CN102113481B - 一种脱落细胞保存液及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种脱落细胞保存液及其制备方法，该保存液的各组分的重量百分比分别为：氯化钠0.6％，氯化钾0.06％，葡萄糖2％，乙醇20％，1-3丙二醇3％，甘油2％，甘氨酸0.15％，粘液溶解剂0.1％，细胞保护剂0.2％，肝素钠0.1％，0.05N苯甲酸钠-苯甲酸缓冲液，并用1％的氢氧化钠或盐酸溶液调整PH值，以确保保存液的PH＝5.8。本发明的脱落细胞保存液能较好的保存细胞，保存时间可达10天以上，细胞核清晰、细胞质舒展，有效去除红细胞和粘液，使细胞分散平铺的同时，更能很好地保存ACP酶，适合做ACP酶染色。

Description

一种脱落细胞保存液及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种脱落细胞保存液及其制备方法，尤其涉及一种适合ACP酶显示的脱落细胞保存液及其制备方法。

背景技术

目前对妇女宫颈细胞的筛查，大多采用液基薄层细胞检测技术。具体方法：使用专门的取样器，在妇女宫颈移行区刷取脱落细胞，再将细胞洗入液基细胞保存液中，经保存液消化后，将脱落细胞转移到载玻片上制成均匀的细胞涂片，涂片上有5000-50000个宫颈脱落细胞，经过巴氏或者HF染色后，病理医生在显微镜下观察这些细胞的形态，寻找异常的细胞，并根据TBS报告要求作出诊断报告，供妇科临床医生参考。

液基薄层细胞检测技术采用的是巴氏或HE染色，虽然一张优良的细胞涂片能够做到细胞薄层、均匀，便于医师阅片，但相对于需要从数万个细胞中找出阳性细胞，对镜检医师仍然存在工作量大和要求经验水平高的问题，因人为因素造成漏检的现象非常常见，因此，寻找一种能够提示阳性细胞的染色方法将具有十分重大的社会意义。经最新研究发现，当细胞遭受HPV病毒感染或鳞状细胞表现CIN变化时，一种叫ACP的酶可以出现显著的活性，而正常的细胞不出现这种酶的表达。利用这一研究发现，通过特殊的方法将阳性细胞ACP酶显示出来，可以大大减少误诊率。

在液基薄层细胞检测技术中加入ACP酶的显示技术，符合目前用户的使用习惯，但这一技术对脱落细胞保存液要求更高，除了保存细胞、消化杂质外，还必须对ACP酶具有良好的保存效果。脱落细胞的液基保存，并不适合用完全固定细胞的方法，否则可能影响去除没有诊断价值的红细胞、粘液和细胞碎片等杂质。

发明内容

本发明的第一个目的是提供一种适合ACP酶显示的脱落细胞保存液，用于解决目前的液基细胞保存液不能有效的保存ACP酶的问题。

为了实现本发明的目的，发明人通过大量试验研究，终于获得了如下技术方案：

一种脱落细胞保存液，含有氯化钠、氯化钾、葡萄糖、乙醇、1-3丙二醇、甘油、甘氨酸、粘液溶解剂、细胞保护剂、肝素钠，各成分的重量百分比分别为：

氯化钠        0.6％

氯化钾        0.06％

葡萄糖        2％

乙醇          20％

1-3丙二醇     3％

甘油          2％

甘氨酸        0.15％

粘液溶解剂    0.1％

细胞保护剂    0.2％

肝素钠        0.1％

所述脱落细胞保存液的PH为5.8。

上述的脱落细胞保存液，它还含有0.05N苯甲酸钠-苯甲酸缓冲液。

上述的脱落细胞保存液，优选用1％的氢氧化钠或盐酸溶液调整PH至5.8。

上述的脱落细胞保存液，所述氯化钠、氯化钾、葡萄糖、乙醇、1-3丙二醇、甘油、甘氨酸、粘液溶解剂、细胞保护剂、肝素钠为离子状。

上述任一一种的脱落细胞保存液，其中所述粘液溶解剂优选为二硫苏糖醇(DTT)。

上述任一一种的脱落细胞保存液，其中所述细胞保护剂优选为多聚甲醛。

本发明的另一个目的是提供上述脱落细胞保存液的制备方法，该方法包括如下步骤：

(1)用去离子水分别溶解氯化钠、氯化钾、葡萄糖、甘氨酸、粘液溶解剂、细胞保护剂、肝素钠，备用；

(2)将乙醇、1-3丙二醇、甘油混合，并用去离子水稀释一倍；

(3)配制0.05N苯甲酸钠-苯甲酸缓冲液浓缩液；

(4)在步骤(3)的苯甲酸钠-苯甲酸缓冲液浓缩液中，依次加入氯化钠、氯化钾、葡萄糖、甘氨酸、粘液溶解剂、细胞保护剂、肝素钠溶液，混匀后加入步骤(2)的混合溶液，混匀后用去离子水稀释至终浓度，边稀释边搅拌，并用1％的氢氧化钠或盐酸溶液调整PH值至5.8。

