CN108008042A - 一种重楼解毒酊制剂四种皂苷类成分的含量测定方法 - Google Patents

一种重楼解毒酊制剂四种皂苷类成分的含量测定方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种重楼解毒酊制剂中重楼皂苷I、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅲ及重楼皂苷Ⅳ四种有效成分的含量测定方法。它以重楼皂苷I、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅲ及重楼皂苷Ⅳ为对照品，以乙腈（A）‑水(B)/梯度洗脱0～15min30%～40%A；15～40min40%A；40～70min40%～60%A流动相的高效液相色谱法。与现有技术相比，本发明为同时测定四种有效成分含量，质量概述全面，专属性强，稳定性高，测量结果准确，达到了有效控制该制剂质量的目的，确保了该制剂及其相关产品质量的稳定及临床用药的安全。

Description

一种重楼解毒酊制剂四种皂苷类成分的含量测定方法
技术领域
本发明涉及了一种重楼解毒酊制剂中重楼皂苷I、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅲ及重楼皂苷Ⅳ四种有效成分的含量测定方法，属于中药质量检测技术领域。
背景技术
重楼解毒酊制剂处方由重楼、生草乌、艾叶、石菖蒲、大蒜、艾片六味中药材组成，具有清热解毒，散淤止痛。用于肝经火毒所致的带状疱疹，皮肤瘙痒，虫咬皮炎，流行性腮腺炎。经临床应用并证明，本品治疗效果明显，具有抑菌、抗病毒感染，清热解毒，消肿散瘀，疏经止痛之功效。目前已有的剂型为酊剂。
本制剂由重楼、生草乌、艾叶、石菖蒲、大蒜、艾片六味药材组成，在现行质量标准中鉴别项和含量测定项仅控制重楼、石菖蒲药材的鉴别及艾片的含量测定，质量控制体系单一，重楼为方中君药，处方中含量高。现代药理学表明，重楼中重楼皂苷I、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅲ及重楼皂苷Ⅳ具有抗肿瘤、抗感染、止血、抗血管生成、抗骨质疏松、抗氧化等药理作用。因此在现有质量标准的基础上，增加多指标有效成分的含量测定，有利于该制剂的质量及临床应用的稳定性。
发明内容
本发明的目的在于提供一种重楼解毒酊制剂中重楼皂苷I、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅲ及重楼皂苷Ⅳ四种有效成分的含量测定方法，以期能够对制剂中重楼皂苷I、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅲ及重楼皂苷Ⅳ的含量进行快速、准确、高重现率、高回收率的测定。
本发明完成前未发现对该制剂进行重楼皂苷I、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅲ及重楼皂苷Ⅳ四种成分同时测定的报道。本发明所述的重楼解毒酊制剂：重楼、生草乌、艾叶、石菖蒲、大蒜、艾片六味药材，大蒜去皮，捣碎成泥，重楼、生草乌、石菖蒲、艾叶粉碎成最粗粉（过10目筛），加二倍量稀乙醇，浸渍10天，去上清液，药渣滤过，滤液和上清液合并，加入艾片，搅拌使溶解，加水和乙醇调整至1000ml,并使含醇量达45%～55%，搅匀，静置3天，滤过，即得。已获得专利2013101172316《重楼解毒酊及其制备方法》。
本发明采用如下的技术方案：
一种重楼解毒酊制剂中四种有效成分的含量测定方法，以重楼皂苷I、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅲ及重楼皂苷Ⅳ为对照，以乙腈（A）-水(B)/梯度洗脱0～30min30%～60%A；30～40min40%A；40～80min40%～80%A为流动相的高效液相色谱法。对制剂中重楼皂苷I、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅲ及重楼皂苷Ⅳ的含量测定按照如下步骤进行：
（1）色谱条件与系统适应性试验：以十八烷基硅烷合硅胶为填充剂；以乙腈（A）-水(B)/梯度洗脱0～30min30%～60%A；30～40min40%A；40～80min40%～80%A为流动相；柱温20～30℃；检测波长为200～275nm；流速为0.8～1.2mL/min；理论塔板数以重楼皂苷I计不得少于4000。
(2)对照品溶液的制备：取重楼皂苷I、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅲ及重楼皂苷Ⅳ对照品适量，加甲醇制成浓度分别含重楼皂苷I0.64mg/mL、重楼皂苷Ⅱ0.46mg/mL、重楼皂苷Ⅲ0.26mg/mL、重楼皂苷Ⅳ0.23mg/mL的溶液，按1:1:1:1混合，摇匀，临用前用0.22μm微孔滤膜过滤，即得。
(3)供试品溶液的制备：取装量差异下的重楼解毒酊制剂5ml，蒸至无醇味，精密加入甲醇5mL，称定重量，超声或加热回流30～60min，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，滤过，回收溶剂至干，用甲醇溶解残渣，定容于5ml量瓶中，滤过，取续滤液，即得。
(4)测定法：分别精密吸取对照品与供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定，即得。
