CN104114691A - 用于再生干细胞的培养基组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种用于将来自老年人的干细胞转化为年轻的干细胞的培养基组合物，更具体地涉及一种用于培养干细胞的培养基组合物，用于将来自老年人的干细胞再生为具有与年轻人的干细胞类似的特性，并涉及一种再生干细胞的方法，包括在所述培养基组合物中培养来自老年人的干细胞。根据本发明，即使自超过60岁的老年人收集的间充质干细胞也可被转化为具有高分化能力、高端粒酶活性和高干细胞标记表达能力的年轻的间充质干细胞。因此，本发明能够显著地提高采用间充质干细胞的细胞治疗的疗效。

Description

用于再生干细胞的培养基组合物
技术领域
本发明涉及一种用于将来自老年人的干细胞转化为年轻的干细胞的培养基组合物，更具体地涉及一种用于培养干细胞的培养基组合物，用于将来自老年人的干细胞再生为具有与年轻人的干细胞类似的特性，并涉及一种再生干细胞的方法，包括在所述培养基组合物中培养来自老年人的干细胞。
背景技术
间充质干细胞是源自诸如骨髓细胞、脐带血细胞、胎盘细胞(胎盘组织细胞)或脂肪细胞(或脂肪组织细胞)的各种成体细胞的多能干细胞。例如，来自骨髓的间充质干细胞具有多能性而分化为脂肪组织、骨/软骨组织和肌肉组织，因此已经进行了各种研究来开发采用间充质干细胞的细胞治疗剂。
近年来，由于利用间充质干细胞的细胞治疗技术受到了关注，因而需要发展来自人体的间充质干细胞的活化技术以适合于治疗目的。特别地，老年人占细胞治疗患者的很大一部分，而从老年人的组织收集的间充质干细胞由于较低的增殖和分化能力而具有较低的疗效。此外，需要将来自老年人的间充质干细胞活化为具有与来自年轻人的间充质干细胞类似特性的技术。
众所周知，类似于其他原代培养的人类细胞，当在体外培养时，间充质干细胞由于与端粒缩短不相关的衰老机制而分裂非常缓慢(Shibata,K.R.et al.,Stem cells,25；2371-2382,2007)。尚未清楚地发现这种衰老机制，但已知主要是因为在长期体外培养中环境胁迫积累，使得Cdk抑制蛋白p16(INK4a)表达并积累而抑制了参与细胞生长的Cdk蛋白的活性。研究发现，当诱导肿瘤基因Bmi-1在间充质干细胞中的表达而抑制p16的表达时，细胞的衰老就会受到抑制(Zhang,X.et al.Biochemical and biophysical research communications351；853-859,2006)。此外，据报道，当在培养期间用FGF-2对间充质干细胞进行处理以抑制p21(Cip1)、p53和p16(INK4a)的mRNA表达时，间充质干细胞的生长在G1期停滞的情况就会受到抑制(Ito,T.et al.,Biochemical andbiophysical research communications,359；108-1142007)。此外，韩国专利公开No.10-2009-0108141公开了一种通过将编码Wip1蛋白的基因转化间充质干细胞而抑制间充质干细胞衰老的方法。
然而，目前还没有对再生从老年人的组织收集的老化的间充质干细胞的方法的报道。
因此，本发明发现，当将从分离自老年患者的脂肪组织收集的间充质干细胞在含有抗氧化剂和生长因子的培养基中培养时，能够产生具有与年轻人的间充质干细胞的活性类似的间充质干细胞，因此完成了本发明。
发明内容
本发明的一个目的在于提供一种用于再生来自老年人的间充质干细胞的培养基组合物。
