CN103582637B - 酪氨酸激酶抑制剂 - Google Patents

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Abstract

本申请公开了根据通式(I)的化合物，其中所有变量如本文中所述定义，所述化合物抑制Btk。本文公开的化合物可以用于调节Btk的活性和治疗与过度Btk活性相关的疾病。所述化合物还可以用于治疗与异常B细胞增殖相关的炎性和自身免疫疾病如类风湿性关节炎。还公开了含有式I化合物和至少一种载体、稀释剂或赋形剂的组合物。

Description

酪氨酸激酶抑制剂
发明领域
本发明涉及抑制Btk并且可以用于治疗由异常B-细胞活化导致的自身免疫疾病和炎性疾病的新型化合物的用途。
发明背景
蛋白质激酶组成人类酶的最大家族之一并且通过添加磷酸基团到蛋白质上来调节许多不同的信号传导过程(T.Hunter，Cell198750：823-829)。特别地，酪氨酸激酶磷酸化蛋白质在酪氨酸残基的酚部分。酪氨酸激酶家族包括控制细胞生长、迁移和分化的成员。异常的激酶活性已经涉及许多人类疾病，包括癌症、自身免疫病症和炎性疾病。由于蛋白质激酶属于细胞信号传导的关键调节剂，它们提供用小分子激酶抑制剂来调节细胞功能的目标，并且因此成为了良好的药物设计靶标。除了激酶介导的疾病过程的治疗，激酶活性的选择性和有效抑制剂还可用于研究细胞信号传导过程和鉴定其他具有治疗意义的细胞靶标。
关于B细胞在自身免疫和／或炎性疾病的发病机制中的关键作用存在良好的证据。消耗B细胞的基于蛋白质的治疗剂如Rituxan针对自身抗体导致的炎性疾病如类风湿性关节炎是有效的(Rastetter等人Annu Rev Med200455：477)。因此，在B-细胞活化中发挥作用的蛋白质激酶的抑制剂应该是对于B细胞介导的疾病病理如自身抗体生成的有用的治疗剂。
通过B-细胞受体(BCR)的信号传导控制一系列B细胞应答，包括增殖和分化到成熟的抗体生成细胞。BCR是B-细胞活性的关键调节点并且异常的信号传导可以导致失调的B-细胞增殖和病原性自身抗体的形成，其导致多种自身免疫疾病和／或炎性疾病。酪氨酸蛋白激酶(Btk)是在BCR的膜近端和紧接下游的非-BCR相关的激酶。Btk的缺乏已经显示阻断BCR信 号传导，并且因此Btk的抑制可以是阻断B细胞介导的疾病过程的有效治疗方法。
Btk是酪氨酸激酶Tec家族的成员，并且显示是早期B细胞形成以及成熟B细胞活化和存活的关键调节剂(Khan等人Immunity19953：283；Ellmeier等人J.Exp.Med.2000192：1611)。人中的Btk突变导致病症x染色体连锁性无γ球蛋白血症(XLA)(Rosen等人New Eng.J.Med.1995333：431和Lindvall等人Immunol. Rev.2005203：200中综述)。这些患者是免疫受损的，并且显示受损的B细胞成熟，降低的免疫球蛋白和外周B细胞水平，减少的不依赖T细胞的免疫应答以及在BCR刺激后的减弱的钙动员。
关于Btk在自身免疫病症和炎性疾病中的作用的证据已经由Btk-缺陷型小鼠模型提供。在系统性红斑狼疮(SLE)的临床前鼠模型中，Btk缺陷型小鼠显示疾病进展的显著改善。此外，Btk-缺陷型小鼠对胶原诱导的关节炎具有抗性(Jansson和Holmdahl Clin.Exp.Immunol.199394：459)。已经证明选择性Btk抑制剂在小鼠关节炎模型中的剂量依赖性功效(Z.Pan等人，Chem.Med Chem.20072：58-61)。
Btk还由除了B-细胞之外可能涉及疾病过程的细胞表达。例如，Btk由肥大细胞表达并且Btk缺陷型骨髓来源的肥大细胞显示受损的抗原诱导的脱粒(Iwaki等人J.Bi0l.Chem.2005280：40261)。这显示Btk可以用于治疗病理性肥大细胞反应如变态反应和哮喘。此外，其中缺乏Btk活性的来自XLA患者的单核细胞显示在刺激后减少的TNFα生成(Horwood等人JExp Med197：1603，2003)。因此，TNFα介导的炎症可以由小分子Btk抑制剂调节。此外，已经报道Btk在细胞凋亡中发挥作用(Islam和Smith Immunol.Rev.2000178：49)，并且因此Btk抑制剂对于治疗某些B-细胞淋巴瘤和白血病将是有效的(Feldhahn等人J.Exp.Med.2005201：1837)。
发明概述
本申请提供式I的Btk抑制剂化合物，它的使用方法，如本文下面所述：
本申请提供式I的化合物，
其中：
是单键或双键；
A是5-元杂芳基或5，6-元双环杂芳基，其中CONH2连接5-元杂芳基，它们各自任选地被一个或多个A’取代；
A’是-NHR或R4；
[0017] R是H、-R1、-R1-R2-R3、-R1-R3或-R2-R3；
[0018] R1是芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基或与杂环烷基稠合的杂芳基，它们各自任选地被一个或多个R1’或R1”取代；
R1’各自独立地是卤素、硝基、氰基、低级烷基磺酰氨基、-S(O)2或氧代；
R1”各自独立地是低级烷基、环烷基、杂环烷基、低级烷氧基、氨基或酰氨基，它们各自任选地被一个或多个R1”’取代；
R1”’各自独立地是羟基、卤素、氨基、烷基氨基、二烷基氨基或杂环烷基；
R2是-C(＝O)、-C(＝O)O、-C(＝O)NR2’、-NHC(＝O)O、-C(R2’)2、-O、-C(＝NH)NR2’或-S(＝O)2；
R2’各自独立地是H或低级烷基；
R3是H或R4；
R4是低级烷基、低级卤代烷基、低级烷氧基、氨基、低级烷基氨基、低级二烷基氨基、芳基、芳基烷基、烷基芳基、杂芳基、烷基杂芳基、杂芳基烷基、环烷基、烷基环烷基、环烷基烷基、杂环烷基、烷基杂环烷基、杂环烷基烷基、双环环烷基、双环杂环烷基、螺环烷基或螺杂环烷基，它们各自任选地被一个或多个低级烷基、卤素、低级烷基氨基、低级二烷基氨基、羟基、羟基低级烷基、低级烷氧基、卤素、硝基、氨基、酰氨基、酰基、氰基、氧代、胍基、羟基氨基、羧基、氨基甲酰基、氨基甲酸酯、卤代低级烷氧基或卤代低级烷基取代，其中两个低级烷基可以一起形成环；
Q是CH或N；
X是CH、N或N(X’)；
X’是低级烷基；
Y0是H、卤素或低级烷基；
Y1是Y1a、Y1b、Y1c或Y1d；
Y1a是H或卤素；
Y1b是低级烷基，其任选地被一个或多个选自低级卤代烷基、卤素、羟基、氨基、氰基和低级烷氧基的取代基取代；
Y1c是低级环烷基，其任选地被一个或多个选自低级烷基、低级卤代烷基、卤素、羟基、氨基、氰基和低级烷氧基的取代基取代；
Y1d是氨基，其任选地被一个或多个低级烷基、烷氧基低级烷基或羟基低级烷基取代；
Y2是H、卤素或低级烷基；
Y3是H、卤素、低级烷基、低级卤代烷基、低级烷氧基或低级羟基烷基；且
Y4是H、低级烷基或低级羟基烷基；
或其药学可接受的盐。
本申请提供了治疗炎性疾病和／或自身免病症的方法，包括对有此需要的患者施用治疗有效量的式I化合物。
本申请提供了药物组合物，其包含式I的化合物与至少一种药学可接受的载体、赋形剂或稀释剂。
发明详述
定义
如本文使用的，短语“一(a)”或“一(an)”种实体是指一种或多种该实体；例如，一种化合物指一种或多种化合物或至少一种化合物。因此，术语“一种(a)”(或“一种(an)”)，“一种或多种”和“至少一种”可以在本文中可交换使用。
短语“如上文定义”是指如说明书概述或最宽权利要求中提供的每个基团的最宽定义。在下面提供的所有的其他实施方案中，可以在每个实施方案中存在并且没有明确定义的取代基保留在发明概述中提供的最宽定义。
如在此说明书中使用的，不管在过渡性短语中或在权利要求的主体中，术语″包含″和″包括″应当被解释为具有开放式的含义。即，该术语应当被解释为与短语″至少具有″或″至少包括″同义。当在方法的上下文中使用时，术语″包含″是指该方法至少包括所述的步骤，但是可以包括另外的步骤。当在化合物或组合物的上下文中使用时，术语″包含″是指该化合物或组合物至少包括所述的特征或组分，但是还可以包括另外的特征或组分。
如本文中所用的，除非另外具体指出，单词″或″的使用是“和／或”的“包括”意思，而不是“或／或”的“排它”意思。
本文中使用的术语″独立地″是指变量被用于任何一种情况，而不考虑在相同的化合物内存在或不存在具有相同或不同定义的变量。因此，在其中R″出现两次并且被定义为″独立地为碳或氮″的化合物中，两个R″可以是碳，两个R″可以是氮，或者一个R″可以是碳并且另一个是氮。
在描绘或描述本发明中采用的或要求保护的化合物的任何部分或式中，任何变量出现多于一次时，其在每一次出现时的定义独立于其在每一 次另外出现时的定义。此外，取代基和／或变量的组合只有在这些化合物导致稳定的化合物的情况下才是允许的。
在键末端处的符号″*″或划过键的″------″分别是指官能团或其他化学部分与其作为一部分的分子的余下部分的连接点。因此，例如：
MeC(=O)OR4其中
划入环体系中的键(与在明确的顶点处连接相反的)是指该键可以连接到任何适宜的环原子。
如本文中所用的术语“任选的”或“任选地”是指随后描述的事件或情形可以、但不是必须发生，并且是指该描述包括事件或情形发生的情况，和它不发生的情况。例如，“任选取代的”是指任选取代的部分可以结合氢原子或取代基。
短语“任选的键”是指该键可以存在或可以不存在，并且是指该描述包括单键、双键或叁键。如果取代基被指定为是″键″或″不存在″，则连接到该取代基上的原子直接连接。
本文使用的术语″约″是指大致地、在...的附近、粗略地或大约。当术语″约″与一个数值范围一起使用时，它通过将边界延伸高于和低于所列出的数值而改变该范围。通常，本文使用的术语″约″将数值改变到高于和低于所述的值20％的方差。
式I的某些化合物可以显示出互变异构现象。互变异构的化合物可以以两种或更多种可以相互转化的物种存在。质子转移的互变异构体由共价结合的氢原子在两个原子之间的迁移得到。互变异构体通常存在着平衡并且分离单个互变异构体的尝试通常制备出其化学和物理性质与化合物的混合物一致的混合物。平衡的位置取决于在分子内的化学特征。例如，在许多脂族醛和酮如乙醛的情况下，酮形式占优势，而在酚类中，烯醇形式占优势常见的质子转移的互变异构体包括酮／烯醇 酰胺／亚氨酸和脒 互变异构体。后两种在杂芳基和杂环中是特别常见的，并且本发明包括化合物的所有互变异构形式。
本文使用的技术和科学术语具有本发明所属技术领域内的技术人员所通常理解的含义，除非另外定义。本文参考本领域技术人员已知的各种方法和材料。列出药理学的通用原理的标准参考作品包括Goodman和Gilman′s The Pharmacological Basis of Therapeutics，第10版，McGraw Hill Companies Inc.，New York(2001)。可以将本领域技术人员已知的任何适宜材料和／或方法用于实施本发明。但是，描述的是优选的材料和方法。在下面的说明和实施例中涉及的材料、试剂等可获自商业来源，除非另外指出。
本文所述的定义可以被附加以形成化学上相关的组合，如“杂烷基芳基”、“卤代烷基杂芳基”、“芳基烷基杂环基”、“烷基羰基”、“烷氧基烷基”等。当术语“烷基”被用作另一个术语之后的后缀时，如在“苯基烷基”或“羟基烷基”中时，它意在表示如上定义的烷基，其被一至两个选自所述的另外具体标名的基团的取代基取代。因此，例如“苯基烷基”是指具有1至2个苯基取代基的烷基，并且因此包括苄基、苯基乙基和联苯。“烷基氨基烷基”是具有1至2个烷基氨基取代基的烷基。“羟基烷基″包括2-羟基乙基、2-羟基丙基、1-(羟甲基)-2-甲基丙基、2-羟基丁基、2,3-二羟基丁基、2-(羟甲基)、3-羟基丙基等。因而，如本文中所用的，术语“羟基烷基”用来定义下面定义的杂烷基的子集。术语-(芳)烷基是指未取代的烷基或芳烷基。术语(杂(hetero))芳基或(杂(het))芳基是指芳基或杂芳基。
如本文中所用的术语“螺环烷基”是指螺环的环烷基，诸如，例如，螺[3.3]庚烷。如本文中所用的术语螺杂环烷基是指螺环的杂环烷基，诸如，例如，2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷。
如本文中所用的术语“酰基”表示式-C(=O)R的基团，其中R是氢或如本文中定义的低级烷基。如本文中所用的术语″烷基羰基″表示式-C(＝O)R的基团，其中R是如本文中定义的烷基。术语C1-6酰基是指基团-C(＝O)R含1-6个碳原子。如本文中所用的术语″芳基羰基″表示式C(＝O)R的 基团，其中R是芳基；如本文中所用的术语″苯甲酰基″是其中R是苯基的″芳基羰基″。
如本文中所用的术语“酯”表示式-C(=O)OR的基团，其中R是如本文所定义的低级烷基。
如本文中所用的术语“烷基”表示含有1至10个碳原子的非支链或支链的饱和一价烃残基。术语“低级烷基”表示含有1至6个碳原子的直链或支链烃残基。如本文中所用的″C1-10烷基″是指由1至10个碳构成的烷基。烷基的实例包括，但不限于，低级烷基包括甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基或戊基、异戊基、新戊基、己基、庚基和辛基。
当术语“烷基”被用作另一个术语之后的后缀时，如在“苯基烷基”或“羟基烷基”中时，它意在表示如上定义的烷基，其被一至两个选自所述的另外具体标名的基团的取代基取代。因此，例如“苯基烷基”表示基团R′R″-，其中R′是苯基，并且R″是如本文中定义的亚烷基，其中理解的是苯基烷基部分的连接点将在亚烷基上。芳基烷基的实例包括但是不限于苄基、苯基乙基、3-苯基丙基。术语“芳基烷基”或″芳烷基″被类似地解释，不同之处在于R′是芳基。术语″(杂)芳基烷基″或″(杂)芳烷基″被类似地解释，不同之处在于R′任选是芳基或杂芳基。
术语“卤代烷基”或“卤代-低级烷基”或“低级卤代烷基”是指含1至6个碳原子的直链或支链烃残基，其中一个或多个碳原子被一个或多个卤原子取代。
如本文中所用的术语″亚烷基(alkylene或alkyleny1)″表示1至10个碳原子的二价饱和直链烃基(例如(CH2)n)或2至10个碳原子的支链饱和二价烃基(例如-CHMe-或-CH2CH(i-Pr)CH2-)，除非另外指出。除了在亚甲基的情况下之外，亚烷基的开放价态不连接到相同的原子上。亚烷基的实例包括但是不限于：亚甲基、亚乙基、亚丙基、2-甲基-亚丙基、1，1-二甲基-亚乙基、亚丁基、2-乙基亚丁基。
如本文中所用的术语″烷氧基″表示-O-烷基，其中烷基如上定义，诸如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、 戊氧基、己氧基，包括它们的异构体。如本文中所用的″低级烷氧基″表示具有如上面定义的″低级烷基″基团的烷氧基。如本文中所用的″C1-10烷氧基″是指-O-烷基，其中烷基是C1-10。
术语“PCy3”是指被三个环状部分三取代的膦。
术语“卤代烷氧基”或“卤代-低级烷氧基”或“低级卤代烷氧基”是指低级烷氧基，其中一个或多个碳原子被一个或多个卤原子取代。
如本文中所用的术语″羟基烷基″表示如本文中定义的烷基，其中在不同碳原子上的1至3个氢原子被羟基替代。
如本文中所用的术语″烷基磺酰基″和″芳基磺酰基″是指式-S(＝O)2R的基团，其中R分别是烷基或芳基，并且烷基和芳基如本文中定义。如本文中所用的术语“杂烷基磺酰基”表示式-S(=O)2R的基团，其中R是如本文中定义的“杂烷基”。
如本文中所用的术语″烷基磺酰氨基″和″芳基磺酰氨基″是指式-NR′S(=O)2R的基团，其中R分别是烷基或芳基，R′是氢或C1-3烷基，并且烷基和芳基如本文中所定义。
如本文中所用的术语“环烷基”是指含有3至8个碳原子的饱和碳环，即环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基或环辛基。如本文中所用的″C3-7环烷基″或“低级烷基”是指由在碳环中的3至7个碳构成的环烷基。
如本文中所用的术语羧基-烷基是指烷基部分，其中一个氢原子已经被羧基替代，其中应理解，杂烷基的连接点是通过碳原子。术语“羧基(carboxy 或carboxyl)”是指-CO2H部分。
如本文中所用的术语″杂芳基”或″杂芳族″是指5至12个环原子的单环或双环基团，其具有至少一个芳族或部分不饱和的环，每个环含有4至8个原子，结合有一个或多个N、O或S杂原子，其余环原子是碳，其中理解的是杂芳基的连接点将在芳族或部分不饱和的环上。如本领域中技术人员周知的，杂芳基环比它们的全碳副本具有更低的芳族特性。因此，对于本发明而言，杂芳基只需要具有一定程度的芳族特性。杂芳基部分的实例包括具有5至6个环原子和1至3个杂原子的单环芳族杂环，包括但不 限于吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、噁嗪基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噁唑基、4,5-二氢-噁唑基、5，6-二氢-4H-[1，3]噁唑基、异噁唑、噻唑、异噻唑、三唑啉、噻二唑和噁二唑啉(oxadiaxoline)，它们可以任选被1个或多个，优选1或2个取代基取代，所述的取代基选自羟基、氰基、烷基、烷氧基、硫代、低级卤代烷氧基、烷硫基、卤素、低级卤代烷基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、卤素、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、氨基烷基、烷基氨基烷基和二烷基氨基烷基、硝基、烷氧基羰基和氨基甲酰基、烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、芳基氨基甲酰基、烷基羰基氨基和芳基羰基氨基。双环部分的实例包括但不限于喹啉基、异喹啉基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噁唑、苯并异噁唑、苯并噻唑、萘啶基、5,6,7,8-四氢-[1，6]萘啶基和苯并异噻唑。双环部分可以在任一环上任选取代，但是连接点在含有杂原子的环上。
如本文中所用的术语″杂环基″、″″杂环烷基″或″杂环″表示由一个或多个环，优选1至2个环(包括螺环系统)组成的一价饱和环状基团，每个环3至8个原子，其结合有一个或多个环杂原子(选自N、O或S(O)0-2)，并且其可以任选独立地被一个或多个，优选1个或2个取代基取代，所述的取代基选自羟基、氧代、氰基、低级烷基、低级烷氧基、低级卤代烷氧基、烷硫基、卤素、低级卤代烷基、羟基烷基、硝基、烷氧基羰基、氨基、烷基氨基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、烷基氨基磺酰基、芳基氨基磺酰基、烷基磺酰基氨基、芳基磺酰基氨基、烷基氨基羰基、芳基氨基羰基、烷基羰基氨基、芳基羰基氨基及其离子形式，除非另外指出。杂环基的实例包括但不限于吗啉基、哌嗪基、哌啶基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基、六氢氮杂基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、噁唑烷基、噻唑烷基、异噁唑烷基、四氢吡喃基、硫代吗啉基、奎宁环基和咪唑啉基及其离子形式。实例还可以是双环的，诸如，例如，3，8-二氮杂-双环[3.2.1]辛烷、2,5-二氮杂-双环[2.2.2]辛烷或八氢-吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪。
Btk抑制剂
本申请提供了式I的化合物，
其中：
是单键或双键；
A是5-元杂芳基或5，6-元双环杂芳基，其中CONH2连接5-元杂芳基，它们各自任选地被一个或多个A’取代；
A’是-NHR或R4；
[0082] R是H、-R1、-R1-R2-R3、-R1-R3或-R2-R3；
[0083] R1是芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基或与杂环烷基稠合的杂芳基，它们各自任选地被一个或多个R1’或R1”取代；
R1’各自独立地是卤素、硝基、氰基、低级烷基磺酰氨基、-S(O)2或氧代；
R1”各自独立地是低级烷基、环烷基、杂环烷基、低级烷氧基、氨基或酰氨基，它们各自任选地被一个或多个R1”’取代；
R1”’各自独立地是羟基、卤素、氨基、烷基氨基、二烷基氨基或杂环烷基；
R2是-C(＝O)、-C(＝O)O、-C(＝O)NR2’、-NHC(＝O)O、-C(R2’)2、-O、-C(＝NH)NR2’或-S(＝O)2；
R2’各自独立地是H或低级烷基；
R3是H或R4；
R4是低级烷基，低级卤代烷基、低级烷氧基、氨基、低级 烷基氨基、低级二烷基氨基、芳基、芳基烷基、烷基芳基、杂芳基、烷基杂芳基、杂芳基烷基、环烷基、烷基环烷基、环烷基烷基、杂环烷基、烷基杂环烷基、杂环烷基烷基、双环环烷基、双环杂环烷基、螺环烷基或螺杂环烷基，它们各自任选地被一个或多个低级烷基、卤素、低级烷基氨基、低级二烷基氨基、羟基、羟基低级烷基、低级烷氧基、卤素、硝基、氨基、酰氨基、酰基、氰基、氧代、胍基、羟基氨基、羧基、氨基甲酰基、氨基甲酸酯、卤代低级烷氧基或卤代低级烷基取代，其中两个低级烷基可以一起形成环；
Q是CH或N；
X是CH、N或N(X’)；
X’是低级烷基；
Y0是H、卤素或低级烷基；
Y1是Y1a、Y1b、Y1c或Y1d；
Y1a是H或卤素；
Y1b是低级烷基，其任选地被一个或多个选自低级卤代烷基、卤素、羟基、氨基、氰基和低级烷氧基的取代基取代；
Y1c是低级环烷基，其任选地被一个或多个选自低级烷基、低级卤代烷基、卤素、羟基、氨基、氰基和低级烷氧基的取代基取代；
Y1d是氨基，其任选地被一个或多个低级烷基、烷氧基低级烷基或羟基低级烷基取代；
Y2是H、卤素或低级烷基；
Y3是H、卤素、低级烷基、低级卤代烷基、低级烷氧基或低级羟基烷基；且
Y4是H、低级烷基或低级羟基烷基；
或其药学可接受的盐。
本申请提供了式I化合物，其中X是N。
本申请提供了式I化合物，其中Q是CH。
本申请提供了式I化合物，其中Y1是Y1a。
本申请提供了式I化合物，其中Y1a是H。
本申请提供了式I化合物，其中Y1是低级烷基或低级环烷基。
本申请提供了式I化合物，其中Y1是叔丁基、异丙基、环丙基或异丙腈。
本申请提供了式I化合物，其中Y1是叔丁基。 
本申请提供了式I化合物，其中X是N，Y1是叔丁基或环丙基。
本申请提供了式I化合物，其中Y2是H。
本申请提供了式I化合物，其中Y3是H或卤素。
本申请提供了式I化合物，其中Y3是H或F。
本申请提供了式I化合物，其中Y0是H，Y2是H，Y3是F或H，Y4是羟基甲基。
本申请提供了式I化合物，其中Q是CH，X是N，且是双键。
本申请提供了式I化合物，其中A是呋喃基、咪唑基、噻唑基、吡咯基、吡唑基、苯基、吲哚基、吡咯并[2，3-b]吡啶基或噁唑基。
本申请提供了式I化合物，其中Y1是叔丁基或环丙基。
本申请提供了式I化合物，其中Y3是F。
本申请提供了式I化合物，其中Y3是H或F，X是N。
本申请提供了式I化合物，其中Y3是H或F，Y1是叔丁基或环丙基。
本申请提供了式I化合物，其中Y3是H或F，X是N，Y1是叔丁基或环丙基。
本申请提供了式I化合物，其中Y4是低级羟基烷基。
本申请提供了式I化合物，其中Y4是羟基甲基。 
本申请提供了式I化合物，其中A是任选地被一个或多个A’取代的呋喃基。
本申请提供了式I化合物，其中Y3是H或F，X是N，Y1是叔丁基或环丙基，A是任选地被一个或多个A’取代的呋喃基。
本申请提供了式I化合物，其中A是任选地被一个或多个A’取代的咪唑基。
本申请提供了式I化合物，其中Y3是H或F，X是N，Y1是叔丁基或环丙基，A是任选地被一个或多个A’取代的咪唑基。
本申请提供了式I化合物，其中A是任选地被一个或多个A’取代的噻唑基。
本申请提供了式I化合物，其中Y3是H或F，X是N，Y1是叔丁基或异丙基，A是任选地被一个或多个A’取代的噻唑基。
本申请提供了式I化合物，其中A是任选地被一个或多个A’取代的吡咯基。
本申请提供了式I化合物，其中Y3是H或F，X是N，Y1是叔丁基或异丙基，A是任选地被一个或多个A’取代的吡咯基。
本申请提供了式I化合物，其中A是任选地被一个或多个A’取代的吡唑基。
本申请提供了式I化合物，其中Y3是H或F，X是N，Y1是叔丁基或异丙基，A是任选地被一个或多个A’取代的吡唑基。
