CN101879270A - 一种中药粉针及其质量控制方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种中药粉针及其质量控制方法，该中药粉针是由重量份配比的红参、麦冬、五味子组成，其中所述的粉针中主要活性成分含量的总和不得低于4.0mg/g，所述活性成分包括人参皂苷Rf、Rb₁、Rb₂、Rb₃、Rd、Rg3、F₂和五味子醇甲。所述的质量控制方法包括质量标准制定，含量测定方法和待测样品含量与质量标准的比较，判断是否达到预先设定的标准，以此控制产品质量，该方法快速，准确灵敏并有利于工业化生产检验，能够有效控制成品质量。

Description

一种中药粉针及其质量控制方法

技术领域

本发明涉及一种中药制剂，尤其是涉及一种中药粉针制剂及其质量控制方法。

背景技术

我国有关中药质量控制方法的记载是世界上最全面和最早的，但由于技术更新较慢，现有质量分析和评价手段落后，目前中药质量国家标准还很不完善，尚不能充分反映中药的质量状况，远远满足不了中药产业的现实需求。2000年版中国药典一部中，已经收载中药材和中成药制剂共992种，采用鉴别的为602种，有含量测的308种；在收载的458种中成药制剂中，采用化学对照品鉴别的有280种，用对照药材鉴别的有80种，有含量测定的142种，占制剂总数的31％。这比以往历届药典的质量标准与水平有了大幅度的提高，但仍有相当数量的中药材和中成药缺乏可靠的质量标准，特别是缺乏能够全面反映中药质量控制方法。一些中成药尤其是中药粉针，往往是通过其中一个或2个主要活性成分含量进行控制，此时很难通过仅有的几个“量”达到“质”的控制目的。

益气复脉制剂源于金代《医学启源》中的著名古方生脉散，具有益气生津、敛阴止汗的功能，临床上主要用于治疗气阴两亏，脉脱欲虚的心悸、气短、四肢冰冷，汗出、脉欲绝及心肌梗塞，心源性休克，感染性休克等具有上述症候者。随着临床的广泛应用，对益气复脉制剂种类日益增加，已有的普通口服制剂已经无法满足现代的患者需求，从医院的统计数据来看，在用中药治疗心脑血管方面疾病，尤其是中药注射剂类药物因其生物利用度高，作用迅速等特点，能较好地发挥中药治疗急病重症目的，起到举足轻重的作用。

目前益气复脉制剂有如益气复脉颗粒、益气复脉胶囊、益气复脉口服液等，在益气复脉口服液的部颁标准，标准编号WS3-34(Z-25)-93(Z)；益气复脉胶囊的新药转正标准，标准编号WS3-173(X-163)-98(Z)和益气复脉颗粒的新药转正标准，其标准编号WS3-172(X-162)-2001(Z)的质量标准中均设置了五味子醇甲和人参总苷的含量测定方法，并没有测定出单个人参皂苷的含量，用总苷进行控制制剂的含量，质量评价还是比较片面。只有对制剂中单个活性成分及各主要活性成分的总和完全控制对把握整个制剂的质量有很重要的意义。益气复脉粉针的试行标准中采用过大孔吸附树脂和酸性氧化铝混合树脂，需要接收大量的流出液，其操作繁琐，且处理后的样品溶液色泽深，影响测定结果的可靠性和稳定性，无法表达制剂产品的真实含量，由于操作繁琐，步骤多检测时间至少8个小时，无法满足质量检验的需求。

同上在益气复脉制剂的质量标准中，人参总苷含量测定方法采用乙醚提取，水饱和正丁醇萃取，实验操作繁琐，费时且有机溶剂用量大，对人体伤害极大，难于满足工业化生产的日常检验。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明所要提供一种质量可控的益气复脉中药粉针。