本发明的另一目的在于提供一种再生间充质干细胞的方法，包括使用所述培养基组合物培养来自老年人的充质干细胞。
为了实现上述目的，本发明提供一种用于再生来自老年人的间充质干细胞的培养基组合物，所述培养基组合物含有FBS(胎牛血清)、抗氧化剂、细胞因子和NAC(N-乙酰-L-半胱氨酸)。
本发明还提供了一种再生来自老年人的间充质干细胞的方法，所述方法包括在上述培养基组合物中培养来自老年人的间充质干细胞。
附图说明
图1示出了来自20几岁的人和30几岁的人的脂肪干细胞在每种培养基中作4轮传代培养的显微图片。
图2示出了来自70几岁的人和80几岁的人的脂肪干细胞在其培养基中作4轮传代培养的显微图片。
图3是示出来自年轻人(20几岁和30几岁)的细胞和来自老年人(70几岁和80几岁)的细胞在10种不同的培养基中培养的细胞群倍增水平(CPDL)的图表。
图4是示出来自年轻人(20几岁和30几岁)的细胞和来自老年人(70几岁和80几岁)的细胞在各种培养基中培养的细胞群倍增水平(CPDL)的图表。
图5是示出在五种不同的培养基中培养的源自不同年龄的人的脂肪干细胞的端粒酶活性的图表。
图6是示出在两种不同的培养基(1号培养基和9号培养基)中培养的来自20几岁、30几岁、70几岁和80几岁的人的脂肪干细胞的端粒酶活性的图表。
图7是示出在使用1号培养基和9号培养基对细胞作4轮传代培养和6轮传代培养后，端粒酶活性变化的测量结果的图表。
图8示出了在1号培养基和9号培养基中培养3轮的脂肪干细胞中的多能性标记oct4、nanog和Rex1的表达水平的测量结果。
图9示出了在1号培养基和9号培养基中培养4轮的脂肪干细胞中的多能性标记oct4、nanog和Rex1的表达水平的测量结果。
用于实施本发明的最佳实施方式
一方面，本发明涉及一种用于再生来自老年人的间充质干细胞的培养基组合物，所述培养基组合物含有FBS(胎牛血清)、抗氧化剂、细胞因子和NAC(N-乙酰-L-半胱氨酸)。
如在此使用的，术语“干细胞”是指这样的细胞，其不仅具有自我复制的能力而且还具有分化为至少两种类型的细胞的能力，而“成体干细胞”是指出现在发育过程后形成胚胎的各器官的时期或出现在成年期的干细胞。
如在此使用的，术语“间充质干细胞”是指从人类或哺乳动物的各种组织中分离的未分化干细胞。特别地，本发明中的间充质干细胞可以是脐带源性间充质干细胞、脐带血源性间充质干细胞、骨髓源性间充质干细胞、脂肪源性间充质干细胞、肌肉源性间充质干细胞、神经源性间充质干细胞、皮肤源性间充质干细胞、羊膜源性间充质干细胞和胎盘源性间充质干细胞。从各组织分离干细胞的技术是本领域已知的。
如在此使用的，术语“脂肪源性干细胞”是指从脂肪组织中分离的未分化干细胞。例如，可按以下方式分离脂肪源性干细胞。具体地，可通过以下方式分离脂肪源性干细胞：将通过抽脂术获得的脂肪在生理盐水中悬浮，培养悬浮液，用胰蛋白酶处理贴附至培养容器(如烧瓶)的脂肪细胞层，并收集经处理的脂肪细胞，或者用刮刀收集悬浮在生理盐水中的少量脂肪细胞。
如在此使用的，措词“再生干细胞”是使来自老年人的间充质干细胞的表型类似于来自年轻人的间充质干细胞的表型。所述表型包括细胞形态、细胞增殖速率、端粒酶活性、干细胞标记(Oct4、SSEA-1、Tra1-60、Tra1-81、Nanog等)的表达水平和干细胞的分化能力。在本发明中，来自老年人的间充质干细胞优选为分离自60-120岁的老人的细胞。
