or enzyme substrates
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Oncology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明属于临床医学病理技术领域，具体涉及一种用于宫颈液基细胞的p16INK4a免疫标记显色试剂盒。所述试剂盒包括：p16INK4a抗原保存液，第一抗体，第二抗体，DAB显色液，内源性过氧化物酶阻断剂，封闭液，缓冲液，阳性对照品和阴性对照品。本发明试剂盒特异性强，利用抗原抗体特异性结合的染色方法，克服了当前液基细胞学非特异性巴氏染色、全靠肉眼形态判断的特异性低的缺陷。
Description
技术领域
本发明属于临床医学病理技术领域，具体涉及一种用于宫颈液基细胞的 p16INK4a免疫标记显色试剂盒。
背景技术
宫颈癌是妇科最常见的女性生殖系统恶性肿瘤之一，发病率仅次于乳腺癌，位居女性恶性肿瘤第二位，严重威胁着女性的身体健康和生活质量。中国是宫颈癌的高发国家，发生率及死亡率约占全世界的1/3。宫颈癌也是目前唯一病因明确，通过有效的早期诊断及治疗可以完全治愈的癌症。
当前宫颈癌及癌前的病变的早期诊断分为“三阶梯”。第一步为阴道脱落细胞学检查，筛查出可疑病例。第二步为阴道镜检查，在阴道镜下对可疑病例取活检组织。然后进行第三步活体组织检查，最终确诊。
做为宫颈癌及癌前病变诊断的第一步，阴道脱落细胞学检查起着非常重要的门户作用，当前脱落细胞学的主要检查技术为液基薄层制片技术。
液基薄层细胞制片术改良自传统“巴氏涂片法”，使用独特的细胞保存液和液基薄层制片机器，代替传统巴氏的手工涂片法，可制出均匀薄层的细胞有利于病理医院镜下观察，降低了传统巴氏的漏诊率和假阳性、假阴性率。
然而液基薄层细胞制片术采用的依旧是非特异性的巴氏/HE染色，并未从根源上弥补细胞学检查的技术缺陷。受取材、染色、及病理医生的主观判断等因素的影响，仍存在假阴性率高、灵敏度和特异性不理想等缺点。特别是对病理医生的要求较高，且我国病理医生缺乏、病理医生的工作量大，易出现人为因素导致漏检的情况。
液基细胞学的技术缺陷促进了宫颈癌及癌前病变筛查辅助技术的发展，当前主要的辅助筛查技术为HPV检测，目前HPV的检测方法有多种，灵敏度和特异度较高的有杂交捕获二代检测系统(HC-II)、荧光定量PCR技术等。
研究己揭示高危型人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)的持续感染是导致宫颈癌的主要原因。目前已知的HPV亚型有近200种，大多数不会引起宫颈癌，只有14种高危型，是引起宫颈癌的主要原因。女性的一生中，感染HPV 的风险超过50％，而这些感染者有90％以上可在一至两年内通过人体自身的免疫力清楚掉HPV，即转阴自愈。因而HPV检测作为一个筛查指标明显缺乏特异性，易导致病人的心理恐慌和过渡医疗。且HPV分子生物学检测技术对实验环境和人员的要求较高，检测价格较贵，限制了其在临床上的广泛应用。
寻找新的灵敏度和特异度更好的分子生物标志物用于宫颈癌的早期诊断具有重要意义。
p16INK4a是一种重要的抑癌基因，特异性的与CDK4结合，抑制CDK4的活性，从而抑制细胞从G1期进入S期，使细胞无法持续增殖。p16INK4a蛋白的表达通常受到另两种抑癌蛋白P53和pRB调控，在正常增殖的细胞中处于低水平表达状态。
已知宫颈癌发生的主要原因是持续性的人乳头瘤病毒(HPV)感染(99％以上)。HPV的持续感染会导致病毒的致癌基因蛋白E6和E7含量升高，E6和 E7作用是分别与人体抑癌基因蛋白p53和pRB结合，E6通过抑制P53而阻断凋亡，E7通过抑制pRB使细胞周期失控。在宫颈癌及癌前病变中P53和pRB 功能常处于被抑制状态，导致p16INK4a蛋白从被抑制状态释放出来，过量表达。研究显示，p16INK4a蛋白的过度表达和宫颈癌及癌前病变的分级显著相关，随着病变等级的越高p16INK4a蛋白的表达量越高，固在宫颈癌及癌前病变细胞中检测p16INK4a蛋白的表达量即可预测这些细胞的病变转化程度。
p16INK4a做为高危HPV的代表和宫颈癌前病变的发展密切相关，具有较高的特异性和灵敏度，在宫颈组织活检样本中，已经得到普遍被认可与应用。将 p16INK4a免疫标记应用于液基细胞学，可利用抗原抗体的特异性结合，在液基细胞学中提供特异性的染色技术，避免宫颈癌前筛查易受病理医生经验和人员缺乏等影响因素。