本发明还提供了一种快速、准确、灵敏并有利与工业化生产检验，同时能够可靠监控产品质量的一种中药粉针的质量控制方法。

本发明是通过以下方案实现的：

本发明的中药粉针，是由下述重量份配比的原料药组成：

五味子0.5～3份

红参0.5～2份

麦冬1.5～6份

其中主要活性成分含量的总和不得低于4.0mg/g，所述活性成分包括人参皂苷Rf、Rb₁、Rb₂、Rb₃、Rd、Rg3、F₂和五味子醇甲。

本发明的中药粉针，优选由下述重量份配比原料药组成：

五味子1.5份

红参1份

麦冬3份。

本发明的中药粉针，分别通过以下活性成分含量控制中药粉针的质量。

优选上述的人参皂苷Rf含量不得低于0.2mg/g。

优选人参皂苷Rb₁含量不得低于1.4mg/g。

优选人参皂苷Rb₂含量不得低于0.8mg/g。

优选人参皂苷Rb₃含量不得低于0.1mg/g。

优选人参皂苷Rd含量不得低于0.6mg/g。

优选人参皂苷Rg3含量不得低于0.6mg/g。

优选人参皂苷F₂含量不得低于0.3mg/g。

优选五味子醇甲含量不得低于0.1mg/g。

本发明中药粉针中上述各主要活性成分通过下述含量测定方法测得：

(1)色谱条件：C₁₈色谱柱，流动相由弱酸-乙腈或弱酸-甲醇组成，梯度洗脱，检测波长为203nm，流速为0.8-1.2ml/min。

(2)对照品溶液制备：取人参皂苷Rf、Rb₁、Rb₂、Rb₃、Rd、Rg3、F₂和五味子醇甲对照品，用30-80％甲醇或甲醇溶解即得。

(3)供试品溶液制备：取冻干粉针，水溶解后，上树脂柱用碱水洗脱，洗脱液弃去，再用含水甲醇洗脱，收集洗脱液即可。

(4)分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，测得即得。

上述步骤(1)中所述的流动相可以是甲醇或乙腈与水的混合液、甲醇或乙腈与无机酸或有机酸的混合液，包括但不限于碳酸-甲醇、磷酸-甲醇、枸橼酸-甲醇、酒石酸-甲醇、乙腈-水、碳酸-乙腈、磷酸-乙腈、枸橼酸-乙腈、酒石酸-乙腈等，优选流动相为0.02-1.0％磷酸-乙腈，最佳为0.05％磷酸-乙腈按照下表梯度洗脱。

步骤(2)中所述的对照品溶剂可以是流动相、甲醇、乙腈、或其混合物，优选对照品溶剂为50％甲醇。

步骤(3)中所述的碱水为有机碱、无机碱、强碱弱酸盐或碱式盐水溶液或甲醇溶液。所述有机碱包括但不限于胺类如乙醇胺、二乙醇胺、乙二胺、三乙醇胺、四甲基氢氧化胺、烷基醇胺、异丙醇胺等；有机金属化合物如甲醇钠、乙醇钠等。

所述的无机碱包括但不限于：氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化镁、氢氧化钙、氢氧化铝、氢氧化锌、氢氧化铜、氢氧化钡等无机碱。

所述的碱式盐包括强酸弱碱盐如氯化铵、硫酸铜等；强碱弱酸盐如碳酸钠、碳酸氢钠等；弱酸弱碱盐如碳酸铝，偏铝酸铝等。

本发明中优选碱水溶液为NaOH甲醇-水溶液，比例为0.5-5∶9.5-5，优选比例为2∶8。

由于制剂中存在的辅料以及一些碳水化合物(如糖、色素等)将严重干扰被测物质的分离度和重现性，故本发明选用色谱柱对待测样品进行除杂处理。步骤(3)中所述的色谱柱型号包括但不限于所述的树脂柱型号包括但不限于Cleanert^TM SPE小柱、AB-8柱、D101柱、D201柱、D301柱、HPD100柱、HPD300柱、HPD600柱、NKA-9柱、DA201型、D-型、SIP系列、X-5型、GDX104型、LD605型、LD601型、CAD-40型、DM-130型、R-A型、CHA-111型、WLD型(混合型)、H107型等。优选树脂柱型号为Cleanert^TM SPE小柱和AB-8，该色谱柱对样品进行预处理，操作简单，不仅能够有效地除去干扰物质，还能起到富集样品的作用，而且提取率及重现性也令人满意。

为了更好的监控制剂的质量，本发明提供的质量控制方法能够完全准确监控药品的质量，用一种含量测定方法同时测定出8种有效活性成分的含量，并根据大量数据分别制定出各成分含量标准和总量标准。产业化中将待测样品含量与标准含量进行对比，就能够判定制剂的质量。

