CN103901136B - 一种快速测定三七药材含量的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及药材含量的测定方法技术领域，尤其涉及一种快速测定三七药材含量的方法，它是按照以下步骤进行测定的：(1)供试品溶液的制备：称取三七药材粗粉作为供试品，加入有机溶剂分别加热提取若干次，分别将若干次提取液过滤制得滤液，合并滤液并加入有机溶剂定容，摇匀，过滤制得续滤液，量取续滤液并加入有机溶剂定容，即制得供试品溶液；(2)对照品溶液的制备；(3)采用高效液相色谱法测定。本发明的方法检测出的三七总皂苷含量和药典标准方法检测出来的三七总皂苷含量之间的偏差≤1.4%，符合偏差要求；本发明的三七药材含量测定供试品制备中，样品取样量较大，误差较小，检验周期比药典方法短。

Description

一种快速测定三七药材含量的方法

技术领域

本发明涉及药材含量的测定方法技术领域，尤其涉及一种快速测定三七药材含量的方法。

背景技术

三七为复方血栓通软胶囊处方中的主药，是五加科植物三七的干燥根和茎叶，秋季花开前采挖、洗净，分开主根、支根以及根茎，干燥。三七皂苷(saponinsofPanaxnotoginseng，PNS)是三七的主要药用成分，三七皂苷是从五加科人参属植物三七中提取的，其中65％以上的皂苷成分为三七皂苷R₁、人参皂苷R_g1和人参皂苷R_b1。药理学研究表明，三七总皂苷具有降低机体耗氧量，抑制血小板聚集并增加脑血流量，降血脂血糖，抗疲劳以及提高巨噬细胞功能等作用。在临床应用中，以三七总皂苷为药物活性成分制备的三七总皂苷制剂(商品名称为：血栓通制剂)已经成为治疗缺血性心脑血管疾病的一种理想新药。三七总皂苷制剂形式有许多种如注射剂、胶囊及片剂等。该类制剂中上述3种皂苷的含量是决定药品质量和疗效的重要因素，因此，对不同剂型的三七总皂苷制剂来说，三七皂苷R₁、人参皂苷R_g1和人参皂苷R_b1的含量均是需要严格检测与控制的关键指标。

目前，三七药材含量主要按照高效液相色谱法《中国药典》（一部2010版）附录ⅥD测定，在《中国药典》（一部2010版）中，三七药材含量测定样品前处理方法如下：

对照品溶液的制备：精密称取人参皂苷R_g1对照品、人参皂苷R_b1对照品及三七皂苷R₁对照品适量，加甲醇制成每1ml含人参皂苷R_g10.4mg、人参皂苷R_b10.4mg、三七皂苷R₁0.1mg；

供试品溶液的制备：取样品粉末(过四号筛)0.6g，精密称定，精密加甲醇50ml，放置过夜，置80℃水浴上保持微沸2h，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，即得。

然而，《中国药典》（一部2010版）三七药材含量测定样品前处理方法取样量少，误差较大，且检验周期也较长，不利于生产控制。为此，以上所述问题亟待解决。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，而提供一种误差小、检验周期短的快速测定三七药材含量的方法。

本发明是通过以下技术方案来实现的。

一种快速测定三七药材含量的方法，它是按照以下步骤进行测定的：

(1)供试品溶液的制备

称取三七药材粗粉作为供试品，加入有机溶剂分别加热提取若干次，分别将若干次提取液过滤制得滤液，合并滤液并加入有机溶剂定容，摇匀，过滤制得续滤液，量取续滤液并加入有机溶剂定容，即制得供试品溶液；

(2)对照品溶液的制备

精密称取人参皂苷R_g1对照品、人参皂苷R_b1对照品及三七皂苷R₁对照品适量，加甲醇制成每1ml分别含三七皂苷R₁0.069-0.073mg、人参皂苷R_g10.300-0.320mg、人参皂苷R_b10.285-0.299mg的混合溶液，即制得对照品溶液；