如在此使用的，措词“使来自老年人的间充质干细胞的表型类似于来自年轻人的间充质干细胞的表型”是指与第一轮中分离的来自老年人的间充质干细胞相比，表型变得更类似于来自年轻人的组织的干细胞的状态，或者与在不同于本发明的培养基组合物中培养的间充质干细胞相比，表型变得更类似于年轻人的干细胞的状态。
在本发明中，所述培养基组合物可进一步含有胰岛素或胰岛素样生长因子以及氢化可的松，并且所述培养基组合物中的细胞因子可以是EGF(表皮生长因子)和/或bFGF(碱性成纤维细胞生长因子)。
本发明的培养基组合物中使用的抗氧化剂可以是硒、维生素E、抗坏血酸、儿茶素、番茄红、β-胡萝卜素、辅酶Q-10、EPA(二十碳五烯酸)、DHA(二十二碳六烯酸)等。优选地，抗氧化剂可以是硒。
因此，本发明发现FBS、bFGF和EGF是培养来自所有年龄组的人的脂肪干细胞的必需因子。并且还发现来自年轻人的细胞比来自老年人的细胞的多能性、分化率或端粒酶活性高，而且在不含FBS、bFGF或EGF的培养基中培养的细胞显示出降低的生长速率、分化率和端粒酶活性，这表明FBS、bFGF和EGF是细胞生长和细胞活性的必需因子。
此外，本发明发现在不含硒的培养基和含硒的对照培养基中，源自年轻组和源自老年组的干细胞的细胞分化率是类似的。然而，两种培养基中的端粒酶活性检测结果表明在不含硒的培养基中培养的老年组细胞的端粒酶活性比年轻组细胞的端粒酶活性低，这表明硒实质上应包含在用于培养来自老年人的细胞的培养基中，以提供高的端粒酶活性。
另一方面，本发明涉及一种再生来自老年人的间充质干细胞的方法，所述方法包括在上述培养基组合物中培养来自老年人的间充质干细胞，所述培养基组合物用于将来自老年人间充质干细胞培养为来自年轻人间充质干细胞，所述培养基组合物含有FBS(胎牛血清)、抗氧化剂、细胞因子和NAC(N-乙酰-L-半胱氨酸)。
用于培养间充质干细胞的基础培养基可以是本领域已知的常规的适合于培养干细胞的培养基，例如，DMEM、MEM或K-SFM培养基。优选地，所述基础培养基为无血清培养基。更优选地，所述基础培养基为K-SFM(角化细胞-SFM；角化细胞无血清培养基)。
用于培养间充质干细胞的培养基可补充本领域已知的添加剂，以抑制间充质干细胞的分化，同时促进其未分化表型的增殖。
此外，所述培养基可含有等渗溶液的中性缓冲液(例如，磷酸盐和/或高浓度碳酸氢盐)以及蛋白营养物(例如，血清如FBS、血清替代品、白蛋白或必需氨基酸及非必需氨基酸如谷氨酰胺)。此外，所述培养基可含有脂类(脂肪酸、胆固醇、血清HDL或LDL提取物)以及在大多数这类培养基中发现的其他成分(例如，胰岛素或转铁蛋白、核苷或核苷酸、丙酮酸、糖源如葡萄糖、呈任何离子形式或盐的硒、糖皮质激素如氢化可的松和/或还原剂如β-巯基乙醇)。
此外，为了防止细胞彼此贴附或贴附在容器壁上，或防止形成大的聚簇，培养基中含有抗凝剂会是有利的，例如由Invitrogen出售的抗凝剂(Cat#0010057AE)。
其中，采用选自以下添加剂中的一种或多种添加剂会是有利的：
-干细胞因子(SCF、Steel因子)、二聚化c-kit的其他配体或抗体，以及相同信号传导通路的其他激活子；
-其他酪氨酸激活酶相关受体的配体，所述受体例如血小板源性生长因子(PDGF)、巨噬细胞集落刺激因子、Flt-3配体以及血管内皮生长因子(VEGF)的受体；
-提高环腺苷酸cAMP水平的因子，如弗斯可林(forskolin)；
-诱导gp130的因子，如LIF或制瘤素-M；
-造血生长因子，如血栓形成素(TPO)；
-转化生长因子，如TGFβ1；
-神经生长因子，如CNTF。
根据本发明待培养的间充质干细胞可通过例如以下方法获得。
