CN114152493A - 一种用于石蜡切片的低ph脱蜡修复阻断溶液及其配置方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用于石蜡切片的低PH脱蜡修复阻断溶液及其配置方法，脱蜡修复阻断溶液中包括有脱蜡剂、抗原修复液和阻断剂。本发明制得的低PH脱蜡修复阻断溶液的脱蜡效果和二甲苯相当，可以完全代替二甲苯，并且其无毒性、不挥发、无味，不会对人员的健康造成危害，因此可在免疫组化实验中广泛推广。另外，在具体的实验时，脱蜡修复阻断溶液可一次性完成脱蜡、抗原修复、内源性过氧化物酶阻断三个步骤，实验过程中操作简便、并且耗时成倍的缩短，便于技术人员使用。
Description
技术领域
本发明涉及医疗器械领域，尤其涉及一种用于石蜡切片的低PH脱蜡修复阻断溶液及其配置方法。
背景技术
目前，技术人员基本上都在使用二甲苯作为脱蜡试剂。因为二甲苯渗透力强、作用时间短，溶解石蜡量大且易挥发，而且对组织的脱蜡效果好，价格便宜。但是二甲苯存在致命的缺点：二甲苯等传统透明剂易挥发、有毒性，医护人员长期吸入或皮肤接触二甲苯等传统透明剂时就会直接危害身体健康。另外，在免疫组化实验中，实验操作步骤为脱蜡，水化，修复，阻断，整个过程需要耗费较长时间，步骤繁琐。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用于石蜡切片的低PH脱蜡修复阻断溶液及其配置方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种用于石蜡切片的低PH脱蜡修复阻断溶液，脱蜡修复阻断溶液中包括有脱蜡剂、抗原修复液和阻断剂。
优选的，脱蜡剂包括有水溶性脱蜡剂、渗透剂、分散剂、消泡剂和蒸馏水。
优选的，水溶性脱蜡剂为包含有PEG200、乙二醇、脂肪醇聚氧乙烯醚的混合物；渗透剂选用Triton X-100和/或丙三醇；分散剂选用Tween-20和/或Triton X-100；消泡剂为乙二醇叔丁醚和/或聚氧丙烯甘油醚。
优选的，抗原修复液为柠檬酸和柠檬酸钠混合形成的柠檬酸钠缓冲液。
优选的，阻断剂采用高碘酸。
优选的，脱蜡修复阻断溶液包含如下体积的组分：
水溶性脱蜡剂：PEG200 0.25％-2.5％、乙二醇0.05％-0.75％、脂肪醇聚氧乙烯醚0.05％-0.75％
渗透剂：Triton X-100 0.1％-0.75％和/或丙三醇0.01％-0.5％
分散剂：Triton X-100 0.1％-0.75％和/或Tween-20 0.01％-0.05％
消泡剂：乙二醇叔丁醚0.01％-0.1％和/或聚氧丙烯甘油醚0.03％-0.05％
抗原修复液：柠檬酸1g/L-4g/L、柠檬酸钠10g/L-30g/L
阻断剂：高碘酸0.1%-0.75%。
优选的，脱蜡修复阻断溶液包含如下体积的组分：
水溶性脱蜡剂：PEG200 0.5％、乙二醇0.5％、脂肪醇聚氧乙烯醚0.55％
渗透剂：Triton X-100 0.1％、丙三醇0.2％
分散剂：Tween-20 0.01％
消泡剂：乙二醇叔丁醚0.05％
抗原修复液：柠檬酸4g/L、柠檬酸钠30g/L
阻断剂：高碘酸0.5%。
本发明还提出一种如上述用于石蜡切片的低PH脱蜡修复阻断溶液的制备方法，方法如下：
步骤一、配制抗原修复液：称取柠檬酸与柠檬酸钠溶解于蒸馏水中，充分溶解后，用盐酸调节溶液的pH值为6.0；
步骤二、依次量取水溶性脱蜡剂、渗透剂、分散剂、消泡剂、阻断剂加入到步骤一制得的抗原修复液中，充分搅拌溶解，即得低PH脱蜡修复阻断溶液。
本发明还提出一种如上述用于石蜡切片的低PH脱蜡修复阻断溶液在组织染色中的应用。
与现有技术相比，本发明提供了一种用于石蜡切片的低PH脱蜡修复阻断溶液及其配置方法和应用，具备以下有益效果：
（1）本发明中的低PH脱蜡修复阻断溶液的脱蜡效果和二甲苯相当，可以完全代替二甲苯，并且其无毒性、不挥发、无味，不会对人员的健康造成危害，因此可在免疫组化实验中广泛推广。