(3)采用高效液相色谱法测定

用具有紫外检测器的高效液相色谱仪，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈与水的混合液为流动相进行高压梯度洗脱；检测波长为203nm；分别精密吸取所述对照品溶液与所述供试品溶液注入液相色谱仪，进行测定，最后计算出供试品中三七含量。

其中，所述步骤(1)供试品溶液的制备具体为：精密称取三七药材粗粉45.00-55.00g作为供试品，加入75%乙醇分别加热提取若干次，若干次加热提取加入的75%乙醇的体积依次为250ml、100ml、100ml，分别将若干次提取液用纱布过滤制得滤液，合并滤液并加入75%乙醇定容至500ml，摇匀，过滤制得续滤液，精密量取续滤液5ml加甲醇定容至50ml，即制得供试品溶液。

其中，所述步骤(1)供试品溶液的制备具体为：精密称取三七药材粗粉45.00-55.00g作为供试品，加入75%乙醇分别加热提取三次，三次加热提取加入的75%乙醇的体积依次为250ml、100ml、100ml，每次加热提取的温度为70℃，每次加热提取的时间为1h，分别将三次提取液用纱布过滤制得滤液，合并滤液并加入75%乙醇定容至500ml，摇匀，过滤制得续滤液，精密量取续滤液5ml加甲醇定容至50ml，即制得供试品溶液。

其中，所述步骤(3)采用高效液相色谱法测定中，所述以乙腈与水的混合液为流动相进行梯度洗脱，是以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下述体积比进行高压梯度洗脱：0-12min，流动相A为19%，流动相B为81%，12-60min，流动相A为19%至36%，流动相B为81%至64%；检测波长为203nm；柱温为室温；流速为1.00mL/min；进样量为10μL。

其中，所述步骤(3)采用高效液相色谱法测定中，最后采用外标法计算出供试品中三七含量，其中：

供试品中含有的R₁的含量（%）：

w₁=

供试品中含有的R_g1的含量（%）：

w₂=

供试品中含有的R_b1的含量（%）：

w₃=

供试品中三七含量，以R₁、R_g1及R_b1及的总含量计为：

w=w₁+w₂+w₃

式中，C_R1、C_Rg1、C_Rb1分别为对照品溶液中R₁、R_g1及R_b1的浓度，单位为mg/ml；

C_样中R1、C_样中Rg1、C_样中Rb1分别为供试品溶液中R₁、R_g1及R_b1的浓度，单位为mg/ml；

A_R1、A_Rg1、A_Rb1分别为对照品溶液中R₁、R_g1及R_b1的峰面积；

A_样中R1、A_样中Rg1、A_样中Rb1分别为供试品溶液中R₁、R_g1及R_b1的峰面积；

w₁、w₂、w₃分别为供试品中含有的R₁、R_g1及R_b1的含量，单位为%；

w为供试品中三七含量，以R₁、R_g1及R_b1的总含量计，单位为%。

本发明的有益效果为：本发明的方法检测出的三七总皂苷含量比药典标准方法检测出来的三七总皂苷含量偏高，本发明的三七药材前处理方法和三七提取工艺吻合，结果更接近真实值，两种方法检测出的三七总皂苷含量之间的偏差≤1.4%，符合偏差要求；

三七药材含量测定供试品制备中，样品取样量较大，误差较小，检验周期比药典方法短，同时本发明的三七药材含量测定样品处理方法与生产工艺参数吻合，检验出来的数据更具有代表性；

本发明的含量测定结果的具有较高的准确性和可操作性，确保三七药材含量测定结果稳定、可靠，为企业生产出合格、稳定的产品提供保证和技术支持。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的说明。

实施例1。

本实施例的一种快速测定三七药材含量的方法，它是按照以下步骤进行测定的：

(1)供试品溶液的制备

精密称取三七药材粗粉50.01g作为供试品样品1，加入75%乙醇分别加热提取三次，三次加热提取加入的75%乙醇的体积依次为250ml、100ml、100ml，每次加热提取的温度为70℃，每次加热提取的时间为1h，分别将三次提取液用纱布过滤制得滤液，合并滤液并加入75%乙醇定容至500ml，摇匀，过滤制得续滤液，精密量取续滤液5ml加甲醇定容至50ml，即制得供试品溶液；