然而宫颈液基细胞样本的特殊性限制了其应用的发展：(1)宫颈液基样本常含有较多的炎症细胞、红细胞等干扰成分，含丰富的内源性过氧化物酶，易导致免疫染色的非特异性；(2)当前液基细胞的保存液不能很好的保存细胞的 p16INK4a抗原，易导致染色结果的假阴性。
许振国等人在“p16INK4a作为分子标记物在宫颈癌筛查中的应用”中采用的p16INK4a免疫细胞化学染色方法为：将液基细胞保存液中的剩余标本离心沉淀后制成涂片，丙酮固定10min，4℃冰箱保存。采用MaxvisionTM法检测，染色步骤为：①细胞片在抗原修复液中95℃～100℃处理1～2min，室温下冷却10min，用流水冲压力锅外壁直至冷却；②取出玻片用流水冲洗干净，用PBS(pH值7.4) 冲洗3次，3min/次；③除去PBS液，每张玻片滴加50μL曲拉通X－100液，室温孵育10min，PBS(pH值7.4)冲洗3次，3min/次；④除去PBS液，每张玻片滴加1∶200稀释的100μLp16INK4a单克隆抗体至室温下孵育60min或4℃冰箱过夜；⑤滴加MaxvisionTM试剂；⑥二甲基联苯胺(DAB)显色；⑦自来水冲洗，苏木素复染，酒精脱水，二甲苯透明，封片。阳性细胞为细胞核和细胞质出现棕黄色颗粒，以异形的阳性染色细胞数≥10个判定为阳性。
发明内容
为解决上述问题，本发明提供了一种用于宫颈液基细胞p16INK4a免疫标记显色试剂盒。本发明宫颈液基细胞的p16INK4a免疫标记显色试剂盒在当前阴道脱落液基细胞学的基础上，利用抗原抗体的特异性结合提供了一种特异性的染色方法，弥补了当前液基细胞学非特异性巴氏染色、全靠肉眼形态判断的特异性低，容易漏诊的缺陷。
本发明通过以下技术方案实现：
一种用于宫颈液基细胞p16INK4a免疫标记显色试剂盒，所述试剂盒包括： p16INK4a抗原保存液，第一抗体，第二抗体，DAB显色液，内源性过氧化物酶阻断剂，封闭液，缓冲液，阳性对照品和阴性对照品。
优选地，所述p16INK4a抗原保存液由以下成分及其浓度组成：NaCl 60-100mmol/L、KCl 2-10mmol/L、乙二胺四乙酸二钠1-5mmol/L、尿素 30-50mmol/L、柠檬酸钠1-5mmol/L、蔗糖5-20mmol/L、PEG-4004-10mmol/L、多聚甲醛2％-3％、甘油2-10mmol/L和二硫苏糖醇10-20mmol/L。
优选地，所述p16INK4a抗原保存液由以下成分及其浓度组成：NaCl 85mmol/L、 KCl7.5mmol/L、乙二胺四乙酸二钠3.5mmol/L、尿素42mmol/L、柠檬酸钠 3.6mmol/L、蔗糖16mmol/L、PEG-4006.5mmol/L、多聚甲醛2％、甘油8.4mmol/L 和二硫苏糖醇16.5mmol/L。
优选地，所述第一抗为宫颈液基细胞p16INK4a鼠抗人单克隆抗体；所述第二抗体为标记了辣根过氧化物酶的兔抗小鼠IgG抗体。
优选地，所述内源性过氧化物酶阻断剂为0.5％-1％高碘酸溶液；封闭液为动物非免疫羊血清。
优选地，所述缓冲液为含有0.1％-0.5％吐温20的pH值为7.2-7.6的磷酸盐缓冲液。
优选地，所述阳性对照品为高表达p16INK4a蛋白的宫颈鳞癌细胞SiHa；阴性对照品为低表达p16INK4a蛋白的正常宫颈细胞。
本发明还提供了一种用于宫颈液基细胞p16INK4a免疫标记显色试剂盒的使用方法，包括以下步骤：
(1)用一次性宫颈刷刷取女性患者宫颈移形区的细胞样本，用p16INK4a抗原保存液保存细胞，并用JY-3200型自动制片机进行自动制片；
(2)制片后用4％多聚甲醛固定5-10min，后60℃烘干10min；
(3)烘干结束后用1-2mL的缓冲液清洗3-5次，3-5min/次；
(4)清洗过后滴加封闭液，32℃恒温孵育10-20min后抛干；
(5)滴加第一抗体，根据样本面积覆盖完全，32℃恒温孵育30-60min；
(6)孵育结束后用1-2mL的缓冲液清洗3-5次，3-5min/次；
(7)滴加第二抗体，根据样本面积覆盖完全，32℃恒温孵育15-30min；
(8)孵育结束后用1-2mL的缓冲液清洗3-5次，3-5min/次；
(9)滴加内源性过氧化物酶阻断剂，根据样本面积覆盖完全，32℃恒温孵育2-5min；