本发明中药粉针的质量控制方法，包括以下步骤：

(1)质量标准制定：分别制定下述主要活性成分含量人参皂苷Rf、Rb₁、Rb₂、Rb₃、Rd、Rg3、F₂和五味子醇甲，其总和不得低于4.0mg/g；

(2)产品活性成分含量测定：通过高效液相色谱法同时测定人参皂苷Rf、Rb₁、Rb₂、Rb₃、Rd、Rg3、F₂、五味子醇甲，即得含量测定值；

(3)产品含量测定值与质量标准比较，判断是否达到预先设定的标准，以此控制产品质量。

优选所述的步骤(1)中制定标准：人参皂苷Rf含量不得低于0.2mg/g、人参皂苷Rb₁含量不得低于1.4mg/g、人参皂苷Rb₂含量不得低于0.8mg/g、人参皂苷Rb₃含量不得低于0.1mg/g、人参皂苷Rd含量不得低于0.6mg/g、人参皂苷Rg3含量不得低于0.6mg/g、人参皂苷F₂含量不得低于0.3mg/g和五味子醇甲含量不得低于0.1mg/g。

所述的步骤(2)中的含量测定方法a、对照品的制备：分别取人参皂苷Rf、Rb₁、Rb₂、Rb₃、Rd、Rg3、F₂和五味子醇甲对照品，用30-80％甲醇或甲醇溶解即得；b、供试品溶液的制备：取待测样品适量，水溶液上色谱柱，用碱水洗脱，弃去，再用含水甲醇洗脱，收集洗脱液即得；c、高效液相色谱测定：精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得，所述的高效液相色谱条件采用0.02-1.0％磷酸-乙腈梯度洗脱。

上述步骤a中所述的对照品溶剂还可以是流动相、甲醇、乙腈、或其混合物，优选对照品溶剂为50％甲醇。

上述步骤b中所述的供试品溶液的制备中：所述的碱水为有机碱、无机碱、强碱弱酸盐或碱式盐水溶液或甲醇溶液。所述有机碱包括但不限于胺类如乙醇胺、二乙醇胺、乙二胺、三乙醇胺、四甲基氢氧化胺、烷基醇胺、异丙醇胺等；有机金属化合物如甲醇钠、乙醇钠等。

所述的无机碱包括但不限于：氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化镁、氢氧化钙、氢氧化铝、氢氧化锌、氢氧化铜、氢氧化钡等无机碱。

所述的碱式盐包括强酸弱碱盐如氯化铵、硫酸铜等；强碱弱酸盐如碳酸钠、碳酸氢钠等；弱酸弱碱盐如碳酸铝，偏铝酸铝等。

本发明中优选碱水溶液为NaOH甲醇-水溶液，比例为0.5-5∶9.5-5，优选比例为2∶8。

由于制剂中存在的辅料以及一些碳水化合物(如糖、色素等)将严重干扰被测物质的分离度和重现性，故本发明选用色谱柱对待测样品进行除杂处理。步骤(3)中所述的色谱柱型号包括但不限于所述的树脂柱型号包括但不限于Cleanert^TM SPE小柱、AB-8柱、D101柱、D201柱、D301柱、HPD100柱、HPD300柱、HPD600柱、NKA-9柱、DA201型、D-型、SIP系列、X-5型、GDX104型、LD605型、LD601型、CAD-40型、DM-130型、R-A型、CHA-111型、WLD型(混合型)、H107型等。优选树脂柱型号为Cleanert^TM SPE小柱和AB-8，该色谱柱对样品进行预处理，操作简单，不仅能够有效地除去干扰物质，还能起到富集样品的作用，而且提取率及重现性也令人满意。

上述步骤c中所述的流动相可以是甲醇或乙腈与水的混合液、甲醇或乙腈与无机酸或有机酸的混合液，包括但不限于碳酸-甲醇、磷酸-甲醇、枸橼酸-甲醇、酒石酸-甲醇、乙腈-水、碳酸-乙腈、磷酸-乙腈、枸橼酸-乙腈、酒石酸-乙腈等，优选流动相为0.02-1.0％磷酸-乙腈，最佳为0.05％磷酸-乙腈按照下表梯度洗脱。