分离通过抽脂术或类似技术从腹部获得的人体脂肪组织并用PBS洗涤。然后，细致切割所述组织，并用含胶原酶的DMEM培养基降解所述组织，之后用PBS洗涤并以1000rpm离心5分钟。除去上清液，用PBS洗涤残留的沉淀并以1000rpm离心5分钟。通过100μm过滤网除去上清液并用PBS洗涤残留的细胞。然后，将细胞在DMEM培养基(10％FBS、2mM NAC、0.2mM抗坏血酸)中培养过夜，培养之后，用PBS洗涤未贴附至培养容器的细胞并在Keratinocyte-SFM培养基(含有NAC、抗坏血酸、钙、rEGF、BPE、胰岛素以及氢化可的松)中培养，同时每隔2天更换培养基。从培养基分离间充质干细胞并传代培养，从而获得间充质干细胞。此外，也可按照本领域已知的任何方法获得间充质干细胞。
在本发明的一个实施例中，优选地采用0.5-1ng/mL量的硒作为抗氧化剂。如果培养基中硒的含量小于0.5μg/l，则培养基将对氧中毒敏感，而如果培养基中硒的含量大于10μg/l，则将引起严重的细胞毒性。
在本发明中，可将胰岛素样生长因子用作胰岛素的替代品。胰岛素样因子的作用是增强葡萄糖代谢和蛋白质代谢以促进细胞生长。优选地，本发明中采用重组IGF-1(胰岛素样生长因子-1)。培养基中胰岛素样生长因子的含量优选为10-50ng/ml。如果胰岛素样生长因子的含量小于10ng/ml，则将出现细胞凋亡，而如果胰岛素样生长因子的含量大于50μg/l，将引起细胞毒性并将增加培养基的成本。
此外，在本发明的实施例中，培养基中使用表皮生长因子(EGF)。EGF可诱导各种类型细胞的体内增殖并优选为重组EGF。培养基中EGF的含量优选为10-50ng/mL。如果培养基中EGF的含量小于10ng/mL，则将没有特别的效果，而如果培养基中EGF的含量大于50ng/mL，则将有细胞毒性。
此外，在本发明中，培养基中使用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)。bFGF可诱导各种类型细胞的体内增殖并优选为重组bFGF。培养基中bFGF的含量优选为1-100ng/mL。
在本发明的一个实施例中，可发现FBS、bFGF和EGF是培养来自所有年龄组的人脂肪干细胞的必需因子。特别地，发现缺乏bFGF对培养脂肪干细胞有重要影响。此外，发现随着细胞源自的人的年龄减小，细胞的生长速率增加。
在本发明的另一个实施例中，发现FBS、bFGF和EGF是决定脂肪干细胞的端粒酶活性的重要因子。此外，可以看出来自20几岁的人的细胞中的端粒酶活性较高，且在不含硒的培养基中培养的细胞具有低的端粒酶活性。此外，发现当在含硒的培养基中培养来自老年人的脂肪干细胞时，它们可具有类似于源自年轻人的脂肪干细胞的端粒酶活性。
以下，将参照实施例更详细地描述本发明。对于本领域的普通技术人员将显而易见的是，这些实施例仅是解释性的目的，而不被理解为限制本发明的范围。
实施例1人脂肪组织源性间充质干细胞的分离
从20几岁、30几岁、70几岁和80几岁的患者的腹部分离脂肪组织并用PBS洗涤。细致切割洗涤后的脂肪组织并用含1型胶原酶(1mg/ml)的DMEM培养基在37℃降解2小时。用PBS洗涤经胶原酶处理的组织，然后以1000rpm离心5分钟。除去上清液，然后用PBS洗涤残留的沉淀并以1000rpm离心5分钟。通过100μm过滤网过滤离心后的组织以除去上清液，然后用PBS洗涤并在含有10％FBS、2mM NAC(N-乙酰-L-半胱氨酸)和0.2mM抗坏血酸的DMEM培养基中培养过夜。
