CN109644985B

CN109644985B - 一种细胞保存液及其应用

Info

Publication number: CN109644985B
Application number: CN201811558071.8A
Authority: CN
Inventors: 程嘉骧; 程骎
Original assignee: Yipusen Health Technology Shenzhen Co ltd
Current assignee: Yipusen Health Technology Shenzhen Co ltd
Priority date: 2018-12-19
Filing date: 2018-12-19
Publication date: 2021-04-27
Anticipated expiration: 2038-12-19
Also published as: CN109644985A

Abstract

本发明实施例公开了一种细胞保存液及其应用，该细胞保存液包括如下组分：0.03‑0.07M Tris缓冲液45‑55％(v/v)、93‑97％乙醇45‑55％(v/v)、钙盐8‑12％(w/w)和镁盐8‑12％(w/w)；本发明细胞保存液能够避免核酸物质的丢失，以及提高保存细胞形态的稳定性，并提高了保存样本时间。

Description

一种细胞保存液及其应用

技术领域

本发明实施例涉及检测技术领域，具体涉及一种细胞保存液及其应用。

背景技术

HPV检测是对付人乳头瘤病毒的一种手段，病毒是一种DNA病毒，人类是HPV唯一的宿主。HPV进入机体皮肤粘膜后，主要潜伏于表皮内基底细胞间，一旦时机成熟它就会致病。

TCT检查是液基薄层细胞检测的简称，采用液基薄层细胞检测系统检测宫颈细胞并进行细胞学分类诊断，它是目前国际上最先进的一种宫颈癌细胞学检查技术，与传统的宫颈刮片巴氏涂片检查相比明显提高了标本的满意度及宫颈异常细胞检出率。

目前，针对HPV和TCT的检测过程中，均需采用细胞保存液对宫颈细胞进行保存，然而，针对HPV检测和TCT检测所采用的宫颈细胞保存液为两种不同的保存方法；此外，现有细胞保存液保存时间较短，且HPV病毒核酸容易丢失，导致检出率较低；另外，现有细胞保存液保存细胞保持形态不变的时间较短，一般为30天左右。

发明内容

为此，本发明实施例提供一种细胞保存液，用以解决现有技术中由于所保存的核酸容易丢失以及细胞形态易改变导致的宫颈细胞保存时间较短，以及HPV检出率较低的问题；以及针对HPV和TCT检查需要两种不同细胞保存液对宫颈细胞进行保存的问题。

为了实现上述目的，本发明的实施方式提供如下技术方案：

在本发明的实施方式的第一方面中，提供了一种细胞保存液，所述细胞保存液包括如下组分：

0.03-0.07M Tris缓冲液45-55％(v/v)、93-97％乙醇45-55％(v/v)、钙盐8-12％(w/w)和镁盐8-12％(w/w)。

通过上述各成分的添加以及含量的限定，实现了样本的常温保存，并且能够避免细胞保存液保存核酸物质的丢失，以及提高细胞保存液保存细胞形态的稳定性，实现了一次采样能够分别用于HPV和TCT两种检测的目的，并提高了保存时间。

在本发明的一个实施例中，所述细胞保存液包括如下组分：

0.05M Tris缓冲液50％(v/v)、95％乙醇50％(v/v)、钙盐10％(w/w)和镁盐10％(w/w)。

通过上述各组分含量的进一步限定，能够更好的提高所述细胞保存液保存的细胞形态以及核酸物质的稳定性。

在本发明的另一个实施例中，所述Tris缓冲液的PH为7.5-8.0。通过对PH的限定，能够为保存样本提供稳定的环境，利于提高保存样本的保存时间。

在本发明的又一个实施例中，所述钙盐为磷酸钙或一水氯化钙；优选地，所述钙盐为磷酸钙。

在本发明的再一个实施例中，所述镁盐选自碳酸镁、氯化镁和溴化镁中的任意一种；优选地，所述镁盐为碳酸镁。

在本发明的实施方式的第二方面中，提供了一种上述细胞保存液在保存宫颈细胞中的应用。

上述应用能够使得细胞保存液对宫颈细胞进行常温保存，并提高了HPV病毒核酸和宫颈细胞形态的保存稳定性，实现了一份样本同时进行HPV检测和TCT检测，还提高了HPV病毒核酸的保存时间和阳性检出率，以及提高了宫颈细胞的保存时间。

进一步地，所述宫颈细胞保存温度为5-30℃；保存时间为0-45天。

在本发明的实施方式的第三方面中，提供了一种上述细胞保存液在保存胸腹水、尿液、脑脊液或肿瘤穿刺物中的应用。

进一步地，所述细胞保存液保存温度为5-30℃；保存时间为0-45天。

根据本发明的实施方式，本发明具有如下优点：

(1)本发明细胞保存液能够避免核酸物质的丢失，以及提高保存细胞形态的稳定性，提高了HPV病毒核酸的保存时间和阳性检出率，以及提高了宫颈细胞形态稳定的保存时间，并实现了一次采样能够分别用于HPV和TCT两种检测。

(2)本发明细胞保存液通过对PH的限定，能够为保存样本提供稳定的环境，利于提高保存样本的保存时间。

(3)本发明细胞保存液还能够对胸腹水、尿液、脑脊液或肿瘤穿刺物进行保存。

具体实施方式

以下由特定的具体实施例说明本发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点及功效，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