(11)用1-2mL的缓冲液清洗3-5次，3-5min/次；
(12)滴DAB显色液，显色5-10min；
(13)用1-2mL的缓冲液清洗3-5次，3-5min/次；
(14)用苏木素复染后，中性树胶封片。
试剂盒使用过程中，首先使用了p16INK4a抗原保存液，在细胞收集阶段就很好的保存了细胞p16INK4a抗原决定簇，防止其受其它化学物质影响而封闭；制片后使用4％多聚甲醛固定液代替了传统液基的乙醇/甲醇固定液，从而对p16INK4a抗原具有更好的保护效果；与传统免疫组织化学的缓冲液相比，本发明在pH值为7.2-7.6的磷酸盐缓冲液中添加了0.1％-0.5％吐温20的表面活性剂，使反应过程中清洗更彻底。
本发明用低浓度的强氧化剂HIO3替代了传统的内源性过氧化物阻断剂中现配现用的H2O2溶液，缩短了反应时间，提高了内源性过氧化物酶的阻断效果；并且HIO3溶液不需现配现用，可长期保存。此外，本发明将内源性过氧化物酶阻断步骤在二抗孵育节后进行，与传统操作步骤中将内源性过氧化物酶阻断步骤在一抗反应前进行相比，避免了氧化剂对抗原的影响。
本发明p16INK4a免疫标记显色试剂盒中含有p16INK4a抗原保存液，并对免疫显色体系及流程进行了优化，能够有效检测p16INK4a的表达，从而解决了将免疫显色技术应用于宫颈液基细胞学的限制。本发明试剂盒与现有相比具有以下突出优点：
(1)本发明试剂盒特异性强，利用抗原抗体特异性结合的染色方法，克服了当前液基细胞学非特异性巴氏染色、全靠肉眼形态判断的特异性低的缺陷；
(2)本发明试剂盒灵敏度高，稳定性强，成本低，操作方便。
附图说明
图1：阴性对照品：P16低表达的正常宫颈细胞；
图2：样品：P16高表达的宫颈病变细胞；
图3：阳性对照品：P16高表达的宫颈鳞癌细胞株SiHa。
具体实施方式
下面将结合说明书附图和实施例进一步的详细说明本发明。需要指出的是，以下说明仅仅是对本发明要求保护的技术方案的举例说明，并非对这些技术方案的任何限制。本发明的保护范围以所附权利要求书记载的内容为准。
多聚甲醛，CAS号30525-89-4。
实施例1 一种用于宫颈液基细胞p16INK4a免疫标记显色试剂盒
所述试剂盒包括：p16INK4a抗原保存液，第一抗体，第二抗体，DAB显色液，内源性过氧化物酶阻断剂，封闭液，缓冲液，阳性对照品和阴性对照品。
其中，所述p16INK4a抗原保存液由以下成分及其浓度组成：NaCl 85mmol/L、 KCl7.5mmol/L、乙二胺四乙酸二钠3.5mmol/L、尿素42mmol/L、柠檬酸钠 3.6mmol/L、蔗糖16mmol/L、PEG-4006.5mmol/L、多聚甲醛2％、甘油8.4mmol/L 和二硫苏糖醇16.5mmol/L。
所述第一抗体为p16INK4a鼠抗人单克隆抗体；所述第二抗体为标记了辣根过氧化物酶的兔抗小鼠IgG抗体。
所述内源性过氧化物酶阻断剂为0.75％高碘酸溶液；所述封闭液为动物非免疫羊血清。
所述缓冲液为含有0.3％吐温20的pH值为7.4的磷酸盐缓冲液。
所述阳性对照品为高表达P16蛋白的宫颈鳞癌细胞SiHa；阴性对照品为低表达P16蛋白的正常宫颈细胞。
实施例2 一种用于宫颈液基细胞p16INK4a免疫标记显色试剂盒
一种用于宫颈液基细胞p16INK4a免疫标记显色试剂盒，所述试剂盒包括： p16INK4a抗原保存液，第一抗体，第二抗体，DAB显色液，内源性过氧化物酶阻断剂，封闭液，缓冲液，阳性对照品和阴性对照品。
所述p16INK4a抗原保存液由以下成分及其浓度组成：NaCl 60mmol/L、KCl 2mmol/L、乙二胺四乙酸二钠1mmol/L、尿素30mmol/L、柠檬酸钠1mmol/L、蔗糖5mmol/L、PEG-4004mmol/L、多聚甲醛2％、甘油2mmol/L和二硫苏糖醇 10mmol/L。
其中，所述第一抗为p16INK4a鼠抗人单克隆抗体；所述第二抗体为标记了辣根过氧化物酶的兔抗小鼠IgG抗体。
所述内源性过氧化物酶阻断剂为0.5％高碘酸溶液；所述封闭液为动物非免疫羊血清。
所述缓冲液为含有0.1％吐温20的pH值为7.2的磷酸盐缓冲液。
所述阳性对照品为高表达P16蛋白的宫颈鳞癌细胞SiHa；阴性对照品为低表达P16蛋白的正常宫颈细胞。
实施例3 一种用于宫颈液基细胞p16INK4a免疫标记显色试剂盒