本申请提供了式I化合物，其中A任选地被一个或多个A’取代。
本申请提供了式I化合物，其中Y3是H或F，X是N，Y1是叔丁基或异丙基，A是任选地被一个或多个A’取代的苯基。
本申请提供了式I化合物，其中A是任选地被一个或多个A’取代的吲哚基。
本申请提供了式I化合物，其中Y3是H或F，X是N，Y1是叔丁基或异丙基，A是任选地被一个或多个A’取代的吲哚基。
本申请提供了式I化合物，其中A是任选地被一个或多个A’取代的吡咯并[2，3-b]吡啶基。
本申请提供了式I化合物，其中Y3是H或F，X是N，Y1是叔丁基或异丙基，A是任选地被一个或多个A’取代的吡咯并[2，3-b]吡啶基。
本申请提供了式I化合物，其中A是任选地被一个或多个A’取代的噁唑基。
本申请提供了式I的化合物，其中Y3是H或F，X是N，Y1是叔丁基或异丙基，A是任选地被一个或多个A’取代的噁唑基。
本申请提供了式I化合物，其中Y3是羟基甲基。 
本申请提供了式I化合物，其中Y3是羟基甲基，X是N，Y1是叔丁基或异丙基。
本申请提供了选自如下的式I化合物：
4-[3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-1-甲基-1H-咪唑-2-甲酰胺；
2-[3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-噻唑-4-甲酰胺；
4-[3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-1H-吡咯-2-甲酰胺；
4-[3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺；
5-[3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺；
2-[3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-4-甲基-噁唑-5-甲酰胺；
2-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-噻唑-4-甲酰胺；
4-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-1-甲基-1H-咪唑-2-甲酰胺；
4-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺；
5-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-呋喃-2-甲酰胺；
4-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-呋喃-2-甲酰胺；
4-[3-(6-叔丁基-8-羟基甲基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺；
4-[3-(6-环丙基-8-氟-1-氧代-1H-异喹啉-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺；
4-[3-(6-叔丁基-3-甲基-1-氧代-3，4-二氢-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺；
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲酰胺；
4-[2-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-3-羟基甲基-吡啶-4-基]-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺；
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-1H-吲哚-3-甲酰胺；
1-[3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-1H-吲哚-3-甲酰胺；
1-[3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-[4-(吗啉-4-羰基)-苯基氨基]-1H-吡唑-4-甲酰胺；
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-[4-(吗啉-4-羰基)-苯基氨基]-1H-吡唑-4-甲酰胺；
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-苯基]-3-[4-(吗啉-4-羰基)-苯基氨基]-1H-吡唑-4-甲酰胺；
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-[4-(1-羟基-1-甲基-乙基)-苯基氨基]-1H-吡唑-4-甲酰胺；
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-(5-氯-吡啶-2-基氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺；
3-[5-(2-氮杂环丁烷-1-基-1，1-二甲基-乙氧基)-吡啶-2-基氨基]-1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-1H-吡唑-4-甲酰胺；
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-(5-甲基-4，5，6，7-四氢-吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺；
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-(吡啶-2-基氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺；
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-(4-甲磺酰基-苯基氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺；
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-(1-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺；
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-(吡嗪-2-基氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺；
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-(5-氟-吡啶-2-基氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺；
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-(1，5-二甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺；
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-(5-三氟甲基-吡啶-2-基氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺；
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-(5-甲基-吡啶-2-基氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺；
1-[3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-(1，5-二甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺；
1-[3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-(5-氟-吡啶-2-基氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺；
1-[3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-(吡嗪-2-基氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺；
1-[3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-(5-甲基-吡啶-2-基氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺；
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-(5-甲磺酰基-吡啶-2-基氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺；
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-(5-氰基-吡啶-2-基氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺；
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-1H-吡唑-3-甲酰胺；
1-[3-(6-叔[基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-1H-吡唑-4-甲酰胺；
7-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-甲酰胺；
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲酰胺；
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-6-吗啉-4-基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲酰胺；
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-6-(6-乙氧基-吡啶-3-基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲酰胺；
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-6-(2-氟-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲酰胺；
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-6-(2-氯-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲酰胺；
6-溴-1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲酰胺；
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-6-(1，2-二羟基-乙基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲酰胺；
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-6-(1，1-二氧代-1λ6-硫吗啉-4-基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲酰胺；
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-6-(2-二甲基氨基-乙基氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲酰胺；
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-6-二甲基氨基甲基-1H-比咯并[2，3-b]吡啶-3-甲酰胺；
3-(4-乙酰基-苯基氨基)-1-[3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-1H-吡唑-4-甲酰胺；
1-[3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-(吡啶-2-基氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺；
1-[3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-(5-二甲基氨基甲基-吡啶-2-基氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺；和
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-苯基]-1H-吡唑-4-甲酰胺。
本申请提供了式I化合物作为治疗活性物质的用途。
本申请提供了式I化合物在治疗炎性疾病和／或自身免疫病症中的用途。
本申请提供了式I化合物在治疗炎性病症中的用途。
本申请提供了式I化合物在治疗类风湿性关节炎或哮喘中的用途。
本申请提供了式I化合物，用于治疗炎性病症和／或自身免疫病症。
本申请提供了式I化合物，用于治疗炎性病症。
本申请提供了式I化合物，用于治疗类风湿性关节炎或哮喘。
本申请提供了治疗炎性病症和／或自身免疫病症的方法，包括对有此需要的患者施用治疗有效量的式I化合物。
本申请提供了治疗炎性病症的方法，包括对有此需要的患者施用治疗有效量的式I化合物。
本申请提供了治疗类风湿性关节炎的方法，包括对有此需要的患者施用治疗有效量的式I化合物。
本申请提供了治疗哮喘的方法，包括对有此需要的患者施用治疗有效量的式I化合物。
本申请提供了药物组合物，其包含式I的化合物与至少一种药学可接受的载体、赋形剂或稀释剂。
本申请提供了式I的化合物在制备用于治疗炎性病症的药物中的用途。
本申请提供了式I化合物在制备用于治疗自身免疫障碍的药物中的用途。
本申请提供了式I化合物在制备用于治疗炎性病症和／或自身免疫障碍的药物中的用途。
本申请提供了式I化合物在制备用于治疗类风湿性关节炎或哮喘的药物中的用途。
本申请提供了如本文所述的化合物、方法或组合物。
化合物和制备
在下面的表中提供由本发明包含并且在本发明范围内的代表性化合物的实例。提供下面的这些实施例和制备以使本领域的技术人员能够更清楚地理解并且实践本发明。它们不应当被认为是限制本发明的范围，而仅为示例性的并且是其代表。
通常，本申请中使用的命名法基于AUTONOMTM v.4.0，一种用于产生IUPAC系统命名的Beilstein Institute计算机化的系统。如果在画出的结构和给出该结构的名称之间有差异，则画出的结构将给予更大的权重。此外，如果结构或结构的一部分的立体化学没有用例如粗体或虚线指示，则所述结构或结构的一部分将解释为包含其全部立体异构体。
表I描述了式I的哒嗪酮化合物的实例：
表I.
合成：一般合成方案
如方案1中所述，溴-取代的5元杂环芳香甲酰胺(1)可以由相应的酯或羧酸通过使用氨的酰胺形成制备。在结构(1)中，X可以是NH、NR、O或S，其中R可以是低级烷基，例如甲基。在结构(1)中，Y可以是CH或被低级烷基例如甲基取代的碳或氮原子。在结构(2)中，Z可以是氮或CH，R可以是单-或二-取代物。取代基可以是氟、氯、烷基、取代的烷基或环烷基。(2)的制备如文献(US2010／0222325)中所述。在钯催化的偶合条件下(US2010／0222325)，化合物(1)与(2)偶合可以得到化合物(3)，可以将其水解成期望的化合物(4)。
或者，可以根据方案(2)制备5-元甲酰胺(4)。溴-取代的5元杂环芳香甲酰胺(1)可以由相应的酯或羧酸通过使用氨的酰胺形成制备。在结构(1)中，X可以是NH、NR、O或S，其中R可以是低级烷基，例如甲基。在结构(1)中，Y可以是CH或被低级烷基例如甲基取代的碳或氮原子。可以通过在钯催化的硼酸芳基酯形成条件下与双-频哪酸硼烷反应将溴-取代的5元杂环芳香甲酰胺(1)转化成相应的频哪酸硼酸酯(5)(US2010／0222325)。在结构(6)中，Z可以是氮或CH，R可以是单-或二-取代物。取代基可以是氟、氯、烷基、取代的烷基或环烷基。化合物(6)的制备如方案9中所述。可以使芳基溴(6)与5-元杂芳香硼酸酯(5)在钯催化的偶合条件下偶合(US2010／0222325)，得到期望的化合物(4)。
5-元杂环甲酰胺可以与芳香环稠合，得到如方案3中所示的双环杂芳香甲酰胺。吲哚或氮杂-吲哚衍生物(7)可以在钯催化的偶合条件下与芳基硼酸（8)偶合，根据文献中类似的条件得到芳基-取代的吲哚或氮杂-吲哚（9)(Tretrahedron Letters2009，50，15-18)。芳基硼酸(8)的制备如方案9中所述。在结构(7)中，X可以是CH或氮，Y可以是烷基、被杂原子取代的烷基或杂环。在结构(8)中，R可以是单-或二-取代物。取代基可以是氟、氯、烷基、取代的烷基或环烷基。在结构(8)中，Z可以是氮或CH。可以在中性条件下，在钯催化的存在下水解化合物(9)上的氰基(Journal of Organic Chemistry2004，69，2327-2331)，得到相应的甲酰胺(10)。
或者，可以根据方案4制备甲酰胺(10)。在结构(7)中，X可以是CH或氮，Y可以是烷基、被杂原子取代的烷基或杂环。在碱性条件下，例如叔丁醇钾，化合物(7)通过亲核芳香取代反应与芳基氟(11)反应，得到化合物(12)，其中化合物(11)上的卤素可以是溴或碘原子。在碘化亚铜的存在下用(13)处理化合物(12)(US2010／0222325)可以得到化合物(14)。化合物(13)的制备描述在文献中(US2010／0222325)，其中R可以是单-或二-取代物。取代基可以是氟、氯、烷基、取代的烷基或环烷基。在结构(13)中，Z可以是氮或CH。可以通过使用还原试剂例如硼氢化钠将化合物(14)上的醛基还原成醇。可以在中性条件下，在钯催化的存在下水解化合物(14)上的氰基(Journal of Organic Chemistry2004，69，2327-2331)，得到相应的甲酰胺(10)。
就这样的化合物而言，其中5-元杂芳香甲酰胺是氨基吡唑甲酰胺，制备描述在方案5中。可以使商购的氨基吡唑腈(15)与三氟硼酸钾盐(16)在醋酸铜的存在下反应，得到化合物(17)。就在(15)转化成(17)过程中N-芳基化的混合区域异构体而言，可以在超临界流体色谱(SFC)条件下分离期望的化合物(17)。在结构(16)中，R1可以是氢、烷基和乙酰氧基。在结构(16)中，R可以是单-或二-取代物。取代基可以是氟、氯、烷基、取代的烷基或环烷基，Z可以是氮或碳。化合物(16)的制备描述在方案10中。化合物(17) 与芳基卤例如芳基溴在钯催化条件下的N-芳基化反应可以得到化合物(18)，其中X和Y可以是CH或X和Y之一可以是氮。芳基卤上的R2基团可以是二烷基氨基羰基、氨基烷基、杂环烷基、甲基磺酰基、单-或二-羟基取代的烷基。(17)转化成(18)中的芳基卤反应剂不限于6-元芳香卤化物且它可以是5-元芳香卤化物或与杂环稠合的5-元芳香卤化物。水解(18)上的氰基可以得到期望的甲酰胺(19)。
制备包含氨基吡唑部分的5-元芳香甲酰胺的可选途径描述在方案6中。在碱例如氢化钠的存在下用三甲基甲硅烷基乙氧基亚甲基氯(SEM-Cl)保护化合物(15)上的NH基团可以得到两种区域异构体。可以分离这两种区域异构体，得到(20)。在钯催化的存在下用芳基卤使(20)的N-芳基化可以得到化合物(21)，其中X和Y可以是CH或X和Y之一可以是氮。芳基卤上的基团可以是二烷基氨基羰基、氨基烷基、杂环烷基、甲基磺酰基、单-或二-羟基取代的烷基。(20)转化成(21)中的芳基卤反应剂不限于6-元芳 香卤化物且它可以是5-元芳香卤化物或与杂环稠合的5-元芳香卤化物。可以在酸性条件下例如稀盐酸或碱性条件下例如氟化四丁基铵使(21)上的SEM基团脱保护，得到化合物(22)。在碱例如叔丁醇钾的存在下用2-氟-6-碘苯甲醛处理化合物(22)可以得到化合物(23)。在Cu(I)催化条件下，例如碘化亚铜，可以用化合物(13)使化合物(23)N-芳基化，得到化合物(24)，其中化合物(24)上的Z和R1与化合物(13)上的Z和R具有相同的定义。还原化合物(24)上的醛，然后进行腈水解可以得到期望的甲酰胺(25)。
制备包含氨基吡唑部分的5-元芳香甲酰胺的可选途径描述在方案7中。可以根据文献方法(WO2005／005414)将商购的化合物(15)转化成相应的碘化物(26)。根据文献方法(WO2005／005414)用SEM-Cl保护(26)上的NH基团可以得到化合物(27)。可以在钯催化剂例如双(三-叔丁膦)钯(0)的存在下使化合物(27)与芳基胺反应，得到N-芳基化产物(28)，其中芳基可以是杂芳香部分，且芳基可以被二烷基氨基羰基、氨基烷基、杂环烷基、甲基磺酰基、单-或二-羟基取代的烷基取代。可以在酸性条件下例如稀盐酸或 碱性条件下例如氟化四丁基铵使(28)上的SEM基团脱保护，得到化合物(29)。在Cu(II)催化例如醋酸铜的存在下用三氟硼酸钾(16)处理化合物(29)可以得到化合物(30)，其中化合物(16)上的R和R1基团如方案5中所定义。水解化合物(30)上的氰基可以得到期望的甲酰胺(31)。
在方案7中的(29)转化成(30)的过程中，可以通过纯化混合的区域异构体得到期望的N-芳基化产物的区域异构体。
或者，可以根据方案8制备期望的氨基吡唑衍生物。可以在碘化亚铜的存在下用化合物(13)处理R1-取代的2,6-二溴苯得到化合物(32)。在钯催化条件下用化合物(32)使商购腙(33)N-芳基化，然后在酸性条件下水解，可以得到肼(34)。可以通过使用类似的文献方法(Journal of Organic Chemistry2005，70，9222)用商购化合物(35)处理化合物(34)，得到期望的氨基吡唑(36)。可以如方案5中制备化合物(18)所述用芳基卤使化合物(36)N-芳基化。在化合物(30)上进行腈水解可以得到期望的甲酰胺(31)。
所需的硼酸芳基酯(2)、芳基硼酸(8)和中间体(6)的制备描述在方案9中。化合物(37)可以在碘化亚铜的存在被化合物(13)取代，得到N-芳基化产物(38)。在弱碱性条件下水解(38)可以得到期望的羟基衍生物(6)。可以通过使用双(频哪酸)硼烷在钯催化条件下将(38)转化成(2)。水解硼酸酯(2)可以得到硼酸(8)。
最终，所需的三氟硼酸钾盐(16)的制备描述在方案10中。在碘化亚铜的存在下用芳基溴(39)使化合物(13)N-芳基化可以得到化合物(40)，其中R 可以是单-或二-取代物。可以通过使用双(频哪酸)硼烷在钯催化下将(40)转化成(41)。可以根据文献方法(Tetrahedron Letters 2005，46，7899)将硼酸频哪醇酯(41)转化成相应的三氟硼酸盐(16)。
药物组合物和施用
可以以广泛种类的口服施用剂型和载体配制本发明的化合物。口服施用可以是片剂、包衣片剂、糖衣丸、硬和软明胶胶囊、溶液、乳剂、糖浆或混悬剂的形式。在其他施用途径中，当由包括持续(静脉内滴注)局部肠胃外、肌内、静脉内、皮下、透皮(其可以包含渗透增强剂)、含服、经鼻、吸入和栓剂施用的其他施用途径施用时，本发明的化合物是有效的。优选的施用方式通常是使用常规日服剂量方案进行口服，所述日服剂量方案可以根据痛苦的程度和患者对活性成分的反应进行调节。