本发明的益气复脉粉针的制备方法：

取重量份配比的三味药材，红参用乙醇回流提取三次，第一、二次第一、二次分别为3小时，第三次2小时，合并提取液，减压回收乙醇至无醇味，加水至约500ml，冷置，分离除去上层油，水层滤过，减压浓缩至相对密度为1.15～1.20(50℃)，70℃减压干燥，得注射用红参提取物；麦冬、五味子分别加水煎煮三次，第一次1小时，第二、三次分别为45分钟、30分钟，合并提取液，分别减压浓缩至相对密度为1.15～1.20(50℃)、1.16～1.21(50℃)，加乙醇至含醇量为75％，放置，滤过，滤液分别减压浓缩至相对密度为1.25～1.30(50℃)、1.18～1.23(50℃)，分别再加乙醇至含醇量为85％，放置，滤过，加40％氢氧化钠溶液调节pH值分别为9、7，放置，滤过，麦冬滤液加稀盐酸调pH值为6.5～7.0，分别减压回收乙醇至相对密度为1.15～1.20、1.25～1.35(50℃)，70℃减压干燥，分别得注射用麦冬、注射用五味子提取物。

将注射用红参提取物加注射用水500ml溶解，滤过，滤液加0.5％活性炭加热煮沸5分钟，滤过，滤液加40％氢氧化钠溶液调pH值为6.5～7.0；注射用麦冬、五味子提取物分别加注射用水750ml、500ml溶解，滤过，滤液用40％氢氧化钠溶液调pH值为6.5～7.0；合并上述三种溶液，加入葡甲胺13g，100℃加热1小时，冷置，滤过，滤液加甘露醇390g，搅拌，溶解，加注射用水至总体积，测pH值，以微孔滤膜(0.22μm)滤过，灌装于10ml西林瓶中，冷冻干燥，压塞、加盖，制成1000瓶，即得。

功能与主治益气复脉，养阴生津。用于冠心病劳累型心绞痛气阴两虚证，症见胸痹心痛，心悸气短、倦怠懒言、头晕目眩、面色少华，舌淡、少苔或剥苔，脉细弱或结代；冠心病所致慢性左心功能不全Ⅱ、Ⅲ级气阴两虚证，症见心悸、气短甚则气急喘促，胸闷隐痛，时作时止，倦怠乏力，面色苍白，动则汗出，舌淡少苔或剥苔，脉细弱或结代。

用法与用量静脉滴注。每日1次，每次8瓶(每瓶用5ml注射用水溶解)，再用250ml-500ml 5％葡萄糖注射液稀释后静脉滴注，每分钟40滴。疗程2周或遵医嘱。

规格  每瓶装0.65g。

下面通过该含量测定方法的方法学验证本发明的有益效果

1、待测样品按照实施例1制备

2、按照实施例2中的含量测定方法，制备供试品和对照品溶液

3、方法学研究

3.1线性分别取人参皂苷Rf、Rb₁、Rb₂、Rb₃、Rd、五味子醇甲、人参皂苷F₂和Rg3对照品适量，精密称定，加50％甲醇分别稀释制成系列浓度的对照品溶液，分别精密吸取上述各对照品溶液10μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。以各对照品的浓度(μg·mL^-1)为横坐标，峰面积为纵坐标，分别绘制标准曲线，计算回归方程，结果见表3-1～3-8、图3-10。

表3-1、人参皂苷Rf线性关系结果

表3-2、人参皂苷Rb₁线性关系结果

表3-3、人参皂苷Rb₂线性关系结果

表3-4、人参皂苷Rb₃线性关系结果

表3-5、人参皂苷Rd线性关系结果

表3-6、五味子醇甲线性关系结果

表3-7、人参皂苷F₂线性关系结果

表3-8、人参皂苷Rg₃线性关系结果

从表3-1-8结果表明，人参皂苷Rf在3.68～73.6μg·mL^-1浓度范围、人参皂苷Rb₁在28.24～564.8μg·mL^-1浓度范围、人参皂苷Rb₂在15.12～302.4μg·mL^-1浓度范围、人参皂苷Rb₃在1.63～32.6μg·mL^-1浓度范围、人参皂苷Rd在8.18～163.6μg·mL^-1浓度范围、五味子醇甲在2.14～42.8μg·mL^-1浓度范围、人参皂苷F₂在4.0～80.0μg·mL^-1浓度范围、人参皂苷Rg₃在10.0～200.0μg·mL^-1浓度范围线性关系良好。

