CN103196729A - 用于处理粘液的试剂 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种用于解粘体液标本的组合物,该组合物包括二硫键还原剂、渗透压调节剂和pH缓冲剂。该组合物能够快速降低标本如白带标本等中粘液的粘度,且不损伤标本中细胞、霉菌和滴虫等,也不改变体液标本的原有理化性质,适用于标本的前处理、稀释和洗脱,以便进行进一步手动和自动化检测。该组合物在白带常规检测和其它含有粘液的体液标本检测中具有广阔的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及一种用于处理粘液,尤其是体液如白带中的组合物。具体的说,本发明涉及用于降低粘液粘度的组合物。本发明还涉及包括本发明组合物的试剂盒和使用本发明组合物处理粘液的方法。
背景技术
白带是由妇女从阴道里流出来的一种带有粘性的白色液体,它是由前庭大腺、子宫颈腺体、子宫内膜的分泌物和阴道粘膜的渗出液、脱落的阴道上皮细胞混合而成。白带中含有丰富的粘蛋白,炎性标本中还含有各种蛋白成分。部分粪便和其他体液标本中也可以含有类似粘液成分。
目前临床上使用检测白带和其他体液样本的方法是直接涂片,再使用显微镜或带有电子目镜的显微镜进行直接检测。该方法受显微设备质量,样本的采集以及操作者的经验等因素的影响,而粘液成分会使取样困难,样本中的细胞成分也会有于粘液的存在而发生聚集,从而使涂片上各种病原体成分分布不均匀而很难对结果准确判定,重复性差,不利于检测的标准化,也不能够实现自动化。
另外传统方法多依赖手工检测,会造成院内感染和环境污染。
阴道分泌物(白带)常规检测是临床上常规检测手段之一,对于诊断各种妇科炎症和妇科肿瘤具有重要意义。现有技术中已有半自动酶学和化学的半自动检测设备,来帮助进行这些样本的分析。已经在临床上广泛应用的现有设备中,标本存放和检测技术是根据样本中细胞和微生物的形态及数量来判断结果,这些技术的基本原理也是本领域公知的。
但是现有技术的设备和方法仍然没有很好的解决样本采集、涂布、检测和洗脱等问题,而检测结果和洗脱的程度密切相关。由于上述原因,在该粘液、尤其是白带检测领域,自动化的设备重复性差,目前还无法使用。
因此,本领域技术人员可理解,促进白带等体液样本检测的标准化和自动化是困难的,却又是重要的。同样,能够降低体液样本粘度,从而使得取样、洗脱容易进行检测的组合物是前处理中不可缺少的。这种组合物便于使用且低价也是本领域技术人员所期望的。
发明内容
本发明涉及一种用于处理粘液的组合物,具体地说是降低粘液的粘度、尤其是阴道分泌物粘度的组合物。
在本发明的一个实施方案中,本发明组合物包含二硫键还原剂、渗透压调节剂和pH缓冲剂。
在本发明的一个实施方案中,二硫键还原剂选自半胱氨酸、N-乙酰半胱氨酸、还原型谷胱甘肽、二硫苏糖醇、2-巯基乙醇和2-巯基乙胺。
在本发明的一个实施方案中,渗透压调节剂选自葡萄糖、氯化钠、碳酸氢钠、磷酸盐、枸橼酸盐或硫代硫酸钠等。
在本发明的一个实施方案中, pH缓冲剂选自乙酸-乙酸钠缓冲液、邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钠缓冲液和磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液、甘氨酸-盐酸缓冲液、邻苯二甲酸-盐酸缓冲液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、柠檬酸-氢氧化钠-盐酸缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液、磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液、巴比妥钠-盐酸缓冲液、Tris-盐酸缓冲液、硼砂-盐酸缓冲液、硼酸-硼砂缓冲液、甘氨酸-氢氧化钠缓冲液、硼砂-氢氧化钠缓冲液、碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液、碳酸钠-氢氧化钠缓冲液、磷酸氢二钠-氢氧化钠缓冲液、氯化钾-盐酸缓冲液、氯化钾-氢氧化钠缓冲液。
在本发明的另一个实施方案中,所述组合物还含有尿素、胍盐或其组合。在本发明的一个实施方案中,胍盐选自盐酸胍、硫氰酸胍、硝酸胍和碳酸胍。