本发明的一种化合物或多种化合物以及它们的药用盐，与一种或多种常用赋形剂，载体或稀释剂一起可以被置于药物组合物和单位剂量的形式中。药物组合物和单位剂型可以包括常规比例的常用的成分，存在另外的活性化合物或要素，或不存在另外的活性化合物或要素，并且所述单位剂型可以包含与所意欲使用的日剂量范围相当的任何适合的有效量的活性成分。所述药物组合物可以以固体如片剂或填充胶囊、半固体、粉末剂、持续释放制剂或液体如溶液、混悬剂、乳剂、酏剂或填充胶囊使用，进行口服应用；或以用于直肠或阴道施用的栓剂形式使用；或以用于肠胃外使用的无菌可注射溶液的形式使用。典型的制剂包含约5％到约95％的一种活性化合物或多种活性化合物(w／w)。术语“制剂”或“剂型”意欲包括活性化合物的固体和液体制剂并且本领域的技术人员将理解活性成分可以根据靶器官或组织并且根据需要的剂量和药物代谢动力学参数而以不同制剂存在。
术语“赋形剂”用于本文时指用于制备药物组合物的、通常是安全无毒并且没有生物学上或其他方面不适宜的化合物，并且包括可用于兽医使用以及人药物应用的赋形剂。本发明的化合物可以单独施用，但是通常与一 种或多种根据意欲施用的途径和标准的药物实践选择的适合的药物赋形剂、稀释剂或载体混合施用。
“药学可接受的”是指其可以用于制备通常安全、无毒并且在生物学上和其他方面都没有不适宜的药物组合物，并且包括其对于兽医以及人类药物用途是可接受的。
活性成分的“药学可接受的盐”形式也可以在开始赋予活性成分需要的药物代谢动力学性质，所述药物代谢动力学性质在非盐形式中是缺乏的，并且就其体内治疗活性而论，可能甚至正面影响活性成分的药效学。短语化合物的“药学可接受的盐”指药物学上可接受的并且具有母体化合物的需要的药理活性的盐。所述盐包括：(1)酸加成盐，与无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等形成；或与有机酸如乙酸、丙酸、己酸、环戊烷丙酸、羟基乙酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、3-(4-羟基苯甲酰)苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、1，2-乙二磺酸、2-羟基乙磺酸、苯磺酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟脑磺酸、4-甲基二环[2.2.2]-辛-2-烯-1-羧酸、葡糖庚酸、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、月桂基硫酸、葡萄糖酸、谷氨酸、羟基萘甲酸、水杨酸、硬脂酸、粘康酸等形成；或(2)当在母体化合物中存在的酸质子被金属离子例如碱金属离子、碱土离子或铝离子替换时形成的盐；或与有机碱如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨丁三醇、N-甲基葡糖胺等配位形成的盐。
固体形式制剂包括粉末、片剂、丸剂、胶囊、扁囊剂、栓剂和可分散的颗粒。固体载体可以是一种或多种物质，其也可以充当稀释剂、调味剂、增溶剂、润滑剂、悬浮剂、粘合剂、防腐剂、片剂崩解剂或包封材料。在粉末中，所述载体通常是细碎固体，其是与细碎活性成分的混合物。在片剂中，活性成分通常与具有必要的结合能力的载体以适合比例混合，并且被压制成需要的形状和大小。适合的载体包括但不限于碳酸镁、硬脂酸镁、滑石、糖、乳糖、果胶、糊精、淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低熔点蜡、可可脂等。除了活性成分之外，固体形式的制剂 可以包含着色剂、香料、稳定剂、缓冲剂、人工和天然的甜味剂、分散剂、增稠剂、溶解剂等。
液体制剂也适合于口服施用，包括液体制剂，包括乳剂、糖浆、酏剂、水溶液、水性混悬剂。这些包括意欲在即将使用前转化为液体形式制剂的固体形式制剂。乳剂可以以溶液形式例如以丙二醇水溶液的形式制备或可以包含乳化剂，如卵磷脂、去水山梨糖醇单油酸酯或阿拉伯胶。可以通过将活性成分溶解在水中并加入适合的着色剂、香料、稳定剂和增稠剂来制备水溶液。可以通过将细碎的活性成分与粘性物质如天然或合成的树胶、树脂、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠及其他的熟知的悬浮剂一起分散在水中来制备水性混悬剂。
本发明的化合物可以配制用于肠胃外施用(例如通过注射例如推注，或连续输注)并且可以以单位剂型在安瓿、预装注射器、小体积的输注液中或在多剂量容器中与加入的防腐剂一起存在。所述组合物可以采用这样的形式，如在油性或水性赋形剂中的混悬剂、溶液或乳剂形式，例如在水性聚乙二醇中的溶液。油性或非水性载体、稀释剂、溶剂或赋形剂的实例包括丙二醇、聚乙二醇、植物油(例如橄榄油)和可注射有机酯(例如油酸乙酯)，并且可以包含配制剂如防腐剂、湿润剂、乳化剂或悬浮剂、稳定剂和／或分散剂。备选地，所述活性成分可以以粉末形式存在，所述粉末通过无菌分离灭菌固体获得或通过从溶液中冻干获得，其在使用前用适合的赋形剂例如无菌的无热原的水进行重构。
可以配制本发明的化合物，作为软膏、乳膏或洗剂，或作为透皮贴片用于给表皮的局部施用。软膏和乳膏例如可以用水性或油性基质，在加入适宜的增稠剂和／或胶凝剂的情况下配制。洗剂可以用水性或油性基质配制，并且通常也将含有一种或多种乳化剂、稳定剂、分散剂、悬浮剂、增稠剂或着色剂。适宜于口中局部施用的制剂包括：锭剂，其在调味基质中包含活性成分，所述的调味基质通常是蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶；软锭剂，其在惰性基质中包含活性成分，所述的惰性基质如明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯胶；以及漱口药，其在适宜液体载体中包含活性成分。
可以将本发明的化合物配制作为栓剂施用。首先将低熔点蜡，如脂肪酸甘油酯或可可脂的混合物融化，并且例如通过搅拌均匀分散活性成分。接着，将融化的均匀混合物倾入适宜尺寸的模具中，使其冷却并且固化。
可以将本发明的化合物配制用于阴道施用。阴道栓剂、棉球、乳膏剂、凝胶、糊剂、泡沫或喷雾剂除了活性成分外，还包含如本领域已知是合适的载体。
可以配制本发明的化合物用于经鼻施用。由常规装置例如用滴管、吸管或喷雾器将溶液剂或混悬剂直接应用至鼻腔。制剂可以以单剂量或多剂量形式提供。在滴管或吸管的后一种情况下，这可以通过患者施用适宜的、预定体积的溶液剂或混悬剂来实现。在喷雾器的情况下，这可以通过例如计量的雾化喷雾泵来实现。
可以配制本发明的化合物用于气雾剂施用，特别是对呼吸道施用，并且包括鼻内施用。该化合物通常具有小的粒子大小，例如约五(5)微米或更小。这样的粒子大小可以通过本领域中已知的方式获得，例如通过微粉化获得。将活性成分提供在具有适宜推进剂的加压容器中，所述的推进剂如氯氟烃(CFC)，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷或二氯四氟乙烷，或二氧化碳或其他适宜的气体。气雾剂还可以方便地含有表面活性剂如卵磷脂。药物的剂量可以通过计量阀来控制。备选地，活性成分可以以干粉的形式提供，例如化合物在适宜粉末基质中的粉末混合物，所述的粉末基质如乳糖、淀粉、淀粉衍生物如羟丙基甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。粉末载体将在鼻腔中形成凝胶。粉末组合物可以以单位剂量形式存在，例如在如明胶的胶囊或药筒中，或泡眼包装中，这些包装中的粉末剂可以通过吸入器施用。
当需要时，可以用适合于活性成分的持续或控制释放施用的肠溶衣制备制剂。例如，本发明的化合物可以在透皮或皮下药物递送装置中配制。当所述化合物的持续释放是需要的时并且当患者顺应治疗方案是重要的时，这些递送系统是有利的。在透皮递送系统中的化合物经常附着于皮肤粘附性固体支持物。目的化合物还可以与渗透增强剂例如月桂氮酮(1-十 二烷基氮杂-环庚-2-酮)组合。将持续释放递送系统通过外科手术或注射皮下插入皮下层。皮下植入物在脂溶性膜例如硅橡胶或可生物降解的聚合物例如聚乳酸(polyactic acid)中包封化合物。
在雷明顿：药物科学和实践(Remington：The Science和Practice of Pharmacy 1995，由E.W.Martin编辑，Mack出版公司，第19版，Easton，宾夕法尼亚州)中描述了适合的制剂以及药物载体、稀释剂和赋形剂。有经验的制剂科学家可以在本发明说明书教导的范围内改变制剂以提供多种制剂，其用于施用的具体途径，而不使本发明的组合物不稳定或有损它们的治疗活性。
使本发明的化合物在水或其他赋形剂中的溶解度增高的它们的修饰，例如可以容易地通过较小的修饰实现(形成盐，酯化等)，这都在本领域普通技能的范围内。也在本领域普通技能范围内的是，改变施用途径和具体化合物的剂量方案从而使本发明化合物的药物代谢动力学在患者中获得最大的有益效果。
用于本文时，术语″″治疗有效量″是指减轻个体中的疾病的症状所需要的量。将在每个具体病例中，根据个体需要调整剂量。取决于多种因素，该剂量可以在广泛范围内改变，所述因素如待治疗的疾病的严重性，患者的年龄和一般健康状况，治疗患者的其他药物，施用的途径和形式，和涉及的执业医生的偏好和经验。对于口服施用，在每天约0.01-约1000mg／kg体重之间的日剂量应该在单一治疗和／或组合治疗情况中是适合的。优选的日剂量在每天约0.1-约500mg／kg体重之间，更优选在每天0.1-约100mg／kg体重之间，最优选在每天1.0-约10mg／kg体重／天之间。因此，对于给70kg的人施用，剂量范围是约7mg-0.7g／天。日剂量可以以单一剂量或以分剂量进行施用，典型地在1-5个剂量／天。一般而言，用比化合物的最佳剂量少的较小剂量开始治疗。随后，通过小增量增加剂量直到达到个体患者的最佳效果。治疗本文所述疾病的本领域普通技术人员能够不经过过度实验和根据个人的知识经验和本申请的公开内容来确定本发明化合物对于给定疾病和患者的治疗有效量。
药物制剂优选为单位剂量形式。在这种形式下，将制剂再分成含有适宜量的活性成分的单位剂量。单位剂量形式可以是包装制剂，该包装含有离散量的制剂，如小包片剂、胶囊和在管瓶或安瓿中的粉剂。此外，单位剂量形式可以是胶囊、片剂、扁囊剂或锭剂本身，或者它可以是适宜数量的包装形式的这些中的任何一种。
适应症和治疗方法
式I化合物抑制酪氨酸激酶(Btk)。用上游激酶活化Btk导致磷酸酶-Cγ活化，由此刺激促炎介体释放。并入了1-氧代-1H-酞嗪-2-基侧链的式I化合物与带有其他侧链的类似物相比显示令人意外的增强的抑制活性。值得注意地，在不饱和侧链上的氟取代在人全血中的效力产生了令人意外的约5-10-倍增加。苯环上的羟基甲基取代与在该位置上带有可选的取代的类似物相比进一步提供了令人意外的增加的效力。式I化合物用于治疗关节炎和其他抗炎和自身免疫疾病。式I化合物由此用于治疗关节炎。式I化合物用于抑制细胞中的Btk并且调节B-细胞发育。本发明还包含药物组合物，其包含式I化合物与药学可接受的载体、赋形剂或稀释剂。
本文描述的主要甲酰胺衍生物是激酶抑制剂，特别是Btk抑制剂。这些抑制剂可以用于治疗哺乳动物中的一种或多种响应激酶抑制的疾病，包括响应Btk抑制和／或B-细胞增殖的抑制的疾病。不希望束缚于任何特定的理论，相信本发明化合物与Btk的相互作用导致Btk活性的抑制，并因此得到这些化合物药学应用。因此，本发明包括用于治疗具有响应Btk活性的抑制和／或抑制B-细胞增殖的疾病的哺乳动物，例如人的方法，该方法包 括：向具有这样的疾病的哺乳动物施用有效量的至少一种在本文中提供的化学实体。可以在实验上例如通过测定化合物的血液浓度，或理论上通过计算生物利用度，确定有效浓度。除了Btk之外，还可能受到影响的其他激酶包括但不限于，其他酪氨酸激酶和丝氨酸/苏氨酸激酶。
激酶在控制基本细胞过程如增殖、分化和死亡(细胞凋亡)的信号传导路径方面起着显著的作用。异常的激酶活性已经暗示于各种疾病中，所述的疾病包括多种癌症、自身免疫和／或炎性疾病和急性炎性反应。激酶在关键细胞信号传导路径中的多面性作用提供识别靶向激酶和信号传导路径的新药物的显著机会。
一个实施方案包括治疗具有自身免疫和／或炎性疾病或响应Btk活性和／或B细胞增殖的抑制的急性炎性反应的患者的方法。
使用根据本发明的化合物和组合物可以影响的自身免疫和／或炎性疾病包括但不限于：银屑病、变态反应、克罗恩病、肠易激综合征、舍格伦病、组织移植物排斥反应和移植器官的超急性排斥反应、哮喘、系统性红斑狼疮(和相关的肾小球肾炎)、皮肌炎、多发性硬化、硬皮病、血管炎(ANCA-相关的和其他的血管炎)、自身免疫溶血性和血小板减少性症状、古德帕斯综合征(和相关的肾小球肾炎和肺出血)、动脉粥样硬化、类风湿性关节炎、慢性的特发性血小板减少性紫癜(ITP)、艾迪生病、帕金森病、阿尔茨海默病、糖尿病、脓毒性休克和重症肌无力。
本文中包括的是治疗方法，其中将本文中提供的至少一种化学实体与抗炎药组合施用。抗炎药包括但不限于：NSAID、非特异性和COX-2特异性环氧合酶酶抑制剂、金化合物、皮质类固醇类、甲氨蝶呤、肿瘤坏死因子受体(TNF)受体拮抗剂、免疫抑制剂和甲氨蝶呤。
NSAID的实例包括但不限于，布洛芬、氟比洛芬、萘普生和萘普生钠、双氯芬酸、双氯芬酸钠和米索前列醇的组合、舒林酸、奥沙普秦、二氟尼柳、吡罗昔康、吲哚美辛、依托度酸、非诺洛芬钙、酮洛芬、萘丁美酮钠、柳氮磺吡啶、托美丁钠和羟氯喹。NSAID的实例还包括COX-2特异性抑制剂如塞来考昔、伐地考昔、芦米考昔和／或艾托考昔。
在一些实施方案中，抗炎药是水杨酸酯或盐。水杨酸酯或盐包括但不限于乙酰基水杨酸或阿斯匹林、水杨酸钠以及水杨酸胆碱和水杨酸镁。
抗炎药还可以是皮质类固醇类。例如，皮质类固醇类可以是可的松、地塞米松、甲泼尼龙、泼尼松龙、泼尼松龙磷酸钠或泼尼松。
在另外的实施方案中，抗炎药是金化合物如硫代苹果酸金钠或金诺芬。
本发明还包括其中抗炎药是代谢抑制剂如二氢叶酸还原酶抑制剂如甲氨蝶呤或二氢乳清酸盐脱氢酶抑制剂如来氟米特的实施方案。
本发明的其他实施方案涉及其中至少一种抗炎化合物是抗-C5单克隆抗体(如依库珠单抗或培克珠单抗)、TNF拮抗剂如依那西普(entanercept)或英利昔单抗的组合，所述英利昔单抗是一种抗-TNFα单克隆抗体。
本发明的再其他的实施方案涉及其中至少一种活性药是免疫抑制剂化合物如选自甲氨蝶呤、来氟米特、环胞素、他克莫司、硫唑嘌呤和吗替麦考酚酯中的免疫抑制剂化合物的组合。
表达BTK的B-细胞和B-细胞前体已经暗示于B细胞恶性的病理学中，B细胞恶性包括但不限于B细胞淋巴瘤、淋巴瘤(包括何杰金和非何杰金淋巴瘤)、毛细胞淋巴瘤、多发性骨髓瘤、慢性和急性髓细胞源性白血病和慢性和急性淋巴细胞白血病。
已经表明BTK是在B-系淋巴样细胞中Fas／APO-1(CD-95)死亡诱导信号传导复合物(DISC)的抑制剂。白血病／淋巴瘤细胞的命运可能在于由DISC活化的半胱天冬蛋白酶的反向前细胞凋亡作用和包括BTK和／或其底物的上游抗细胞凋亡调节机理之间的平衡(Vassilev等人，J.Biol. Chem.1998，274，1646-1656)。
还发现BTK抑制剂可以用作化学敏化剂，因此可以用于与其他化学治疗药组合，所述的化学治疗药特别是诱导细胞凋亡的药。可以与化学敏化BTK抑制剂组合使用的其他化学治疗药的实例包括拓扑异构酶I抑制剂(喜树碱或托泊替康)、拓扑异构酶II抑制剂(如道诺霉素和依托泊苷)、烷化剂（如环磷酰胺、美法仑和BCNU)、微管蛋白导向的药剂(如泰素和长春碱)和生物制剂(例如抗体如抗CD20抗体、IDEC8、免疫毒素和细胞因子)。
Btk活性还与一些表达由部分染色体9和22的易位导致的bcr-abl融合基因的白血病相关。这种异常通常在慢性髓细胞源性白血病中观察到。Btk本质上由bcr-abl激酶磷酸化，这引发在bcr-abl细胞中防止细胞凋亡的下游生存信号(N.Feldhahn等人J.Exp.Med.2005201(11)：1837-1852)。
治疗方法
本申请提供了治疗炎性病症和／或自身免疫病症的方法，包括对有此需要的患者施用治疗有效量的式I化合物。
本申请提供了治疗炎性病症的方法，包括对有此需要的患者施用治疗有效量的式I化合物。
本申请提供了治疗类风湿性关节炎的方法，包括对有此需要的患者施用治疗有效量的式I化合物。
本申请提供了治疗哮喘的方法，包括对有此需要的患者施用治疗有效量的式I。
本申请提供了治疗炎性病症和／或自身免疫病症的方法，包括对有此需要的患者施用治疗有效量的式I的Btk抑制剂化合物。
本申请提供了治疗炎性病症的方法，包括对有此需要的患者施用治疗有效量的式I化合物。
本申请提供了治疗关节炎的方法，包括对有此需要的患者施用治疗有效量的式I的Btk抑制剂化合物。
本申请提供了治疗哮喘的方法，包括对有此需要的患者施用治疗有效量的式I的Btk抑制剂化合物。
本申请提供了抑制B-细胞增殖的方法，包括对有此需要的患者施用治疗有效量的式I的Btk抑制剂化合物。
本申请提供了抑制Btk活性的方法，包括施用式I的任一种Btk抑制剂化合物，其中Btk抑制剂化合物在Btk活性的体外生化试验中显示50微摩尔或以下的IC50。
在上述方法的一种变化形式中，Btk抑制剂化合物在Btk活性的体外生化试验中显示100纳摩尔或以下的IC50。
在上述方法的另一种变化形式中，所述化合物在Btk活性的体外生化试验中显示10纳摩尔或以下的IC50。
本申请提供了治疗炎性病症的方法，包括对有此需要的患者共同施用治疗有效量的抗炎化合物与式I的Btk抑制剂化合物。
本申请提供了治疗关节炎的方法，包括对有此需要的患者共同施用治疗有效量的抗炎化合物与式I的Btk抑制剂化合物。
本申请提供了治疗淋巴瘤或BCR-ABL1+白血病细胞的方法，通过对有此需要的患者施用治疗有效量的式I的Btk抑制剂化合物来进行。
实施例
缩写
通常使用的缩写包括：乙酰基(Ac)，偶氮二异丁腈(AIBN)，大气压(Atm)，9-硼杂双环[3.3.1]壬烷(9-BBN或BBN)，2，2’-双(二苯基膦)-1，1’-联萘(BINAP)，叔丁氧羰基(Boc)，焦碳酸二叔丁酯(di-tert-butyl pyrocarbonate)或boc酸酐(BOC2O)，苄基(Bn)，丁基(Bu)，化学文摘登记号(CASRN)，苄氧羰基(CBZ或Z)，羰基二咪唑(CDI)，1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷(DABCO)，三氟化二乙氨基硫(DAST)，二亚苄基丙酮(dba)，1,5-二氮杂双环[4.3.0]壬-5-烯(DBN)，1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)，N,N′-二环己基碳二亚胺(DCC)，1,2-二氯乙烷(DCE)，二氯甲烷(DCM)，2,3-二氯-5,6-二氰基-1，4-苯并醌，偶氮二甲酸二乙酯(DEAD)，偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD)，氢化二异丁基铝(DIBAL或DIBAL-H)，二异丙基乙胺(DIPEA)，N,N-二甲基乙酰胺(DMA)，4-N,N-二甲基氨基吡啶(DMAP)，N,N-二甲基甲酰胺(DMF)，二甲亚砜(DMSO)，1，1′-双-(二苯基膦基)乙烷(dppe)，1，1′-双-(二苯基膦基)二茂铁(dppf)，1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)，2-乙氧基-1-乙氧基羰基-1,2-二氢喹啉(EEDQ)，乙基(Et)，乙酸乙酯(ea、EtOAc)，乙醇(EtOH)，2-乙氧基-2H- 喹啉-1-甲酸乙酯(EEDQ)，二乙醚(Et2O)，乙基异丙基醚(EtOiPr)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’N’-四甲基脲六氟磷酸盐乙酸(HATU)，乙酸(HOAc)，1-N-羟基苯并三唑(HOBt)，高压液相色谱(HPLC)，异丙醇（IPA)，氯化异丙基镁(iPrMgCl)，六甲基二硅氮化锂(lithium hexamethyl disilazane)(LiHMDS)，六甲基二甲硅基胺(HMDS)，液相色谱质谱(LCMS)，六甲基锂二甲硅基胺(LiHMDS)，间-氯过氧苯甲酸(m-CPBA)，甲醇(MeOH)，熔点(mp)，MeSO2-(甲磺酰基或Ms)，甲基(Me)，乙腈（MeCN)，间氯过苯甲酸(MCPBA)，质谱(ms)，甲基叔丁基醚(MTBE)，甲基四氢呋喃(MeTHF)、N-溴琥珀酰亚胺(NBS)，n-丁基锂(nBuLi)，N-羧基酸酐(NCA)，N-氯琥珀酰亚胺(NCS)，N-甲基吗啉(NMM)，N-甲基-吡咯烷酮(NMP)，氯铬酸吡啶(PCC)，二氯-((双-二苯基膦基)二茂铁基)钯(II)(Pd(dppf)Cl2)，醋酸钯(II)(Pd(OAc)2)，三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(Pd2(dba)3)，重铬酸吡啶(PDC)，苯基(Ph)，丙基(Pr)，异丙基(i-Pr)，磅／平方英寸(psi)，吡啶(pyr)，1，2，3，4，5-五苯基-1′-(二叔丁基膦基)二茂铁(Q-Phos)，室温(rt或RT)，仲丁基锂(sBuLi)，叔丁基二甲基甲硅烷基或t-BuMe2Si(TBDMS)，四正丁基氟化铵(TBAF)，三乙胺(TEA或Et3N)，2，2，6，6-四甲基哌啶1-氧基(TEMPO)，三甲基甲硅烷基乙氧基甲基(SEM)，三氟甲磺酸根或CF3SO2-(Tf)，三氟乙酸(TFA)，1，1′-双-2，2，6，6-四甲基庚烷-2，6-二酮(TMHD)，O-苯并三唑-1-基-N,N，N′，N′-四甲基脲四氟硼酸盐(TBTU)，薄层色谱(TLC)，四氢呋喃(THF)，三甲代甲硅烷基或Me3Si(TMS)，一水合对甲苯磺酸(TsOH或pTsOH)，4-Me-C6H4SO2-或甲苯磺酰基(Ts)，和N-氨基甲酸乙酯-N-羧基酸酐(UNCA)。当用于烷基部分时，包括前缀正(n)、异(i-)、仲(sec-)、叔(tert-)和新(neo)的常规命名法具有它们的惯用含义(J.Rigaudy和D.P.Klesney，Nomenclature in Organic Chemistry,IUPAC1979Pergamon Press，Oxford.)。
一般条件
可以从商购原料开始，通过使用一般合成技术和本领域技术人员公知 的方法制备本发明的化合物。下文概述了适合于制备这种化合物的反应方案。另外的典型可以在具体实施例中找到。
制备实施例 
4-溴-1-甲基-1H-咪唑-2-甲酰胺(中间体-1)
向1-甲基-1H-咪唑(2g，24.4mmol)在16mLDCM中的溶液中滴加4.4g的三氯乙酰基氯，将得到的混合物在25℃搅拌6h。将该混合物冷却至0℃，在搅拌下滴加3.4mL三乙胺。蒸发溶剂，通过闪蒸塔色谱法纯化残余物(石油醚／DCM=4／1)，得到2,2,2-三氯-1-(1-甲基-1H-咪唑-2-基)乙酮(3.1g，收率56％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.35(s，1H)，7.16(s，1H)，4.06(s，3H)。
在-10℃向2,2,2-三氯-1-(1-甲基-1H-咪唑-2-基)乙酮(1.5g，6.6mmol)在26mL无水THF中的溶液中加入2.35g NBS。将得到的混合物在-10℃搅拌2h，然后在25℃搅拌16h。蒸发该溶液，通过硅胶柱纯化残余物(DCM为洗脱液)，得到1-(-4-溴-1-甲基-1H-咪唑-2-基)-2,2,2-三氯乙酮(1.18g，收率58％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.15(s，1H)，4.05(s，3H)。
向1.18g的1-(-4-溴-1-甲基-1H-咪唑-2-基)-2,2,2-三氯乙酮在10mL甲醇中的溶液中加入42mg甲醇钠，将得到的混合物在25℃搅拌20min。TLC显示反应完成。蒸发该溶液，再溶于30mL的DCM，用水(15mLx2)和盐水(15mL)洗涤。用无水硫酸钠干燥该溶液，过滤。通过硅胶柱纯化残余物(DCM／MeOH=60／1)，得到4-溴-1-甲基-1H-咪唑-2-甲酸甲酯(0.575g，收率68％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.02(s，1H)，4.00(s，3H)，3.93(s，3H)。LC-MS计算值C6H7BrN2O2(m／e)217.97,测定值219和221[M+1]+.