一种用于宫颈液基细胞p16INK4a免疫标记显色试剂盒，所述试剂盒包括： p16INK4a抗原保存液，第一抗体，第二抗体，DAB显色液，内源性过氧化物酶阻断剂，封闭液，缓冲液，阳性对照品和阴性对照品。
其中，所述p16INK4a抗原保存液由以下成分及其浓度组成：NaCl 100mmol/L、 KCl10mmol/L、乙二胺四乙酸二钠5mmol/L、尿素50mmol/L、柠檬酸钠5mmol/L、蔗糖20mmol/L、PEG-40010mmol/L、多聚甲醛2.5％、甘油10mmol/L和二硫苏糖醇20mmol/L。
所述第一抗为p16INK4a鼠抗人单克隆抗体；所述第二抗体为标记了辣根过氧化物酶的兔抗小鼠IgG抗体。
所述内源性过氧化物酶阻断剂为1％高碘酸溶液；所述封闭液为动物非免疫羊血清。
所述缓冲液为含有0.5％吐温20的pH值为7.6的磷酸盐缓冲液。
所述阳性对照品为高表达P16蛋白的宫颈鳞癌细胞SiHa；阴性对照品为低表达P16蛋白的正常宫颈细胞。
实施例4 一种用于宫颈液基细胞p16INK4a免疫标记显色试剂盒的使用方法
所述用于宫颈液基细胞p16INK4a免疫标记显色试剂盒的使用方法，包括以下步骤：
(1)用一次性宫颈刷刷取女性患者宫颈移形区的细胞样本，用p16INK4a抗原保存液保存细胞，并用JY-3200型自动制片机进行自动制片；
(2)制片后用4％多聚甲醛固定5-10min，后60℃烘干10min；
(3)烘干结束后用1-2mL的缓冲液清洗3-5次，3-5min/次；
(4)清洗过后滴加封闭液，32℃恒温孵育10-20min后抛干；
(5)滴加第一抗体，根据样本面积覆盖完全，32℃恒温孵育30-60min；
(6)孵育结束后用1-2mL的缓冲液清洗3-5次，3-5min/次；
(7)滴加第二抗体，根据样本面积覆盖完全，32℃恒温孵育15-30min；
(8)孵育结束后用1-2mL的缓冲液清洗3-5次，3-5min/次；
(9)滴加内源性过氧化物酶阻断剂，根据样本面积覆盖完全，32℃恒温孵育2-5min；
(11)用1-2mL的缓冲液清洗3-5次，3-5min/次；
(12)滴DAB显色液，显色5-10mi；
(13)用1-2mL的缓冲液清洗3-5次，3-5min/次；
(14)用苏木素复染后，中性树胶封片。
对比例1 一种用于宫颈液基细胞p16INK4a免疫标记显色试剂盒
所述试剂盒与实施例1的区别在于，所用保存液为CPS03保存液，其与成分均与实施例1类似。
对比例2 一种用于宫颈液基细胞p16INK4a免疫标记显色试剂盒
所述试剂盒与实施例1的区别在于，所用内源性过氧化物酶阻断剂为现配现用的H2O2溶液，其与成分均与实施例1类似。
试验例1 不同样品p16INK4a蛋白免疫标记染色
利用实施例1试剂盒按实施例4使用方法，对p16INK4a高表达的宫颈病变细胞进行p16INK4a蛋白免疫标记染色，并与本发明试剂盒中阳性对照品、阴性对照品进行比较，试验结果如图1、图2和图3所示。
由图1、图2和图3可知，本发明试剂盒能够对p16INK4a蛋白免疫标记进行特异性染色，从而能够实现对p16INK4a表达的准确检测。
试验例2 不同试剂盒p16INK4a蛋白免疫标记染色情况比较
利用实施例1、对比例1和对比例2试剂盒按实施例4使用方法对P16高表达的宫颈病变细胞进行p16INK4a蛋白免疫标记染色，观察p16INK4a蛋白免疫标记染色程度，并计算阳性细胞颜色比例，结果如表1所示。
表1 不同试剂盒p16INK4a蛋白免疫标记染色情况
注：+表示大于10％的细胞呈现微弱，不完全染色；+++表示大于10％的细胞呈现强的、完整的细胞染色。
由表1可知，本发明试剂盒p16INK4a蛋白免疫标记染色情况明显优于对比例 1、对比例2；与对比例1相比，本发明试剂盒阳性染色细胞比例提高了2.9倍，这说明本发明试剂盒中所用p16INK4a抗原保存液比普通保存液更能促进p16INK4a蛋白免疫标记染色；与对比例2相比，本发明试剂盒阳性染色细胞比例提高了 1.2倍，这说明本发明用低浓度的强氧化剂HIO3替代内源性过氧化物阻断剂中现配现用的H2O2溶液，效果更为明显。
试验例3、用于宫颈液基细胞p16INK4a免疫标记显色试剂盒的稳定性
1、冻融稳定性
为模拟试剂盒在运输过程中，低温环境下试剂盒各组分反复冻融对试剂盒稳定性的影响，将本发明实施例1整套试剂盒在-20℃的低温下冷冻过夜，然后在室温下复溶，然后再置于-20℃的低温下冷冻过夜，如此反复冻融5次，然后按实施例4的使用方法进行检测。结果如表2所示。