在本发明的另一个实施方案中,其中所述组合物的渗透压范围为280-315mOsm/L,优选290 mOsm/L。
在本发明的另一个实施方案中,本发明组合物中二硫键还原剂浓度为0.05-0.005g/L,优选0.02 g/L。
在本发明的另一个实施方案中,本发明组合物的pH范围为3.0-10.0。在一个优选的实施方案中,本发明组合物pH范围为3.5-7.0,以应用于白带标本。
在本发明的另一个实施方案中,本发明组合物为液体、喷雾、泡沫、洗液或洗剂的形式。
本发明的另一个方面涉及粘液的解粘前处理方法,包括向粘液中加入包含二硫键还原剂、渗透压调节剂和pH缓冲剂的本发明组合物。在本发明的一个实施方案中,粘液包括阴道分泌物、粪便、尿液、浆膜腔积液、前列腺液和各种穿刺取得的体液成分。
在本发明的一个实施方案中,本发明方法包括将本发明组合物在检测试管中加入或在检测设备中加入。
本发明的另一个方面涉及一种粘液前处理组合物盒,其包含本发明的组合物。
具体实施方式
当在本文中使用时,术语“包含”应被理解为开放式的术语,其指明了任何所声称的特征、要素、整体、步骤或组分的存在,并不试图排除一种或多种其它特征、要素、整体、步骤、组分或它们的组的存在或加入。
当在本文中使用时,术语“粘液”意指具有至少一种粘液特性的浓稠液体。通常,人和动植物体内分泌的粘稠液体富含粘蛋白等蛋白质成分和水溶性成分如无机盐、葡萄糖、氨基酸、多肽类和脂质等组成。
当在本文中使用时,术语“解粘剂”意指这样的有机组合物,当其以有效量接触粘液组合物时,其显著的改变该粘液组合物的性质,例如降低了它的粘度。显著的改变是指所测量的特性被改变至少一个统计上显著的量,并且有利地,对于许多应用来说此改变将至少为约30%。
当在本文中使用时,“白带”指阴道分泌物,包括来自大小阴唇,前庭大腺、阴道渗出物及宫颈腺体分泌物,还有少量由子宫内膜所分泌。它是白色、絮状、带有部性的液体,其量及性状随月经周期稍有变化。临床上可通过白带颜色和性状上的变化来判断女性生殖系统感染和肿瘤等疾病。
“二硫键还原剂”指能够将分子中2个-SH基氧化形成的—S—S—形式的硫原子间键打开的化合物,例如2-巯-乙醇、二硫苏糖类、巯基乙酸等化合物。在尿素等变性剂同时存在时,二硫键还原剂可与二硫键发生作用,使之还原成-SH基(为了防止再氧化,通常用适当的SH试剂将该基团烷基化);在过甲酸等氧化剂同时存在时,二硫键还原剂可与二硫键反应衍生成-SO3H基;在亚硫酸等氧化剂同时存在时,二硫键还原剂可与二硫键反应生成-S-SO3H基。本发明中使用的二硫键还原剂包括各种本领域中已知的二硫键还原剂,包括但不限于半胱氨酸、N-乙酰半胱氨酸、还原型谷胱甘肽、二硫苏糖醇、2-巯基乙醇和2-巯基乙胺。本领域技术人员也可以根据现有技术或经过有限实验在本发明中使用合适的其它二硫键还原剂。
本领域技术人员可理解,可根据所使用的不同二硫键还原剂选择相应的合适浓度。然而,在本发明的一个优选实施方案中,本发明组合物中二硫键还原剂浓度为0.05-0.005g/L,优选0.02 g/L。
“渗透压调节剂”指由能够改变溶液渗透压的化学物质组成的溶剂。各种渗透压调节剂是本领域中公知的,例如葡萄糖、各种盐和硫代硫酸钠等化合物。体液中的渗透压在保持细胞内外的水平衡、使细胞形态保持稳定方面起到极为重要的作用。例如,当组合物渗透压不合适时,白带中滴虫的活性容易受到影响,滴虫肿胀并失去活动性,从而在形态上和白细胞不易区别。因此,本发明组合物应最大限度保持样本中原有的细胞状态稳定。本发明中可使用的渗透压调节剂包括各种本领域中已知的各种渗透压调节剂,包括但不限于葡萄糖、氯化钠、碳酸氢钠、磷酸盐或枸橼酸盐等。
本领域技术人员可理解,可根据需要预处理的体液来选择合适的渗透压浓度。在本发明的一个优选实施方案中,其中所述组合物的渗透压范围为280-315mOsm/L,优选290 mOsm/L。在该渗透压范围内,本发明组合物可良好的应用于预处理白带标本。
“pH缓冲剂”是指由“弱酸及其共轭碱”或“弱碱及其共轭酸”所组成的缓冲化合物对。pH缓冲剂的溶液能够在加入一定量其他物质时减缓pH改变。