向饱和的氨的MeOH溶液中加入165mg的4-溴-1-甲基-1H-咪唑-2-甲酸甲酯，将得到的混合物在20℃搅拌16h。蒸发该溶液，得到4-溴-1- 甲基-1H-咪唑-2-甲酰胺(154mg，收率100％)。LC-MS计算值C5H6BrN3O(m／e)202.97,测定值204和206[M+1]+。
2-溴噻唑-4-甲酰胺(中间体-2)
将2-溴噻唑-4-甲酸甲酯(50mg)溶于饱和氨的甲醇溶液(4ml)。将反应溶液在室温搅拌过夜。减压除去溶剂，得到2-溴噻唑-4-甲酰胺(46mg，收率100％)，为黄色固体。1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ8.11(s，1H)。LC-MS计算值C4H3BrN2OS(m／e)205.91，测定值207和209[M+1]+。
4-溴-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺(中间体-3)
将4-溴-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酸(122mg，0.60mmol)、HATU(274mg，0.72mmol)和DIEA(194mg，1.50mmol)溶于DMF(5mL)。将该反应混合物在室温通过与氨气连续起泡一起搅拌过夜。用100mL DCM稀释该反应混合物，然后用水(50mL)洗涤。用DCM(20mL×2)萃取水层。合并全部有机层，用硫酸钠干燥，过滤，浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物(石油醚／乙酸乙酯6／1)，得到4-溴-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺(56mg，收率46％)。 1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ6.74(d，J=1.8 Hz，1H)，6.59(d，J=1.8Hz，1H)，3.92(s，3H)。LC-MS计算值C6H7BrN2O(m／e)201.97，测定值203和205[M+1]+。
乙酸2-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-6-(4，4,5,5-四甲基-[1，3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-苄酯(中间体-4)
向2,6-二溴甲苯(55.5g，222.1mmol)和NBS(43.5g，244.3mmol)在四氯化碳(300mL)中的溶液中加入过氧化苯甲酰(5.37g，22.2mmol)。将该反应混合物回流20h，冷却至室温，用水(300mL×3)和盐水(300mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥。过滤该溶液，蒸发，得到1,3-二溴-2-溴甲基苯，为黄色粉末(71g)。将该物质不经进一步纯化用于下一步。
向1,3-二溴-2-溴甲基苯(71.3g)在DMF(300mL)中的溶液中加入乙酸钠(91.7g)，将得到的混合物在105℃搅拌6h。冷却该混合物，用水(1500mL)猝灭，用乙酸乙酯(1000mL×2)萃取。用水(1000mL)和盐水(1000mL)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤。通过硅胶柱纯化残余物(200-300目，用石油醚／乙酸乙酯30／1洗脱)，得到乙酸2,6-二溴苄酯，为黄色油状物(59.42g，收率89％)。1HNMR(300MHz，d6-DMSO)δ7.57(d，J＝8.0Hz，2H)，7.07(t，J=7.8Hz，1H)，5.41(s，2H)，2.11(s，3H)。
在N2气氛中，将乙酸2,6-二溴苄酯(34.88g，113mmol)、6-叔丁基-2H-酞嗪-1-酮(4.56g，22.5mmol)、Cs2CO3(14.72g，45mmol)、CuI(6.44g，33.8 mmol)和N,N-二甲基乙烷-1,2-二胺(2g，22.7mmol)溶于DMF(92mL)。将该反应混合物在150℃搅拌4h，然后冷却至室温，用乙酸乙酯(500mL)稀释，用500mL水洗涤。分离水层，用乙酸乙酯(200mL×2)萃取。用水(300mL×2)和盐水(300mL)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥。过滤该溶液，蒸发。通过硅胶色谱法纯化残余物(石油醚／乙酸乙酯4／1)，得到乙酸2-溴-6-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-苄酯(6.2g，64％收率)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.39(d，J=8.3Hz，1H)，8.25(s，1H)，7.91-7.87(m，1H)，7.72(s，2H)，7.41-7.35(m，2H)，5.17(s，2H)，1.91(s，3H)，1.44(s，9H)。LC-MS计算值C21H21BrN2O3(m／e)428.07,测定值429和431[M+1]+。
在N2气氛中，将乙酸2-溴-6-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-苄酯(1.43g，10.7mmol)、双(频哪酸)二硼(1.03g，4.05mmol)、KOAc(0.99g，10.1mmol)和Pd(dppf)Cl2(0.3g，0.36mmol)在16.7mL DMSO中在80℃搅拌16h。将该混合物冷却至室温，用乙酸乙酯(100mL)稀释，用100mL水洗涤。用乙酸乙酯(50mL×2)萃取水层。用水(100mL×2)和盐水(100mL)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥。过滤该溶液，蒸发。通过硅胶色谱法纯化残余物(石油醚／乙酸乙酯2／1)，得到乙酸2-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-6-(4，4,5,5-四甲基-[1，3，2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-苄酯，为淡绿色固体(1.45g，91％收率)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.39(d，J=8.5Hz，1H)，8.23(s，1H)，7.96(dd，J=6.4，2.5Hz，1H)，7.86(dd，J=8.5，1.8Hz，1H)，7.71(d，J=1.7Hz，2H)，7.52-7.45(m，2H)，5.30(s，2H)，1.86(s，3H)，1.43(s，9H)，1.33(s，12H)。LC-MS计算值C27H33BN2O5(m／e)476.25,测定值477[M+1]+。
乙酸2-（6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-6-(4，4,5,5-四甲基-[1，3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-苄酯(中间体-5)
在N2气氛中，将乙酸2,6-二溴苄酯(24.74g，80.3mmol)、6-叔丁基-8-氟-2H-酞嗪-1-酮(3.54g，16.1mmol)、Cs2CO3(10.46g，32.1mmol)、CuI(4.61g，24.2mmol)和N,N-二甲基乙烷-1,2-二胺(1.42g，16.1mmol)溶于DMF(70mL)。将该反应混合物在150℃搅拌4h。将得到的混合物冷却至室温，用乙酸乙酯(200mL)稀释，然后加入200mL水。分离该混合物，用乙酸乙酯(200mL×2)萃取水层。用水(200mL)和盐水(200mL)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥该溶液，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法纯化得到的粗产物(石油醚／乙酸乙酯4／1)，得到2-溴-6-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-苄酯(3.21g，45％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ8.17(d，J＝2.7Hz，1H)，7.71(t，J=4.8Hz，1H)，7.50-7.45(m，2H)，7.36(s，1H)，7.34(d，J＝0.9Hz，1H)，5.17(s，2H)，1.94(s，3H)，1.42(s，9H)。LC-MS计算值C21H20BrFN2O3(m／e)446.06，测定值447和449[M+1]+。
在N2气氛中，将2-溴-6-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-苄酯（1.51g，3.39mmol)、双频哪酸二硼(1.03g，4.06mmol)、KOAc(0.998g，10.7mmol)和Pd(dppf)Cl2(0.277g，0.339mmol)溶于干DMSO(80mL)。将该反应混合物在80℃搅拌24h。用乙酸乙酯(100mL)稀释该反应混合物，用水(200mL×2)洗涤。用乙酸乙酯(100mL×2)萃取水层。用水(200mL×2)和盐水(200mL)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥。过滤该溶液，浓缩。通过色谱法纯化残余物(石油醚／乙酸乙酯2／1)，得到乙酸2-(6-叔丁基-8- 氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-6-(4，4,5,5-四甲基-[1，3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-苄酯(1.26g，75％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ8.17(d，J=2.6，2.4Hz，1H)，7.95(dd,J＝6.9，2.2Hz，1H)，7.49-7.44(m，4H)，6.31(brs，2H)，1.90(s，3H)，1.42(s，9H)，1.34(s，12H)。LC-MS计算值C27H32BFN2O5(m／e)494.24，测定值495[M+1]+。
6-叔丁基-2-(3-氯-2-羟基甲基-苯基)-8-羟基甲基-2H-酞嗪-1-酮(中间体-6)
向100mL圆底烧瓶中加入6-叔丁基-2-[3-氯-2-(羟基甲基)苯基]-8-氟酞嗪-1(2H)-酮(671mg，1.86mmol，根据US2010／0222325制备)、氰化钠(365mg，7.44mmol)和DMSO(10mL)，得到淡黄色混悬液。将该混合物在80℃搅拌16hrs。再加入氰化钠(182mg，3.72mmol)，将该混合物在80℃再搅拌60hrs。将该混合物冷却至室温，用乙酸乙酯和水萃取。用水和盐水洗涤有机层，用硫酸钠干燥，过滤。蒸发溶剂，通过闪蒸塔色谱法纯化残余物(220g硅胶，0％-40％丙酮的庚烷溶液)，得到7-叔丁基-3-[3-氯-2-(羟基甲基)苯基]-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-腈，为黄色固体(390mg，57％收率)。
在250mL圆底烧瓶中加入7-叔丁基-3-[3-氯-2-(羟基甲基)苯基]-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-腈(390mg，1.06mmol)和甲苯(8mL)。在冰浴中冷却该溶液，加入DIBAH的甲苯溶液(2.33mL，2.33mmol)。将该混合物在冰浴中搅拌1hr，然后用二氯甲烷稀释，用1M盐酸猝灭。将该混合物搅拌10分钟，用二氯甲烷萃取。用水和盐水洗涤有机层，用硫酸钠干燥，过滤。 蒸发溶剂，通过闪蒸塔色谱法纯化粗物质(硅胶，120g，0％-35％乙酸乙酯的庚烷溶液)，得到7-叔丁基-3-[3-氯-2-(羟基甲基)苯基]-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-甲醛(147mg，37.4％)，为淡黄色粉末。
将上述7-叔丁基-3-[3-氯-2-(羟基甲基)苯基]-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-5-甲醛(147mg，0.396mmol)与二氯乙烷(5mL)和甲醇(5mL)合并，得到黄色溶液。加入硼氢化钠(27mg，0.714mmol)，将该混合物在室温搅拌4hrs。用1N盐酸处理该混合物，用二氯甲烷萃取。用盐水洗涤有机层，用硫酸钠干燥。蒸发溶剂后，通过闪蒸塔色谱法纯化残余物(硅胶40g，0％-40％乙酸乙酯的庚烷溶液)，得到6-叔丁基-2-[3-氯-2-(羟基甲基)苯基]-8-(羟基甲基)酞嗪-1(2H)-酮，为淡黄色固体(39mg，26.4％)。LC／MS计算值C20H21ClN2O3(m／e)372.12，测定值371.1(M-H，ES-)。
实施例1
5-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-呋喃-2-甲酰胺
在微波烧瓶中，用氩气给5-溴呋喃-2-甲酰胺(200mg，1.05mmol)、乙 酸2-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-6-(4，4,5,5-四甲基-[1，3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-苄酯(中间体-5，1.04g，2.11mmol)、X-PHOS(50.2mg，0.105mmol)、Pd2(dba)3(48.2mg，0.052mmol)和磷酸钾(894mg，4.21mmol)在噁烷(7ml)和水(0.7ml)中的混悬液脱气3-5min。将该混合物置于微波中在125℃30min。加入水，用乙酸乙酯将该混合物萃取2次。用盐水洗涤有机层，用硫酸钠干燥，浓缩至干。通过闪蒸塔色谱法纯化粗物质(乙酸乙酯的己烷溶液，梯度至100％乙酸乙酯)，得到乙酸2-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-6-(5-氨基甲酰基-呋喃-2-基)-苄酯(78.5mg，16％)。
向上述乙酸酯(78.5mg，0.164mmol)在甲醇(2mL)中的溶液中加入碳酸钾(4.5mg，0.033mmol)。将该混合物在N2气氛中搅拌5h。加入二氯甲烷，用水洗涤该混合物。用二氯甲烷萃取水相。用硫酸钠干燥合并的有机相，蒸发至干。加入乙酸乙酯，将该混悬液搅拌5min，过滤出固体，干燥，得到5-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-呋喃-2-甲酰胺(42mg，59％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm1.38(s，9H)4.33-4.53(m，2H)4.66-4.92(m，1H)7.05(d，J＝3.78Hz，1H)7.20(d，J＝3.40Hz，1H)7.29-7.47(m，2H)7.50-7.63(m，1H)7.75(dd，J=13.41，1.70Hz，1H)7.81-8.03(m，3H)8.52(d，J＝2.64Hz，1H)；LC／MS计算值C24H22FN3O4(m／e)435.16，测定值458[M+Na]+。
实施例2
4-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-呋喃-2-甲酰胺
在微波烧瓶中，用氩气给4-溴呋喃-2-甲酰胺(150mg，0.79mmol)、乙酸2-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-6-(4，4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苄酯(中间体5，468mg，0.95mmol)、X-PHOS(37.6mg，0.079mmol)、Pd2(dba)3(36.1mg，0.040mmol)和磷酸钾(670mg，3.16mmol)在噁烷(5mL)和水(0.5mL)中的混悬液脱气5min。将该混合物置于微波中在125℃30min。加入水，用乙酸乙酯将该混合物萃取2次。用盐水洗涤有机层，用硫酸钠干燥，浓缩至干。通过闪蒸塔色谱法纯化粗物质(乙酸乙酯的己烷溶液，线性梯度至100％EtOAc)，得到乙酸2-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-6-(5-氨基甲酰基呋喃-3-基)苄酯(273mg，0.572mmol，72.4％收率)。
向上述乙酸酯(262.6mg，0.55mmol)在甲醇(5mL)中的溶液中加入碳酸钾(15.2mg，0.11mmol)。将该混合物在N2气氛中搅拌3.5h。加入二氯甲烷(50mL)，用水洗涤该混合物，用硫酸钠干燥，浓缩至干。通过闪蒸塔色谱法纯化粗物质(乙酸乙酯的己烷溶液，线性梯度至100％EtOAc)，得到4-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-呋喃-2-甲酰胺(192mg，80％)。1H NMR(300MHz，氯FORM-d)δppm1.36-1.62(m，9H)4.40(br.s.，2H)7.35(dd，J=6.80，2.64Hz，1H)7.44-7.64(m，5H)8.14(d，J=1.13Hz，4H)8.29(d，J=2.64Hz，1H)；LC／MS计算值C24H22FN3O4(m／e)435.16，测定值436[M+H]+。
实施例3
4-[3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-1-甲基-1H-咪唑-2-甲酰胺
使用与实施例1中所述相同的方法、通过使用4-溴-1-甲基-1H-咪唑-2-甲酰胺(中间体-1)和乙酸2-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-6-(4，4,5,5-四甲基-[1，3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-苄酯(中间体4)制备该化合物。在2步中制备期望的化合物(33％收率)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.46(d，J=8.5Hz，1H)，8.36(s，1H)，7.95-7.91(m，2H)，7.77(d，J=1.6Hz，1H)，7.70(s，1H)，7.54(t，J=7.9Hz，1H)，7.36(dd,J=7.9，1.3Hz，1H)，4.42(brs，2H)，4.14(s，3H)，1.46(s，9H)。LC-MS计算值C24H25N5O3(m／e)431.20，测定值432[M+1]+。
实施例4
2-[3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-噻唑4-甲酰胺
使用与实施例1中所述相同的方法、通过使用2-溴噻唑-4-甲酰胺(中间体-2)和乙酸2-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-6-(4，4,5,5-四甲基-[1，3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-苄酯(中间体4)制备该化合物。在2步中制备期望的化合物(25％收率)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ 8.56(s，1H)，8.41(s，1H)，8.24(d，J=8.4Hz，1H)，8.05-8.00(m，2H)，7.82(dd,J=1.8，7.2Hz，1H)， 7.61-7.58(m，2H)，4.54-4.45(m，2H)，1.41(s，9H)。LC-MS计算值C23H22N4O3S(m／e)434.14，测定值435[M+1]+。
实施例5
4-[3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺
使用与实施例1中所述相同的方法、通过使用4-溴-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺(中间体-3)和乙酸2-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-6-(4，4,5,5-四甲基-[1，3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-苄酯(中间体4)制备该化合物。在2步中制备期望的化合物(20％收率)。1H NMR(300 MHz，DMSO-d6)δ 8.54(s，1H)，8.25(d，J=8.4Hz，1H)，8.04(d，J=1.5Hz，1H)，8.01(dd,J=1.8，8.4Hz，1H)，7.48-7.45(m，2H)，7.28-7.23(m，2H)，7.08(d，J=1.8Hz，1H)，4.35(s，2H)，3.89(s，3H)，1.41(s，9H)。LC-MS计算值C25H26N4O3(m／e)430.20,测定值431[M+1]+。
实施例6
2-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-噻唑-4-甲酰胺
使用与实施例1中所述相同的方法、通过使用2-溴噻唑-4-甲酰胺(中间体-2)和乙酸2-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-6-(4，4,5,5-四甲基 -[1，3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-苄酯(中间体5)制备该化合物。在2步中制备期望的化合物(10％收率)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.59(d，J=2.4Hz，1H)，8.46(s，1H)，7.94(d，J=1.8Hz，1H)，7.88-7.79(m，2H)，7.66-7.63(m，2H)，4.61-4.52(m，2H)，1.46(s，9H)。LC-MS计算值C23H21FN4O3S452.13，测定值453[M+1]+。
实施例7
4-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基苯基]-1-甲基-1H-咪唑-2-甲酰胺
使用与实施例1中所述相同的方法、通过使用4-溴-1-甲基-1H-咪唑-2-甲酰胺(中间体-1)和乙酸2-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-6-(4，4,5,5-四甲基-[1，3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-苄酯(中间体5)制备该化合物。在2步中制备期望的化合物(12％收率)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.50(d，J=2.7Hz，1H)，7.87-7.71(m，5H)，7.50-7.44(m，2H)，7.30(dd，J=1.2，7.8Hz，1H)，4.38-4.33(m，2H)，4.00(s，3H)，1.39(s，9H)。LC-MS计算值C24H24FN5O3(m／e)449.19，测定值450[M+1]+。
实施例8
4-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺
使用与实施例1中所述相同的方法、通过使用4-溴-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺(中间体-3)和乙酸2-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-6-(4，4,5,5-四甲基-[1，3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-苄酯(中间体5)制备该化合物。在2步中制备期望的化合物(60％收率)。1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ8.49-8.48(m,1H)，7.86(s，1H)，7.73(d，J=13.2Hz，1H)，7.44-7.42(m，3H)，7.25-7.23(m，2H)，7.06(brs，2H)，4.56(s，1H)，4.36(s，2H)，3.88(s，3H)，1.37(s，9H)。LC-MS计算值C25H25FN4O3(m／e)448.19,测定值449.1[M+H]+。
实施例9
4-[3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-1H-吡咯-2-甲酰胺
步骤1：在N2气氛中，将乙酸2-溴-6-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-苄酯(制备描述在中间体-4中，300mg，0.699mmol)、4-(4，4,5,5-四甲基-[1，3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-吡咯-1，2-二甲酸1-叔丁酯2-甲酯(270mg，0.769mmol)、Pd(dppf)Cl2(171mg，0.21mmol)和K2CO3(289mg，2.19mmol)在二噁烷(15mL)和水(3mL)中的混合物在100℃加热4h。将该混合物浓缩 至干。通过硅胶柱色谱法纯化残余物(用石油醚／乙酸乙酯以2／1比例洗脱)，得到4-[2-乙酰氧基甲基-3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-苯基]-吡咯-1,2-二甲酸1-叔丁酯2-甲酯(160mg，收率40％)。LC-MS计算值C32H35N3O7(m／e)573.25,测定值473[M-Boc+1]+。
步骤2：向4-[2-乙酰氧基甲基-3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-苯基]-吡咯-1，2-二甲酸1-叔丁酯2-甲酯(136mg，0.24mmol)在5mL二噁烷和5mL水中的溶液中加入NaOH(40mg)，将该反应混合物在室温搅拌20h。减压浓缩该混合物。将残余物溶于8mL水，用1N HCl酸化至pH3-4。用乙酸乙酯(5mL×3)萃取该混合物。用Na2SO4干燥合并的有机层，减压浓缩，得到4-[3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-1H-吡咯-2-甲酸(99mg，收率100％)。LC-MS计算值C24H23N3O4(m／e)417.17，测定值418[M+1]+。
步骤3：将HATU(104mg，0.27mmol)和三乙胺(1mL)加入到4-[3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-1H-吡咯-2-甲酸(95mg，0.23mmol)在干THF(15mL)中的溶液中，使氨气通过该溶液起泡5h。减压浓缩该混合物。通过制备型TLC纯化残余物(石油醚／乙酸乙酯=2：1)，得到4-[3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-1H-吡咯-2-甲酰胺(25mg，收率26％)，为白色固体。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ8.43(s，1H)，8.28(d，J=8.5Hz，1H)，7.98-7.92(m，2H)，7.52-7.39(m，2H)，7.26-7.19(m，2H)，7.03(d，J=1.6Hz，1H)，4.38(s，2H)，1.38(s，9H)。LC-MS计算值C24H24N4O3(m／e)416.18，测定值417[M+1]+。
实施例10
5-[3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺
步骤1：在N2气氛中，将乙酸2-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-6-(4，4,5,5-四甲基-[1，3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-苄酯(描述在制备中间体4中，300mg，0.63mmol)、5-溴-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酸甲酯(150mg，0.69mmol)、Pd(dppf)Cl2(150mg，0.19mmol)和K2CO3(261mg，1.9mmol)在二噁烷（15mL)和水(3mL)中的混合物在100℃加热3h。将该混合物浓缩至干。通过硅胶柱色谱法纯化残余物(用石油醚／乙酸乙酯以8：1-5：1比例洗脱)，得到5-[2-乙酰氧基甲基-3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-苯基]-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酸甲酯(237mg，收率77％)，为黄色液体。LC-MS计算值C28H29N3O5(m／e)487.21，测定值997[2M+Na]+。
步骤2：将5-[2-乙酰氧基甲基-3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-苯基]-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酸甲酯(237mg，0.486mmol)在饱和NH3／MeOH(20mL)中的混合物在室温搅拌48h。将该混合物蒸发至干，得到5-[3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酸甲 酯(150mg，收率68％)，为黄色固体。LC-MS计算值C26H27N3O4(m／e)445.20，测定值913[2M+Na]+。
步骤3：将水(5mL)加入到5-[3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酸甲酯(150mg，0.337mmol)在二噁烷(5mL)中的溶液中。将该混合物搅拌5min，加入NaOH(40mg)。将该反应混合物在室温搅拌16h。减压浓缩该混合物。用乙醚(5mL×3)萃取残余物。用盐水洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，减压浓缩，得到5-[3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酸(113mg，收率78％)，为黄色固体。LC-MS计算值C25H25N3O4(m／e)431.18，测定值885[2M+23]+。