表2：试剂盒冻融稳定性结果
由表2可以看出，本发明试剂盒经反复冻融5次后，试剂盒的阴性对照、阳性对照、细胞形态以及重复性等均满足要求。这说明，本发明试剂盒具有较好的冻融稳定性。
2、模拟运输稳定性
为模拟试剂盒在运输过程中，车辆的颠簸以及高温环境对试剂盒稳定性的影响，将实施例1整套试剂盒固定在微量振荡器上，放置于37℃恒温箱振荡7天后按实施例4使用方法进行检测。结果如表3所示。
表3：试剂盒模拟运输稳定性结果
由表3可以看出，本发明试剂盒放置于37℃恒温箱振荡7天后，试剂盒的阴性对照、阳性对照、细胞形态以及重复性等均满足要求。这说明，本发明试剂盒具有较好的运输稳定性。
Claims (5)
1.一种用于宫颈液基细胞p16INK4a免疫标记显色试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：p16INK4a抗原保存液，第一抗体，第二抗体，DAB显色液，内源性过氧化物酶阻断剂，封闭液，缓冲液，阳性对照品和阴性对照品；所述p16INK4a抗原保存液由以下成分及其浓度组成：NaCl60-100mmol/L、KCl 2-10mmol/L、乙二胺四乙酸二钠1-5mmol/L、尿素30-50mmol/L、柠檬酸钠1-5mmol/L、蔗糖5-20mmol/L、PEG-400 4-10mmol/L、多聚甲醛2％-3％、甘油2-10mmol/L和二硫苏糖醇10-20mmol/L，余量为溶剂；所述内源性过氧化物酶阻断剂为体积百分比0.5％-1％高碘酸溶液；封闭液为动物非免疫羊血清。
2.根据权利要求1所述用于宫颈液基细胞p16INK4a免疫标记显色试剂盒，其特征在于，所述p16INK4a抗原保存液由以下成分及其浓度组成：NaCl 85mmol/L、KCl 7.5mmol/L、乙二胺四乙酸二钠3.5mmol/L、尿素42mmol/L、柠檬酸钠3.6mmol/L、蔗糖16mmol/L、PEG-4006.5mmol/L、多聚甲醛2％、甘油8.4mmol/L和二硫苏糖醇16.5mmol/L，余量为溶剂。
3.根据权利要求1所述用于宫颈液基细胞p16INK4a免疫标记显色试剂盒，其特征在于，所述第一抗体为宫颈液基细胞p16INK4a鼠抗人单克隆抗体；所述第二抗体为标记了辣根过氧化物酶的兔抗小鼠IgG抗体。
4.根据权利要求1所述用于宫颈液基细胞p16INK4a免疫标记显色试剂盒，其特征在于，所述缓冲液为含有0.1％-0.5％吐温20的pH值为7.2-7.6的磷酸盐缓冲液。
5.根据权利要求1所述用于宫颈液基细胞p16INK4a免疫标记显色试剂盒，其特征在于，所述阳性对照品为高表达p16INK4a蛋白的宫颈鳞癌细胞SiHa；阴性对照品为低表达p16INK4a蛋白的正常宫颈细胞。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710562392.4A CN107202888B (zh) | 2017-07-11 | 2017-07-11 | 一种用于宫颈液基细胞的p16INK4a免疫标记显色试剂盒 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710562392.4A CN107202888B (zh) | 2017-07-11 | 2017-07-11 | 一种用于宫颈液基细胞的p16INK4a免疫标记显色试剂盒 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN107202888A CN107202888A (zh) | 2017-09-26 |
| CN107202888B true CN107202888B (zh) | 2018-10-12 |
Family
ID=59911625
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201710562392.4A Active CN107202888B (zh) | 2017-07-11 | 2017-07-11 | 一种用于宫颈液基细胞的p16INK4a免疫标记显色试剂盒 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN107202888B (zh) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110763661B (zh) * | 2018-07-25 | 2022-03-22 | 中国科学院合肥物质科学研究院 | 处理液组合物、试剂盒和生物器官透明化同时进行免疫标记的方法 |