3.2精密度试验

精密吸取混合对照品溶液(人参皂苷Rf浓度为36.8μg·mL^-1、Rb₁浓度为282.4μg·mL^-1、Rb₂浓度为151.2μg·mL^-1、Rb₃浓度为16.3μg·mL^-1、Rd浓度为36.8μg·mL^-1、五味子醇甲浓度为21.4μg·mL^-1、人参皂苷F₂浓度为40.0μg·mL^-1和Rg3浓度为100.0μg·mL^-1)10μL，注入液相色谱仪，连续进样5次，记录色谱图，计算进样精密度，结果见表3-9。

表3-9、精密度试验结果(n＝5)

结果表明，仪器精密度良好。

3.3重复性试验

按所拟订的“含量测定”项下方法，对同一批样品(批号：070702)平行制备5份供试品溶液，进样10μL，分别计算各测定成分的含量，结果见表3-10。

表3-10、重复性试验结果(单位：mg·g^-1，n＝5)

结果表明，本法重复性良好。

3.4稳定性试验

按所拟订的“含量测定”项下方法，对同一供试品溶液(批号：070702)分别在室温下放置0、2、4、8、12、24小时，精密吸取10μL注入液相色谱仪，测定。结果见表3-11。

表3-11、稳定性试验结果(n＝6)

结果表明，供试品溶液在24小时内稳定。

3.5加样回收试验

精密称取6份已知含量的注射用益气复脉(冻干)样品(批号为070702)各0.5g，分置10mL量瓶中，分别精密加入混合对照品溶液(人参皂苷Rf浓度为36.8μg·mL^-1、Rb₁浓度为282.4μg·mL^-1、Rb₂浓度为151.2μg·mL^-1、Rb₃浓度为16.3μg·mL^-1、Rd浓度为36.8μg·mL^-1、五味子醇甲浓度为21.4μg·mL^-1、人参皂苷F₂浓度为40.0μg·mL^-1和Rg3浓度为100.0μg·mL^-1)5mL，按供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，测定，结果见表3-12～3-19。

表3-12、人参皂苷Rf加样回收试验结果

表3-13、人参皂苷Rb₁加样回收试验结果

表3-14、人参皂苷Rb₂加样回收试验结果

表3-15、人参皂苷Rb₃加样回收试验结果

表3-16、人参皂苷Rd加样回收试验结果

表3-17、五味子醇甲加样回收试验结果

表3-18、人参皂苷F₂加样回收试验结果

表3-19、人参皂苷Rg₃加样回收试验结果

加样回收率试验结果表明，所拟订的方法符合定量的要求。

本发明的一种中药质量控制方法通过八种活性成分以及总和含量控制制剂的质量，确定人参皂苷Rf含量不得低于0.2mg/g、人参皂苷Rb₁含量不得低于1.4mg/g、人参皂苷Rb₂含量不得低于0.8mg/g、人参皂苷Rb₃含量不得低于0.1mg/g、人参皂苷Rd含量不得低于0.6mg/g、人参皂苷Rg3含量不得低于0.6mg/g、人参皂苷F₂含量不得低于0.3mg/g和五味子醇甲含量不得低于0.1mg/g，并且总和含量不得低于4.0mg/g。凡是不在此范围均为不合格产品、假药或劣药，从而本发明中质量控制标准能够很好控制成品的质量，严格控制假药、劣药冒充本发明所述的中药粉针。本发明的质量控制方法还可以严格监控整个生产流程。如果样品含量值不在本发明的范围，从而确定该批样品为不合格产品，防止流入市场。同时还可以寻找是否是药材或工艺生产流程不稳定带来的影响，从而节约成本，避免较大的经济损失。本发明的含量测定方法能够将八种成分同时完全检测出，该方法操作简单，节省时间，而且避免使用大量有毒试剂，更适用于产业化的日常检验，减少环境污染。