然后，用PBS洗涤未贴附的细胞，并在含有5％FBS、2mM NAC、0.2mM抗坏血酸、0.09mM钙、5ng/ml rEGF、5μg/ml胰岛素、10ng/mL bFGF、74ng/ml氢化可的松以及1ng/ml硒的Keratinocyte-SFM培养基(RKCM)中传代培养，同时每隔2天更换培养基。细胞传代培养三次之后，分析来自20几岁、40几岁和70几岁的人的脂肪干细胞的活性。
为分析干细胞的活性，测量了干细胞的微观形态、分化标记、端粒酶活性、端粒长度以及分化能力。
结果发现分离自20几岁、40几岁和70几岁的人的脂肪干细胞在传代培养三次之后具有类似的活性。
实施例2、再生干细胞的培养基组合物的确定
制备不含作为活性成分添加至用于实施例1中的RKCM培养基的FBS、NAC、抗坏血酸、钙、rEGF、5μg/ml胰岛素、bFGF氢化可的松和硒中之一的培养基。此外，分析来自20几岁、30几岁、70几岁和80几岁的患者的脂肪干细胞在不含每一种活性成分的培养基中的表型。
制备1号至10号培养基。1号培养基为RKCM培养基，而2号至10号培养基为不含RKCM培养基中的每一种活性成分的培养基。下表1中示出了培养基中不含的活性成分。
表1
培养基号 RKCM培养基中缺少的活性成分
1 无
2 FBS
3 bFGF
4 胰岛素
5 氢化可的松
6 EGF
7 抗坏血酸
8 NAC(N-乙酰-L-半胱氨酸)
9 硒
10 EGF/bFGF
(1)形态和增殖率观察
将按照实例1的方法从20几岁、30几岁、70几岁和80几岁的患者分离的脂肪干细胞作4轮传代培养，用显微镜观察它们的形态(图1和图2)。此外，在每个传代培养过程中用血球计数器测量细胞的数目，以确定细胞的增殖率。
图3和图4示出了来自年轻人(20几岁和30几岁)的细胞和来自老年人(70几岁和80几岁)的细胞在十种不同的培养基中的细胞群倍增水平(CPDL)，并示出了分别按年龄和按培养基的CPDL。
从中可以看出，除了2号培养基和10号培养基，在活性成分不同的十种培养基中培养的来自年轻人(20几岁和30几岁)的细胞和来自老年人(70几岁和80几岁)的细胞，细胞的CPDL按年龄由高到低的顺序为20几岁、30几岁、70几岁和80几岁。各培养基之间的细胞生长速率稍有不同，在1号、6号或7号培养基中最高，在2号培养基中最低。
观察在十种不同的培养基中培养的脂肪干细胞的形态或生长速率，结果可以看出在2号、3号和10号培养基中缺少的成分是培养来自所有年龄组的人的脂肪干细胞的必需因子，而相比于2号和10号培养基中缺少的成分，3号培养基中缺少的成分对培养脂肪干细胞具有更重要的影响。此外，发现随着细胞源自的人的年龄减小，细胞的生长速率增加。
(2)端粒酶活性分析
将按照实例1的方法从20几岁、30几岁、70几岁和80几岁的患者分离的脂肪干细胞在五种不同的培养基(1号、2号、3号、9号和10号)中作3轮传代培养，然后分析细胞的端粒酶活性。
用PBS洗涤在培养基中培养的脂肪源性间充质干细胞，然后用包含胶原酶的DMEM培养基在37℃下消化2小时。然后，用PBS洗涤细胞，并以3000Xg离心10分钟。除去上清液，用Telo TAGGG端粒酶PCR ELISA试剂盒(Roche)中的裂解缓冲液裂解残留的细胞并在冰上静置30分钟。以16,000Xg离心细胞裂解液20分钟，将一部分上清液与试剂盒中包含的反应混合物混合并在以下条件下进行PCR反应：在25℃延伸10分钟、在94℃灭活5分钟、在94℃变性30秒、在50℃退火30秒并在72℃聚合30秒。将5μlPCR扩增样品与包含在试剂盒中的25μl变性剂在室温下反应10分钟，然后与225μl杂交溶液混合。