CN107630065A

CN107630065A - 一种在支原体液体培养时使标本均匀分散的方法

Info

Publication number: CN107630065A
Application number: CN201711062029.2A
Authority: CN
Inventors: 蔡慧娜
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2017-11-02
Filing date: 2017-11-02
Publication date: 2018-01-26

Abstract

本发明提供了一种在支原体液体培养时使标本均匀分散的方法，该方法通过加入N‑乙酰半胱氨酸水溶液到支原体液体培养物中，利用N‑乙酰半胱氨酸来消化分解泌尿生殖道标本中的粘液，从而使泌尿生殖道标本均匀分散在支原体培养液中，有利于标本中支原体均匀地加入到鉴定药敏板的各个孔内。本发明的方法不需要额外的操作步骤，即可达到标本均匀分散的良好效果，各孔的颜色观察也更容易，可避免不一致甚至矛盾结果的产生，鉴定药敏检测的结果更为准确。

Description

一种在支原体液体培养时使标本均匀分散的方法

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，尤其涉及支原体液体培养、鉴定及药敏检测，具体为一种在支原体液体培养时使标本均匀分散的方法。

背景技术

支原体(Mycoplasma)是一种介于细菌和病毒之间、能独立生存的无细胞壁微生物，种类包括肺炎支原体、解脲脲原体、人型支原体、微小脲原体、和生殖器支原体等。其中，人型支原体和解脲脲原体是引起非淋球菌性泌尿生殖道炎的主要病原体，临床上可以表现为附睾炎、前列腺炎、精囊腺炎、盆腔炎和不孕不育等。支原体作为引起女性泌尿生殖道感染的主要病原体之一，还会导致妊娠期妇女生产出低体重儿、反复流产、绒毛膜羊膜炎、胎膜早破及死产等。

在目前的临床微生物检验工作中，绝大多数医院采用商品化试剂盒检测各种生殖道支原体，其基本原理是：支原体培养液中含有支原体生长所需的营养物质、抑菌剂、尿素、精氨酸和酚红指示剂等物质，培养时支原体分解尿素或精氨酸产碱而使培养液的pH升高，这样培养液中的酸碱指示剂——酚红会发生颜色改变。培养液因支原体生长而产生的颜色变化再结合药敏板上预制的多种抗生素，最后可以达到支原体培养、鉴定、计数和药敏检测的目的。

支原体液体培养时，首先将泌尿生殖道拭子样本接种在液体培养基中，然后再分别加入到鉴定、计数和药敏孔里。由于部分标本含有较多粘液或脓性分泌物，短时间内不能完全溶解于培养液中，故包裹其中的支原体不能完全释放到培养液中，这样使支原体在培养液中分布不均匀，当用微量加样器向每个鉴定药敏孔加入同体积培养液时，容易造成每孔中加入的支原体数量不同，最终导致一些错误结果的出现。

为了促进粘液或脓液中支原体的释放和培养液的均质化，有必要采用某种方法(物理、化学或生物方法)来加速泌尿生殖道标本的溶解，并开发出一种在支原体液体培养时使标本均匀分散的方法，以提高检测结果的准确性。

发明内容

有鉴于此，本发明所解决的技术问题在于提供一种在支原体液体培养时使标本均匀分散的方法，无需额外的操作步骤，即可使支原体液体培养物中支原体均匀分散，提高实验的可操作性以及药敏检测的结果的准确性。

为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案如下：

一种在支原体液体培养时使标本均匀分散的方法，加入N-乙酰半胱氨酸水溶液到支原体液体培养物中。

优选地，加入到支原体培养液中的N-乙酰半胱氨酸终浓度为0.1％～1％。

优选地，加入的N-乙酰半胱氨酸水溶液原始工作浓度为10％～20％。

优选地，加入的N-乙酰半胱氨酸水溶液pH值为5～8。

优选地，加入的N-乙酰半胱氨酸水溶液用NaHCO₃进行pH值调节。

在本发明的实施方案中，取N-乙酰半胱氨酸(NAC)粉末和无菌水配制原始工作浓度为10％～20％的NAC(pH为5～8)，然后加入100μL NAC溶液到支原体培养液中使NAC终浓度为0.1％～1％。

相比于现有技术，本发明的的方法至少具备如下有益效果：

本发明的技术方案中，通过在支原体液体培养时，加入N-乙酰半胱氨酸水溶液到支原体液体培养物中，其中N-乙酰半胱氨酸(NAC)可消化分解泌尿生殖道标本中的粘液，从而使泌尿生殖道标本均匀分散在支原体培养液中，有利于标本中支原体均匀地加入到鉴定药敏板的各个孔内。本发明的方法不需要额外的操作步骤，即可达到标本均匀分散的良好效果，各孔的颜色观察也更容易，可避免不一致甚至矛盾结果的产生，鉴定药敏检测的结果更为准确。