步骤4：将HATU(110mg，0.288mmol)加入到5-[3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酸(113mg，0.262mmol)在干THF(15mL)中的溶液中。使氨气通过该溶液起泡。将该混合物在室温在NH3(g)气氛中搅拌16h。减压浓缩该混合物。通过制备型HPLC纯化残余物，得到5-[3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺(25mg，收率22％)，为白色固体。1HNMR(300 MHz，CD3OD)δ8.42(s，1H)，8.27(d，J=8.5Hz，1H)，8.02-7.90(m，2H)，7.54-7.35(m，2H)，7.24-7.13(m，2H)，7.02(d，J=1.9 Hz，1H)，4.37(s，2H)，3.87(s，3H)，1.37(s，9H)。LC-MS计算值C25H26N4O3(m／e)430.20,测定值883[2M+Na]+。
实施例11
2-[3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-4-甲基-噁唑-5-甲酰胺
步骤1：在N2气氛中，将乙酸2-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-6-(4，4,5,5-四甲基-[1，3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-苄酯(制备描述在中间体-4中，72mg，0.153mmol)、2-溴-4-甲基-噁唑-5-甲酸乙酯(34mg，0.146mmol)、Pd(dppf)Cl2(36mg，0.0438mmol)和K2CO3(61mg，0.438mmol)溶于二噁烷／H2O(5：1，6mL)。将该反应混合物在100℃搅拌约1.5h。减压除去溶剂，通过硅胶色谱法纯化残余物(石油醚／乙酸乙酯=2：1)，得到2-[2-乙酰氧基甲基-3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-苯基]-4-甲基-噁唑-5-甲酸乙酯。
步骤2：将上述2-[2-乙酰氧基甲基-3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-苯基]-4-甲基-噁唑-5-甲酸乙酯溶于10mLNH3／MeOH。将该反应体系在室温搅拌2天。减压除去溶剂，通过硅胶色谱法纯化残余物(石油醚／乙酸乙酯＝1：1)，得到2-[3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-4-甲基-噁唑-5-甲酰胺(47mg，收率68％，2步)，为白色固体。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)：δ 8.57(s，1H)，8.24(d，J=8.1Hz，1H)，8.20(dd,J=2.1，8.4Hz，1H)，8.06-8.00(m，2H)，7.66-7.58(m，2H)，4.73-4.57(m，2H)，2.46(s，3H)，1.41(s，9H)。LC-MS计算值C24H24N4O4(m／e)432.18，测定值433[M+H]+。
实施例12
4-[3-(6-环丙基-8-氟-1-氧代-1H-异喹啉-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺
步骤1：将1-(4-溴-1-甲基-1H-吡咯-2-基)-2,2,2-三氟乙酮(5.0g，19.5mmol)溶于氢氧化铵(72.5ml，29.4％水溶液)，在室温搅拌45min。用2NHCl使该溶液达到pH=7。通过过滤收集固体沉淀。用水洗涤固体，在50℃减压干燥。用二氯甲烷将水层萃取2次。真空浓缩有机相，又得到固体。合并来自过滤和萃取的固体，得到4-溴-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺(3.2g，81％)，为白色固体：LC／MS-ESI测定值[M+H]+203和205。
步骤2：向25mL微管试管中加入双(频哪酸)二硼(2.5g，9.85mmol)、4-溴-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺(1.0g，4.93mmol)和乙酸钾(1.45g，14.8mmol)。加入双(二亚苄基丙酮)钯(142mg，246μmol)，然后加入X-phos(235mg，493μmol)。加入1,4-二噁烷(10.0mL)，得到黑色溶液。密封试管，用氩气将该混合物净化10min。将该反应混合物加热至65℃，搅拌18h。将粗反应混合物倾入100mLH2O，用乙酸乙酯(4x100mL)萃取。用盐水洗涤有机相，用Na2SO4干燥，真空浓缩。通过快速色谱法纯化粗物质(硅胶，150g，5％-50％乙酸乙酯／己烷梯度)。真空浓缩，得到1-甲基-4-(4，4,5,5-四甲基-[1，3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吡咯-2-甲酰胺(973mg，79％)，为淡黄色泡沫体。LC／MS-ESI测定值[M+H]+251。
步骤3：向10mL微波小瓶中加入1-甲基-4-(4，4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吡咯-2-甲酰胺(100mg，400μmol，Eq：1.00)、2-(3-氯-2-(羟基甲基)苯基)-6-环丙基-8-氟异喹啉-1(2H)-酮(137mg，400μmol，Eq：1.00)、X-phos(19.1mg，40.0μmol，Eq：0.1)、Pd2(dba)3(18.3mg，20.0μmol，Eq：0.05)和磷酸三钾(212mg，1.00mmol，Eq：2.50)，然后加入1,4-二噁烷(5ml)和水(0.5ml)，得到深棕色混悬液。搅拌该反应混合物，同时用氩气净化10min。将该溶液在125℃在微波中加热30min。将该反应混合物冷却至室温。用50mL二氯甲烷稀释该反应混合物，用水萃取。真空浓缩 水相。通过快速色谱法纯化粗物质(硅胶，25％-50％[60：10：1二氯甲烷：甲醇：氢氧化铵水溶液]／二氯甲烷梯度)，得到4-[3-(6-环丙基-8-氟-1-氧代-1H-异喹啉-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺(25.9mg，15％)，为白色固体：LC／MS-ESI测定值[M+H]+432。
实施例13
4-[3-(6-叔丁基-3-甲基-1-氧代-3,4-二氢-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺
步骤1：在100mL圆底烧瓶中，将6-叔丁基-2-(3-氯-2-(羟基甲基)苯基)-3-甲基-3,4-二氢酞嗪-1(2H)-酮(500mg，1.39mmol，Eq：1.00)、乙酐(711mg，657μl，6.97mmol，Eq：5)和吡啶(331mg，338μl，4.18mmol，Eq：3)与二氯甲烷(10.0ml)合并，得到无色溶液。将该反应混合物加热至45℃，搅拌8h。冷却至室温，搅拌48h。真空浓缩粗反应混合物至得到黄褐色油状物。通过快速色谱法纯化粗物质(硅胶，20％-30％乙酸乙酯／己烷梯度)，得到乙酸2-(6-叔丁基-3-甲基-1-氧代-3,4-二氢酞嗪-2(1H)-基)-6-氯苄酯(489mg，88％)：1H NMR(300MHz，氯FORM-d)δppm1.37(s，9H)2.03(s，3H)2.62(s，3H)4.45(s，2H)5.33(s，2H)7.23(d，J=1.51Hz，1H)7.35-7.39(m，2H)7.43-7.52(m，2H)8.03(d，J=8.31Hz，1H)。
步骤2：在安装了氩气气囊、冷凝器和温度计的50mL2-颈烧瓶中将乙酸2-(6-叔丁基-3-甲基-1-氧代-3,4-二氢酞嗪-2(1H)-基)-6-氯苄酯(489mg，1.22mmol，Eq.1.00)和双(频哪酸)二硼(619mg，2.44mmol，Eq：2)与1,4-二噁烷(20.0ml)合并，得到无色溶液。搅拌至溶解。将该混合物抽真空。反填充氩气3次，然后加入乙酸钾(359mg，3.66mmol，Eq：3)。加入双(二亚苄基丙酮)钯(35.1mg，61.0μmol，Eq：0.05)。加入X-phos(58.1mg，122μmol， Eq：.1)。将该混合物抽真空，反填充氩气3次。将该反应混合物加热至65℃，搅拌18h。将该反应混合物冷却至室温，倾入50mL H2O，然后用乙酸乙酯(4x50mL)萃取。合并有机相，用盐水洗涤。加入脱色活性炭到有机层中。将该溶液搅拌5min。通过硅藻土过滤该溶液，然后真空浓缩。通过快速色谱法纯化粗物质(硅胶，25％乙酸乙酯／己烷)，得到乙酸2-(6-叔丁基-3-甲基-1-氧代-3,4-二氢酞嗪-2(1H)-基)-6-(4，4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苄酯(518mg，82％)：1H NMR(300MHz，氯仿-d)δppm1.35(d，J=9.44Hz，21H)1.99(s，3H)2.62(s，3H)4.44(br.s.，2H)5.44(s，2H)7.22(d，J=1.51Hz，1H)7.36-7.58(m，3H)7.87(dd，J=7.18，1.89Hz，1H)8.04(d，J=8.31Hz，1H)。
步骤3：在10ml微波小瓶中，将4-溴-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺(82.5mg，406μmol，Eq：1.00)，[在实施例12步骤1中制备]、乙酸2-(6-叔丁基-3-甲基-1-氧代-3,4-二氢酞嗪-2(1H)-基)-6-(4，4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苄酯(200mg，406μmol，Eq：1.00)、X-phos(19.4mg，40.6μmol，Eq：0.10)和磷酸三钾(259mg，1.22mmol，Eq：3.00)与1,4-二噁烷(5ml)和水(0.5ml)合并，得到深棕色混悬液。搅拌该反应混合物，同时用氩气净化10min。将该反应混合物在125℃在微波中加热30min。用50mL二氯甲烷稀释该反应混合物，干燥(MgSO4)。真空浓缩。通过快速色谱法纯化粗物质(硅胶，20％-100％乙酸乙酯／己烷梯度)，得到乙酸2-(6-叔丁基-3-甲基-1-氧代-3,4-二氢酞嗪-2(1H)-基)-6-(5-氨基甲酰基-1-甲基-1H-吡咯-3-基)苄酯(31mg，16％)：1HNMR(300MHz，氯仿-d)δppm1.37(s，9H)1.98(s，3H)2.68(s，3H)3.99(s，2H)5.28(s，2H)6.72(d，J=1.89Hz，1H)6.84-6.94(m，1H)7.23（d，J=1.51Hz，1H)7.27-7.52(m，5H)7.61(s，1H)8.04(d，J=7.93Hz，1H)。
步骤4：向在四氢呋喃中的乙酸2-(6-叔丁基-3-甲基-1-氧代-3,4-二氢酞嗪-2(1H)-基)-6-(5-氨基甲酰基-1-甲基-1H-吡咯-3-基)苄酯(31mg，63.4μmol，Eq：1.00)加入NaOH(1.0M(水溶液)1.0mL，1.00mmol，Eq：15.8)。将该反应混合物在60℃加热4h。将该混合物冷却至室温。用饱和NaHCO3(水 溶液)和二氯甲烷稀释该溶液。分离各层。用二氯甲烷将水层萃取1次。合并有机萃取物，用MgSO4干燥。过滤该溶液。真空浓缩，得到4-[3-(6-叔丁基-3-甲基-1-氧代-3,4-二氢-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺(28mg，99％)：1H NMR(300MHz，氯FORM-d)δppm1.26-1.40(m，9H)2.56(s，3H)3.95(s，3H)4.53(br.s.，2H)5.23(s，2H)6.93(d，J=1.89Hz，1H)7.14(d，J=1.89Hz，1H)7.24-7.38(m，3H)7.39-7.53(m，1H)7.64(dd，J=5.67，3.40Hz，1H)8.01(d，J=8.31Hz，1H)。LC／MS-ESI测定值[M+H]+447。
实施例14
4-[3-(6-叔丁基-8-羟基甲基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺
向15mL试管中加入6-叔丁基-2-[3-氯-2-(羟基甲基)苯基]-8-(羟基甲基)酞嗪-1(2H)-酮(39mg，0.105mmol)、1-甲基-4-(4，4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吡咯-2-甲酰胺(26.2mg，0.105mmol，由中间体-3和双(频哪酸)二硼在中间体-4制备中所示硼酸酯形成相同的条件下制备)、X-Phos(4.99mg，0.0105mmol)和三-磷酸钾(55.5mg，0.262mmol)。加入二噁烷(5mL)和水(0.5mL)，然后添加Pd2(dba)3(4.79mg，0.00523mmol)。用氩气净化该混合物，然后在搅拌下加热至125℃30分钟。再加入Pd2(dba)3(6.0mg，0.00655mmol)，将该混合物在125℃再搅拌30分钟。用二氯甲烷和水萃取该混合物。用盐水洗涤有机层，用硫酸钠干燥。蒸发溶剂，通过闪蒸塔色谱法纯化残余物(12g硅胶，0％-10％甲醇的二氯甲烷溶液)。通过制备型TLC进一步纯化期望的级分(硅胶，二氯甲烷／甲醇／氢氧化铵90／10／1)，得到4-[3-(6-叔丁基-8-羟基甲基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟 基甲基-苯基]-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺，为淡黄色粉末(7.6mg，15.8％收率)。LC／MS计算值C26H28N4O4(m／e)460.21，测定值459.0(M-H，ES-)。1H-NMR(300MHz，CDCl3)。
实施例15
1-[3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-[4-(吗啉-4-羰基)-苯基氨基]-1H-吡唑-4-甲酰胺
步骤1：将3-氨基-1H-吡唑-4-腈(10g，92.5mmol)溶于100mL DMF，在0℃搅拌该溶液。分小部分加入氢化钠(60％的矿物油溶液，7.4g，185mmol)。将该混合物搅拌30分钟，加入(2-(氯甲氧基)乙基)三甲基硅烷(90％纯度，17.1g，92.5mmol)。将该混合物在室温搅拌1hr，然后用氯仿和氯化铵水溶液萃取。用盐水洗涤有机层，用硫酸钠干燥，过滤，浓缩。通过ISCO闪蒸塔色谱法纯化残余物(220g硅胶，乙酸乙酯的己烷溶液5％-40％，25分 钟)。蒸发具有稍为较大的Rf作为主要成分的级分，然后从7％乙酸乙酯的己烷溶液中结晶，得到白色结晶纯化合物，为1N-三甲基甲硅烷基乙氧基甲基-5-氨基-4-氰基吡唑(3.75g)。蒸发具有稍为较低的Rf作为主要成分的级分，然后从4％乙酸乙酯的己烷溶液中结晶，得到纯结晶化合物，为1N-三甲基甲硅烷基乙氧基甲基-3-氨基-4-氰基吡唑(3.50g)。合并母液和包含两种成分的级分，蒸发，得到混合物(7.4g，该步骤的总收率67％)。就1N-三甲基甲硅烷基乙氧基甲基-5-氨基-4-氰基吡唑而言：LC／MS计算值C10H18N4OSi(m／e)238.12，测定值237.2(M-H，ES-)；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm0.00(s，9H)，0.82(t，J=8.0Hz，2H)，3.53(t，J=8.0Hz，2H)，5.24(s，2H)6.80(s，2H)7.58(s，1H)；就1N-三甲基甲硅烷基乙氧基甲基-3-氨基-4-氰基吡唑：1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm0.00(s，9H)，0.83(t，J=8.0Hz，2H)，3.51(t，J=8.0Hz，2H)，5.15(s，2H)，5.65(s，2H)，8.28(s，1H)。
步骤2：将来自步骤1的5-氨基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-腈(476mg，2.0mmol)和(4-溴苯基)(吗啉代)甲酮(539mg，2.0mmol,由4-溴苯甲酰氯和吗啉制备)溶于温甲苯(10mL)，加入碳酸铯(976mg，3.0mmol)，然后添加甲苯(4mL)。用氩气给该混合物脱气，加入双(三-叔丁膦)钯(102mg，0.2mmol)。密封该混合物，在120℃搅拌5hrs。过滤该混合物，用乙酸乙酯(60mL)洗涤。用乙酸乙酯和水萃取有机层。用硫酸钠干燥有机层，过滤，浓缩。使残余物通过使用乙酸乙酯(包含8％甲醇)的己烷溶液(5％-50％，15分钟，50g硅胶)的ISCO闪蒸塔色谱，得到期望的级分，使其从乙醚和己烷中结晶，得到白色结晶物质，为5-[4-(吗啉-4-羰基)-苯基氨基]-1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1H-吡唑-4-腈(631mg，74.1％收率)。LC／MS计算值C21H29N5O3Si(m／e)427.20，测定值428.0(M+H，ES+)； 1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm0.02(s，9H)，0.95(t，J=8.0Hz，2H)，3.61(t，J=8.0Hz，2H)，3.50-3.80(m，8H)，5.44(s，2H)，6.57(br.s.，1H)，7.02(d，J=8.5Hz，2H)，7.42(d，J=8.5Hz，2H)，7.68(s，1H)。
步骤3：将5-(4-(吗啉-4-羰基)苯基氨基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基) 甲基)-1H-吡唑-4-腈(880mg，2.06mmol)溶于40mL乙醇。加入盐酸(2N)，将该混合物在室温搅拌过夜。在室温16hrs后，LC／MS显示60％期望的物质和40％未反应的原料。将该混合物加热至65℃，搅拌2hrs。LC／MS显示原料完全耗尽，形成期望的产物。在冰浴中用氢氧化钠溶液(4g NaOH在40mL水中)处理该混合物。用乙酸乙酯将得到的混合物萃取2次(350mL)。用盐水洗涤有机层，用硫酸钠干燥。TLC显示澄清点。蒸发溶剂，将残余物与乙醚一起研磨，得到5-[4-(吗啉-4-羰基)-苯基氨基]-1H-吡唑-4-腈，为白色固体(530mg，86.6％收率)。H-NMR与期望的结构一致。LC／MS是澄清的且与期望的分子量一致。LC／MS计算值C15H15N5O2(m／e)297.12，测定值298.0(M+H，ES+)。
步骤4：将叔丁醇钾(68mg，0.60mmol)溶于3mL DMSO，在室温搅拌5分钟。加入5-(4-(吗啉-4-羰基)苯基氨基)-1H-吡唑-4-腈(150mg，0.505mmol)，将该混合物搅拌5分钟。加入2-氟-6-碘苯甲醛(378mg，1.51mmol)，将该混合物在室温搅拌24hrs。用乙酸乙酯和水萃取该混合物。用盐水洗涤有机层，干燥。蒸发溶剂。将残余物与乙酸乙酯一起研磨。过滤固体，得到黄白色固体71mg。通过TLC和LC／MS分析白色固体显示澄清物质。浓缩滤液，溶于二氯甲烷，通过ISCO闪蒸塔色谱法、使用甲醇的二氯甲烷溶液(0-5％，15分钟，24g硅胶)纯化，得到淡粉红色固体58mg。显示两种来自TLC和LC／MS的分离的固体与期望的1-(2-甲酰基-3-碘-苯基)-3-[4-(吗啉-4-羰基)-苯基氨基]-1H-吡唑-4-腈(48.5％收率)相同。LC／MS计算值C22H18N5O3I(m／e)527.05，测定值526.0(M-H，ES-)；1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm3.52-3.85(m，8H)，6.60(br.s，1H)，7.33(t，J=8.0Hz，1H)，7.38-7.49(m，4H)，7.52(d，J＝8.1Hz，1H)，8.04(s，1H)，8.08(d，J=8.0Hz，1H)，9.93(br.s，1H)。
步骤5：将1-(2-甲酰基-3-碘苯基)-3-(4-(吗啉-4-羰基)苯基氨基)-1H-吡唑-4-腈(71mg，0.135mmol)、6-叔丁基酞嗪-1(2H)-酮(27.2mg，0.135mmol)、碘化亚铜(25.6mg，0.135mmol)和碳酸氢钠(22.6mg，0.269mmol)在2mLDMSO中合并。用氩气给该混合物彻底脱气，然后在预加热至100℃的油 浴中搅拌。1hr后，用二氯甲烷和水萃取该混合物。用硫酸钠干燥有机层，过滤。蒸发溶剂，通过闪蒸塔色谱法纯化残余物(12g硅胶，0％-5％甲醇的二氯甲烷溶液)，得到1-(3-(6-叔丁基-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-2-甲酰基苯基)-3-[4-(吗啉-4-羰基)苯基氨基]-1H-吡唑-4-腈，为淡粉红色固体(34mg，42％收率)。LC／MS计算值C34H31N7O4(m／e)601.24，测定值602.1(M+H，ES+)；1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm1.45(s，9H)，3.68(br.m.，8H)，6.68(br.s.，1H)，7.39(d，J=8.6Hz，2H)，7.46(d，J=8.6Hz，2H)，7.57(dd，J=8.0，1.1Hz，1H)，7.65-7.74(m，1H)，7.74-7.81(m，2H)，7.93(dd，J＝8.6，1.8Hz，1H)，8.17(s，1H)，8.40(d，J=8.6Hz，1H)，8.47(br.s.，1H)，9.90(br.s.，1H)。
步骤6：将1-(3-(6-叔丁基-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-2-甲酰基苯基)-3-[4-(吗啉-4-羰基)苯基氨基]吡唑-4-腈(53mg，0.0875mmol)溶于6mL二氯甲烷和2mL甲醇。滴加硼氢化钠在水(0.5mL)和甲醇(1.0mL)中的溶液(8.28mg，0.219mmol)。将该混合物在室温搅拌1hr。LC／MS显示澄清的期望的产物。蒸发该混合物至干，用二氯甲烷和水萃取。用硫酸钠干燥有机层，蒸发，得到纯的期望的1-[3-(6-叔丁基-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-2-(羟基甲基)苯基]-3-[4-(吗啉-4-羰基)苯基氨基]-1H-吡唑-4-腈(52.8mg，100％收率)。LC／MS计算值C34H33N7O4(m／e)603.26，测定值604.1(M+H，ES+)；1HNMR(400MHz，CDCl3)δppm1.47(s，9H)，3.61-3.77(m，8H)，4.35(br.s.，2H)，6.59(br.s.，1H)，7.43(d，J＝8.6Hz，2H)，7.50(d，J＝8.1Hz，1H)，7.58(d，J=8.6Hz，2H)，7.67(t，J=8.1Hz，1H)，7.80(d，J=1.7Hz，1H)，7.83(dd，J＝8.1，1.3Hz，1H)，7.97(dd，J=8.6，1.7Hz，1H)，8.39(d，J=0.5Hz，1H)，8.48(d，J=8.6Hz，1H)，8.79(s，1H)。
步骤7：将1-[3-(6-叔丁基-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-2-(羟基甲基)苯基]-3-[4-(吗啉-4-羰基)苯基氨基]-1H-吡唑-4-腈(52mg，0.0861mmol)溶于4mL THF和0.4mL水。然后加入二氢三(二甲基三价膦酸)氢铂酸盐(CAS#173416-05-2，3mg，8％eq)。将该混合物回流1hr。TLC显示原料完全耗尽。LC／MS显示具有正确MW的形成澄清产物。蒸发该混合物至干， 然后溶于二氯甲烷，用硫酸钠干燥，过滤。蒸发溶剂后，通过闪蒸塔色谱法纯化残余物(24g硅胶，甲醇的二氯甲烷溶液，0％-5％，16分钟)，得到1-[3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-[4-(吗啉-4-羰基)-苯基氨基]-1H-吡唑-4-甲酰胺，为白色固体(41mg，76.6％收率)。LC／MS计算值C34H35N7O5(m／e)621.27，测定值622.1(M+H，ES+)；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm1.41(s，9H)3.41-3.71(m，8H)，4.37(br.s.，2H)，4.74(br.s.，1H)，7.36(d，J=6.3Hz，3H)，7.49-7.71(m，5H)，7.80(br.s.，1H)，8.04(d，J＝9.1Hz，2H)，8.25(d，J＝6.6Hz，1H)，8.56(br.s.，2H)，9.44(br.s.，1H)。
实施例16
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-[4-(吗啉-4-羰基)-苯基氨基]-1H-吡唑-4-甲酰胺
使用与实施例15(实施例15的步骤5、6和7)中所示相同的方法、通过使用6-叔丁基-8-氟-2H-酞嗪-1-酮(根据US2010／0222325制备)制备该化合物。
将1-(2-甲酰基-3-碘苯基)-3-(4-(吗啉-4-羰基)苯基氨基)-1H-吡唑-4-腈(115mg，0.218mmol)、6-叔丁基-8-氟酞嗪-1(2H)-酮(48mg，0.218mmol)、碘化亚铜(41.5mg，0.218mmol)和碳酸氢钠(36.6mg，0.436mmol)在2mLDMSO中合并。用氩气给该混合物彻底脱气，在预加热至100℃的油浴中搅拌1hr。用二氯甲烷和水萃取该混合物。用盐水洗涤有机层，用硫酸钠干燥，过滤。蒸发溶剂，通过闪蒸塔色谱法、使用甲醇的二氯甲烷溶液(0％-5％，16分钟，24g硅胶)纯化残余物，得到1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-甲酰基-苯基]-3-[4-(吗啉-4-羰基)-苯基氨基]-1H-吡唑-4-腈，为淡粉红色固体(54mg，40％收率)。LC／MS计算值C34H30FN7O4(m／e)619.23，测定值620.0(M+H，ES+)；1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm1.43(s，9 H)，3.56-3.76(m，8H)，6.61br.s.，1H)，7.40(d，J＝8.6Hz，2H)，7.46(d，J＝8.6Hz，2H)，7.52(dd，J=12.4，1.8Hz，1H)，7.55-7.59(m，2H)，7.64(d，J=7.8Hz，1H)，7.78(t，J＝8.1Hz，1H)，8.16(s，1H)，8.32(s，1H)，9.97(s，1H)。
将1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-甲酰基-苯基]-3-[4-(吗啉-4-羰基)-苯基氨基]-1H-吡唑-4-腈(52mg，0.0839mmol)溶于6mL二氯甲烷和2mL甲醇。滴加硼氢化钠在水(0.5mL)和甲醇(1.0mL)中的溶液(9.52mg，0.252mmol)。将该混合物在室温搅拌1hr。LC／MS显示澄清的期望的产物。蒸发该混合物至干，用二氯甲烷和水萃取。用硫酸钠干燥有机层，蒸发，得到纯的期望的1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-[4-(吗啉-4-羰基)-苯基氨基]-1H-吡唑-4-腈(51mg，98％收率)。LC／MS计算值C34H32FN7O4(m／e)621.25，测定值622.1(M+H，ES+)；1HNMR(400MHz，CDCl3)δppm1.45(s，9H)，3.59-3.77(m，8H)，4.37(br.s.，2H)，6.59(br.s.，1H)，7.43(d，JJ＝8.6Hz，2H)，7.48(dd，J＝7.8，1.3Hz，1H)，7.54-7.61(m，4H)，7.66(t，J＝8.1Hz，1H)，7.81(dd，J＝8.1，1.3Hz，1H)，8.32(d，J=2.5Hz，1H)，8.74(s，1H)。
将1-(3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-2-(羟基甲基)苯基)-3-(4-(吗啉-4-羰基)苯基氨基)-1H-吡唑-4-腈(46mg，0.074mmol)溶于4mL THF和0.5mL水。然后加入二氢三(二甲基三价膦酸)氢铂酸盐(3mg，0.0069mmol)。回流搅拌该混合物。1hr后，TLC显示原料完全耗尽。LC／MS显示形成澄清期望的产物。蒸发该混合物，将残余物溶于二氯甲烷，用硫酸钠干燥，通过微米滤膜过滤，蒸发。通过闪蒸塔色谱法、使用甲醇的二氯甲烷溶液(1.5％-5％甲醇，10分钟，12g硅胶)纯化残余物，得到1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-[4-(吗啉-4-羰基)-苯基氨基]-1H-吡唑-4-甲酰胺，为白色固体(36mg，76.1％收率)。LC／MS计算值C34H34FN7O5(m／e)639.26，测定值640.1(M+H，ES+)；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm1.38(s，9H)，3.50(br.，4H)，3.59(br.，4H)，4.38(br.s.，2H)，4.78(t，J=5.2Hz，1H)，7.36(d，J＝8.6Hz，3H)，7.52-7.69(m，5H)， 7.76(d，J=13.1Hz，2H)，7.88(s，1H)，8.54(m，2H)，9.44(s，1H)。
实施例17
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-苯基]-3-[4-(吗啉-4-羰基)-苯基氨基]-1H-吡唑-4-甲酰胺
步骤1：将叔丁醇钾(120mg，1.07mmol)溶于5mL DMSO，在rt搅拌5分钟。然后加入5-(4-(吗啉-4-羰基)苯基氨基)-1H-吡唑-4-腈(290mg，0.975mmol)，将该混合物搅拌5分钟。向该溶液中加入2-溴-6-氟苯甲醛(396mg，1.95mmol)，将该混合物在室温搅拌过夜。用乙酸乙酯和水萃取该混合物。用水和盐水洗涤有机层，用硫酸钠干燥，蒸发。将残余物与20mL乙酸乙 酯一起研磨，过滤，得到期望的化合物70mg。通过闪蒸塔色谱法纯化滤液，得到第二批期望的化合物(110mg)，为1-(3-溴-2-甲酰基-苯基)-3-[4-(吗啉-4-羰基)-苯基氨基]-1H-吡唑-4-腈(38.4％收率)。LC／MS计算值C22H18BrN5O3(m／e)479.06，测定值477.8(M-H，ES-)；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm3.50(br.s.，4H)，3.59(d，J=3.8Hz，4H)，7.34(d，J=8.7Hz，2H)，7.53(d，J=8.7Hz，2H)，7.65(t，J＝7.9Hz，1H)，7.79(d，J=7.9Hz，1H)，7.85(d，J＝7.9Hz，1H)，9.08(s，1H)，9.47(s，1H)，10.07(s，1H)。1H-NMR的NOE分析证实期望的区域化学。
