CN110786318A - 一种尿液细胞预固定液 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种尿液细胞预固定液，包括：2‑3％w/v的聚乙二醇1500、40‑50％v/v的乙醇、0.01M的磷酸盐缓冲液和0.01‑0.1％w/v的二硫苏糖醇、0.1‑0.2M的氯化铵、0.01‑0.1％w/v的乙二胺四乙酸二钠。其中磷酸盐缓冲液由NaCl、KCl、Na₂HPO₄和KH₂PO₄溶解于超纯水中而得。本发明提供的尿液细胞预固定液，可以很方便的用于晨尿样本的取样和保存，可以处理全部晨尿样本，可以让可能多的保存异常细胞在室温下至少保存5天，稳定的尿液细胞可以直接进行后续细胞学检测，如尿沉渣细胞检查，尿液TCT，尿液细胞荧光原位杂交等。

Description

一种尿液细胞预固定液

技术领域

本发明涉及一种尿液细胞预固定液。

背景技术

随着各种肿瘤已经成为一种高发性的疾病，对肿瘤的准确检测就至关重要。液体活检，是利用人体体液(血液、尿液等体液)作为标本来源检测获取肿瘤相关信息的技术，由于它操作简单且非侵入性，因此具有患者依从性好，特异性好，异质性低，可反复取材等优势。因此，通过液体活检技术来进行癌症的早期筛查具有非常良好的发展前景。

尿液由肾脏产生，经由输尿管到膀胱储存，然后经过尿道排出体外。由于尿液的生理特质，尿液样本对于泌尿系统肿瘤是十分优秀的液态活检样本来源，其中尿液细胞学检查是用于发现泌尿系统恶性肿瘤的一种病理学检查方法，尤其是尿脱落细胞形态检查和尿脱落细胞染色体异常检查是膀胱癌早期诊断的一个重要手段。

由于尿脱落细胞含量较少，其中异常细胞比例更少，为保证足够有尿脱落细胞量，通常需要晨尿样本，这样尿量多，细胞含量高，但由于晨尿更加浓缩，尿素等有机成分浓度高，pH值偏低，渗透压也不利于细胞保存。因此对于尿液异常细胞等检查通常要求尿液常温不能超过2小时，4°也仅能保存4小时，更不能将尿液长距离运输，这极大限制了尿液异常细胞检查的应用。因此亟须一种尿液细胞预固定液，使尿液细胞在储存和运输过程中形态和染色体可以稳定更长时间，方便后续细胞形态学和染色体异常检查。

发明内容

本发明的目的是克服现有尿液细胞保存液不能长时间保存尿液的问题，提供一种尿液细胞预固定液，能有效的在常温下对尿液细胞起到长时间保存效果。

实现本发明目的的技术方案是一种尿液细胞预固定液，包括：

2-3％w/v的聚乙二醇1500、40-50％v/v的乙醇、0.01M的磷酸盐缓冲液、0.01-0.1％w/v的二硫苏糖醇、0.1-0.2M的氯化铵和0.01-0.1％w/v的乙二胺四乙酸二钠。

所述磷酸盐缓冲液由NaCl、KCl、Na₂HPO₄和KH₂PO₄溶解于超纯水中而得。

所述的一种尿液细胞预固定液的制备方法，包括以下步骤：

步骤一：配置A mL磷酸盐缓冲液；

步骤二：取A mL无水乙醇加入步骤一的A mL磷酸盐缓冲液中，混匀；

步骤三：称取聚乙二醇1500，确保聚乙二醇1500为2-3％w/v，加入步骤二配置好的液体中，搅拌至聚乙二醇完全溶解，室温密封保存。

所述步骤一的具体方法为：

准备超纯水，分别称取NaCl、KCl、Na₂HPO₄和KH₂PO₄，搅拌溶解，定容至A mL，得0.02M的磷酸盐缓冲液。

所述步骤三中，还包括称取二硫苏糖醇、氯化铵和乙二胺四乙酸二钠，确保其分别满足：二硫苏糖醇0.01-0.1％w/v、氯化铵0.1-0.2M和乙二胺四乙酸二钠0.01-0.1％w/v。

采用了上述技术方案，本发明具有如下技术效果:

1、本发明提供的尿液细胞预固定液，可以很方便的用于晨尿样本的取样和保存，可以处理全部晨尿样本，可以让可能多的保存异常细胞在室温下至少保存5天，稳定的尿液细胞可以直接进行后续细胞学检测，如尿沉渣细胞检查，尿液TCT，尿液细胞荧光原位杂交等。