人体各种体液样本中pH值略有不同,但基本在4.5-8.5之间。pH可以影响细胞及微生物的形态和存在状态。例如,pH偏碱时红细胞及白细胞的存活时间会减少,细胞可能在较短的时间内破裂因而无法检验。本发明组合物应使用pH缓冲剂以适应不同种类样本。本发明中可使用的pH缓冲剂包括各种本领域中已知的各种pH缓冲剂,包括但不限于乙酸-乙酸钠缓冲液、邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钠缓冲液和磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液、甘氨酸-盐酸缓冲液、邻苯二甲酸-盐酸缓冲液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、柠檬酸-氢氧化钠-盐酸缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液、磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液、巴比妥钠-盐酸缓冲液、Tris-盐酸缓冲液、硼砂-盐酸缓冲液、硼酸-硼砂缓冲液、甘氨酸-氢氧化钠缓冲液、硼砂-氢氧化钠缓冲液、碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液、碳酸钠-氢氧化钠缓冲液、磷酸氢二钠-氢氧化钠缓冲液、氯化钾-盐酸缓冲液、氯化钾-氢氧化钠缓冲液。本领域技术人员公知的是,需要根据不同的具体用途、尤其是不同的最终pH值来选择合适的pH缓冲剂,从而使得最终pH值尽量接近pH缓冲剂的最大缓冲pH,从而可在pH缓冲剂浓度相同的情况下提高缓冲容量,或者在缓冲容量相同的情况下降低pH缓冲剂的浓度。
本领域技术人员可理解,可根据需要预处理的体液来选择合适的pH值范围和相应的pH缓冲剂。在本发明的另一个实施方案中,本发明组合物的pH范围为3.0-10.0。在一个优选的实施方案中,本发明组合物pH范围为3.5-7.0,以应用于白带标本。
在本发明的另一个实施方案中,本发明组合物还含有尿素、胍盐或其组合。不限于理论,可认为尿素和胍盐与二硫键还原剂还原产生的巯基产生反应,从而减少巯基之间重新反应产生二硫键的几率,从而促进了二硫键的断裂,进而促进了粘度的降低。
本文中使用的术语“胍”是指分子式为(NH2)2NH的有机化合物。胍可以和不同的酸形成盐,例如形成盐酸胍、硫氰酸胍、硝酸胍、碳酸胍等。
本文中使用的术语“尿素”是指分子式为 (NH2)2CO 、分子质量60的化合物。尿素的外观是白色晶体或粉末。尿素能非常有效的使蛋白质变性,尤其能非常有效地破坏非共价键结合的蛋白质。
在本发明的另一个实施方案中,本发明组合物为液体、喷雾、泡沫、洗液或洗剂的形式,从而适合不同的应用方式。例如,本发明组合物以液体试剂的形式作为稀释液应用在自动检测设备中与样本进行混合并稀释,也可以喷雾的形式喷洒在采集样本的试管内表面而起作用。
本发明的另一个方面涉及粘液的解粘前处理方法,包括向粘液中加入包含二硫键还原剂、渗透压调节剂和pH缓冲剂的本发明组合物。
具体地说,本发明可在粘液样本采集后至进行各种检测前加入与标本充分混合而降低其粘度,使之能够方便进行手工或自动检测加入稀释液中应用。例如,在本发明的一个实施方案中,本发明方法包括将本发明组合物在检测试管中加入或在检测设备中加入。
本发明的另一个方面涉及一种粘液前处理试剂盒,其包含二硫键还原剂、渗透压调节剂和pH缓冲剂。本发明的粘液前处理试剂盒可直接包含本发明组合物形式的二硫键还原剂、渗透压调节剂和pH缓冲剂。或者,二硫键还原剂、渗透压调节剂和pH缓冲剂可分别单独包装,或者任意两种成分混合并与另一种成分分开包装,以适用于不同的实际应用需要。所有这些都包括在本发明的范围内。
在本发明的一个实施方案中,粘液包括阴道分泌物、粪便、尿液、浆膜腔积液、前列腺液和各种穿刺取得的体液成分。优选所述粘液为较粘稠、不均质的体液成分,例如白带。
实施例
解粘稀释液的配置:0.05g DTT,8.5gNaCl, 0.056g磷酸氢二钠和0.01g磷酸二氢钾再加去离子水1L,溶液实测pH5.2,实测渗透压289 mOsm/L。
试验方法1:取一份粘液较多样本分成两份分别加入1.5ml稀释液和1.5ml生理盐水,然后由一位工作5年以上的医生对样本进行检验,观察10个视野下的白细胞数量记录如下(每高倍视野下10个细胞为一个“+”)
试验方法2:按临床白带常规取样方法对12位患者取两份分泌物样本,一份加入1.5ml生理盐水,另一份加入1.5ml配置好的稀释液,再分别由两位工作5年以上的医生A和B对这些样本立即在显微镜下进行检验,检验结果如下。