（2）本发明制得的低PH脱蜡修复阻断溶液可一次性完成脱蜡、抗原修复、内源性过氧化物酶阻断三个步骤，实验过程中操作简便、并且耗时成倍的缩短，便于技术人员使用。
附图说明
附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制，在附图中：
图1为本发明中的脱蜡修复阻断液的HE染色效果示意图；
图2为本发明中的的脱蜡修复阻断液的IHC染色效果示意图。
具体实施方式
下面将结合本发明的实施例中附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。通常在此处附图中描述和示出的本发明实施例的组件可以以各种不同的配置来布置和设计。因此，以下对在附图中提供的本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例一
本实施例中公开了一种用于石蜡切片的低PH脱蜡修复阻断溶液，脱蜡修复阻断溶液包含如下体积的组分：
水溶性脱蜡剂：PEG200 0.5％、乙二醇0.5％、脂肪醇聚氧乙烯醚0.55％
渗透剂：Triton X-100 0.1％、丙三醇0.2％
分散剂：Tween-20 0.01％
消泡剂：乙二醇叔丁醚0.05％
抗原修复液：柠檬酸4g/L、柠檬酸钠30g/L
阻断剂：高碘酸0.5%。
上述脱蜡修复阻断溶液的制备方法为：
步骤一、配制抗原修复液：称取柠檬酸0.4g和柠檬酸钠3g溶解于1000ml蒸馏水中，充分溶解后，用盐酸调节溶液的pH值为6.0；
步骤二、按照上述组成比例，依次量取水溶性脱蜡剂（PEG200、乙二醇、脂肪醇聚氧乙烯醚）、渗透剂（Triton X-100、丙三醇）、分散剂（Tween-20）、（乙二醇叔丁醚）、阻断剂（高碘酸）加入到步骤一制得的抗原修复液中，充分搅拌溶解，即得低PH脱蜡修复阻断溶液。
实施例二
本实施例中公开了一种用于石蜡切片的低PH脱蜡修复阻断溶液，包含如下体积的组分：
水溶性脱蜡剂：PEG200 2.5％、乙二醇0.75％、脂肪醇聚氧乙烯醚0.75％
渗透剂：Triton X-100 0.75％、丙三醇0.5％
分散剂：Triton X-100 0.75％、Tween-20 0.05％
消泡剂：乙二醇叔丁醚0.1％、聚氧丙烯甘油醚0.05％
抗原修复液：柠檬酸2g/L、柠檬酸钠20g/L
阻断剂：高碘酸0.75%。
本实施例中的脱蜡修复阻断溶液制备方法与实施例一中的制备方法相同，就不再进行赘述。
实施例三
本实施例中公开了一种用于石蜡切片的低PH脱蜡修复阻断溶液，包含如下体积的组分：
水溶性脱蜡剂：PEG200 0.25％、乙二醇0.05％、脂肪醇聚氧乙烯醚0.05％
渗透剂：丙三醇0.01％
分散剂：Triton X-100 0.1％、Tween-20 0.03％
消泡剂：乙二醇叔丁醚0.01％、聚氧丙烯甘油醚0.03％
抗原修复液：柠檬酸1g/L、柠檬酸钠10g/L
阻断剂：高碘酸0.1%
本实施例中的脱蜡修复阻断溶液制备方法与实施例一中的制备方法相同，就不再进行赘述。
本申请将实施例一制得的低PH脱蜡修复阻断液应用在免疫组化实验中，可起到脱蜡剂和阻断剂的作用（含水化作用），为了证明其作用，本申请进行详细的实验，实验步骤为：组织石蜡切片置于60-65℃烤箱中烤60分钟，然后将切片放入预先加热到75℃脱蜡修复阻断液中，恒温浸泡20分钟；取出切片后再次直接放入另一缸预先加热到75℃脱蜡修复阻断液中，恒温浸泡20分钟，然后用水冲洗即完成脱蜡、水化和阻断作用。脱蜡水化阻断的的病理切片、进行HE染色、脱水、透明和封片。
如图1为本实施例的脱蜡修复阻断液HE染色结果：结果显示切片表面没有留蜡、脱蜡干净，组织细胞形态完整、染色清晰、明显,背景没有受内源性生物素影响、说明使用本试剂处理的病理切片具有良好的脱蜡阻断效果，且不会损坏病理组织细胞结构。