本发明提供的脱落细胞保存液，以科学合理的比例增加了多种化学成分，细胞保存率高，细胞核清晰、细胞质舒展，能有效去除红细胞和粘液，使细胞分散平铺的同时，更能很好地保存ACP酶，适合做ACP酶染色。

附图说明

图1经过本发明的细胞保存液保存后制成细胞涂片的显微照片

1、异常细胞    2、正常细胞

具体实施方式

以下是本发明的具体实施例，对本发明的技术方案做进一步作描述，但是本发明的保护范围并不限于这些实施例。凡是不背离本发明构思的改变或等同替代均包括在本发明的保护范围之内。

宫颈脱落细胞保存液的制备

1、根据最终溶液的容量，计算出各组分的用量，氯化钠0.6％，氯化钾0.06％，葡萄糖2％，乙醇20％，1-3丙二醇3％，甘油2％，甘氨酸0.15％，粘液溶解剂0.1％，细胞保护剂0.2％，肝素钠0.1％，保持终浓度达到所需要求；

2、用去离子水分别溶解氯化钠、氯化钾、葡萄糖、甘氨酸、粘液溶解剂、细胞保护剂、肝素钠备用；

3、将乙醇、1-3丙二醇、甘油混合，并用去离子水稀释一倍；

4、配制0.05N苯甲酸钠-苯甲酸缓冲液浓缩液；

5、在苯甲酸钠-苯甲酸缓冲液浓缩液中，依次加入氯化钠、氯化钾、葡萄糖、甘氨酸、二硫苏糖醇、多聚甲醛、肝素钠溶液混匀；

6、将步骤3的混合溶液加入步骤5的溶液中混匀；

7、用去离子水将6稀释到终浓度，边稀释边搅拌；

8、测定PH值，用1％的氢氧化钠或盐酸溶液调整PH值到5.8。

9、各组分溶解，都呈现无色。

经过上述制备方法制备的细胞保存液保存的宫颈脱落细胞，在转移到载玻片上制成均匀的细胞涂片时，经过酶染色后，异常细胞的细胞质中含有的大量ACP酶颗粒被染成红色，而正常细胞因不含ACP酶颗粒，故细胞质不着色，从而使异常细胞被清晰的标示出来，具体效果参见图1。

Claims (6)

1.一种脱落细胞保存液，其特征在于：含有如下重量百分比的组分：

所述脱落细胞保存液的pH为5.8。

2.如权利要求1所述的脱落细胞保存液，其特征在于：还含有0.05N苯甲酸钠-苯甲酸缓冲液。

3.如权利要求2所述的脱落细胞保存液，其特征在于：所述氯化钠、氯化钾、葡萄糖、乙醇、1-3丙二醇、甘油、甘氨酸、粘液溶解剂、细胞保护剂、肝素钠为离子状。

4.如权利要求1-3任一所述的脱落细胞保存液，其特征在于：所述粘液溶解剂为二硫苏糖醇。

5.如权利要求1-3任一所述的，其特征在于：所述细胞保护剂为多聚甲醛。

6.权利要求1-3任一所述的脱落细胞保存液的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)用去离子水分别溶解氯化钠、氯化钾、葡萄糖、甘氨酸、粘液溶解剂、细胞保护剂、肝素钠，备用；

(2)将乙醇、1-3丙二醇、甘油混合，并用去离子水稀释一倍；

(3)配制0.05N苯甲酸钠-苯甲酸缓冲液浓缩液；

(4)在步骤(3)的苯甲酸钠-苯甲酸缓冲液浓缩液中，依次加入氯化钠、氯化钾、葡萄糖、甘氨酸、粘液溶解剂、细胞保护剂、肝素钠溶液，混匀后加入步骤(2)的混合溶液，混匀后用去离子水稀释至终浓度，边稀释边搅拌，并用1％的氢氧化钠或盐酸溶液调整pH值至5.8。