CN112881113A - 一种稳定的粘液处理剂 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及细胞生物技术领域，具体为一种稳定的粘液处理剂，其组分按质量百分比配比为：质量浓度为0.5％‑5％的N‑乙酰半胱氨酸作为粘液溶解剂；质量浓度为0.05％‑0.5％抗坏血酸和质量浓度为0.05％‑0.2％儿茶素作为稳定剂；10‑50mmol/L的3‑吗啉丙磺酸缓冲液或2‑吗啉乙磺酸有机生物缓冲液缓冲液；质量浓度为0.01％‑0.1％的粘液分散剂；质量浓度为0.01％‑0.1％的防腐剂。本发明选用N‑乙酰半胱氨酸作为粘液溶解剂，首次选择抗坏血酸，儿茶素等抗氧化剂协同稳定剂以稳定粘液溶解剂，选择3‑吗啉丙磺酸缓冲液(MOPS),2‑吗啉乙磺酸(MES)有机生物缓冲液作为协同稳定缓冲液，获得一种稳定的，高效的粘液处理剂。
Description
技术领域
本发明涉及细胞生物技术领域，具体为一种稳定的粘液处理剂。
背景技术
临床上取宫颈细胞样本、胸腹水及痰液样本时，样本上经常含有大量的粘液，粘液包裹细胞后形成细胞团，在对细胞染色的时候，粘液或粘液团会附着在玻片上，影响细胞在玻片上的平铺，并导致染色背景复杂，因此临床上通常会把大块细胞团静置除去或通过梯度离心的方法除去粘液团，再行制片，该方法主要的缺点是除去了粘液团里面的细胞，但通常异常的细胞往往存在于细胞团或粘液团中，对于后续的TBS诊断和细胞DNA倍体分析都会漏诊。临床上另外采用二硫苏糖醇裂解的方法，在保存液中直接加入或在细胞制片前加入二硫苏糖醇以达到处理粘液的作用，该方法的缺点是二硫苏糖醇有毒且有很重的气味，影响实验者的健康，且化学性质不稳定，易分解，不易保存，临床实施困难。另有临床采用蛋白酶、分解胎之类的裂解，但该溶液不稳定，且分解时间必须精准把控，否则造成对待测细胞的裂解，且对后续进行免疫细胞化学染色有一定的影响，临床应用有限。为此，我们提出一种稳定的粘液处理剂。
发明内容
本发明的目的在于提供一种稳定的粘液处理剂，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种稳定的粘液处理剂，其组分按质量百分比配比为：
质量浓度为0.5％-5％的N-乙酰半胱氨酸作为粘液溶解剂；
质量浓度为0.05％-0.5％抗坏血酸和质量浓度为0.05％-0.2％儿茶素作为稳定剂；
10-50mmol/L的3-吗啉丙磺酸缓冲液或2-吗啉乙磺酸有机生物缓冲液缓冲液；
质量浓度为0.01％-0.1％的粘液分散剂；
质量浓度为0.01％-0.1％的防腐剂。
优选的，所述N-乙酰半胱氨酸作为粘液溶解剂的质量浓度为1％。
优选的，所述抗坏血酸作为稳定剂的质量浓度为0.3％。
优选的，所述儿茶素作为稳定剂的质量浓度为0.1％。
优选的，所述粘液分散剂为乙二胺四乙酸二钠。
优选的，所述防腐剂为ProClin300或ProClin950。
一种稳定的粘液处理剂用于宫颈细胞样本、胸腹水及痰液样本的处理。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：选用N-乙酰半胱氨酸作为粘液溶解剂，首次选择抗坏血酸，儿茶素等抗氧化剂协同稳定剂以稳定粘液溶解剂，选择3-吗啉丙磺酸缓冲液(MOPS),2-吗啉乙磺酸(MES)有机生物缓冲液作为协同稳定缓冲液，获得一种稳定的，高效的粘液处理剂。
附图说明
图1为本发明实施例中宫颈粘液样本示意图；
图2为本发明实施例中胸腹水样本玻片外观图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明提供一种技术方案：一种稳定的粘液处理剂，其组分按质量百分比配比为：
质量浓度为0.5％-5％的N-乙酰半胱氨酸作为粘液溶解剂；
质量浓度为0.05％-0.5％抗坏血酸和质量浓度为0.05％-0.2％儿茶素作为稳定剂；
10-50mmol/L的3-吗啉丙磺酸缓冲液或2-吗啉乙磺酸有机生物缓冲液缓冲液；
一种稳定的粘液处理剂用于宫颈细胞样本、胸腹水及痰液样本的处理。
实施例1：粘液溶解剂N-乙酰半胱氨酸浓度筛选
使用20mmol/L的MES缓冲液分别配制质量浓度为0.1％，0.5％，1％，3％，5％，8％的N-乙酰半胱氨酸溶液，配制后放入2-8℃保存。