本实施例为一种细胞保存液，该细胞保存液包括如下组分：

0.03M Tris缓冲液55％(v/v)、97％乙醇45％(v/v)、一水氯化钙8％(w/w)和氯化镁12％(w/w)；

其中，Tris缓冲液PH为7.5。

实施例2

本实施例为一种细胞保存液，该细胞保存液包括如下组分：

0.07M Tris缓冲液45％(v/v)、93％乙醇55％(v/v)、磷酸钙12％(w/w)和溴化镁8％(w/w)；

其中，Tris缓冲液PH为8.0。

实施例3

本实施例为一种细胞保存液，该细胞保存液包括如下组分：

0.05M Tris缓冲液50％(v/v)、95％乙醇50％(v/v)、磷酸钙10％(w/w)和碳酸镁10％(w/w)；

其中，Tris缓冲液PH为7.8。

对照例1

本对照例为一种细胞保存液，该细胞保存液与实施例3的细胞保存液基本相同，区别仅在于磷酸钙为20％(w/w)。

对照例2

本对照例为一种细胞保存液，该细胞保存液与实施例3的细胞保存液基本相同，区别仅在于将碳酸镁替换为同等份数的磷酸钙。

对照例3

本对照例为一种细胞保存液，该细胞保存液与实施例3的细胞保存液基本相同，区别仅在于Tris缓冲液pH为7.0。

实验例1

选取214例需要进行HPV检查的患者，获取患者的待检测样本(宫颈脱落细胞)；

将获取每位患者的待测样本分为两份，第一份按照广州凯普医学检验所保存方法进行保存及检测，检测结果为阳性患者68例；

将获取每位患者的待测样本另一份根据第一份检测结果分为4组，其中，每组阳性患者均为17例，第一组54例，第二组54例，第三组53例，第四组53例；第一组样本采用实施例3中的细胞保存液进行保存，第二组采用对照例1中的细胞保存液进行保存，第三组采用对照例2中的细胞保存液进行保存；第四组采用对照例3中的细胞保存液进行保存，控制第一-四组保存液保存温度为25℃；

将四组待测样本送至广州凯普医学检验所采用相同方法进行检测，具体地，分别在保存第7、30、45、50天进行检查阳性患者数；检测结果如表1所示：

表1

组别	7天	30天	45天	50天
					第一组	17例	17例	17例	16例
第二组	17例	15例	13例	12例
					第三组	15例	11例	8例	6例
第四组	16例	15例	13例	10例

由表1可知：

本发明实施例3制备得到的细胞保存液能够更好的保存细胞中HPV病毒核酸的稳定性，有效保存时间达到45天，然而改变本发明保存液的PH以及钙、镁离子浓度易使的HPV病毒核酸丢失，降低了阳性检出率。

实验例2

选取111例需要进行TCT检查的患者，获取患者的待检测样本(宫颈脱落细胞)；

将获取每位患者的待测样本分为两份，第一份按照广州和实科技有限公司保存方法进行保存及检测，检测结果为阳性患者54例；

将获取每位患者的待测样本另一份根据第一份检测结果分为4组，其中，第一组28例，阳性患者14例；第二组28例，阳性患者14例；第三组28例，阳性患者13例；第四组27例，阳性患者13例；第一组样本采用实施例3中的细胞保存液进行保存，第二组采用对照例1中的细胞保存液进行保存，第三组采用对照例2中的细胞保存液进行保存；第四组采用对照例3中的细胞保存液进行保存，控制第一-四组保存液保存温度为25℃；

将四组待测样本送至广州和实科技有限公司采用相同方法进行检测，具体地，分别在保存第7、30、45、50天进行检查阳性患者数；检测结果如表2所示：

表2

组别	7天	30天	45天	50天
					第一组	14例	14例	14例	14例
第二组	14例	14例	13例	12例
					第三组	13例	11例	8例	6例
第四组	13例	12例	10例	8例

由表2可知：

本发明实施例3制备的到的细胞保存液能够更好的保存宫颈细胞的形态稳定性，有效保存时间达到50天，然而改变本发明保存液的PH以及钙、镁离子浓度易导致保存宫颈细胞的损坏，降低了阳性检出率。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施例对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims

1.一种细胞保存液，其特征在于，包括如下组分：

0.03-0.07M Tris缓冲液45-55％(v/v)、93-97％乙醇45-55％(v/v)、钙盐8-12％(w/w)和镁盐8-12％(w/w)；

所述Tris缓冲液的PH为7.5-8.0；

所述钙盐为磷酸钙或一水氯化钙；

所述镁盐选自碳酸镁、氯化镁、溴化镁中的任意一种；

所述细胞保存液用于保存细胞中的HPV病毒核酸。

2.根据权利要求1所述的细胞保存液，其特征在于，包括如下组分：

3.一种权利要求1或2所述的细胞保存液在保存宫颈细胞中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述宫颈细胞保存温度为5-30℃；保存时间为0-45天。

5.一种权利要求1或2所述的细胞保存液在保存胸腹水、尿液、脑脊液或肿瘤穿刺物中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述细胞保存液保存温度为5-30℃；保存时间为0-45天。