将100μl混合物分散到包被的微孔板上并在37℃下以300rpm的速度反应2小时，然后除去杂交溶液。用洗涤缓冲液将所得材料洗涤几次，然后向其中加入100μl抗-DIG-POD溶液并在室温下以300rpm的速度反应30分钟。然后，除去工作液，用洗涤缓冲液将残留的材料洗涤几次。向其中加入100μl TMB底物溶液并在室温下以300rpm的速度反应30分钟。然后，向其中加入100μl终止液，观察混合物的颜色变化。当加入终止液时，颜色由蓝色变为黄色，并在30分钟内用微孔板(ELISA)装置测量波长450nm处的吸光度。
结果，如图5所示，在细胞是来自20几岁或30几岁的人的情况下，五种不同的培养基中培养的脂肪干细胞的端粒酶活性在9号培养基中最高，而2号、3号和10号培养基中的细胞具有较低的端粒酶活性或无端粒酶活性。在细胞是来自老年人的情况下，在1号培养基中培养的细胞显示出活性稍高于9号培养基中培养的细胞。此外，在细胞是来自老年人的情况下，2号、3号和10号培养基中培养的细胞的端粒酶活性较低。
图6示出了在两种不同的培养基(1号培养基和9号培养基)中培养的来自20几岁、30几岁、70几岁和80几岁的人的细胞的端粒酶活性。
结果，在1号和9号培养基中培养的来自20几岁的人的脂肪干细胞的端粒酶活性最高，而且除了来自30几岁的人的细胞外，在1号培养基中培养的细胞的活性比在9号培养基中培养的细胞的活性高。
此外，当细胞在1号和9号培养基中作4轮培养时，在培养的细胞中，来自80几岁的人的细胞的多能性最高，而来自20几岁的人的细胞的端粒酶活性最高。仅基于端粒酶活性的分析结果，可以看出与1号培养基中缺少的成分相比，9号培养基中缺少的成分使干细胞的活性降低更多，只是差异不显著。此外，发现当在包含了9号培养基中缺少的成分的培养基中培养来自老年人的细胞时，细胞可具有类似于来自年轻人的细胞的活性，这表明该成分是重要成分。
此外，细胞在1号和9号培养基中作4轮和8轮培养，然后测量端粒酶活性随传代培养的轮数的变化。
结果，由图7可以看出，在所有的年龄组和两种培养基中，4轮的端粒酶活性均比6轮的端粒酶活性高。
(3)干细胞标记的表达分析
将按照实例1的方法从20几岁、30几岁、70几岁和80几岁的人分离的脂肪干细胞在1号和9号培养基中作3轮传代培养，然后生长至90％融合。除去培养基之后，用PBS洗涤生长的脂肪干细胞一次或多次，然后用裂解缓冲液(Intron Biotechnology,Sungnam,韩国)裂解，用于RNA提取，采用总RNA提取试剂盒(Intron Biotechnology)从细胞提取RNA。将提取的RNA转化为cDNA(Intron Biotechnology cDNA合成试剂盒)，然后采用为多能性标记oct-4、Nanog和Rex1构建的引物进行PCR。PCR产物经电泳，然后由图像分析仪定量分析。
结果，如图8所示，在1号和9号培养基中培养的脂肪干细胞均示出了多能性标记oct-4、Nanog和Rex1，只是所述标记的表达在干细胞之间的差异显著。所述标记的表达水平在来自80几岁的人的细胞中比来自其他年龄组的细胞中高。此外，仅仅在细胞来自30几岁的人的情况下，在9号培养基中的表达水平比1号培养基中高，而其他年龄组示出了相似的标记表达水平。
此外，在1号和9号培养基中培养的脂肪干细胞均表达了多能性标记oct4、nanog和Rex1，只是所述标记在干细胞之间的表达水平显著(图9)。所述标记的表达水平在来自80几岁的人的细胞中比来自其他年龄组的细胞中高，且对于所有年龄组而言，在9号培养基中的表达水平比在1号培养基中高。