本发明所述的重楼解毒酊制剂中重楼皂苷I含量不得少于0.15%，重楼皂苷Ⅱ含量不得少于0.45%，重楼皂苷Ⅲ含量不得少于0.2%，重楼皂苷Ⅳ含量不得少于0.2%。
具体实施方式
实施例
1仪器与试药
1.1仪器：Agilent1200高效液相色谱仪
1.2 试药：重楼皂苷I、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅲ及重楼皂苷Ⅳ对照品，均由中国药品生物制品检定研究院提供，乙腈为色谱纯，重楼解毒酊由贵州圣济堂制药有限公司提供。
2 方法与结果
2.1色谱条件 Phenomenex C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）,乙腈（A）-水(B)/梯度洗脱0～15min30%A；15～40min40%A；40～70min50%A为流动相，检测波长为203nm；流速为1.0mL.min-1；柱温为25℃。在选定的条件下，各色谱峰与样品中其他色谱峰达基线分离，其理论板数（N）均大于4000。
2.2对照品溶液的制备 取重楼皂苷I、重楼皂苷II、重楼皂苷VI及重楼皂苷VII对照品适量，精密称定，加甲醇制成每毫升含重楼皂苷I、II、VI、VII分别为0.4127,0.4370,0.4288,0.4497mg的混合溶液，及得。
2.3供试品溶液的制备 取装量差异下的重楼解毒酊制剂5ml，蒸至无醇味，精密加入甲醇5mL，称定重量，超声或加热回流30～60min，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，滤过，回收溶剂至干，用甲醇溶解残渣，定容于5ml量瓶中，滤过，取续滤液，即得。
2.4 线性关系考察 精密吸取上述混合对照品溶液，分别进样2,4,6,8,10,12µL，测定各色谱峰峰面积。以对照品进样量（µg)为横坐标，色谱峰峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。结果表明重楼皂苷I、II、VI、VII分别在0.8254～4.9164，0.8740～4.9440,0.8576～4.9296,0.8994～5.4720µg范围内线性关系良好。
2.5精密度实验 取同一份供试品溶液，连续进样6次，测定并记录重楼皂苷I、II、VI、VII的峰面积。结果各成分峰面积RSD分别为0.45%，0.28%，0.31%,0.22%，表明仪器的精密度良好。
2.6重复性实验
取同一批重楼解毒酊样品6份，分别按“2.4” 项方法制备，进样10µL，测定峰面积，计算含量。结果重楼皂苷I、II、VI、VII含量RSD分别为1.12%，1.32%,1.17%,1.32%,表明该方法重复性良好。
2.7稳定性实验
取同一重楼解毒酊供试品溶液，分别于0,1,2,4,8,16,24h进样10µL，测定峰面积，计算含量。结果重楼皂苷I、II、VI、VII的RSD分别为1.32%，1.54%，1.65%，1.96%，表明在24小时内，供试品溶液稳定。
2.8加样回收率实验
取6份同一批号已知含量的重楼解毒酊供试品约3ml,精密称定，分别加入混合对照品溶液1mL(重楼皂苷I2.317 mg.ml－1、重楼皂苷II 1.231mg.ml－1、重楼皂苷VI0.435mg.ml－1、重楼皂苷VII 1.334mg.ml－1)。按“2.4”项方法制备，进样10µL，测定峰面积，计算回收率，结果表明4种重楼皂苷类成分平均加样回收率分别为99.32%,99.95%,98.12%,99.04%;RSD分别为2.15%，1.32%，1.76%，1.15%，说明该方法准确度良好。
2.9相对校正因子测定及耐用性考察
2.10相对校正因子及相对保留时间测定 取“2.3”项的混合对照品溶液，分别进样2,4,6,8,10,12µL，测定峰面积。以重楼皂苷VII为参照物，计算各待测成分重楼皂苷I,II,VI 相对校正因子FI/VII,FII/VII,FVI/VII,相对保留时间tI/VII,tII/VII,tVI/VII。
2.10.1 仪器对相对校正因子的影响 取“2.3”项的混合对照品溶液，分别进样10µL，比较三种不同型号高效液相色谱仪（Agilent1200、Waters2695、Shimadzu LC-20A）相对校正因子的影响。FI/VII,FII/VII,FVI/VII的RSD分别为1.19%，1.25%，1.73%, 表明仪器对相对校正因子影响不大。
2.10.2色谱柱对相对校正因子影响 取“2.3”项的混合对照品溶液，分别进样10µL，在同一台高效液相色谱仪上（Shimadzu LC-20A），比较Phenomenex Luna、AgilentEclipse、Diamonsil、Thermo、Kromasil 5种型号C18色谱柱（4.6mmX250mm,5µm）。FI/VII,FII/VII,FVI/VII的RSD分别为0.46%，和0.73%，0.78%，说明色谱柱对相对校正因子无显著影响。
2.10.3样品测定 取不同批号的重楼解毒酊，用本实验所确定的方法进行样品处理和定量测定，并分别采用标准曲线法计算含量，结果如下：重楼解毒酊中重楼皂苷I、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅲ及重楼皂苷Ⅳ的含量分别为0.12%,0.264%,0.109%，0.485%，说明该方法测定结果具有较高可信度。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，任何未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。