| CN110501496A (zh) * | 2019-08-28 | 2019-11-26 | 深圳市森盈生物科技有限公司 | 一种免疫细胞p16检测试剂盒 |
| CN110488001A (zh) * | 2019-09-11 | 2019-11-22 | 广州江元医疗科技有限公司 | 一种使用密度梯度分层离心法进行抗原修复的方法 |
| CN112710526A (zh) * | 2019-10-24 | 2021-04-27 | 广州江元医疗科技有限公司 | 一种细胞固定保存液及其制备方法和应用 |
| CN111024471A (zh) * | 2019-12-17 | 2020-04-17 | 浙江殷欣生物技术有限公司 | 一种用于宫颈癌筛查的液基细胞检测试剂盒及使用方法 |
| CN112114145A (zh) * | 2020-09-21 | 2020-12-22 | 中山大学附属第一医院 | 一种检测hpv病毒感染致宫颈癌的试剂盒 |
| CN112180090A (zh) * | 2020-10-09 | 2021-01-05 | 深圳市森盈生物科技有限公司 | 免疫细胞p16特异性结合的单克隆抗体的试剂盒 |
| CN113607534B (zh) * | 2021-08-20 | 2022-10-18 | 河南赛诺特生物技术有限公司 | 一种染色方法、试剂盒及应用 |
| CN114152493A (zh) * | 2021-11-12 | 2022-03-08 | 杭州迪英加科技有限公司 | 一种用于石蜡切片的低ph脱蜡修复阻断溶液及其配置方法 |
| CN116380602B (zh) * | 2023-06-05 | 2023-09-08 | 深圳市森盈生物科技有限公司 | 一种液基细胞学和免疫细胞化学双制片染色试剂盒及应用 |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101446591A (zh) * | 2008-11-15 | 2009-06-03 | 邹先进 | P16INK4a双抗体夹心酶联免疫吸附检测试剂盒 |
| CN102258003A (zh) * | 2010-05-28 | 2011-11-30 | 孝感市中心医院 | 一种液基细胞保存液 |
| CN101914483B (zh) * | 2010-09-02 | 2013-07-31 | 福建新大陆生物技术股份有限公司 | 一种液基薄层细胞保存处理液及其用途 |
| CN102113481B (zh) * | 2010-12-24 | 2013-03-13 | 厦门迈威生物科技有限公司 | 一种脱落细胞保存液及其制备方法 |
| CN102318597B (zh) * | 2011-08-19 | 2013-04-03 | 张雪云 | 一种液基细胞保存液组合物及其制备方法 |
| CN103120153A (zh) * | 2012-11-26 | 2013-05-29 | 刘召宏 | 一种脱落细胞保存液 |
| CN103076453B (zh) * | 2012-12-24 | 2015-04-15 | 何以丰 | P16免疫细胞化学试剂盒及其制备用多肽序列 |
| CN104155167A (zh) * | 2013-05-27 | 2014-11-19 | 厦门菲尔科生物技术有限公司 | 低背景的P16-INK4a染色试剂盒及其应用方法 |
| CN104041484B (zh) * | 2014-05-23 | 2016-09-28 | 科蒂亚(新乡)生物技术有限公司 | 一种细胞保存液 |
| CN106442078B (zh) * | 2016-08-25 | 2019-09-10 | 四川金域医学检验中心有限公司 | 一种碱性液基细胞保存处理液及其制备方法 |
-
2017