附图说明

图1八种成分对照品HPLC图谱

图2注射用益气复脉(冻干)样品HPLC图谱

图3人参皂苷Rb₁标准曲线图

图4人参皂苷Rf标准曲线图

图5人参皂苷Rb₂标准曲线图

图6人参皂苷Rb₃标准曲线图

图7人参皂苷Rd标准曲线图

图8五味子醇甲标准曲线图

图9人参皂苷F₂标准曲线图

图10人参皂苷Rg₃标准曲线图

其中，1人参皂苷Rf  2人参皂苷Rb₁  3人参皂苷Rb₂  4人参皂苷Rb₃5人参皂苷Rd  6五味子醇甲  7人参皂苷F₂  8人参皂苷Rg3  X人参皂苷Rg₁和ReY人参皂苷Rg₂  Z人参皂苷Rh₁  K人参皂苷Rc

具体实施方法

下面结合具体实施方式进一步说明本发明，该实施方式仅用于说明本发明而对本发明并没有限制。

实施例1

红参1份  麦冬3份  五味子1.5份

取上述重量份配比的三味药材，红参用乙醇回流提取三次，第一、二次分别为3小时，第三次2小时，合并提取液，减压回收乙醇至无醇味，加水至约500ml，冷置，分离除去上层油，水层滤过，减压浓缩至相对密度为1.15～1.20(50℃)，70℃减压干燥，得注射用红参提取物；麦冬、五味子分别加水煎煮三次，第一次1小时，第二、三次分别为45分钟、30分钟，合并提取液，分别减压浓缩至相对密度为1.15～1.20(50℃)、1.16～1.21(50℃)，加乙醇至含醇量为75％，放置，滤过，滤液分别减压浓缩至相对密度为1.25～1.30(50℃)、1.18～1.23(50℃)，分别再加乙醇至含醇量为85％，放置，滤过，加40％氢氧化钠溶液调节pH值分别为9、7，放置，滤过，麦冬滤液加稀盐酸调pH值为6.5～7.0，分别减压回收乙醇至相对密度为1.15～1.20、1.25～1.35(50℃)，70℃减压干燥，分别得注射用麦冬、注射用五味子提取物。

将注射用红参提取物加注射用水500ml溶解，滤过，滤液加0.5％活性炭加热煮沸5分钟，滤过，滤液加40％氢氧化钠溶液调pH值为6.5～7.0；注射用麦冬、五味子提取物分别加注射用水750ml、500ml溶解，滤过，滤液用40％氢氧化钠溶液调pH值为6.5～7.0；合并上述三种溶液，加入葡甲胺13g，100℃加热1小时，冷置，滤过，滤液加甘露醇390g，搅拌，溶解，加注射用水至总体积，测pH值，以微孔滤膜(0.22μm)滤过，灌装于10ml西林瓶中，冷冻干燥，压塞、加盖，制成1000瓶，即得。每瓶0.65g。

实施例2含量测定方法

1仪器与材料

1.1仪器Waters2695型高效液相色谱单元，配Waters2996型二极管阵列检测器(美国WATERS公司)；XS105型十万分之一电子分析天平(瑞士METTLER公司)Milli-Q超纯水处理系统。

1.2材料人参皂苷Rf，Rb₁，Rb₂，Rb₃，Rd，五味子醇甲，F₂对照品(供含量测定用，中国药品生物制品检定所提供)；注射用益气复脉(冻干)样品为实施例一；乙腈为色谱纯；磷酸为分析纯；水为高纯水。

2实验方法

2.1色谱条件色谱柱：Waters Symmetry C₁₈柱(4.6mm×250mm，5阳)，流动相：0.05％磷酸-乙腈组成，按表1中的梯度比例进行梯度洗脱；检测波长：203nm；流速：1.0mL·min^-1；柱温：30℃；进样量：10μL。在此色谱条件下，所测成分与其他成分色谱峰均达到基线分离。结果见附图1、2。

表1、HPLC梯度洗脱程序

2.2对照品混合溶液的制备取人参皂苷Rf、Rb₁、Rb₂、Rb₃、Rd、五味子醇甲、人参皂苷F₂和Rg3对照品适量，精密称定，加50％甲醇制成每1mL分别含人参皂苷Rf 36.8μg、Rb₁282.4μg、Rb₂151.2μg、Rb₃16.3μg、Rd 81.8μg、五味子醇甲21.4μg、F₂40μg和Rg₃100μg的混合溶液，作为对照品混合溶液。