(2)对照品溶液的制备

精密称取人参皂苷R_g1对照品、人参皂苷R_b1对照品及三七皂苷R₁对照品适量，加甲醇制成每1ml分别含人参皂苷三七皂苷R₁0.0696mg、R_g10.3037mg、人参皂苷R_b10.2868mg的混合溶液，即制得对照品溶液；

(3)采用高效液相色谱法测定

用具有紫外检测器的高效液相色谱仪，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈与水的混合液为流动相进行高压梯度洗脱，是以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下述体积比进行高压梯度洗脱：0-12min，流动相A为19%，流动相B为81%，12-60min，流动相A为19%至36%，流动相B为81%至64%；检测波长为203nm；柱温为室温；流速为1.00mL/min；进样量为10μL；分别精密吸取所述对照品溶液与所述供试品溶液，注入液相色谱仪，进行测定，最后计算出供试品中三七含量，测得样品1的对照品溶液与供试品溶液的检验结果如表1所示；

最后计算出供试品中三七含量时是采用外标法计算，其中：

供试品中含有的R₁的含量（%）：

w₁===0.96%

供试品中含有的R_g1的含量（%）：

w₂===3.70%

供试品中含有的R_b1的含量（%）：

w₃===3.10%

供试品中三七含量，以R₁、R_g1及R_b1及的总含量计为：

w=w₁+w₂+w₃=0.96%+3.70%+3.10%=7.76%

式中，C_R1、C_Rg1、C_Rb1分别为对照品溶液中R₁、R_g1及R_b1的浓度，单位为mg/ml；

C_样中R1、C_样中Rg1、C_样中Rb1分别为供试品溶液中R₁、R_g1及R_b1的浓度，单位为mg/ml；

A_R1、A_Rg1、A_Rb1分别为对照品溶液中R₁、R_g1及R_b1的峰面积；

A_样中R1、A_样中Rg1、A_样中Rb1分别为供试品溶液中R₁、R_g1及R_b1的峰面积；

w₁、w₂、w₃分别为供试品中含有的R₁、R_g1及R_b1的含量，单位为%；

w为供试品中三七含量，以R₁、R_g1及R_b1的总含量计，单位为%。

精密称取三七药材粗粉50.03g作为供试品样品2，并按照以上的步骤(1)、步骤(2)和步骤(3)进行测定和计算，测得样品2的对照品溶液与供试品溶液的检验结果如表1所示，供试品样品2中三七含量，以R₁、R_g1及R_b1及的总含量计为7.74%，由样品1的三七含量7.76%和样品2的三七含量7.74%的平均值得出本实施例的三七平均总含量为7.75%。

表1

。

药典方法对比例：即《中国药典》（一部2010版）中三七药材含量的测定，它是按照以下步骤进行测定的：

供试品溶液的制备：分别精密称取样品粉末(过四号筛)0.5872g和0.5913g作为样品1和样品2，并分别精密加甲醇50ml，放置过夜，置80℃水浴上保持微沸2h，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，即分别制得样品1和样品2的供试品溶液，并按照本实施例的以上的步骤(2)和步骤(3)进行测定和计算，测得样品1和样品2的对照品溶液与供试品溶液的检验结果如表1＇所示。

表1＇

。

实施例2。

本实施例的一种快速测定三七药材含量的方法，它是按照以下步骤进行测定的：

(1)供试品溶液的制备

精密称取三七药材粗粉50.20g作为供试品样品1，加入75%乙醇分别加热提取三次，三次加热提取加入的75%乙醇的体积依次为250ml、100ml、100ml，每次加热提取的温度为70℃，每次加热提取的时间为1h，分别将三次提取液用纱布过滤制得滤液，合并滤液并加入75%乙醇定容至500ml，摇匀，过滤制得续滤液，精密量取续滤液5ml加甲醇定容至50ml，即制得供试品溶液；

(2)对照品溶液的制备

精密称取人参皂苷R_g1对照品、人参皂苷R_b1对照品及三七皂苷R₁对照品适量，加甲醇制成每1ml分别含人参皂苷三七皂苷R₁0.0725mg、R_g10.3164mg、人参皂苷R_b10.2988mg的混合溶液，即制得对照品溶液；