- 2017-07-11 CN CN201710562392.4A patent/CN107202888B/zh active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN107202888A (zh) | 2017-09-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN107202888B (zh) | 一种用于宫颈液基细胞的p16INK4a免疫标记显色试剂盒 | |
| CN102822672B (zh) | 用于诊断和筛选与hpv有关的癌症的高通量细胞基hpv免疫测定 | |
| CN104067126B (zh) | 用于检测人乳头瘤病毒并提供头颈部鳞状细胞癌预后的方法 | |
| CN109856383A (zh) | 一种用于宫颈癌辅助诊断的免疫化学染色试剂盒 | |
| CN103033409B (zh) | 改进的组织细胞染色方法及其应用 | |
| CN109187978A (zh) | 一种检测循环肿瘤细胞her2、er、pr的免疫荧光试剂盒及其应用 | |
| Sarian et al. | Expression of cyclooxygenase-2 (COX-2) and Ki67 as related to disease severity and HPV detection in squamous lesions of the cervix | |
| CN110275028A (zh) | 一种胶体金标记的抗he4抗体试剂盒及其制备方法 | |
| CN101446591A (zh) | P16INK4a双抗体夹心酶联免疫吸附检测试剂盒 | |
| CN109187977A (zh) | 一种检测her2抗原不同位点的免疫荧光试剂盒及应用 | |
| CN104745670A (zh) | 一种细胞芯片的制备方法及其在肿瘤筛查领域的应用 | |
| CN107271246B (zh) | 一种用于液基薄层细胞的免疫p16INK4a抗原保存液及其制备方法 | |
| CN109425527B (zh) | 一种细胞染色方法 | |
| CN101968491A (zh) | 弥漫性大b细胞淋巴瘤分子病理分型方法及试剂盒和应用 | |
| Dai et al. | Effectiveness of novel folate receptor-mediated staining solution detection (FRD) for cervical cancer screening | |
| CN103471903A (zh) | 切片用固定液的配置方法及其应用 | |
| CN105241726A (zh) | 一种免疫细胞化学染色方法及其在宫颈肿瘤性病变筛查中的应用 | |
| Sartelet et al. | Comparison of liquid based cytology and histology for the evaluation of HER-2 status using immunostaining and CISH in breast carcinoma | |
| Namugenyi et al. | Prevalence and genotype distribution of human papillomavirus in cytology specimens containing atypical glandular cells: A case–control study | |
| CN103966360B (zh) | 一种人乳头状瘤病毒16/18的检测方法、检测试剂盒和hpv16/18探针 | |
| CN102435734A (zh) | 卵巢癌原发化疗敏感性测评试剂盒及其应用 | |
| CN106610378A (zh) | 一种hpv16型e7蛋白的检测试剂盒 | |
| CN104849449A (zh) | 酶标抗体-金纳米探针在二氨基联苯胺催化显色及暗场成像的应用 | |
| CN205049576U (zh) | 一种用于检测乳腺癌细胞的染色试剂盒 | |