2、本发明采用聚乙二醇对液体中的细胞进行缓冲，有效防止在运输的震荡中细胞破碎，确保尿液样本的长途运输；聚乙二醇还可以在后续的细胞涂片中防止细胞脱落，确保检测的准确性

3、本发明采用乙醇配置磷酸盐缓冲液,具有固定和抑菌作用，可以快速穿透细胞膜固定染色体，使尿液细胞预固定液有良好的保存效果

4、本发明采用二硫苏糖醇作为还原剂，可将蛋白变性，有效去除尿液中的粘液成分，进而实现检验的准确性。

5、本发明采用氯化铵来裂解红细胞，有效去除血尿中的红细胞干扰，确保检验的准确性。

6、本发明添加乙二胺四乙酸二钠，可以防止细胞聚团，实现长时间保存。

7、本发明所提供的尿液细胞预固定液使用的原料简单易得，成本低廉，便于推广使用，制备方法简单，无三废污染产生，使用中不产生需要特殊处理的医疗垃圾。

附图说明

为了使本发明的内容更容易被清楚地理解，下面根据具体实施例并结合附图，对本发明作进一步详细的说明，其中

图1为尿液细胞预固定液处理细胞1天；

图2为尿液细胞预固定液处理细胞5天；

图3为磷酸缓冲液处理细胞1天；

图4为磷酸缓冲液处理细胞5天；

具体实施方式

(实施例1)

上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，而可依照说明书的内容予以实施，并且为了让本发明的上述和其它目的、特征和优点能够更明显易懂，以下特举本发明的具体实施方式。

本发明提供了一种尿液细胞预固定液，用于解决现有技术中尿液预固定液保存能力欠缺的问题，为了解决上述问题，本发明的总体思路如下：

步骤一：配置A mL磷酸盐缓冲液；

步骤二：取A mL无水乙醇加入步骤一的A mL磷酸盐缓冲液中，混匀，采用乙醇的作用在于其具有固定和抑菌的效果，可以快速穿透细胞膜固定染色体，使尿液细胞预固定液有良好的保存效果；

步骤三：称取聚乙二醇1500，确保聚乙二醇1500为2-3％w/v，加入步骤二配置好的液体中，搅拌至聚乙二醇完全溶解，室温密封保存；该步骤利用聚乙二醇对液体中的细胞进行缓冲，有效防止在运输的震荡中细胞破碎，确保尿液样本的长途运输；聚乙二醇还可以在后续的细胞涂片中防止细胞脱落，确保检测的准确性。

所述步骤一的具体方法为：

准备超纯水，分别称取NaCl、KCl、Na₂HPO₄和KH₂PO₄，搅拌溶解，定容至A mL，得0.02M的磷酸盐缓冲液。

所述步骤三中，还包括称取二硫苏糖醇、氯化铵和乙二胺四乙酸二钠；其中将二硫苏糖醇作为还原剂，用于将蛋白变性，有效去除尿液中的粘液成分，确保检验的准确性，其含量为0.01-0.1％w/v；利用氯化铵来裂解红细胞，有效去除血尿中的红细胞干扰，确保检验的准确性，其含量为0.1-0.2M；利用乙二胺四乙酸二钠防止细胞聚团，实现长时间保存，其含量为0.01-0.1％w/v。

下面通过附图以及具体实施例对本发明技术方案做详细的说明，应当理解本申请实施例以及实施例中的具体特征是对本申请技术方案的详细的说明，而不是对本申请技术方案的限定，在不冲突的情况下，本申请实施例以及实施例中的技术特征可以相互组合。

(实施例2)

在同一份尿液样本中，分别各取200mL尿液，实验组加入100mL尿液细胞预固定液，对照组加入100mL 0.01M磷酸缓冲液；实验组在室温保存，而对照组在2-8°保存，两组都平均分成两份，在第1天各取一份将尿液制成巴氏涂片在显微镜下观察，得出图1和图3的数据，而后在第5天各取一份将尿液制成巴氏涂片在显微镜下观察，得出图2和图4的数据。

如图1和图2，可以清晰看出使用尿液细胞预固定液处理的尿液细胞形态良好，边缘清晰，胞内可见明显细胞核。

如图3和图4，使用磷酸缓冲液的样本，其中尿液细胞已经数量稀少，存在不少细胞碎片。

根据此对比实验，得出使用本发明尿液细胞预固定液保存的尿液，相比于常规低温保存方式形态稳定，边缘清晰，胞内可见明显细胞核明显。

(实施例3)