收集10例肉眼可见粘液团的宫颈脱落细胞样本，分别用上述试剂处理15分钟，处理完成后肉眼观察粘液团情况，并分别进行常规染色，观察细胞是否退化。处理结果如下(表1)：
根据以上结果，可见在N-乙酰半胱氨酸浓度为0.1％的时候，粘液基本上都未被分解，8％的浓度时细胞已经退化，其他浓度时基本能满足需求，因此选择质量浓度为0.5％-5％，其中在1％的浓度的时候，所有样本粘液均已分解，且细胞形态全部正常，因此N-乙酰半胱氨酸优选浓度为1％。
实施例2：抗坏血酸浓度筛选
作为稳定剂，不同浓度的试剂抗氧化效果不同，因此在1％N-乙酰半胱氨酸基础上，分别选择质量浓度为0.01％，0.05％，0.1％，0.3％，0.5％，1％的抗坏血酸，配置完成后37℃加速7天后与现配的N-乙酰半胱氨酸同时处理5例有可见粘液团的宫颈标本，观察处理粘液团效果。处理结果如下表(表2)：
根据以上结果，抗坏血酸浓度为0.3％的时候加速7天后与对照组处理粘液效果一致，在0.05％-0.2％时基本能满足粘液处理的需求。
实施例3：儿茶素浓度筛选
由于单稳定剂无法完全保证N-乙酰半胱氨酸的处理效果，因此选用儿茶素作为协同稳定剂。
使用20mmol/L的MES缓冲液质量浓度为1％的N-乙酰半胱氨酸，再加入0.3％的抗坏血酸，分别加入质量浓度为0.01％，0.05％，0.1％，0.2％，0.5％的儿茶素，配置完成后37℃加速7天后与现配的N-乙酰半胱氨酸同时处理实施例2中的宫颈标本，观察处理粘液团效果。
根据表格3中结果，儿茶素浓度为0.1％的时候加速7天后与对照组处理粘液效果一致，在0.05％-0.5％时基本能满足粘液处理的需求。具体结果如下表(表3)：
实施例4
配置1000mL粘液处理剂，按质量溶度具体配方如下：
20mmol/L的MES缓冲液；
pH调至7.2，2-8℃保存。
实施例5
配置1000mL粘液处理剂，按质量溶度具体配方如下：
50mmol/L MOPS缓冲液；
pH调至7.2，2-8℃保存。
将实施例4和5中试剂放置2-8℃的环境中12个月后，分别处理2例宫颈粘液样本，2例胸腹水样本，1例痰液样本，结果显示，5例样本中的粘液均处理完全，且细胞形态未改变。其中1例宫颈粘液样本如图1所示，1例胸腹水样本玻片外观如图2所示。
本发明选用N-乙酰半胱氨酸作为粘液溶解剂，首次选择抗坏血酸，儿茶素等抗氧化剂协同稳定剂以稳定粘液溶解剂，选择3-吗啉丙磺酸缓冲液(MOPS),2-吗啉乙磺酸(MES)有机生物缓冲液作为协同稳定缓冲液，获得一种稳定的，高效的粘液处理剂。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (7)
1.一种稳定的粘液处理剂，其特征在于：其组分按质量百分比配比为：
质量浓度为0.5％-5％的N-乙酰半胱氨酸作为粘液溶解剂；
质量浓度为0.05％-0.5％抗坏血酸和质量浓度为0.05％-0.2％儿茶素作为稳定剂；
10-50mmol/L的3-吗啉丙磺酸缓冲液或2-吗啉乙磺酸有机生物缓冲液缓冲液；
质量浓度为0.01％-0.1％的粘液分散剂；
质量浓度为0.01％-0.1％的防腐剂。
2.根据权利要求1所述的一种稳定的粘液处理剂，其特征在于：所述N-乙酰半胱氨酸作为粘液溶解剂的质量浓度为1％。
3.根据权利要求1所述的一种稳定的粘液处理剂，其特征在于：所述抗坏血酸作为稳定剂的质量浓度为0.3％。
4.根据权利要求1所述的一种稳定的粘液处理剂，其特征在于：所述儿茶素作为稳定剂的质量浓度为0.1％。
5.根据权利要求1所述的一种稳定的粘液处理剂，其特征在于：所述粘液分散剂为乙二胺四乙酸二钠。
6.根据权利要求1所述的一种稳定的粘液处理剂，其特征在于：所述防腐剂为ProClin300或ProClin950。
7.根据权利要求1-6中任意一项所述的一种稳定的粘液处理剂用于宫颈细胞样本、胸腹水及痰液样本的处理。
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Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 顾元忻等: "一种血性胸腹水细胞预处理液的制备", 浙江实用医学, vol. 18, no. 03, pages 217 * |
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