| Hatta et al. | Freshly prepared immune complexes with intermittent microwave irradiation result in rapid and high-quality immunostaining |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right | ||
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right |
Denomination of invention: A p16INK4aimmunolabeling kit for cervical fluid based cells Effective date of registration: 20201013 Granted publication date: 20181012 Pledgee: Shanghai Pudong Development Bank Limited by Share Ltd. Guangzhou branch Pledgor: GUANGZHOU JIANGYUAN MEDICAL SCIENCE & TECHNOLOGY Co.,Ltd. Registration number: Y2020440000307 |
|
| PC01 | Cancellation of the registration of the contract for pledge of patent right |
Date of cancellation: 20211022 Granted publication date: 20181012 Pledgee: Shanghai Pudong Development Bank Limited by Share Ltd. Guangzhou branch Pledgor: GUANGZHOU JIANGYUAN MEDICAL SCIENCE & TECHNOLOGY Co.,Ltd. Registration number: Y2020440000307 |
|
| PC01 | Cancellation of the registration of the contract for pledge of patent right | ||
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right |
Denomination of invention: P16INK4aimmunolabeling chromogenic kit for cervical fluid based cells Effective date of registration: 20211118 Granted publication date: 20181012 Pledgee: Shanghai Pudong Development Bank Limited by Share Ltd. Guangzhou branch Pledgor: GUANGZHOU JIANGYUAN MEDICAL SCIENCE & TECHNOLOGY Co.,Ltd. Registration number: Y2021440000346 |
|
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right | ||
| PC01 | Cancellation of the registration of the contract for pledge of patent right |
Date of cancellation: 20230116 Granted publication date: 20181012 Pledgee: Shanghai Pudong Development Bank Limited by Share Ltd. Guangzhou branch Pledgor: GUANGZHOU JIANGYUAN MEDICAL SCIENCE & TECHNOLOGY Co.,Ltd. Registration number: Y2021440000346 |
|
| PC01 | Cancellation of the registration of the contract for pledge of patent right |