生理盐水组
解粘稀释液组
由以上实施例可以清楚的看出,本发明组合物能够快速使白带样本液化,并且不损害其中的各种检测物质形态,从而使样本涂片后各种有形成分能够均匀分布,减少粘液带来的不确定性,并且能够在自动化设备上检测样本而不会产生堵孔等问题。
本发明的制剂能够快速解除体液标本(如白带等临床常用标本)中的粘液成分,且不损伤白带中细胞、霉菌和滴虫等成分,也不改变体液标本的原有理化性质,适用于标本的前处理、稀释和洗脱,以便进行进一步手动和自动化检测。
尽管已经参考各种实施方案描述了本发明,但本领域技术人员将会认识到可以在形式和细节上进行改变而不背离本发明的精神和范围。同样,意欲将前面详细的说明书认为是示例性的而非限定的,本发明的范围只受到权利要求书以及权利要求书中各实施方案的等同替换的限定。
Claims (10)
1.一种用于处理粘液的组合物,所述组合物包含二硫键还原剂、渗透压调节剂和pH缓冲剂。
2.权利要求1的组合物,其中二硫键还原剂选自半胱氨酸、N-乙酰半胱氨酸、还原型谷胱甘肽、二硫苏糖醇、2-巯基乙醇和2-巯基乙胺。
3.权利要求1的组合物,其中渗透压调节剂选自葡萄糖、氯化钠、碳酸氢钠、磷酸盐和枸橼酸盐。
4.权利要求1的组合物,其中pH缓冲剂选自乙酸-乙酸钠缓冲液、邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钠缓冲液、磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液、甘氨酸-盐酸缓冲液、邻苯二甲酸-盐酸缓冲液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、柠檬酸-氢氧化钠-盐酸缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液、磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液、巴比妥钠-盐酸缓冲液、Tris-盐酸缓冲液、硼砂-盐酸缓冲液、硼酸-硼砂缓冲液、甘氨酸-氢氧化钠缓冲液、硼砂-氢氧化钠缓冲液、碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液、碳酸钠-氢氧化钠缓冲液、磷酸氢二钠-氢氧化钠缓冲液、氯化钾-盐酸缓冲液、氯化钾-氢氧化钠缓冲液。
5.权利要求1的组合物,其中所述组合物还包含尿素、胍盐或其组合。
6.权利要求1所述组合物,所述组合物的渗透压范围为280-315 mOsm/L,和/或所述组合物中二硫键还原剂浓度为0.05-0.005 g/L,和/或所述组合物的pH范围3.0-10.0,优选为所述组合物的pH范围为3.5-7.0。
7.权利要求1所述的组合物,其为液体、喷雾、泡沫、洗液或洗剂的形式。
8.一种粘液处理试剂盒,其包含权利要求1中所述的组合物。
9.一种粘液的前处理方法,所述方法包括向粘液中加入二硫键还原剂、渗透压调节剂和pH缓冲剂。
10.权利要求9的方法,其中所述粘液包括阴道分泌物、粪便、尿液、浆膜腔积液、前列腺液和各种穿刺取得的体液成分。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C53 | Correction of patent of invention or patent application | ||
CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Tu Bin Inventor before: The inventor has waived the right to be mentioned |
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COR | Change of bibliographic data |
Free format text: CORRECT: INVENTOR; FROM: REQUEST NOT TO RELEASE THE NAME TO: TU BIN |
|
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20130710 |