CN109042630A - 一种细胞保存液及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种细胞保存液及其制备方法，依次包括以下步骤：1)在搅拌罐中加入调配所需水量60‑80％的水；2)将EDTA‑2Na溶于适量水中，然后在搅拌状态下缓慢加入搅拌罐中，完毕后保持搅拌5‑20min；3)在搅拌状态下向搅拌罐中缓慢加入甲醇，完毕后保持搅拌10‑30min；4)将二硫代苏糖醇溶于适量水中，然后在搅拌状态下缓慢加入搅拌罐中，完毕后保持搅拌1‑10min；5)将余量的水加入搅拌罐中并保持搅拌5‑10min；6)在搅拌状态下将醋酸‑醋酸钠缓冲液缓慢加入搅拌罐中，调节搅拌罐内液体pH在5.6‑5.8后，保持搅拌10‑30min即可。

Description

一种细胞保存液及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种细胞保存液，属于生物医药领域。

背景技术

现有细胞保存液根据所保存的细胞对象，各自功能各有差异，保存时间也各不一。国外较好的保存液如新柏氏细胞保存液能保存4～6周的细胞样本，国内普通的能保存约一周左右的细胞样本，且需低温保存。由于医院现在工作量繁大，对细胞保存的效果及保存时间提出了更高的要求，现有国内技术已无法更好的满足。

中国专利201410232820.3公开了一种细胞保存液，它由氯化钠、乙二胺四乙酸二钠、PEG10000、Proclin300、甲醇、醋酸-醋酸钠缓冲液制成。从其说明书背景技术部分可知，与新柏氏细胞保存液相比，其降低了制作成本，但其在细胞保存时间上并没有优势。

发明内容

本发明要解决的技术问题是延长细胞保存液常温保存细胞样本的时间。

本发明的技术方案是：

一种细胞保存液，包括以下重量份数的物质：

进一步，EDTA-2Na重量份数为0.13-0.15。

进一步，二硫代苏糖醇重量份数为0.01-0.02。

进一步，甲醇为AR级甲醇。

进一步，二硫代苏糖醇为BR级二硫代苏糖醇。

进一步，醋酸-醋酸钠缓冲液pH＝6。

细胞保存液的制备方法，依次包括以下步骤：

1)在搅拌罐中加入调配所需水量60-80％的水；

2)将EDTA-2Na溶于适量水中，然后在搅拌状态下缓慢加入搅拌罐中，完毕后保持搅拌5-20min；

3)在搅拌状态下向搅拌罐中缓慢加入甲醇，完毕后保持搅拌10-30min；

4)将二硫代苏糖醇溶于适量水中，然后在搅拌状态下缓慢加入搅拌罐中，完毕后保持搅拌1-10min；

5)将余量的水加入搅拌罐中并保持搅拌5-10min；

6)在搅拌状态下将醋酸-醋酸钠缓冲液缓慢加入搅拌罐中，调节搅拌罐内液体pH在5.6-5.8后，保持搅拌10-30min即可。

与现有技术相比，本发明通过对细胞保存液中功能组分的选择和制备工艺的调整，在不增加成本的基础上显著延长了细胞保存时间。

具体实施方式

现结合实施例对本发明作进一步详细描述：

实施例

	实施例1	实施例2	实施例3	实施例4
					EDTA-2Na	0.1kg	0.2kg	0.13kg	0.15kg
甲醇	40kg	50kg	45kg	45kg
					二硫代苏糖醇	0.01kg	0.03kg	0.01kg	0.02kg
醋酸-醋酸钠缓冲液	0.1kg	0.3kg	0.2kg	0.2kg
					水	60kg	49kg	55kg	55kg
pH(25℃)	5.6	5.7	5.8	5.6

对上表中的物质称重后，用下述步骤制得细胞保存液：

1)在搅拌罐中加入调配所需水量60-80％的水；

2)将EDTA-2Na溶于适量水中，然后在搅拌状态下缓慢加入搅拌罐中，完毕后保持搅拌5-20min；

3)在搅拌状态下向搅拌罐中缓慢加入甲醇，完毕后保持搅拌10-30min；

4)将二硫代苏糖醇溶于适量水中，然后在搅拌状态下缓慢加入搅拌罐中，完毕后保持搅拌1-10min；

5)将余量的水加入搅拌罐中并保持搅拌5-10min；

6)在搅拌状态下将醋酸-醋酸钠缓冲液缓慢加入搅拌罐中，调节搅拌罐内液体pH在5.6-5.8后，保持搅拌10-30min即可。

步骤1)、步骤2)、步骤4)和步骤6)中加入的水之和为实施例中水的量。

对比例1-4为实施例1-4中不加醋酸-醋酸钠缓冲液，其pH(25℃)如下表所示：

	对比例1	对比例2	对比例3	对比例4
					pH(25℃)	5.5	5.2	5.4	5.3

取对比例1-4各20ml，取人口腔上皮细胞8份分别放入上述细胞保存液中搅拌均匀密封，放入恒温30℃环境中进行保存，每隔5天进行取样，用结晶紫染色、制片进行镜检，细胞完整性最大天数(细胞保存时间)如下表所示：

	对比例1	对比例2	对比例3	对比例4
					最大天数	20	15	15	15

实验例

分别取实施例1-4的细胞保存液各两组，每份20ml，取人口腔上皮细胞8份分别放入上述细胞保存液中搅拌均匀密封，将一组放入恒温5℃环境中保存，另一组放入恒温30℃环境中进行保存，每隔5天进行取样，用结晶紫染色、制片进行镜检，镜检结果(细胞完整率)如下表所示：

由上表可见，本发明细胞保存液可以将常温保存时间延长至50天。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。凡在不脱离本发明核心的情况下做出的简单的变形或修改均落入本发明的保护范围。

Claims (7)

1.一种细胞保存液，其特征在于，包括以下重量份数的物质：

2.根据权利要求1所述的一种细胞保存液，其特征在于，EDTA-2Na重量份数为0.13-0.15。

3.根据权利要求1所述的一种细胞保存液，其特征在于，二硫代苏糖醇重量份数为0.01-0.02。

4.根据权利要求1所述的一种细胞保存液，其特征在于，甲醇为AR级甲醇。

5.根据权利要求1所述的一种细胞保存液，其特征在于，二硫代苏糖醇为BR级二硫代苏糖醇。

6.根据权利要求1所述的一种细胞保存液，其特征在于，醋酸-醋酸钠缓冲液pH＝6。

7.根据权利要求1-7任一项一种细胞保存液的制备方法，其特征在于，依次包括以下步骤：

1)在搅拌罐中加入调配所需水量60-80％的水；

2)将EDTA-2Na溶于适量水中，然后在搅拌状态下缓慢加入搅拌罐中，完毕后保持搅拌5-20min；

3)在搅拌状态下向搅拌罐中缓慢加入甲醇，完毕后保持搅拌10-30min；

4)将二硫代苏糖醇溶于适量水中，然后在搅拌状态下缓慢加入搅拌罐中，完毕后保持搅拌1-10min；

5)将余量的水加入搅拌罐中并保持搅拌5-10min；

6)在搅拌状态下将醋酸-醋酸钠缓冲液缓慢加入搅拌罐中，调节搅拌罐内液体pH在5.6-5.8后，保持搅拌10-30min即可。