步骤2：将1-(3-溴-2-甲酰基苯基)-3-(4-(吗啉-4-羰基)苯基氨基)-1H-吡唑-4-腈(34mg，0.0708mmol)、6-叔丁基-8-氟酞嗪-1(2H)-酮(31.2mg，0.142mmol)、碘化亚铜(27mg，0.142mmol)和碳酸氢钠(14.9mg，0.177mmo1)在1mL DMSO中合并。用氩气给该溶液脱气，然后在微波中在120℃加热1hr。用乙酸乙酯和氯化铵溶液萃取得到的混合物。浓缩有机层，通过闪蒸塔色谱法、使用乙酸乙酯(包含5％甲醇)的己烷溶液(5％-80％线性梯度，15分钟，12g硅胶)纯化，得到纯的期望的产物。将该物质与乙醚的己烷溶液一起研磨，过滤，得到1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-苯基]-3-[4-(吗啉-4-羰基)-苯基氨基]-1H-吡唑-4-腈(18.2mg，41.5％收率)，为淡粉红色固体。LC／MS计算值C33H30FN7O3(m／e)591.24，测定值592.0(M+H，ES+)； 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm1.38(s，9H)，3.50(br.，4H)，3.59(br.，4H)，7.37(d，J=8.6Hz，2H)，7.59(d，J＝8.3Hz，1H)，7.65-7.71(m，3H)，7.78(d，J=13.1Hz，1H)，7.87-7.93(m，2H)，8.08(s，1H)，8.58(d，J＝2.3Hz，1H)，9.29(s，1H)，9.47(s，1H)。
步骤3：将1-(3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)苯基)-3-(4-(吗啉-4-羰基)苯基氨基)-1H-吡唑-4-腈(30mg，0.050mmol)溶于4mL THF和0.5mL水。然后加入二氢三(二甲基三价膦酸)氢铂酸盐(2.3mg，0.0052mmol)，回流搅拌该混合物。1hr后，TLC显示原料耗尽。LC／MS显示形成澄清的期望的产物。蒸发该混合物，将残余物溶于二氯甲烷，用硫酸钠干燥，通过微米滤膜过滤，蒸发。通过闪蒸塔色谱法、使用甲醇的二氯甲烷溶液(0％ -5％甲醇，10分钟，12g硅胶)纯化残余物，得到1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-苯基]-3-[4-(吗啉-4-羰基)-苯基氨基]-1H-吡唑-4-甲酰胺，为白色固体(21mg，68％收率)。LC／MS计算值C33H32FN7O4(m／e)609.25，测定值608.0(M-H，ES-)；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm1.39(s，9H)，3.51(br.s.，4H)，3.59(br.s.，4H)，7.39(d，J=8.3Hz，3H)，7.56(d，J=7.8Hz，1H)，7.65-7.73(m，3H)，7.75-7.86(m，3H)，7.89(s，1H)，7.98(br.s.，1H)，8.60(d，J=2.0Hz，1H)，9.04(s，1H)，9.42(s，1H)。
实施例18
1-(3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-2-(羟基甲基)苯基)-1H-吲哚-3-甲酰胺
步骤1：在氮气气氛中在约4分钟内分2部分向冷却的(冰浴)1H-吲哚-3-腈(1g，7.03mmol)在干二甲基甲酰胺(10mL)中的溶液中加入氢化钠(383mg，8.44mmol，60％的油溶液)。将该物质搅拌5分钟，然后除去冰浴，将该混合物温至环境温度。1次加入作为粉末的2-溴-6-氟苯甲醛(1.43g，7.03mmol)。将该物质剧烈搅拌2小时。将该混合物置于连接机械泵的旋 转蒸发器上，汽提溶剂。将剩余部溶于5％氯化铵水溶液(40ml)和乙酸乙酯（40ml)，转入分液漏斗。采集有机相，用50％稀盐水溶液(40ml)洗涤。采集乙酸乙酯相，用乙酸乙酯(2X35mL)反萃取水相。合并有机相，干燥(硫酸镁)，过滤，汽提。使粗产物吸附在硅胶上(10g，从二氯甲烷中)，通过HPLC纯化(干燥上样；硅胶；40g)，用100％二氯甲烷洗脱，得到半纯产物(990mg)。通过从热二氯甲烷／己烷中研磨纯化该物质，得到1-(3-溴-2-甲酰基苯基)-1H-吲哚-3-腈，为橙色固体(354mg，16％收率)。1H NMR(300MHz，氯仿-d)δppm7.02-7.11(m，1H)7.27-7.38(m，2H)7.45(d，J＝7.93Hz，1H)7.61(t，J＝8.12Hz，1H)7.68(s，1H)7.80-7.86(m，1H)7.90(dd，J=7.93，1.13Hz，1H)10.05(s，1H)。
步骤2：在氩气气氛中向6-叔丁基-8-氟酞嗪-1(2H)-酮(根据US2010／0222325制备)36mg，0.16mmol)和1-(3-溴-2-甲酰基苯基)-1H-吲哚-3-腈(59mg，0.18mmol)在干二甲亚砜(1.8mL)中的溶液中加入碳酸氢钠(31mg，0.36mmol)。接下来加入碘化亚铜(35mg，0.18mmol)，将该混合物加热至110℃2小时。将该反应体系冷却至环境温度，溶于水(40ml)和二氯甲烷(40ml)。使该物质通过硅藻土垫，用二氯甲烷充分冲洗。将滤液转入分液漏斗，采集二氯甲烷相。用50％稀盐水溶液(40ml)洗涤。采集有机相，用二氯甲烷(2x35ml)反萃取水相。合并二氯甲烷相，干燥(MgSO4)，过滤，汽提。然后使用1-(3-溴-2-甲酰基苯基)-1H-吲哚-3-腈(290mg，0.89mmol)和类似规模用量的上述试剂、在相同方法和后处理条件下以较大规模重复相同的反应。合并来自两次反应的粗产物，通过HPLC纯化(硅胶，用100％CH2Cl2-1％MeOH／CH2Cl2洗脱)，得到半纯产物。通过制备型薄层色谱法进一步纯化该物质(3个板，用0.5％MeOH／CH2Cl2洗脱，然后用0.75％、然后1％MeOH／CH2Cl2再洗脱)。采集产物带，得到1-(3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-2-甲酰基苯基)-1H-吲哚-3-腈，为黄色泡沫固体。(384mg，77％收率)。LC／MS计算值C28H21FN4O2(m／e)464.49，测定值465.0(M+H，ES+)：1H NMR(300MHz，氯仿-d)δppm1.42(s，9H)7.24-7.32(m，1H)7.34-7.41(m，2H)7.46-7.60(m，3H)7.75(d， J=7.55Hz，1H)7.81(s，1H)7.83-7.87(m，1H)7.90(t，J=7.96Hz，1H)8.25(d，J=2.64Hz，1H)9.56(s，1H)。
步骤3：圆底烧瓶包含溶于10％水／四氢呋喃(1.5ml)的1-(3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-2-甲酰基苯基)-1H-吲哚-3-腈(12mg，0.03mmol)。接下来加入氢(二甲基三价膦酸-kp)[氢双-(二甲基三价膦酸-kp)]铂(II)催化剂(2mg，0.005mmol)，将该混合物加热至回流(油浴)。1小时后，将该混合物冷却至环境温度，汽提挥发性物质(旋转蒸发器)，得到粗产物。使用61mg规模(0.24mmol)重复该反应(如上所述-但使用10％H2O／乙醇作为溶剂)，如所述的进行后处理。通过制备型薄层色谱法纯化来自2次反应的合并的粗物质(3个板，用5％MeOH／CH2Cl2洗脱，然后用5％MeOH／CH2Cl2再展开)。收集产物带，得到1-(3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2（1H)-基)-2-甲酰基苯基)-1H-吲哚-3-甲酰胺，为淡黄色固体(51mg)。LC／MS计算值C28H23FN4O3(m／e)482.52，测定值483.0(M+H，ES+)：1HNMR(300MHz，氯仿-d)δppm1.40(s，9H)6.03(br.s，2H)7.20-7.36(m，3H)7.44-7.59(m，3H)7.66(d，J=7.93Hz，1H)7.81(t，J＝7.60Hz，1H)7.91(s，1H)8.19(m，1H)8.23(d，J=2.64Hz，1H)9.52(s，1H)。
步骤4：向冷却的(冰浴)包含溶于甲醇／二氯甲烷(1.35ml2.9：1)的1-(3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-2-甲酰基苯基)-1H-吲哚-3-甲酰胺(51mg0.11mmol)的烧瓶中通过缓慢滴加加入硼氢化钠(20mg，0.53mmol)的水(0.35ml)溶液。将该混合物搅拌10分钟，然后溶于二氯甲烷(20ml)和水(20ml)。将内含物倾入分液漏斗，搅拌。采集有机相，用50％稀盐水溶液（20ml)洗涤。采集二氯甲烷层，用二氯甲烷(2X20mL)反萃取水相。合并有机相，用硫酸镁干燥，过滤，汽提。通过经短硅胶柱过滤纯化粗物质，用7.5％甲醇／二氯甲烷洗脱。采集期望的级分，然后从热二氯甲烷／己烷溶液中结晶该物质，得到白色结晶产物，为1-(3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-2-(羟基甲基)苯基)-1H-吲哚-3-甲酰胺(37mg)。LC／MS计算值C28H25FN4O3(m／e)484.54，测定值485.0(M+H，ES+)：1H NMR(300MHz，氯仿-d)δppm1.44(s，9H)4.03-4.37(m，2H)5.49-6.00(br.s，2 H)7.18-7.38(m，3H)7.49-7.71(m，5H)8.13-8.28(m，2H)8.32(d，J=2.64Hz，1H)。
实施例19
1-(3-(6-叔丁基-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-2-(羟基甲基)-苯基)-1H-吲哚-3-甲酰胺
步骤1：按照与实施例18中所述类似的方法通过使1-(3-溴-2-甲酰基苯基)-1H-吲哚-3-腈(222mg，40％纯，0.27mmol，上述实施例18步骤1中合成)与6-叔丁基酞嗪-1(2H)-酮(138mg，0.68mmol)反应制备1-(3-(6-叔丁基-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-2-甲酰基苯基)-1H-吲哚-3-腈。进行类似的后处理和纯化得到期望的产物，为淡黄白色固体(82mg，66％收率)。LC／MS计算值C28H22N4O2(m／e)446.51，测定值447.0(M+H，ES+)：1H NMR(300MHz，氯仿-d)δppm1.44(s，9H)7.23-7.40(m，3H)7.55(dd，J=7.93，1.13Hz，2H)7.72-7.94(m，6H)8.32(s，1H)8.39(d，J＝8.31Hz，1H)9.59(s，1H)。
步骤2：按照与实施例18中所述类似的方法通过腈水解1-(3-(6-叔丁基-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-2-甲酰基苯基)-1H-吲哚-3-腈(82mg，0.18mmol)和 应用催化剂氢(二甲基三价膦酸-kp)[氢双-(二甲基三价膦酸-kp)]铂(II)催化剂(5mg，0.064mmol)制备1-(3-(6-叔丁基-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-2-甲酰基苯基)-1H-吲哚-3-甲酰胺。进行类似的后处理和纯化得到期望的产物，为淡黄色玻璃状固体(54mg，63％收率)。LC／MS计算值C28H24N4O3(m／e)464.5，测定值465.0(M+H，ES+)：1H NMR(300MHz，氯仿-d)δppm1.44(s，9H)7.21-7.37(m，3H)7.48-7.59(m，2H)7.67-7.76(m，2H)7.85(t，J=7.93，1.00Hz，1H)7.90(s，1H)8.14-8.20(m，1H)8.30(s，1H)8.37(d，J=8.31Hz，1H)9.56(s，1H)。
步骤3：按照与实施例18中所述类似的方法通过还原1-(3-(6-叔丁基-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-2-甲酰基苯基)-1H-吲哚-3-腈(54mg，0.12mmol)、通过应用硼氢化钠(22mg，0.58mmol)制备1-(3-(6-叔丁基-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-2-(羟基甲基)-苯基)-1H-吲哚-3-甲酰胺。进行类似的后处理和纯化得到期望的产物，为白色结晶固体(36mg，64％收率)。LC／MS计算值C28H26N4O3(m／e)466.54，测定值467.0(M+H，ES+)：1H NMR(300MHz，氯仿-d)δppm1.46(s，9H)4.07(b r.d，J=11.70Hz，1H)4.30(br.d，J=11.70Hz，1H)5.60-5.97(m，2H)7.20-7.38(m，3H)7.52-7.71(m，3H)7.80(d，J＝1.89Hz，1H)7.96(dd，J=8.31，1.89Hz，1H)8.17-8.29(m，2H)8.39(s，1H)8.46(d，J=8.31Hz，1H)。
实施例20
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲酰胺
步骤1：在100mL梨形烧瓶中，将1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-腈(150mg，1.05mmol，Eq：1.00)、醋酸铜(II)(381mg，2.1mmol，Eq：2)、吡啶(166mg，170μl，2.1mmol，Eq：2)和6-叔丁基-8-氟-2-(1-羟基-1，3-二氢-苯并[c][1，2]氧杂环戊硼烷-4-基)-2H-酞嗪-1-酮(706mg，1.15mmol，Eq：1.1)与二氯甲烷(10ml)合并，得到torquise混悬液。给该反应混合物通氮气。将该反应混合物加热至80℃，搅拌16hr。用饱和NH4Cl(50mL)稀释该反应体系，用EtOAc(3x50mL)萃取。在ISCO上用30-50％EtOAc的己烷溶液分离该混合物，得到1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-腈(122mg，25％)，为黄白色泡沫体。1H NMR(DMSO-d6)δ：8.64(dd，J=7.9，1.6Hz，1H)，8.60(d，J=2.5Hz，1H)，8.45(s，1H)，8.36(dd，J=4.8，1.8Hz，1H)，7.94(d，J=1.8Hz，1H)，7.82(dd，J=13.2，1.6Hz，1H)，7.66-7.78(m，3H)，7.63(dd，J=7.3，2.3Hz，1H)，7.36(dd，J=8.0，4.8Hz，1H)，7.18(br.s.，1H)，4.72(t，J=5.4Hz，1H)，4.11-4.34(m，2H)，1.44(s，9H)。MS m／e468.5(M+H+)。
步骤2：将搅拌的1-(3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-2-(羟基甲基)苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-腈(610mg，783μmol，Eq：1.00)、乙醛肟(139mg，143μl，2.35mmol，Eq：3)和氯化铟(III)(8.66mg，39.1μmol，Eq：0.05)在甲苯(25.2ml)中的溶液加热至110℃，搅拌3h。将该反应混合物倾入15mL EtOAc，用饱和NH4Cl(1x25mL)萃取。用MgSO4干燥有机层，真空浓缩。除去溶剂和通过快速色谱法分离残余物(硅胶，12g，80％-100％ EtOAc的己烷溶液)后，得到66mg期望的产物，带有杂质。通过制备型反相HPLC、用TFA再纯化该物质。用NaHCO3(1x25mL)中和期望的产物。用MgSO4干燥有机层，真空浓缩，用乙酸乙酯／甲醇(9：1)萃取，得到1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲酰胺(43mgs，12％)，为白色固体。1H NMR(DMSO-d6)δ：8.64(dd，J=7.9，1.6Hz，1H)，8.60(d，J=2.5Hz，1H)，8.45(s，1H)，8.36(dd，J=4.8，1.8Hz，1H)，7.94(d，J=1.8Hz，1H)，7.82(dd，J=13.2，1.6Hz，1H)，7.66-7.78(m，3H)，7.63(dd，J=7.3，2.3Hz，1H)，7.36(dd，J=8.0，4.8Hz，1H)，7.18(br.s.，1H)，4.72(t，J=5.4Hz，1H)，4.11-4.34(m，2H)，1.44(s，9H)。MS m／e486.6(M+H+)。
实施例21
步骤1：在100mL圆底烧瓶中，将1-甲基-4-(4，4，5，5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吡咯-2-甲酰胺(61.0mg，244μmol，Eq：1.10)、2-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-4-碘烟醛(100mg，222μmol，Eq：1.00)和[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)(16.2mg，22.2μmol，Eq：0.1)与二噁烷(667μl)合并，得到红色溶液。加入碳酸钾(61.3mg，443μmol，Eq：2)的水(66.7μl)溶液，将得到的混悬液加热至70℃，搅拌32h。用乙酸乙酯 (10mL)稀释该反应体系，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，真空浓缩。通过快速色谱法纯化粗物质(硅胶，12g，10％-15％EtOAc的己烷溶液，得到4-[2-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-3-甲酰基-吡啶-4-基]-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺(28mg，28.2％)，为黄白色固体。1H NMR(DMSO-d6)δ：10.06(s，1H)，8.72(d，J=5.3Hz，1H)，8.53(d，J=2.5Hz，1H)，7.91(d，J=1.8Hz，1H)，7.79(dd，J=13.3，1.8Hz，1H)，7.73(d，J=5.3Hz，1H)，7.69-7.76(m，1H)，7.50(d，J=1.8Hz，1H)，7.17(d，J=2.0Hz，1H)，7.12(br.s.，1H)，3.93(s，3H)，1.39(s，9H)；MS m／e448.5(M+H+)。
步骤2：在25mL梨形烧瓶中，将4-(2-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-3-甲酰基吡啶-4-基)-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺(28mg，62.6μmol，Eq：1.00)与CH2Cl2(3ml)和MeOH(1ml)合并，得到无色溶液。加入硼氢化钠(4.73mg，125μmol，Eq：2.00)。将该反应混合物搅拌1h。将该反应混合物倾入EtOAc(25mL)，用饱和NH4Cl(3x10mL)萃取。用MgSO4干燥有机层，真空浓缩，然后冻干，得到4-[2-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-3-羟基甲基-吡啶-4-基]-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺(14mg，50％)，为白色固体。1H NMR(DMSO-d6)δppm8.52(d，J=2.8Hz，1H)，8.46(d，J=5.0Hz，1H)，7.90(d，J=1.8Hz，1H)，7.77(dd，J=13.3，1.8Hz，1H)，7.55-7.72(m，1H)，7.52(d，J=5.0Hz，1H)，7.49(d，J=1.8Hz，1H)，7.23(d，J=2.0Hz，1H)，7.04(br.s.，1H)，4.88(br.s.，1H)，4.29-4.57(m，2H)，3.91(s，3H)，1.39(s，9H)；MS m／e450.5(M+H+)。
实施例22
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-[4-(1-羟基-1-甲基-乙基)-苯基氨基]-1H-吡唑-4-甲酰胺
步骤1：将来自实施例15步骤1的5-氨基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-腈(500mg，2.1mmol)、2-(4-溴苯基)丙-2-醇(519mg，2.41mmol)和碳酸铯(1.03g，3.15mmol)溶于无水甲苯(14ml)。用氩气给该混合物脱气，加入双(三-叔丁膦)钯(107mg，0.21mmol)。用氩气给该混合物脱气，然后在氩气气氛中在120C搅拌4.5小时。再加入2-(4-溴苯基)丙-2-醇(50mg)，将该混合物加热2小时以上。将该物质冷却至环境温度，搅拌过夜。通过硅藻土垫过滤粗物质，用乙酸乙酯(60ml)充分冲洗。将有机层与水(60ml)氩气在分液漏斗中充分振摇，收集。用乙酸乙酯(2x40ml)反萃取水相。用硫酸镁干燥合并的有机相，过滤，汽提。通过Analogix闪蒸塔色谱法、使用乙酸乙酯的己烷溶液(10％-45％梯度，23g硅胶)纯化剩余物，得到5-(4-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-腈，为红棕色粘性油状物(482mg，62％收率)。LC／MS计算值C19H28N4O2Si(m／e)372.55，测定值371(M-H，ES-)。
步骤2：将5-(4-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧 基)甲基)-1H-吡唑-4-腈(480mg，1.13mmol)溶于氟化四丁基铵溶液(1M，16.8ml)，密封烧瓶。将该混合物置于加热至110℃的油浴中，搅拌28小时。将该混合物冷却至环境温度。加入水(60ml)和乙醚(60ml)，将该物质在分液漏斗中振摇，采集有机相。用乙醚(2x50ml)反萃取水相。合并有机相，用硫酸镁干燥，过滤，汽提。通过Analogix闪蒸塔色谱法、使用乙酸乙酯的己烷溶液(30％-90％梯度，40g硅胶)纯化粗剩余物，得到3-(4-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)-1H-吡唑-4-腈，为黄白色粉末(128mg，47％收率)。LC／MS计算值C13H14N4O(m／e)242.28，测定值241(M-H，ES-)。
步骤3：通过与实施例15中所述类似的方案将3-(4-(2-羟基丙-2-基)苯基氨基)-1H-吡唑-4-腈转化成1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-甲酰基-苯基]-3-[4-(1-羟基-1-甲基-乙基)-苯基氨基]-1H-吡唑-4-腈。
步骤4：将1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-甲酰基-苯基]-3-[4-(1-羟基-1-甲基-乙基)-苯基氨基]-1H-吡唑-4-腈(78mg，0.14mmol)和二氢三(二甲基三价膦酸)氢铂酸盐(7.1mg，0.12eq)溶于四氢呋喃(3.1ml)和水(0.31ml)。搅拌该物质，加热至回流(油浴)1小时。将该混合物冷却至环境温度，汽提挥发性物质(旋转蒸发器)。通过制备型薄层色谱法纯化粗物质(2个板，首先用7％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱，然后用6％甲醇的二氯甲烷溶液再展开)。采集产物带，得到期望的1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-甲酰基-苯基]-3-[4-(1-羟基-1-甲基-乙基)-苯基氨基]-1H-吡唑-4-甲酰胺，为淡黄色粉末(41mg)。LC／MS计算值C32H31FN6O4(m／e)582.62，测定值581.0(M-H，ES-)。
步骤5：将1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-甲酰基-苯基]-3-[4-(1-羟基-1-甲基-乙基)-苯基氨基]-1H-吡唑-4-甲酰胺(34mg，0.06mmol)溶于1：1的甲醇和二氯甲烷溶液(15ml)。通过滴加向其中加入溶于水(0.25ml)的硼氢化钠溶液(11mg，0.29mmol)。搅拌10分钟后，汽提挥发性物质(旋转蒸发器)，将剩余物溶于二氯甲烷(30ml)和水(30ml)，在分液漏斗中振摇。采集有机相，用二氯甲烷(2x25ml)反萃取水相。合并有机萃取物，用硫酸镁干燥，过滤，汽提。通过硅胶色谱法纯化粗物质(1g，用7.5％ 甲醇的二氯甲烷溶液洗脱)，得到期望的产物1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-[4-(1-羟基-1-甲基-乙基)-苯基氨基]-1H-吡唑-4-甲酰胺，为黄白色粉末(32mg)。LC／MS计算值C32H33FN6O4(m／e)584.66,测定值583(M-H，ES-)。
实施例23
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-(5-氯-吡啶-2-基氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
步骤1：按照与WO2005／5414A2中所述类似的方法进行。因此，将3-氨基-4-氰基吡唑(11g，102mmol)溶于二碘甲烷(150ml，1.87mol)，将烧瓶冷却至-10℃。在有效搅拌下通过在40分钟内滴加加入亚硝酸异戊酯(92.4ml，688mmol)。添加完成后，将该混合物搅拌5分钟。然后除去添加烧瓶。用高效冷凝器替代，将该物质在100℃加热(油浴)2小时。将烧瓶冷却至环境温度，除去溶剂(旋转蒸发器，最终用机械泵)。将剩余物溶于乙酸乙酯(120 ml)，转入分液漏斗。加入5％焦亚硫酸氢钠水溶液(120ml)，振摇双相混合物。采集有机相，与1N盐酸溶液(水溶液，120ml)、然后与水(120ml)一起振摇。采集有机相，用乙酸乙酯(2x100ml)反萃取水相。合并有机萃取物，用硫酸镁干燥，过滤，汽提。使粗产物吸附在硅胶(约25g，来自二氯甲烷)上，通过Analogix闪蒸塔色谱法、使用乙酸乙酯的己烷溶液(23％-50％梯度，80g硅胶)纯化(干上样)，得到淡黄色粉末(20g)。通过从热乙酸乙酯／己烷热中结晶进一步纯化该物质，得到3-碘-1H-吡唑-4-腈(11.3g)，为淡棕色固体，通过过滤收集(用5％乙酸乙酯／己烷充分冲洗)。从母液中又得到第二批物质(3.76g)。LC／MS计算值C4H2IN3(m／e)218.98，测定值218(M-H，ES-)。
步骤2：在氮气气氛中将3-碘-1H-吡唑-4-腈(3.62g，16.5mmol)溶于干四氢呋喃(67ml)。1次加入氢化钠(992mg，24.8mmol，60％的油溶液)，将该混合物置于加热(50℃)超声浴中50分钟。向该混合物中加入2-氟-6-碘苯甲醛(5.37g，21.5mmol)，将该混合物放入加热至60-65℃的油浴中。2小时后，再加入2-氟-6-碘苯甲醛(350mg，1.4mmol)，将该物质搅拌1小时以上。将烧瓶冷却至环境温度，汽提接近90％的溶剂(旋转蒸发器)。加入乙醚(30ml)和水(50ml)，将该混合物剧烈搅拌30分钟。通过过滤收集沉淀的产物，用乙醚和水充分冲洗，真空烘箱干燥，得到浅褐色粉末(4.78g)。将该固体产物溶于2％甲醇的二氯甲烷溶液(约60ml，加热至溶解)，转入分液漏斗。加入水(60ml)，振摇该物质，采集有机相。用硫酸镁干燥，过滤，汽提，得到期望的1-(2-甲酰基-3-碘-苯基)-3-碘-1H-吡唑-4-腈，为淡黄色粉末(3.973g)。LC／MS计算值C11H5I2N3O(m／e)448.99，测定值450(M+H，ES+)。
步骤3：向烘干的烧瓶中加入1-(2-甲酰基-3-碘-苯基)-3-碘-1H-吡唑-4-腈(1.703g，3.79mmol)、6-叔丁基-8-氟酞嗪-1(2H)-酮[根据US2010／0222325制备](919mg，4.17mmol)和碳酸氢钠(637mg，7.59mmol)，溶于干二甲亚砜(30ml)。在超声浴中用氩气给该混合物脱气。加入碘化亚铜(722mg，3.79mmol)，再次给该物质彻底脱气。在超声处理下，将该混合物加热至60℃ 2.5小时，保持在环境温度过夜。再加入碘化亚铜(360mg)，将该物质在60C在超声处理下加热4小时。将烧瓶冷却至环境温度，在剧烈搅拌下加入二氯甲烷(40ml)和水(40ml)。5分钟后，通过硅藻土垫过滤该物质，用1％甲醇的二氯甲烷溶液充分冲洗。将滤液转入分液漏斗，采集有机相。将其与50％稀盐水溶液(60ml，一些碎屑)一起振摇。采集二氯甲烷相，用二氯甲烷反萃取水相(注意：观察到一些碎屑。它有助于在反萃取时使用较大体积的有机和水溶液)。用硫酸镁干燥合并的有机相，过滤，汽提。将剩余物溶于二氯甲烷，通过Analogix闪蒸塔色谱法纯化，首先用100％二氯甲烷洗脱(保持5分钟)，然后切换至1％-3％甲醇的二氯甲烷溶液梯度(25g硅胶)，得到期望的1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-甲酰基-苯基]-3-碘-1H-吡唑-4-腈，为淡棕色粉末(1.2g)。LC／MS计算值C23H17FIN5O2(m／e)541.32，测定值542(M+H，ES+)。
步骤4：将1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-甲酰基-苯基]-3-碘-1H-吡唑-4-腈(1.2g，2.22mmol)溶于二氯甲烷(40ml)和甲醇(80ml)溶液。通过滴加向其中加入溶于水(0.35ml)的硼氢化钠(21mg，0.53mmol)溶液。搅拌10分钟后，汽提挥发性物质(旋转蒸发器)，将剩余物溶于二氯甲烷(60ml)和水(50ml)，在分液漏斗中振摇。采集有机相，用二氯甲烷(2x50ml)反萃取水相。合并有机萃取物，用硫酸镁干燥，过滤，汽提。通过Analogix闪蒸塔色谱法纯化粗产物(40g柱，首先用100％-二氯甲烷洗脱[保持10分钟]，然后切换至1％甲醇的二氯甲烷溶液，得到期望的产物1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-碘-1H-吡唑-4-腈，为淡橙色油状物，静置时固化(1.029g)。LC／MS计算值C23HwFIN5O2(m／e)543.33，测定值544(M+H，ES+)。