另外，本申请的蜡组织切片的低PH脱蜡修复阻断液在免疫组化实验中在免疫组化实验中还能够起到脱蜡、水化、抗原修复以及阻断作用，为了证明其作用，本申请也进行了相关的实验验证，具体的实验步骤为：组织石蜡切片置于60-65℃烤箱中烤60分钟，然后将切片放入预先加热到75℃脱蜡修复阻断液中，将脱蜡修复阻断液继续加热到100℃，持续20分钟；取出切片后先用预先加热到75℃脱蜡修复阻断液中漂洗一次，然后用水冲洗即完成脱蜡修复阻断。
如图2为本实施例的脱蜡修复阻断液的IHC染色结果：COX-2在结肠癌组织上染色结果显示，切片表面的蜡没有明显的留存，脱蜡效果明显干净，没有内源性生物素的干扰，染色可以看出抗原修复较好，组织细胞形态保留良好的原始状态及其完整性，组织中的阴性表达的细胞细胞核苏木素染色清晰、明显，COX-2阳性染色信号清晰、明确。该脱蜡修复阻断液符合组织切片的免疫组化的脱蜡、水化、抗原修复和阻断的要求。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，本领域的普通技术人员可以理解：在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。
Claims (9)
1.一种用于石蜡切片的低PH脱蜡修复阻断溶液，其特征在于，脱蜡修复阻断溶液中包括有脱蜡剂、抗原修复液和阻断剂。
2.根据权利要求1所述的一种用于石蜡切片的低PH脱蜡修复阻断溶液，其特征在于，脱蜡剂包括有水溶性脱蜡剂、渗透剂、分散剂、消泡剂和蒸馏水。
3.根据权利要求2所述的一种用于石蜡切片的低PH脱蜡修复阻断溶液，其特征在于，水溶性脱蜡剂为包含有PEG200、乙二醇、脂肪醇聚氧乙烯醚的混合物；渗透剂选用Triton X-100和/或丙三醇；分散剂选用Tween-20和/或Triton X-100；消泡剂为乙二醇叔丁醚和/或聚氧丙烯甘油醚。
4.根据权利要求1或3所述的一种用于石蜡切片的低PH脱蜡修复阻断溶液，其特征在于，抗原修复液为柠檬酸和柠檬酸钠混合形成的柠檬酸钠缓冲液。
5.根据权利要求4所述的一种用于石蜡切片的低PH脱蜡修复阻断溶液，其特征在于，阻断剂采用高碘酸。
6.根据权利要求5所述的一种用于石蜡切片的低PH脱蜡修复阻断溶液，其特征在于，脱蜡修复阻断溶液包含如下体积的组分：
水溶性脱蜡剂：PEG200 0.25％-2.5％、乙二醇0.05％-0.75％、脂肪醇聚氧乙烯醚0.05％-0.75％
渗透剂：Triton X-100 0.1％-0.75％和/或丙三醇0.01％-0.5％
分散剂：Triton X-100 0.1％-0.75％和/或Tween-20 0.01％-0.05％
消泡剂：乙二醇叔丁醚0.01％-0.1％和/或聚氧丙烯甘油醚0.03％-0.05％
抗原修复液：柠檬酸1g/L-4g/L、柠檬酸钠10g/L-30g/L
阻断剂：高碘酸0.1%-0.75%。
7.根据权利要求6所述的一种用于石蜡切片的低PH脱蜡修复阻断溶液，其特征在于，脱蜡修复阻断溶液包含如下体积的组分：
水溶性脱蜡剂：PEG200 0.5％、乙二醇0.5％、脂肪醇聚氧乙烯醚0.55％
渗透剂：Triton X-100 0.1％、丙三醇0.2％
分散剂：Tween-20 0.01％
消泡剂：乙二醇叔丁醚0.05％
抗原修复液：柠檬酸4g/L、柠檬酸钠30g/L
阻断剂：高碘酸0.5%。
8.一种如权利要求6或7所述的一种用于石蜡切片的低PH脱蜡修复阻断溶液的制备方法，其特征在于，方法如下：
步骤一、配制抗原修复液：称取柠檬酸与柠檬酸钠溶解于蒸馏水中，充分溶解后，用盐酸调节溶液的pH值为6.0；
步骤二、依次量取水溶性脱蜡剂、渗透剂、分散剂、消泡剂、阻断剂加入到步骤一制得的抗原修复液中，充分搅拌溶解，即得低PH脱蜡修复阻断溶液。
9.一种如权利要求1-7任一所述的一种用于石蜡切片的低PH脱蜡修复阻断溶液在组织染色中的应用。
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