(4)分化能力的分析
将按照实例1的方法从20几岁、30几岁、70几岁和80几岁的人分离的脂肪干细胞在五种不同的培养基(1号、2号、3号、9号和10号)中传代培养，然后在37℃和5％CO2的条件下，在NH Adipodiff培养基(Miltenyi Biotec,Bergisch Gladbach,德国)中培养21天，同时每隔2天更换脂肪分化培养基。从在脂肪分化培养基中开始培养21天之后，通过油红O染色分析脂肪干细胞分化为脂肪细胞的能力。
结果，如图10所示，在源自所有年龄组且在所有培养基中培养的细胞中，观察到连同油红O染色的脂滴(脂肪分化的特性)。图11示出了脂肪分化的定量结果。从中可以看出，分化率由高到低的顺序为9号培养基、1号培养基和3号培养基，而2号和10号培养基之间的分化率类似。此外，按年龄的分化率顺序由高到低为30几岁、20几岁、70几岁和80几岁。
在分子水平上通过RT-PCR分析脂肪分化标记PPARr、LPL和FABP4d的表达水平。结果，如图12所示，年轻组的表达水平比老年组的表达水平稍高，尽管表达水平在个体之间差异显著。此外，各培养基之间的表达水平类似，或者在2号和9号培养基中表达水平稍高。
从上述结果发现2号、3号和10号培养基中缺少的活性成分是培养来自所有年龄组的人的脂肪间充质干细胞的必需因子。此外，发现来自年轻人的细胞比来自老年人的细胞中的多能性、分化率或端粒酶活性高，在2号、3号和10号培养基中培养的细胞示出了降低的生长速率、分化率和端粒酶活性，这表明这些培养基中缺少的活性成分是细胞生长和细胞活性的必需元素。
此外，发现年轻组与老年组之间的细胞分化率在不含硒的9号培养基中类似，但两种培养基中的端粒酶活性检测结果表明，在不含硒的9号培养基中培养的老年组细胞中的端粒酶活性比年轻组细胞中的端粒酶活性低，这表明9号培养基中缺少的硒实质上应被包含在用于培养来自老年人的细胞的培养基中，以提供与1号培养基中培养的细胞类似的端粒酶活性。
工业实用性
根据本发明，即使是自超过60岁的老年人收集的间充质干细胞也可被转化为具有高分化能力、高端粒酶活性及高干细胞标记表达能力的年轻的间充质干细胞。因此，本发明能够显著提高采用间充质干细胞的细胞治疗的疗效。

Claims (8)

1.一种用于再生来自老年人的间充质干细胞的培养基组合物，所述培养基组合物含有FBS(胎牛血清)、抗氧化剂、细胞因子和NAC(N-乙酰-L-半胱氨酸)。
2.如权利要求1所述的培养基组合物，其中所述培养基组合物进一步含有胰岛素或胰岛素样生长因子。
3.如权利要求1或2所述的培养基组合物，其中所述培养基组合物进一步含有氢化可的松。
4.如权利要求1所述的培养基组合物，其中在所述培养基组合物中的细胞因子是EGF(表皮生长因子)和/或bFGF(碱性成纤维细胞生长因子)。
5.如权利要求1所述的培养基组合物，其中所述抗氧化剂选自由硒、抗坏血酸、维生素E、儿茶素、番茄红、β-胡萝卜素、辅酶Q-10、EPA(二十碳五烯酸)和DHA(二十二碳六烯酸)构成的组。
6.如权利要求5所述的培养基组合物，其中所述抗氧化剂是硒。
7.如权利要求1所述的培养基组合物，其中所述老年人是60-120岁的人。
8.一种再生来自老年人的间充质干细胞的方法，所述方法包括在如权利要求1至7中任一项所述的培养基组合物中培养来自老年人的间充质干细胞。
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