步骤5：向小圆底烧瓶中加入1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-碘-1H-吡唑-4-腈(212mg，0.39mmol)、5-氯吡啶-2-胺(65mg，0.51mmol)、XANTPHOS(56mg，0.098mmol)和碳酸铯(381mg，1.17mmol)。加入干二噁烷(5.7ml)，用氩气给该混合物彻底脱气。加入Pd2(dba)3(46mg，0.051mmol)，用氩气再次给该物质脱气。将烧瓶放入加 热至95℃的油浴中2.5小时。将烧瓶冷却至环境温度，加入乙酸乙酯(30ml)和水(30ml)。将内含物在分液漏斗中振摇，采集有机相。用乙酸乙酯(2x30ml)反萃取水相，合并有机相，用硫酸镁干燥，过滤，汽提。通过制备型薄层色谱法纯化粗物质(2个板，用4％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱)。采集产物带，得到期望的1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-(5-氯-吡啶-2-基氨基)-1H-吡唑-4-腈，为淡黄色粉末(111mg)。LC／MS计算值C28H23ClFN7O2(m／e)543.98，测定值544(M+H，ES+)。
步骤6：将1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-(5-氯-吡啶-2-基氨基)-1H-吡唑-4-腈(111mg，0.204mmol)和二氢三(二甲基三价膦酸)氢铂酸盐(10.5mg，0.025mmol)溶于四氢呋喃(3.8ml)和水(0.38ml)。搅拌该物质，加热至回流(油浴)1小时。将该混合物冷却至环境温度，汽提挥发性物质(旋转蒸发器)。通过制备型薄层色谱法纯化粗剩余物(2个板，首先用7％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱，然后再用7％甲醇的二氯甲烷溶液再展开)。采集产物带，得到期望的1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1-H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-(5-氯-吡啶-2-基氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺，为黄白色粉末(70mg)。LC／MS计算值C28H25ClFN7O3(m／e)561.99，测定值562(M+H，ES+)。
实施例24
3-[5-(2-氮杂环丁烷-3-基-1,1-二甲基-乙氧基)-吡啶-2-基氨基]-1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-1H-吡唑-4-甲酰胺
步骤1：在氮气气氛中将2-(6-氯吡啶-3-基氧基)-2-甲基丙醛[根据US2012／40949A1制备](28g，140mmol，Eq：1.00)溶于干二氯甲烷(252ml)，冷却至-10℃(干冰／乙腈冷却浴)。加入乙酸(10.4ml，182mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(41.6g，196mmol)。接下来通过滴液漏斗在6分钟内在有效搅拌下加入氮杂环丁烷(17ml，252mmol)。添加完成后，将该混合物搅拌5分钟，然后除去冷却浴，将该物质温至环境温度。1小时后，加入饱和碳酸氢钠水溶液(200ml)和二氯甲烷(80ml)。将双相物质转入分液漏斗，搅拌，采集有机相。将其与5％碳酸氢钠溶液(200ml)、然后与50％稀盐水溶液(200ml)一起振摇。采集有机相，用二氯甲烷(2100ml)反萃取水相。合并有机相，用硫酸镁干燥，过滤，汽提。通过柱色谱法纯化粗的剩余物质(硅胶，40g)，用4％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱，得到期望的5-(2-氮杂环丁烷-1-基-1,1-二甲基-乙氧基)-2-氯-吡啶(29.66g)，为金棕色流动性油状物。LC／MS计算值C12H17ClN2O(m／e)240.73，测定值241(M+H，ES+)。
步骤2：向脱气的5-(2-氮杂环丁烷-1-基-1，1-二甲基-乙氧基)-2-氯-吡啶(21.2g，88.1mmol)在无水四氢呋喃(314ml)中的溶液中加入2-(二环己基膦基)联苯(6.17g，17.6mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(8.06g，8.81mmol)。然后在5分钟内通过加液漏斗加入1M双(三甲基甲硅烷基)氨基锂的THF溶液(264ml，264mmol)。将该反应混合物在氩气气氛中在75℃搅拌 过夜。将该反应混合物倾入饱和氯化铵水溶液(400ml)，用乙酸乙酯(350ml)萃取。采集有机相，用50％稀盐水(350ml)洗涤。采集有机相，用乙酸乙酯(2X200ml)反萃取水相。用硫酸镁干燥合并的有机相，过滤，汽提。通过Analogix闪蒸塔色谱法(80g柱)纯化剩余物，用0％-12％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱，得到期望的5-(2-氮杂环丁烷-1-基-1，1-二甲基-乙氧基)-吡啶-2-基胺(10.59g)，为深棕色半粘性油状物(和纯度较低的级分，其可以在类似条件下再纯化，又得到4.01g产物)。LC／MS计算值C12H19N3O(m／e)221.3，测定值222(M+H，ES+)。
步骤3和4：使用与实施例16-C步骤5和6中所述类似的方案将上述步骤2中制备的5-(2-氮杂环丁烷-1-基-1，1-二甲基-乙氧基)-吡啶-2-基胺转化成期望的产物，得到粗产物。通过制备型薄层色谱法纯化该物质(2个板，首先用14％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱、然后用12％甲醇的二氯甲烷溶液再展开2次以上)，得到期望的3-[5-(2-氮杂环丁烷-1-基-1，1-二甲基-乙氧基)-吡啶-2-基氨基]-1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-1H-吡唑-4-甲酰胺，为淡棕色粉末(27mg)。LC／MS计算值C35H39FN8O4(m／e)654.73，测定值655(M+H，ES+)。
表I*描述了使用与上述实施例中所述类似的方法制备的另外的类似物。
表I*
实施例39
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-(5-氰基-吡啶-2-基氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
步骤1：将1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-(5-氯-吡啶-2-基氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(在上述实施例23中制备)(31mg，55.2μmol)、氰化锌(51.8mg，441μmol)和2-二环己基膦基-2’，6’-二甲氧基联苯(6mg，14.6μmol)在小容量微波试管内溶于1.5mL干二甲基甲酰胺，用氩气彻底脱气。加入三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(7mg，7.6μmol)，再脱气。将该混合物在微波反应器中在150℃加热60分钟。汽提溶剂(旋转蒸发器／泵)，将剩余物溶于乙酸乙酯(25ml)和水(25mL)，在分液漏斗中振摇。采集有机相，用乙酸乙酯(2x20ml)反萃取水相。合并有机相，用硫酸镁干燥，过滤，汽提。通过制备型薄层色谱法纯化粗产物(1个板，用9.5％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱)。采集产物带，得到半纯的期望的产物(21mg，91％纯)。为了更大纯度，使物质再上1个制备型薄层色谱板，用7％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱。用7％、然后8.5％且最终9％甲醇的二氯甲烷溶液再展开板，此时分离更具有极性的杂质。采集极性较低的产物带，得到期望的1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-(5-氰基-吡啶-2-基氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺，为黄白色固体(17mg，56％)。LC／MS 计算值C29H25FN8O3(m／e)552.57，测定值553(M+H，ES+)。
实施例40
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-1H-吡唑-3-甲酰胺
步骤1：将1H-吡唑-3-腈(850mg，9.13mmol)溶于15mL干DMSO，加入叔丁醇钾(1.08g，9.13mmol，Eq：1.00)。将该混合物在室温搅拌20分钟，加入2-溴-6-氟苯甲醛(3.71g，18.3mmol，Eq：2)。将该混合物在室温搅拌过夜，然后用乙酸乙酯和水萃取。干燥有机层，浓缩。通过快速色谱法纯化粗物质(硅胶，40g，20％-40％EtOAc的己烷溶液)，得到1-(3-溴-2-甲酰基苯基)-1H-吡唑-3-腈(1.83g，73％)。
步骤2：在25mL容器中，将1-(3-溴-2-甲酰基苯基)-1H-吡唑-3-腈(50mg，181μmol，Eq：1.00)、6-叔丁基-8-氟酞嗪-1(2H)-酮(79.8mg，362μmol，Eq：2)和碘化亚铜(I)(69.0mg，362μmol，Eq：2.00)与DMSO(2.00ml)合并，得到黄色混悬液。向其中加入碳酸氢钠(38.0mg，453μmol，Eq：2.5)。将该混合物在微波中在120℃加热1hr。将该反应混合物倾入25mL饱和NH4Cl，用EtOAc(3x25mL)萃取。用MgSO4干燥有机层，真空浓缩。浓缩有机层，通过ISCO闪蒸塔色谱法、使用乙酸乙酯(包含5％甲醇)的己烷溶液(5％-80％线性梯度，15分钟，12g硅胶)纯化，得到纯的期望的产物，将其与乙醚的己烷溶液一起研磨，过滤，得到1-(3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)- 基)-2-甲酰基苯基)-1H-吡唑-3-腈(19mg，25％)。
步骤3：在25mL容器中，将1-(3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-2-甲酰基苯基)-1H-吡唑-3-腈(18mg，43.3μmol，Eq：1.00)、硼氢化钠(6.56mg，173μmol，Eq：4)与CH2Cl2(2mL)和MeOH(1mL)合并，得到白色混悬液。将该混合物搅拌1hr。将该反应混合物倾入25mL饱和NH4Cl，用EtOAc(3x25mL)萃取。用MgSO4干燥有机层，真空浓缩。浓缩有机层，得到1-(3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-2-(羟基甲基)苯基)-1H-吡唑-3-腈(16mg，99％)白色产物。
步骤4：在10mL圆底烧瓶中，将1-(3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-2-(羟基甲基)苯基)-1H-吡唑-3-腈(16mg，38.3μmol，Eq：1.00)和[氢双(二甲基三价膦酸-kP)]铂(II)(1mg，2.33μmol，Eq：0.0608)与乙醇(821μl)和水(410μl)合并，得到无色溶液。将该反应混合物加热至80℃，搅拌2h。用DCM稀释该反应混合物。通过玻璃纤维滤纸过滤该反应混合物。通过制备型HPLC纯化粗物质，得到1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-1H-吡唑-3-甲酰胺(11mg，66％，[M+H]+436)冻干的白色固体。
实施例41
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-1H-吡唑-4-甲酰胺
步骤1：将1H-吡唑-4-腈(935mg，10.0mmol，Eq：1.00)溶于15mL干DMSO，加入叔丁醇钾(1.19g，10.0mmol，Eq：1.00)。将该混合物在室温搅拌20分钟，加入2-溴-6-氟苯甲醛(4.08g，20.1mmol，Eq：2)。将该混合物在室温搅拌过夜，然后用乙酸乙酯和水萃取。干燥有机层，浓缩。通过快速色谱法纯化粗物质(硅胶，40g，20％-40％EtOAc的己烷溶液)，得到1-(3-溴-2-甲酰基苯基)-1H-吡唑-4-腈(1.53g，55％)。
步骤2：在25mL容器中，将1-(3-溴-2-甲酰基苯基)-1H-吡唑-4-腈(100mg，362μmol，Eq：1.00)、6-叔丁基-8-氟酞嗪-1(2H)-酮(160mg，724μmol，Eq：2)和碘化亚铜(I)(138mg，724μmol，Eq：2.00)与DMSO(2.00ml)合并，得到黄色混悬液。向其中加入碳酸氢钠(76.1mg，906μmol，Eq：2.5)。将该混合物在微波中在120C加热1hr。将该反应混合物倾入25mL饱和NH4Cl，用EtOAc(3x25mL)萃取。用MgSO4干燥有机层，真空浓缩。浓缩有机层，通过ISCO闪蒸塔色谱法、使用乙酸乙酯(包含5％甲醇)的己烷溶液(5％-80％线性梯度，15分钟，24g硅胶)纯化，得到纯的期望的产物，与乙醚的己烷溶液一起研磨，过滤，得到1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-甲酰基-苯基]-1H-吡唑-4-腈(110mg，73％)。
步骤3：如实施例22中所述将醛还原成醇。
步骤4：在25mL圆底烧瓶中，将1-(3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-2-(羟基甲基)苯基)-1H-吡唑-4-腈(89mg，213μmol，Eq：1.00)和氢(二甲 基磷酸-kP)(hydrido(dimethylyphosphinous acid))(4.58mg，10.7μmol，Eq：0.05)与乙醇(1ml)和水(1.00ml)合并，得到无色溶液。将该反应混合物加热至85℃，搅拌45min。使混合物达到室温，真空除去溶剂。通过反相HPLC纯化，得到1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-1H-吡唑-4-甲酰胺(51mg，56％，[M+H]+436)。
实施例42
7-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-甲酰胺
步骤1：在250mL圆底烧瓶中，将7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(4.34g，36.4mmol，Eq：1.00)和N-碘琥珀酰亚胺(8.61g，38.3mmol，Eq：1.05)与乙腈(60ml)合并，得到淡棕色混悬液。将该反应混合物搅拌3h。将该反应混合物倾入100mLH2O，用EtOAc(3x50mL)萃取。用MgSO4干燥有机层，真空浓缩。将粗物质与乙醚(2x25mL)一起研磨，得到5-碘-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(7.58g，85％)，为橙色固体。
步骤2：在200mL圆底烧瓶中，将5-碘-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(2.5g，10.2mmol，Eq：1.00)、三乙胺(1.14g，1.56ml，11.2mmol，Eq：1.1)和DMAP(74.8mg，612μmol，Eq：0.06)与CH2Cl2(50.0ml)合并，得到橙色混悬液。将甲苯磺酰基-Cl(2.00g，10.5mmol，Eq：1.03)1次加入到反应混合物中， 将该反应混合物再搅拌3hrs。将该反应混合物倾入25mL H2O，用DCM(3x25mL)萃取。用MgSO4干燥有机层，真空浓缩，得到2gm红色油状物。通过快速色谱法纯化粗物质(硅胶，80g，25％-70％EtOAc的己烷溶液)，得到5-碘-7-甲苯磺酰基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(1g，24.6％)，为黄色固体。
步骤3：在20mL圆底烧瓶中，将5-碘-7-甲苯磺酰基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(3.32g，8.32mmol，Eq：1.00)、氰化亚铜(I)(2.98g，33.3mmol，Eq：4)、Pd2(dba)3(305mg，333μmol，Eq：0.04)和DPPF(738mg，1.33mmol，Eq：0.16)与二噁烷(48.1ml)合并，得到黄色混悬液。用氩气净化该反应体系，将混合物加热至80℃，搅拌4h。LCMS在4h时显示反应完成。真空浓缩粗反应混合物。将粗物质与乙醇(2x15mL)一起研磨，得到1g黄白色固体。
步骤4：在15mL圆底烧瓶中，将7-甲苯磺酰基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈(1g，3.35mmol，Eq：1.00)和TBAF(13.4ml，13.4mmol，Eq：4.00)与四氢呋喃合并，得到黄白色溶液。将该反应混合物搅拌3h。将该反应混合物倾入20mL饱和NH4Cl，用EtOAc(3x25mL)萃取。用MgSO4干燥有机层，真空浓缩。将粗物质与乙醚(1x20mL)一起研磨，得到7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈(312mg，65％)。
步骤5：在25mL圆底烧瓶中，将7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈(40.9mg，284μmol，Eq：1.00)、6-叔丁基-8-氟-2-(1-羟基-1,3-二氢苯并[c][1，2]氧杂环戊硼烷-4-基)酞嗪-1(2H)-酮(100mg，284μmol，Eq：1.00)、醋酸铜(34.8mg)和吡啶(44.9mg，45.9μl，568μmol，Eq：2)与二氯乙烷合并，得到深蓝色混悬液。给该反应混合物通氮气。将该反应混合物加热至80℃，搅拌16hr。用饱和NH4Cl(50mL)稀释该反应体系，用EtOAc(3x50mL)萃取。通过使用30-50％EtOAc的己烷溶液的闪蒸塔分离该混合物，得到7-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈(42mg，31％)，为冻干的白色粉末。
步骤6：在10mL圆底烧瓶中，将7-(3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-2-(羟基甲基)苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈(39mg，83.2μmol，Eq：1.00)和[氢双(二甲基三价膦酸-kP)]铂(II)(1mg，2.33μmol，Eq：0.0280)与乙 醇(2ml)和水(1ml)合并，得到无色溶液。将该反应混合物加热至80℃，搅拌2h。用DCM稀释该反应混合物。通过玻璃纤维滤纸过滤该反应混合物。进行HPLC纯化，得到7-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-甲酰胺(33mg，66％，[M+H]+487)。
实施例43
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲酰胺
步骤1：在25mL圆底烧瓶中，将6-溴-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(250mg，1.27mmol，Eq：1.00)、TIPS-OTf(972mg，860μl，3.17mmol，Eq：2.5)和DIEA(492mg，665μl，3.81mmol，Eq：3)与二噁烷(6.25ml)合并，得到淡棕色溶液。将该反应混合物加热至55℃，搅拌16h。将该反应混合物倾入20mL EtOAc，用饱和NaHCO3(3x10mL)萃取。用MgSO4干燥有机层，真空浓缩。通过快速色谱法纯化粗物质(硅胶，12g，5％-10％EtOAc的己烷溶液)，得到6-溴-1-(三异丙基甲硅烷基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(380mg，85％)无色油状物。
步骤2：在25mL圆底烧瓶中，将6-溴-1-(三异丙基甲硅烷基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(520mg，1.47mmol，Eq：1.00)、乙酸钯(II)(165mg，736μmol， Eq：0.5)和叔丁膦(149mg，182μl，736μmol，Eq：0.5)与甲苯合并，得到黄色溶液。加入1-甲基哌嗪(442mg，491μl，4.41mmol，Eq：3)和叔丁醇钠(424mg，4.41mmol，Eq：3)。将该反应混合物加热至80℃，搅拌1h。将该反应混合物倾入20mLEtOAc，用饱和NaCl(3x20mL)萃取。用MgSO4干燥有机层，真空浓缩。通过快速色谱法纯化粗物质(硅胶，12g，2％-5％MeOH的DCM溶液)，得到6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1-(三异丙基甲硅烷基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(326mg，60％)，为黄色油状物，静置时固化。
步骤3：在25mL圆底烧瓶中，将6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1-(三异丙基甲硅烷基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(320mg，859μmol，Eq：1.00)与DMF(11.8ml)合并，得到无色溶液。将该反应混合物冷却至-20℃，搅拌5min。滴加在乙腈(11.8ml)中的异氰酸氯磺酰酯(365mg，224μl，2.58mmol，Eq：3)，将得到的冷却的反应体系在-20℃搅拌3hrs。将该反应混合物倾入25mLEtOAc，用饱和NaCl(3x20mL)萃取。通过快速色谱法纯化粗物质(硅胶，12g，5％-10％MeOH的DCM溶液)，得到6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-腈(113mg，55％)。
步骤4：在25mL圆底烧瓶中，将6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-腈(110mg，456μmol)、6-叔丁基-8-氟-2-(1-羟基-1,3-二氢苯并[c][1，2]氧杂环戊硼烷-4-基)酞嗪-1(2H)-酮(177mg，501μmol，Eq：1.10)和醋酸铜(112mg)与1,2-二氯乙烷(3.03ml)合并，得到蓝色混悬液。加入吡啶(72.1mg，73.7μl，912μmol，Eq：2)。将该反应混合物加热至45℃，搅拌2d。将该反应混合物倾入20mLEtOAc，用饱和NH4Cl(3x20mL)萃取。用MgSO4干燥有机层，真空浓缩。通过快速色谱法纯化粗物质(硅胶，40g，5％-10％MeOH的DCM溶液)，得到1-(3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-2-(羟基甲基)苯基)-6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-腈(43mg，17％)，为黄白色固体。
步骤5：在25mL圆底烧瓶中，将1-(3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-2-(羟基甲基)苯基)-6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-腈(43mg，76.0μmol)和[氢双(二甲基三价膦酸-kP)]铂(II)(2.00mg，4.66μmol， Eq：0.0613)与乙醇(1.00ml)和水(1.00ml)合并，得到无色溶液。将该反应混合物加热至45℃，搅拌1h。真空浓缩粗反应混合物。用乙腈和水稀释混合物，过滤。冻干得到的滤液，得到1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲酰胺(35mg，97％，[M+H]+584)。
实施例44
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-6-吗啉-4-基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲酰胺
步骤1：在25mL圆底烧瓶中，将6-溴-1-(三异丙基甲硅烷基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(800mg，2.26mmol，Eq：1.00)、乙酸钯(II)(254mg，1.13mmol，Eq：0.5)和叔丁膦(229mg，279μl，1.13mmol，Eq：0.5)与甲苯合并，得到黄色溶液。加入吗啉(789mg，789μl，9.06mmol，Eq：4)和叔丁醇钠(653mg，6.79mmol，Eq：3)。将该反应混合物加热至80℃，搅拌1h。将该反应混合物倾入20mL饱和NaCl，用EtOAc(3x20mL)萃取。用MgSO4干燥有机层，真空浓缩。通过快速色谱法纯化粗物质(硅胶，80g，10％-15％EtOAc的己烷溶液)，得到4-(1-(三异丙基甲硅烷基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-6-基)吗啉(703mg，86％)，为淡棕色油状物。
步骤2：在25mL圆底烧瓶中，将4-(1-(三异丙基甲硅烷基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-6-基)吗啉(803mg，2.23mmol)与DMF(1.00ml)合并，得到无色溶液。将该反应混合物冷却至-20C，搅拌5min。滴加在乙腈(1ml)中的异氰酸氯磺酰酯(474mg，291μl，3.35mmol，Eq：1.5)，将得到的冷却反应体系在-20℃搅拌3h。将该反应混合物倾入饱和NaCl(25mL)，用EtOAc(3x20mL)萃取。用MgSO4干燥有机层，真空浓缩，得到390mg油状物。在25mL圆底烧瓶中，将粗氰基化合物和TBAF(1.02ml，1.02mmol，Eq：1)与THF(2.00ml)合并，得到白色混悬液。将该反应混合物搅拌1h。LC-MS在t=1h显示反应完成。将该反应混合物倾入20mL DCM，用饱和NaHCO3(2x25mL)萃取。用MgSO4干燥有机层，真空浓缩。通过快速色谱法纯化粗物质(硅胶，24g，50％EtOAc的己烷溶液)，得到6-吗啉代-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-腈(180mg，35％)，为白色固体。
步骤3：在25mL圆底烧瓶中，将6-吗啉代-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-腈(65mg，285μmol，Eq：1.00)、6-叔丁基-8-氟-2-(1-羟基-1,3-二氢苯并[c][1，2]氧杂环戊硼烷-4-基)酞嗪-1(2H)-酮(150mg，427μmol，Eq：1.5)和醋酸铜(69.8mg)与1,2-二氯乙烷(3ml)合并，得到蓝色混悬液。加入吡啶(45.1mg，46.1μl，570μmol，Eq：2)。将该反应混合物加热至45℃，搅拌2d。将该反应混合物倾入20mL饱和NH4Cl，用EtOAc(3x20mL)萃取。用MgSO4干燥有机层，真空浓缩。通过快速色谱法纯化粗物质(硅胶，40g，5％-10％MeOH的DCM溶液，然后用硅胶，12g，30％-45％EtOAc的己烷溶液)，得到1-(3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-2-(羟基甲基)苯基)-6-吗啉代-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-腈(157mg，50％)，为无色油状物，干燥时为泡沫体。
步骤4：在25mL圆底烧瓶中，将1-(3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-2-(羟基甲基)苯基)-6-吗啉代-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-腈(75mg，136μmol，Eq：1.00)和[氢双(二甲基三价膦酸-kP)]铂(II)(2mg，4.66μmol，Eq：0.0343)与乙醇(1ml)和水(1.00ml)合并，得到无色溶液。将该反应混合物加热至45℃，搅拌1h，然后真空浓缩。用乙腈和水稀释混合物，过滤。冻 干得到的滤液，得到1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-6-吗啉-4-基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲酰胺(70mg，90％，[M+H]+571)。
实施例45
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-6-(6-乙氧基-吡啶-3-基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲酰胺
步骤1：在100mL圆底烧瓶中，将1-乙酰基-6-溴-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-腈(250mg，947μmol，Eq：1.00)、三乙胺(575mg，792μl，5.68mmol，Eq：6)和X-PHOS(181mg，379μmol，Eq：0.40)与二噁烷(25ml)合并，得到无色溶液。加入[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)(173mg，237μmol，Eq：0.25)和2-乙氧基-5-吡啶硼酸(205mg，1.23mmol，Eq：1.3)，将得到的混合物在氮气气氛中脱气5分钟。将该反应混合物加热至100℃，搅拌O／N h。将该反应混合物倾入50mL H2O，用EtOAc(3x50mL)萃取。用MgSO4干燥有机层，真空浓缩。通过快速色谱法纯化粗物质(硅胶，40g，20％-30％ EtOAc的己烷溶液)，得到6-(6-乙氧基吡啶-3-基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-腈(167mg，67％)。
步骤2：在25mL圆底烧瓶中，将6-(6-乙氧基吡啶-3-基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-腈(110mg，416μmol，Eq：1.00)、6-叔丁基-8-氟-2-(1-羟基-1，3-二氢苯并[c][1，2]氧杂环戊硼烷-4-基)酞嗪-1(2H)-酮(161mg，458μmol，Eq：1.10)和醋酸铜(102mg)与1,2-二氯乙烷(3ml)合并，得到蓝色混悬液。加入吡啶(65.8mg，67.3μl，832μmol，Eq：2)。将该反应混合物加热至45℃，搅拌2d。将该反应混合物倾入20mL饱和NH4Cl，用EtOAc(3x20mL)萃取。用MgSO4干燥有机层，真空浓缩。通过快速色谱法纯化粗物质(硅胶，40g，5％-10％MeOH的DCM溶液)，然后通过SFC纯化，得到1-(3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-2-(羟基甲基)苯基)-6-(6-乙氧基吡啶-3-基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-腈(36mg，15％)。