2.3供试品溶液的制备取注射用益气复脉(冻干)约1.2g，精密称定，置烧杯中，用水10mL溶解，上已处理好的商品柱(Cleanert^TMSPE，柱内径1.2cm，填料2cm)，流速约1.0mL·min^-1，弃去流出液，待流至树脂层液面时，以0.5mol·L^-1NaOH甲醇-水(2∶8)5mL分两次冲洗(糖类及色素类杂质被洗脱下来)后，继以用20％甲醇冲洗(除去碱液)后，最后以甲醇洗脱，洗脱液收集于10mL量瓶中至刻度，摇匀，过0.45μm膜，即可进HPLC。

2.4测定法分别精密吸取上述对照品和供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，计算样品的含量，即得。

3、测定结果

测定了10批注射用益气复脉(冻干)样品中人参皂苷Rf等7种皂苷类成分及五味子醇甲的含量，结果见表2。

表2样品含量测定结果(单位：mg·g^-1)

实施例3

取五味子0.5份，红参0.5份，麦冬6份按照实施例1制备方法制备得制剂，按照实施例2的含量测定方法测定人参皂苷Rf含量0.35mg/g、人参皂苷Rb₁含量1.4mg/g、人参皂苷Rb₂含量0.8mg/g、人参皂苷Rb₃含量0.12mg/g、人参皂苷Rd含量1.0mg/g、人参皂苷Rg3含量0.6mg/g、人参皂苷F₂含量0.3mg/g和五味子醇甲含量0.1mg/g。

实施例4

取五味子3份、红参2份、麦冬1.5份按照实施例1制备方法制备得到中药粉针制剂，按照实施例2的含量测定方法测定得到人参皂苷Rf含量0.54mg/g、人参皂苷Rb₁含量3.424mg/g、人参皂苷Rb₂含量2.0mg/g、人参皂苷Rb₃含量0.30mg/g、人参皂苷Rd含量1.25mg/g、人参皂苷Rg3含量1.0mg/g、人参皂苷F₂含量0.46mg/g和五味子醇甲含量0.3mg/g。

实施例5

对照品溶液的制备，按照实施例2中的制备方法。

供试品制备：取实施例1中药粉针约12g，精密称定，置烧杯中，用水10mL溶解，上已处理好的AR-18柱子，流速约1.0mL·min^-1，弃去流出液，待流至树脂层液面时，以1.0mol·L^-1NaOH甲醇-水(0.5∶9.5)5mL分两次冲洗(糖类及色素类杂质被洗脱下来)后，继以用20％甲醇冲洗(除去碱液)后，最后以甲醇洗脱，洗脱液收集于10mL量瓶中至刻度，摇匀，过0.45μm膜，即可进HPLC。

测定：人参皂苷Rf含量0.25mg/g、人参皂苷Rb₁含量1.47mg/g、人参皂苷Rb₂含量0.84mg/g、人参皂苷Rb₃含量0.14mg/g、人参皂苷Rd含量0.64mg/g、人参皂苷Rg3含量0.74mg/g、人参皂苷F₂含量0.32mg/g和五味子醇甲含量0.16mg/g。

实施例6

对照品溶液的制备，按照实施例2中的制备方法。

供试品制备：取实施例1中药粉针约12g，精密称定，置烧杯中，用水10mL溶解，上已处理好的D-101柱子，流速约1.0mL·min^-1，弃去流出液，待流至树脂层液面时，以0.5mol·L^-1NaHCO3甲醇-水(0.5∶9.5)5mL分两次冲洗(糖类及色素类杂质被洗脱下来)后，继以用20％甲醇冲洗(除去碱液)后，最后以甲醇洗脱，洗脱液收集于10mL量瓶中至刻度，摇匀，过0.45μm膜，即可进HPLC。

测定：人参皂苷Rf含量0.30mg/g、人参皂苷Rb₁含量2.7mg/g、人参皂苷Rb₂含量1.3mg/g、人参皂苷Rb₃含量0.2mg/g、人参皂苷Rd含量0.6mg/g、人参皂苷Rg3含量0.8mg/g、人参皂苷F₂含量0.4mg/g和五味子醇甲含量0.15mg/g。

Claims (17)

1.一种中药冻干粉针，是由下述重量份的原料药组成：五味子0.5～3份、红参0.5～2份、麦冬1.5～6份：所述的粉针中主要活性成分含量的总和不得低于4.0mg/g，所述活性成分包括人参皂苷Rf、Rb₁、Rb₂、Rb₃、Rd、Rg3、F₂和五味子醇甲。