Claims (4)

1.一种重楼解毒酊制剂四种皂苷类成分的含量测定方法，即重楼皂苷I、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅲ及重楼皂苷Ⅳ四种有效成分的含量测定方法，其特征在于：以重楼皂苷I、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅲ及重楼皂苷Ⅳ为对照品，以乙腈（A）-水(B)/梯度洗脱0～15min30%～40%A；15～40min40%A；40～70min40%～60%A为流动相的高效液相色谱法，按照下属步骤进行测定：
（1）色谱条件与系统适应性试验：以十八烷基硅烷合硅胶为填充剂；以乙腈（A）-水(B)/梯度洗脱0～15min30%～40%A；15～40min40%A；40～70min40%～60%A为流动相；柱温20～30℃；检测波长为200～275nm；流速为0.8～1.2mL/min；理论塔板数以重楼皂苷I计不得少于4000；
（2）对照品溶液的制备：取重楼皂苷I、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅲ及重楼皂苷Ⅳ对照品适量，加甲醇制成浓度分别含重楼皂苷I0.64mg/mL、重楼皂苷Ⅱ0.46mg/mL、重楼皂苷Ⅲ0.26mg/mL、重楼皂苷Ⅳ0.23mg/mL的对照品溶液，按1:1:1:1混合，摇匀，临用前用0.22μm微孔滤膜过滤，即得；
（3）供试品溶液的制备：取装量差异下的重楼解毒酊制剂5ml，蒸至无醇味，精密加入甲醇5mL，称定重量，超声或加热回流30～60min，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，滤过，回收溶剂至干，用甲醇溶解残渣，定容于5ml量瓶中，滤过，取续滤液，即得；
（3）测定法：分别精密吸取对照品与供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定，即得。
2.按照权利要求1所述的一种重楼解毒酊制剂四种皂苷类成分的含量测定方法，其特征在于：所述的流动相体系为乙腈（A）-水(B)/梯度洗脱0～30min30%～60%A；30～40min40%A；40～80min40%～80%A。
3.按照权利要求1所述的一种重楼解毒酊制剂四种皂苷类成分的含量测定方法，其特征在于：检测波长为220nm；流速为1.0mL/min；柱温30℃。
4.按照权利要求1所述的一种重楼解毒酊制剂四种皂苷类成分的含量测定方法，其特征在于：供试品制备方法中，超声或加热回流30～60min。
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CN113960233A (zh) * 2021-08-26 2022-01-21 云南中医药大学 一种滇重楼根茎中8种重楼皂苷含量的测定方法
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