附图说明

图1是未使用和使用NAC的结果比较图。图中有两列五排共10块鉴定药敏板，左列为未使用NAC处理的支原体鉴定药敏检测结果，右列为使用NAC处理后的支原体鉴定药敏检测结果，每排的两块鉴定药敏板均使用同一份泌尿生殖道拭子进行检测。结果显示，11号、17号和22号标本在使用NAC和未使用NAC时的结果一致，但22号标本的人型支原体(Mh)鉴定孔、红霉素(ERY)孔、阿奇霉素(AZI)孔和克拉霉素(CLA)孔的颜色非常浅，很容易被误判为阴性或敏感；14号标本在未使用NAC时红霉素(ERY)和交沙霉素(JOS)为敏感，但在使用NAC时红霉素和交沙霉素为中介；16号标本在未使用NAC时阿奇霉素(AZI)为敏感，但在使用NAC时阿奇霉素为中介。

具体实施方式

以下实施例进一步说明本发明的内容，但所描述的实例只是本发明的部分实施例，而不是全部实施例，故不应该理解为对本发明的限制。基于本发明中的实施例，在无创造性劳动前提下对本发明方法、步骤或条件的修改或替换，都属于本发明保护的范围。

实施例1：N-乙酰半胱氨酸(NAC)溶液的配制

取1.55g NAC粉末加入到10ml无菌水中，振荡30s室温放置30min。用pH计检测NAC溶液的pH值，并用少量NaHCO3粉末将pH值调至6后置4℃保存备用。

实施例2：NAC处理泌尿生殖道拭子(采用法国梅里埃公司生产的Mycoplasma IST2试剂盒,批号1004103260)

将泌尿生殖道拭子插入R1试剂瓶(内含保存液)中，在瓶壁上摩擦拭子并不断旋转，当拭子上的附着物全部洗入液体中后，停止摩擦并将拭子取出。用加样枪将R1试剂瓶中一半液体吸到另一空瓶中，接着分别加入等量的R1试剂补齐液体体积，然后在一个瓶中加入100μL NAC溶液。将两个R1试剂瓶中的液体分别转移至两个R2试剂瓶(内含粉末)中，振荡混匀后静置30min。

用微量移液器将两个R2试剂瓶(已混匀)中的液体分别转移至两块支原体鉴定药敏板中，板上每孔均加入50μL液体，再加2滴矿物油于孔内以防止液体蒸发。将培养瓶和鉴定药敏板置于35～37℃培养箱中培养48h，分别于24h时和48h时观察和记录结果。

24h观察结果时只看Uu计数孔，如果该孔变为紫红色，则记录结果为Uu>104/mL，反之记录结果为Uu<104/mL。48h观察结果除所有加样孔均需观察，并且应先观察培养瓶是否变色和澄清；如果鉴定孔变为紫红色，则记录为Uu生长或Mh生长；如果Mh计数孔变为紫红色，则记录为Mh>104/mL；药敏孔需结合高低浓度孔的结果综合判断，高低浓度孔均未变紫红色时记录为敏感，高浓度未变色而低浓度变紫红色时记录为中介，高低浓度孔均变紫红色时记录为耐药。

实验结果如图1所示，图中有两列五排共10块鉴定药敏板，左列为未使用NAC处理的支原体鉴定药敏检测结果，右列为使用NAC处理后的支原体鉴定药敏检测结果，每排的两块鉴定药敏板均使用同一份泌尿生殖道拭子进行检测。结果显示，11号、17号和22号标本在使用NAC和未使用NAC时的结果一致，但22号标本的人型支原体(Mh)鉴定孔、红霉素(ERY)孔、阿奇霉素(AZI)孔和克拉霉素(CLA)孔的颜色非常浅，很容易被误判为阴性或敏感；14号标本在未使用NAC时红霉素(ERY)和交沙霉素(JOS)为敏感，但在使用NAC时红霉素和交沙霉素为中介；16号标本在未使用NAC时阿奇霉素(AZI)为敏感，但在使用NAC时阿奇霉素为中介。

由此可见，上述实施例中的方案通过在支原体液体培养时，加入N-乙酰半胱氨酸水溶液到支原体液体培养物中，其中N-乙酰半胱氨酸(NAC)可消化分解泌尿生殖道标本中的粘液，从而使泌尿生殖道标本均匀分散在支原体培养液中，有利于标本中支原体均匀地加入到鉴定药敏板的各个孔内。本发明的方法不需要额外的操作步骤，即可达到标本均匀分散的良好效果，各孔的颜色观察也更容易，可避免不一致甚至矛盾结果的产生，鉴定药敏检测的结果更为准确。

最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims

1.一种在支原体液体培养时使标本均匀分散的方法，其特征在于：加入N-乙酰半胱氨酸水溶液到支原体液体培养物中。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：加入到支原体培养液中的N-乙酰半胱氨酸终浓度为0.1％～1％。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：加入的N-乙酰半胱氨酸水溶液原始工作浓度为10％～20％。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：加入的N-乙酰半胱氨酸水溶液pH值为5～8。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：加入的N-乙酰半胱氨酸水溶液用NaHCO₃进行pH值调节。