2.如权利要求1所述的中药粉针，其特征在于：所述的粉针是由下述重量份的原料药组成：五味子1.5份、红参1份、麦冬3份。

3.如权利要求1所述的一种粉针，其特征在于：所述的人参皂苷Rf含量不得低于0.2mg/g。

4.如权利要求1所述的一种粉针，其特征在于：所述的人参皂苷Rb₁含量不得低于1.4mg/g。

5.如权利要求1所述的一种粉针，其特征在于：所述的人参皂苷Rb₂含量不得低于0.8mg/g。

6.如权利要求1所述的一种粉针，其特征在于：所述的人参皂苷Rb₃含量不得低于0.1mg/g。

7.如权利要求1所述的一种粉针，其特征在于：所述的人参皂苷Rd含量不得低于0.6mg/g。

8.如权利要求1所述的一种粉针，其特征在于：所述的人参皂苷Rg3含量不得低于0.6mg/g。

9.如权利要求1所述的一种粉针，其特征在于：所述的人参皂苷F₂含量不得低于0.3mg/g。

10.如权利要求1所述的一种粉针，其特征在于：所述的五味子醇甲含量不得低于0.1mg/g。

11.权利要求1～10任一项所述的一种粉针，其特征在于：所述的主要活性成分含量是通过以下步骤得到：

(1)色谱条件：C₁₈色谱柱，流动相由弱酸-乙腈或弱酸-甲醇组成，梯度洗脱，检测波长为203nm，流速为0.8-1.2ml/min。

(2)对照品溶液制备：取人参皂苷Rf、Rb₁、Rb₂、Rb₃、Rd、Rg3、F₂和五味子醇甲对照品，用30-80％甲醇或甲醇溶解即得。

(3)供试品溶液制备：取冻干粉针，水溶解后，上树脂柱用碱水洗脱，洗脱液弃去，再用含水甲醇洗脱，收集洗脱液即可。

12.如权利要求11所述的粉针，其特征在于：所述的步骤(1)中流动相采用0.02-1.0％磷酸-乙腈按照下表梯度洗脱。

13.如权利要求11所述的粉针，其特征在于：所述的步骤(3)中碱水为NaOH甲醇-水溶液。

14.权利要求1-13任一项所述的中药粉针的质量控制方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)质量标准制定：制定下述主要活性成分含量人参皂苷Rf、Rb₁、Rb₂、Rb₃、Rd、Rg3、F₂和五味子醇甲，其总和不得低于4.0mg/g。

(2)产品活性成分含量测定：通过高效液相色谱法同时测定人参皂苷Rf、Rb₁、Rb₂、Rb₃、Rd、Rg3、F₂、五味子醇甲，即得含量测定值；

(3)产品含量测定值与质量标准比较，判断是否达到预先设定的标准，以此控制产品质量。

15.如权利要求14所述的质量控制标准，其特征在于：所述的步骤(1)中人参皂苷Rf含量不得低于0.2mg/g、人参皂苷Rb₁含量不得低于1.4mg/g、人参皂苷Rb₂含量不得低于0.8mg/g、人参皂苷Rb₃含量不得低于0.1mg/g、人参皂苷Rd含量不得低于0.6mg/g、人参皂苷Rg3含量不得低于0.6mg/g、人参皂苷F₂含量不得低于0.3mg/g和五味子醇甲含量不得低于0.1mg/g。

16.如权利要求14所述的质量控制标准，其特征在于，所述的步骤(2)中的含量测定方法包括以下步骤：

a、对照品的制备：分别取人参皂苷Rf、Rb₁、Rb₂、Rb₃、Rd、Rg3、F₂和五味子醇甲对照品，用30-80％甲醇或甲醇溶解即得；

b、供试品溶液的制备：取待测样品适量，水溶液上色谱柱，用碱水洗脱，弃去，再用含水甲醇洗脱，收集洗脱液即得；

c、高效液相色谱测定：精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得，所述的高效液相色谱条件采用0.02-1.0％磷酸-乙腈梯度洗脱。

17.如权利要求14或16中所述的质量控制方法，其特征在于：所述的梯度洗脱程序为

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