(3)采用高效液相色谱法测定

用具有紫外检测器的高效液相色谱仪，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈与水的混合液为流动相进行高压梯度洗脱，是以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下述体积比进行高压梯度洗脱：0-12min，流动相A为19%，流动相B为81%，12-60min，流动相A为19%至36%，流动相B为81%至64%；检测波长为203nm；柱温为室温；流速为1.00mL/min；进样量为10μL；分别精密吸取所述对照品溶液与所述供试品溶液，注入液相色谱仪，进行测定，最后采用外标法、按实施例1中所述方法进行计算，计算出供试品中三七含量为6.95%，测得样品1的对照品溶液与供试品溶液的检验结果如表2所示。

精密称取三七药材粗粉50.13g作为供试品样品2，并按照以上的步骤(1)、步骤(2)和步骤(3)进行测定和计算，测得样品2的对照品溶液与供试品溶液的检验结果如表2所示，供试品样品2中三七含量，以R₁、R_g1及R_b1及的总含量计为6.96%，由样品1的三七含量6.95%和样品2的三七含量6.96%的平均值得出本实施例的三七平均总含量为6.95%。

表2

。

药典方法对比例：即《中国药典》（一部2010版）中三七药材含量的测定，它是按照以下步骤进行测定的：

供试品溶液的制备：分别精密称取样品粉末(过四号筛)0.5682g和0.5724g作为样品1和样品2，并分别精密加甲醇50ml，放置过夜，置80℃水浴上保持微沸2h，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，即分别制得样品1和样品2的供试品溶液，并按照本实施的以上的步骤(2)和步骤(3)进行测定和计算，测得样品1和样品2的对照品溶液与供试品溶液的检验结果如表2＇所示。

表2＇

。

实施例3。

本实施例的一种快速测定三七药材含量的方法，它是按照以下步骤进行测定的：

(1)供试品溶液的制备

精密称取三七药材粗粉50.00g作为供试品样品1，加入75%乙醇分别加热提取三次，三次加热提取加入的75%乙醇的体积依次为250ml、100ml、100ml，每次加热提取的温度为70℃，每次加热提取的时间为1h，分别将三次提取液用纱布过滤制得滤液，合并滤液并加入75%乙醇定容至500ml，摇匀，过滤制得续滤液，精密量取续滤液5ml加甲醇定容至50ml，即制得供试品溶液；

(2)对照品溶液的制备

精密称取人参皂苷R_g1对照品、人参皂苷R_b1对照品及三七皂苷R₁对照品适量，加甲醇制成每1ml分别含人参皂苷三七皂苷R₁0.0721mg、R_g10.3148mg、人参皂苷R_b10.2973mg的混合溶液，即制得对照品溶液；

(3)采用高效液相色谱法测定

用具有紫外检测器的高效液相色谱仪，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈与水的混合液为流动相进行高压梯度洗脱，是以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下述体积比进行高压梯度洗脱：0-12min，流动相A为19%，流动相B为81%，12-60min，流动相A为19%至36%，流动相B为81%至64%；检测波长为203nm；柱温为室温；流速为1.00mL/min；进样量为10μL；分别精密吸取所述对照品溶液与所述供试品溶液，注入液相色谱仪，进行测定，最后采用外标法、按实施例1中所述方法进行计算，计算出供试品中三七含量为6.53%，测得样品1的对照品溶液与供试品溶液的检验结果如表3所示。

精密称取三七药材粗粉50.01g作为供试品样品2，并按照以上的步骤(1)、步骤(2)和步骤(3)进行测定和计算，测得样品2的对照品溶液与供试品溶液的检验结果如表3所示，供试品样品2中三七含量，以R₁、R_g1及R_b1及的总含量计为6.58%，由样品1的三七含量6.53%和样品2的三七含量6.58%的平均值得出本实施例的三七平均总含量为6.55%。