在制备上述预固定液时，控制称取二硫苏糖醇、氯化铵和乙二胺四乙酸二钠的含量；确保二硫苏糖含量为0.1w/v；氯化铵含量为0.2M；乙二胺四乙酸二钠含量为0.01％w/v。

将上述含量预固定液对尿液进行保存，然后将其分成6份同样的样本进行编号，分别放置于室温不同时间后提取，进行细胞学检验，查看细胞形态、浑浊度，所得数据如下：

(实施例4)

在制备上述预固定液时，控制称取二硫苏糖醇、氯化铵和乙二胺四乙酸二钠的含量；确保二硫苏糖含量为0.01w/v；氯化铵含量为0.1M；乙二胺四乙酸二钠含量为0.1％w/v。

将上述含量预固定液对尿液进行保存，然后将其分成6份同样的样本，分别放置于室温不同时间后提取，分别放置不同时间后提取，进行细胞学检验，查看细胞形态、浑浊度，所得数据如下：

序号	时间	形态	浊度
				1	24h	形态饱满	清晰透明
2	48h	形态饱满	清晰透明
				3	72h	形态饱满	清晰透明
4	96h	形态饱满	清晰透明
				5	120h	形态饱满	清晰透明
6	168h	细胞稍微皱缩	轻微浑浊(雾状)

(实施例5)

在制备上述预固定液时，控制称取二硫苏糖醇、氯化铵和乙二胺四乙酸二钠的含量；确保二硫苏糖含量为0.05w/v；氯化铵含量为0.15M；乙二胺四乙酸二钠含量为0.05％w/v。

将上述含量预固定液对尿液进行保存，然后将其分成6份同样的样本，分别放置于室温不同时间后提取，分别放置不同时间后提取，进行细胞学检验，查看细胞形态、浑浊度，所得数据如下：

序号	时间	形态	浊度
				1	24h	形态饱满	清晰透明
2	48h	形态饱满	清晰透明
				3	72h	形态饱满	清晰透明
4	96h	形态饱满	清晰透明
				5	120h	形态饱满	清晰透明
6	168h	细胞稍微皱缩	轻微浑浊(雾状)

以上所述的具体实施例，对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明，所应理解的是，以上所述仅为本发明的具体实施例而已，并不用于限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种尿液细胞预固定液，其特征在于包括：

2-3％w/v的聚乙二醇1500、40-50％v/v的乙醇和0.01M的磷酸盐缓冲液。

2.根据权利要求1所述的一种尿液细胞预固定液，其特征在于：

还包括0.01-0.1％w/v的二硫苏糖醇。

3.根据权利要求2所述的一种尿液细胞预固定液，其特征在于：

还包括0.1-0.2M的氯化铵。

4.根据权利要求3所述的一种尿液细胞预固定液，其特征在于：

还包括0.01-0.1％w/v的乙二胺四乙酸二钠。

5.根据权利要求4所述的一种尿液细胞预固定液，其特征在于：

所述磷酸盐缓冲液由NaCl、KCl、Na₂HPO₄和KH₂PO₄溶解于超纯水中而得。

6.根据权利要求1所述的一种尿液细胞预固定液的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

步骤一：配置A mL磷酸盐缓冲液；

步骤二：取A mL无水乙醇加入步骤一的A mL磷酸盐缓冲液中，混匀；

步骤三：称取聚乙二醇1500，确保聚乙二醇1500为2-3％w/v，加入步骤二配置好的液体中，搅拌至聚乙二醇完全溶解，室温密封保存。

7.根据权利要求6所述的一种尿液细胞预固定液的制备方法，其特征在于：

所述步骤一的具体方法为：

准备超纯水，分别称取NaCl、KCl、Na₂HPO4和KH₂PO₄，搅拌溶解，定容至A mL，得0.02M的磷酸盐缓冲液。

8.根据权利要求7所述的一种尿液细胞预固定液的制备方法，其特征在于：

所述步骤三中，还包括称取二硫苏糖醇、氯化铵和乙二胺四乙酸二钠，确保其分别满足：二硫苏糖醇0.01-0.1％w/v、氯化铵0.1-0.2M和乙二胺四乙酸二钠0.01-0.1％w/v。

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