表3

。

药典方法对比例：即《中国药典》（一部2010版）中三七药材含量的测定，它是按照以下步骤进行测定的：

供试品溶液的制备：分别精密称取样品粉末(过四号筛)0.5336g和0.5359g作为样品1和样品2，并分别精密加甲醇50ml，放置过夜，置80℃水浴上保持微沸2h，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，即分别制得样品1和样品2的供试品溶液，并按照本实施的以上的步骤(2)和步骤(3)进行测定和计算，测得样品1和样品2的对照品溶液与供试品溶液的检验结果如表3＇所示。

表3＇

。

实施例1~实施例3的快速测定三七药材含量的方法的含量测定检验结果汇总表如表4所示。

表4

。

从表4可以看出，实施例1至实施例3按照本申请的方法检测出的三七总皂苷含量比药典标准方法检测出来的三七总皂苷含量偏高，结果更接近真实值，两种方法检测出的三七总皂苷含量之间的偏差≤1.4%，符合偏差要求。

最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细地说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims (1)

1.一种快速测定三七药材含量的方法，其特征在于：它是按照以下步骤进行测定的：

(1)供试品溶液的制备

称取三七药材粗粉作为供试品，加入有机溶剂分别加热提取若干次，分别将若干次提取液过滤制得滤液，合并滤液并加入有机溶剂定容，摇匀，过滤制得续滤液，量取续滤液并加入有机溶剂定容，即制得供试品溶液；具体的，所述步骤(1)供试品溶液的制备具体为：精密称取三七药材粗粉45.00-55.00g作为供试品，加入75%乙醇分别加热提取三次，三次加热提取加入的75%乙醇的体积依次为250ml、100ml、100ml，每次加热提取的温度为70℃，每次加热提取的时间为1h，分别将三次提取液用纱布过滤制得滤液，合并滤液并加入75%乙醇定容至500ml，摇匀，过滤制得续滤液，精密量取续滤液5ml加甲醇定容至50ml，即制得供试品溶液；

(2)对照品溶液的制备

精密称取人参皂苷R_g1对照品、人参皂苷R_b1对照品及三七皂苷R₁对照品适量，加甲醇制成每1ml分别含三七皂苷R₁0.069-0.073mg、人参皂苷R_g10.300-0.320mg、人参皂苷R_b10.285-0.299mg的混合溶液，即制得对照品溶液；

(3)采用高效液相色谱法测定

用具有紫外检测器的高效液相色谱仪，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈与水的混合液为流动相进行高压梯度洗脱；检测波长为203nm；分别精密吸取所述对照品溶液与所述供试品溶液，注入液相色谱仪，进行测定，最后计算出供试品中三七含量，具体的，所述步骤(3)采用高效液相色谱法测定中，所述以乙腈与水的混合液为流动相进行梯度洗脱，是以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下述体积比进行高压梯度洗脱：0-12min，流动相A为19%，流动相B为81%，12-60min，流动相A为19%至36%，流动相B为81%至64%；检测波长为203nm；柱温为室温；流速为1.00mL/min；进样量为10μL；

其中，所述步骤(3)采用高效液相色谱法测定中，最后采用外标法计算出供试品中三七含量，其中：

供试品中含有的R₁的含量（%）：

w₁=

供试品中含有的R_g1的含量（%）：

w₂=

供试品中含有的R_b1的含量（%）：

w₃=

供试品中三七含量，以R₁、R_g1及R_b1及的总含量计为：

w=w₁+w₂+w₃

式中，C_R1、C_Rg1、C_Rb1分别为对照品溶液中R₁、R_g1及R_b1的浓度，单位为mg/ml；

C_样中R1、C_样中Rg1、C_样中Rb1分别为供试品溶液中R₁、R_g1及R_b1的浓度，单位为mg/ml；

A_R1、A_Rg1、A_Rb1分别为对照品溶液中R₁、R_g1及R_b1的峰面积；

A_样中R1、A_样中Rg1、A_样中Rb1分别为供试品溶液中R₁、R_g1及R_b1的峰面积；

w₁、w₂、w₃分别为供试品中含有的R₁、R_g1及R_b1的含量，单位为%；

w为供试品中三七含量，以R₁、R_g1及R_b1的总含量计，单位为%。