步骤3：在25mL圆底烧瓶中，将1-(3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-2-(羟基甲基)苯基)-6-(6-乙氧基吡啶-3-基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-腈(36mg，61.2μmol)和[氢双(二甲基三价膦酸-kP)]铂(II)(263μg，0.612μmol，Eq：0.01)与乙醇(480μl)和水(480μl)合并，得到无色溶液。将该反应混合物加热至45℃，搅拌1h。真空浓缩粗反应混合物。用乙腈和水稀释混合物，过滤。冻干得到的滤液，得到1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-6-(6-乙氧基-吡啶-3-基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲酰胺(31mg，84％，[M+H]+607)。
实施例46
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-6-(2-氟-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲酰胺
步骤1：在100mL圆底烧瓶中，将1-乙酰基-6-溴-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-腈(250mg，947μmol，Eq：1.00)、三乙胺(575mg，792μl，5.68mmol，Eq：6)和X-PHOS(181mg，379μmol，Eq：0.40)与二噁烷(25.0ml)合并，得到无色溶液。加入[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)(173mg，237μmol，Eq：0.25)和2-氟苯基硼酸(265mg，1.89mmol)，将得到的混合物在氮气气氛中脱气5分钟。将该反应混合物加热至100℃，微波照射1hr。将该反应混合物倾入50mL EtOAc，用H2O洗涤。用MgSO4干燥有机层，真空浓缩。通过快速色谱法纯化粗物质(硅胶，40g，20％-30％EtOAc的己烷溶液)，得到6-(2-氟苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-腈(220mg，98％)。
步骤2：在25mL圆底烧瓶中，将6-(2-氟苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-腈(200mg，843μmol)、6-叔丁基-8-氟-2-(1-羟基-1,3-二氢苯并[c][1，2]氧杂环戊硼烷-4-基)酞嗪-1(2H)-酮(297mg，843μmol，Eq：1.00)和醋酸铜(207mg，)与1,2-二氯乙烷(10ml)合并，得到蓝色混悬液。加入吡啶(133mg，136μl，1.69mmol，Eq：2)。将该反应混合物加热至45℃，搅拌2d。将该反应混合物倾入20mL饱和NH4C)，用EtOAc(3x20mL)萃取。用MgSO4干燥有机层，真空浓缩。通过快速色谱法纯化粗物质(硅胶，40g，50％-60％EtOAc的己烷溶液)，然后通过SFC纯化，得到1-(3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-2-(羟基甲基)苯基)-6-(2-氟苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3- 腈(163mg，13％)。
步骤3：在25mL圆底烧瓶中，将1-(3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-2-(羟基甲基)苯基)-6-(2-氟苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-腈(65mg，116μmol)和[氢双(二甲基三价膦酸-kP)]铂(II)(497μg，1.16μmol，Eq：0.01)与乙醇(853μl)和水(853μl)合并，得到无色溶液。将该反应混合物加热至45℃，搅拌1h。真空浓缩混合物，然后用乙腈和水稀释，过滤。冻干得到的滤液，得到1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-6-(2-氟-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲酰胺(61mg，91％，[M+H]+580)。
实施例47
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-6-(2-氯-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲酰胺
步骤1：在100mL圆底烧瓶中，将1-乙酰基-6-溴-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-腈(250mg，947μmol，Eq：1.00)、三乙胺(575mg，792μl，5.68mmol，Eq：6)和X-PHOS(181mg，379μmol，Eq：0.40)与二噁烷(25.0ml)合并，得到无色溶液。加入[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)(173mg，237μmol，Eq：0.25)和2-氯苯基硼酸(296mg，1.89mmol)，将得到的混合物在氮气气氛中脱气5分钟。将该反应混合物加热至100℃，搅拌过夜。将该反应混合 物倾入50mL H2O，用EtOAc(3x50mL)萃取。用MgSO4干燥有机层，真空浓缩。通过快速色谱法纯化粗物质(硅胶，40g，20％-30％EtOAc的己烷溶液)，得到6-(2-氯苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-腈(142mg，59％)。
步骤2：在25mL圆底烧瓶中，将6-(2-氯苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-腈(125mg，493μmol)、6-叔丁基-8-氟-2-(1-羟基-1,3-二氢苯并[c][1，2]氧杂环戊硼烷-4-基)酞嗪-1(2H)-酮(174mg，493μmol，Eq：1.00)和醋酸铜(121mg)与1,2-二氯乙烷(6.25ml)合并，得到蓝色混悬液。加入吡啶(78.0mg，79.7μl，985μmol，Eq：2)。将该反应混合物加热至45℃，搅拌2d。将该反应混合物倾入饱和NH4Cl(20mL)，用EtOAc(3x20mL)萃取。用MgSO4干燥有机层，真空浓缩。通过快速色谱法纯化粗物质(硅胶，40g，5％-10％MeOH的DCM溶液)，然后通过SFC纯化，得到1-(3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-2-(羟基甲基)苯基)-6-(2-氯苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-腈(4.5mg，2％)。
步骤3：在25mL圆底烧瓶中，将1-(3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-2-(羟基甲基)苯基)-6-(2-氯苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-腈(4mg，6.92μmol)和[氢双(二甲基三价膦酸-kP)]铂(II)(29.7μg，0.0692μmol，Eq：0.01)与乙醇(853μl)和水(853μl)合并，得到无色溶液。将该反应混合物加热至45℃，搅拌1h，然后真空浓缩。用乙腈和水稀释混合物，过滤。冻干得到的滤液，得到1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-6-(2-氯-苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲酰胺(3.9mg，95％，[M+H]+596)。
实施例48
6-溴-1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲酰胺
步骤1：在25mL圆底烧瓶中，将6-溴-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-腈(75.0mg，338μmol，Eq：1.19)、6-叔丁基-8-氟-2-(1-羟基-1,3-二氢苯并[c][1，2]氧杂环戊硼烷-4-基)酞嗪-1(2H)-酮(100mg，284μmol，Eq：1.00)和醋酸酮(52.2mg)与1,2-二氯乙烷(3.00ml)合并，得到蓝色混悬液。加入吡啶(44.9mg，45.9μl，568μmol，Eq：2)。将该反应混合物加热至45℃，搅拌2d。将混合物倾入20mL饱和NH4Cl，用EtOAc(3x20mL)萃取。用MgSO4干燥有机层，真空浓缩。通过快速色谱法纯化粗物质(硅胶，40g，25％-45％EtOAc的己烷溶液)，得到6-溴-1-(3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-2-(羟基甲基)苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-腈(16mg，10.3％)。
步骤2：在25mL圆底烧瓶中，将6-溴-1-(3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-2-(羟基甲基)苯基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-腈(14mg，25.6μmol)和[氢双(二甲基三价膦酸-kP)]铂(II)(110μg，0.256μmol，Eq：0.01)与乙醇(2.99ml)和水(2.99ml)合并，得到无色溶液。将该反应混合物加热至45℃，搅拌1h。真空浓缩粗反应混合物。通过HPLC纯化，得到6-溴-1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲酰胺(11mg，77％，[M+H]+565)。
实施例49
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-6-(1,2-二羟基-乙基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲酰胺
步骤1：在25mL圆底烧瓶中，将1-乙酰基-6-溴-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-腈(372mg，1.41mmol，Eq：1.00)、2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚(5mg，22.7μmol，Eq：0.0161)和三丁基(乙烯基)锡(536mg，494μl，1.69mmol，Eq：1.20)与甲苯(8ml)合并，得到淡黄色溶液。将混合物通过氮气通过其起泡脱气5分钟，加入四(三苯膦)钯(0)(130mg，113μmol，Eq：0.08)，再用氮气给反应体系脱气，将该反应混合物加热至80℃，搅拌过夜。将混合物倾到在15mL饱和NaHCO3上，用EtOAc(3x25mL)萃取。用MgSO4干燥有机层，真空浓缩。通过快速色谱法纯化粗物质(硅胶，40g，10％-20％EtOAc的己烷溶液)，得到两种产物：1-乙酰基-6-乙烯基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-腈(160mg)和6-乙烯基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-腈(138mg)。
步骤2：在25mL圆底烧瓶中，将6-乙烯基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-腈(138mg，816μmol，Eq：1.00)、6-叔丁基-8-氟-2-(1-羟基-1，3-二氢苯并[c][1，2]氧杂环戊硼烷-4-基)酞嗪-1(2H)-酮(287mg，816μmol，Eq：1.00)和醋酸酮(200mg)与1,2-二氯乙烷(3.58ml)合并，得到蓝色混悬液。加入吡啶(129mg，132μl，1.63mmol，Eq：2)。将该反应混合物加热至45℃，搅拌2d。将该反应混合物倾入20mL饱和NH4Cl，用饱和EtOAc(3x20mL)萃取。用MgSO4干燥有机层，真空浓缩。通过快速色谱法(硅胶，40g，5％-10％MeOH的DCM溶液)、然后通过HPLC纯化粗物质，得到1-(3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-2-(羟基甲基)苯基)-6-乙烯基-1H-吡咯并[2，3-b]吡 啶-3-腈(51mg，13％)。
步骤3：在10mL梨形烧瓶中，将1-(3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-2-(羟基甲基)苯基)-6-乙烯基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-腈(50mg，101μmol，Eq：1.00)、4-甲基吗啉N-氧化物(17.8mg，152μmol，Eq：1.50)和四氧化锇(41.2mg，50.9μl，4.05μmol，Eq：0.04)与丙酮(2ml)合并，得到无色溶液。将该反应混合物搅拌2d。用亚硫酸钠使反应停止，用乙酸乙酯萃取，蒸发。再加入4-甲基吗啉N-氧化物(17.8mg，152μmol，Eq：1.50)、四氧化锇(41.2mg，50.9μl，4.05μmol，Eq：0.04)和丙酮(3ml)，得到棕色溶液，持续反应1天。用亚硫酸钠使反应停止，用乙酸乙酯萃取，蒸发。取粗1-(3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-2-(羟基甲基)苯基)-6-(1，2-二羟基乙基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-腈(15mg)用于下一步。
步骤4：在25mL圆底烧瓶中，将1-(3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-2-(羟基甲基)苯基)-6-(1，2-二羟基乙基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-腈(14mg，26.5μmol，Eq：1.00)和[氢双(二甲基三价膦酸-kP)]铂(II)(373μg，0.870μmol，Eq：0.0328)与乙醇(200μl)和水(200μl)合并，得到无色溶液。将该反应混合物加热至45℃，搅拌1h。真空浓缩粗反应混合物。用乙腈和水稀释混合物，过滤。冻干得到的滤液，得到1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-6-(1，2-二羟基-乙基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲酰胺(11.2mg，77％，[M+H]+546)。
实施例50
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-6-(1,1-二氧代-1λ*6*-硫吗啉-4-基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲酰胺
步骤1：在25mL圆底烧瓶中，将6-溴-1-(三异丙基甲硅烷基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(420mg，1.19mmol，Eq：1.00)和硫吗啉1,1-二氧化物(482mg，3.57mmol)与甲苯(3ml)合并，得到黄色溶液。加入双(三-叔丁膦)钯(0)(60.7mg，119μmol)和叔丁醇钠(400mg，4.16mmol，Eq：3.5)。将该反应混合物加热至80℃，搅拌1h。将该反应混合物倾入20mL饱和NaCl，用EtOAc(3x20mL)萃取。用MgSO4干燥有机层，真空浓缩。通过快速色谱法纯化粗物质(硅胶，40g，20％-40％EtOAc的己烷溶液)，得到6-(1，1-二氧代-1λ*6*-硫吗啉-4-基)-1-三异丙基硅烷基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(327mg，68％)，为黄色油状物，静置时固化成黄白色固体。
步骤2：在25mL圆底烧瓶中，将6-(1,1-二氧代-1λ*6*-硫吗啉-4-基)-1-三异丙基硅烷基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(322mg，790μmol，Eq：1.00)与DMF(11.9ml)合并，得到无色溶液。将该反应混合物冷却至-20℃，搅拌5min。滴加在乙腈(11.9ml)中的异氰酸氯磺酰酯(335mg，206μl，2.37mmol，Eq：3)，将得到的冷却的反应体系在-20℃搅拌3hrs。该反应混合物倾入25mL EtOAc，用饱和NaCl(3x20mL)洗涤。蒸发后，通过闪蒸塔色谱法纯化粗物质(硅胶，12g，5％-10％MeOH的DCM溶液)，得到6-(1,1-二氧代 -1λ*6*-硫吗啉-4-基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-腈(122mg，56％)。
步骤3：在25mL圆底烧瓶中，将6-(1,1-二氧代-1λ*6*-硫吗啉-4-基)-1H- 吡咯并[2，3-b]吡啶-3-腈(122mg，442μmol)、6-叔丁基-8-氟-2-(1-羟基-1，3-二氢苯并[c][1，2]氧杂环戊硼烷-4-基)酞嗪-1(2H)-酮(155mg，442μmol，Eq：1.00)和醋酸铜(108mg)与1,2-二氯乙烷(3.89ml)合并，得到蓝色混悬液。加入吡啶(69.8mg，71.4μl，883μmol，Eq：2)。将该反应混合物加热至45℃，搅拌2d。将该反应混合物倾入20mL饱和NH4Cl，用EtOAc(3x20mL)萃取。用MgSO4干燥有机层，真空浓缩。通过快速色谱法(硅胶，40g，5％-10％MeOH的DCM溶液)、然后通过HPLC纯化粗物质，得到1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-6-(1,1-二氧代-1λ*6*-硫吗啉-4-基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-腈(22mg，8％)。
步骤4：在25mL圆底烧瓶中，将1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-6-(1,1-二氧代-1λ*6*-硫吗啉-4-基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-腈(22mg，36.6μmol)和[氢双(二甲基三价膦酸-kP)]铂(II)(1.1mg，2.56μmol，Eq：0.07)与乙醇(200μl)和水(200μl)合并，得到无色溶液。将该反应混合物加热至45℃，搅拌1h。真空浓缩该粗反应混合物，然后用乙腈和水稀释，过滤，通过HPLC纯化，得到1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-6-(1,1-二氧代-1λ*6*-硫吗啉-4-基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲酰胺(15.5mg，68％，[M+H]+619)。
实施例51
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-6-(2-二甲基氨基-乙基氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲酰胺
步骤1：在25mL圆底烧瓶中，将6-溴-1-(三异丙基甲硅烷基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(713mg，2.02mmol，Eq：1.00)、N,N-二甲基乙二胺(1.07g，1.32ml，12.1mmol，Eq：6)和双(三-叔丁膦)钯(0)(206mg，404μmol，Eq：0.2)与甲苯(2ml)合并，得到黄色溶液。加入叔丁醇钠(582mg，6.05mmol，Eq：3)。将该反应混合物加热至80℃，搅拌1h，然后倾入20mL饱和NaCl，用EtOAc(3x20mL)萃取。用MgSO4干燥有机层，真空浓缩。通过快速色谱法纯化粗物质(硅胶，12g，2％-5％MeOH的DCM溶液)，得到N1,N1-二甲基-N2-(1-(三异丙基甲硅烷基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-6-基)乙烷-1，2-二胺（405mg，56％)，为黄色油状物，静置时固化。
步骤2：在25mL圆底烧瓶中，将N1,N1-二甲基-N2-(1-(三异丙基甲硅烷基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-6-基)乙烷-1，2-二胺(405mg，1.12mmol)与DMF(14.9ml)合并，得到无色溶液。将该反应混合物冷却至-20℃，搅拌5min。滴加在乙腈(14.9ml)中的异氰酸氯磺酰酯(477mg，293μl，3.37mmol，Eq：3)，将得到的冷却的反应体系在-20℃搅拌3hrs。将该反应混合物倾入25mL饱和NaCl，用EtOAc(3x20ml)萃取。蒸发后，通过快速色谱法纯化粗物质(硅胶，12g，5％-10％MeOH的DCM溶液)，得到6-(2-(二甲基氨基)乙基氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-腈(211mg，82％)。
步骤3：在25mL圆底烧瓶中，将6-(2-(二甲基氨基)乙基氨基)-1H-吡咯 并[2，3-b]吡啶-3-腈(211mg，920μmol)、6-叔丁基-8-氟-2-(1-羟基-1,3-二氢苯并[c][1，2]氧杂环戊硼烷-4-基)酞嗪-1(2H)-酮(324mg，920μmol，Eq：1.00)和醋酸铜(226mg)与1,2-二氯乙烷(6.73ml)合并，得到蓝色混悬液。加入吡啶(146mg，149μl，1.84mmol，Eq：2)。将该反应混合物加热至45℃，搅拌2d。将混合物倾入20mL饱和NH4Cl，用EtOAc(3x20mL)萃取。用MgSO4干燥有机层，真空浓缩。通过快速色谱法(硅胶，40g，5％-10％MeOH的DCM溶液)、然后通过HPLC纯化粗物质，得到1-(3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-2-(羟基甲基)苯基)-6-(2-(二甲基氨基)乙基氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-腈(18mg，3.5％)。
步骤4：在25mL圆底烧瓶中，将1-(3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-2-(羟基甲基)苯基)-6-(2-(二甲基氨基)乙基氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-腈(19mg，34.3μmol，Eq：1.00)和[氢双(二甲基三价膦酸-kP)]铂(II)(1.47mg，3.43μmol，Eq：0.1)与乙醇(271μl)和水(271μl)合并，得到无色溶液。将该反应混合物加热至45℃，搅拌1h。真空浓缩该反应混合物，然后用乙腈和水稀释，过滤。冻干得到的滤液，得到1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-6-(2-二甲基氨基-乙基氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲酰胺(14.2mg，71％，[M+H]+572)。
实施例52
步骤1：在10mL梨形烧瓶中，将6-乙烯基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-腈(274mg，1.62mmol)、4-甲基吗啉N-氧化物(17.8mg，152μmol，Eq：1.50)和四氧化锇(3.29g，4.07ml，324μmol，Eq：0.2)与丙酮(3ml)合并，得到无色溶液。将该反应混合物维持在室温，搅拌2d。用亚硫酸钠使反应停止，用乙酸乙酯萃取，蒸发。再加入4-甲基吗啉N-氧化物(17.8mg，152μmol，Eq：1.50)和四氧化锇(41.2mg，50.9μl，4.05μmol，Eq：0.04)和丙酮(3ml)，得到棕色溶液，使反应持续1天。用亚硫酸钠使反应停止，用乙酸乙酯萃取，蒸发。取粗6-甲酰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-腈用于下一步。
步骤2和3：在标准还原氨基化条件后，将6-((二甲基氨基)甲基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-腈(18mg，89.9μmol)、6-叔丁基-8-氟-2-(1-羟基-1,3-二氢苯并[c][1，2]氧杂环戊硼烷-4-基)酞嗪-1(2H)-酮(38.0mg，108μmol，Eq：1.20)和醋酸酮(22.0mg)与1，2-二氯乙烷(574μl)合并，得到蓝色混悬液。加入吡啶(14.2mg，14.5μl，180μmol，Eq：2)。将该反应混合物加热至45℃，搅拌2d。将该反应混合物倾入20mL EtOAc，用饱和NH4Cl(3x20mL)萃取。用MgSO4干燥有机层，真空浓缩。不经纯化取粗1-(3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-2-(羟基甲基)苯基)-6-((二甲基氨基)甲基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-腈(8mg)用于下一步。
步骤4：在25mL圆底烧瓶中，将1-(3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-2-(羟基甲基)苯基)-6-((二甲基氨基)甲基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-腈(8mg，15.3μmol，Eq：1.00)和[氢双(二甲基三价膦酸-kP)]钯(II)(655μg，1.53μmol，Eq：0.1)与乙醇(1mL)和水(1mL)合并，得到无色溶液。将该反应混合物加热至45℃，搅拌1h。真空浓缩该反应混合物。粗产物的LCMS显示期望的产物。用乙腈和水稀释该反应混合物，过滤，通过HPLC纯化，然后冻干，得到1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-6-二甲基氨基甲基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-甲酰胺(2.5mg，30％，[M+H]+543)。
实施例53
3-(4-乙酰基-苯基氨基)-1-[3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-1H-吡唑-4-腈
步骤1：向干乙腈(10mL)和干四氢呋喃(30mL)中加入5-氨基-1H-吡唑-4-腈(1.0g，9.25mmol)，然后加入三乙胺(1.08mL，1.74mmol)。将得到的混悬液在室温搅拌5分钟，然后冷却至0℃。将(溴甲烷三苯甲基)三苯(1.89g，5.84mmol)在干四氢呋喃(10mL)中的溶液通过安装氮气入口的加液漏斗滴加，按照这种速率使得温度不高于5℃。然后用干四氢呋喃(5mL)冲洗加液漏斗，将该反应混合物在0℃搅拌10分钟，然后温至室温，搅拌2小时。真空除去挥发性物质，将残余物溶于EtOAc(150mL)，用水(100mL)洗涤1次，用饱和氯化钠水溶液洗涤1次，用Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。使用二氯甲烷使粗产物上80g硅胶柱，用10-30％EtOAc／己烷梯度洗脱柱。合并包含产物的级分，得到3-(三苯甲基-氨基)-1H-吡唑-4-腈(1.3g，41％)，为黄白色半结晶固体。
步骤2：向脱气的DMF(1.5mL)中加入5-(三苯甲基氨基)-1H-吡唑-4- 腈(1.36g，3.89mmol)、2-溴-6-(6-叔丁基-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)苯甲醛(1.0g，2.6mmol)、碘化亚铜(I)(494mg，2.6mmol)和碳酸钾(717mg，5.19mmol)。通过交替真空和氮气净化使该反应体系惰性化5次，然后加热至100℃(外部)8hr。第二天早晨TLC显示痕量的原料。用EtOAc(50mL)稀释该反应体系，通过硅藻土垫。再用EtOAc(50mL)冲洗垫，真空浓缩。使粗物质结合硅胶柱，用40g硅胶柱纯化，用20-40％EtOAc／己烷洗脱柱，等度保持5分钟，然后40-100％EtOAc／己烷梯度，20分钟。合并包含产物的级分，浓缩，得到1-[3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-甲酰基-苯基]-3-(三苯甲基-氨基)-1H-吡唑-4-腈(632mg，37％)。
步骤3：在0℃向1-[3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-甲酰基-苯基]-3-(三苯甲基-氨基)-1H-吡唑-4-腈(632mg，0.965mmol)在二氯甲烷(20mL)和甲醇(10mL)中的溶液中加入硼氢化钠(37mg，0.965mmol)。将得到的浑浊反应混合物在0℃搅拌5分钟，然后在室温搅拌10分钟。然后通过TLC判断反应完成。真空除去挥发性物质，使粗产物结合硅胶，用40g硅胶柱纯化，用20-50％EtOAc／己烷梯度洗脱柱，得到1-[3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-(三苯甲基-氨基)-1H-吡唑-4-腈(482mg，76％)。
步骤4：将1-(3-(6-叔丁基-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-2-(羟基甲基)苯基)-3-(三苯甲基氨基)-1H-吡唑-4-腈(382mg0.582mmol)溶于Et2O(30mL)，冷却至0℃。加入MeOH(2mL)，然后加入饱和醚合HCl(2mL，通过使HCl气体进入100mL乙醚起泡制备)。将该反应混合物在0℃搅拌30分钟，此后，通过TLC判断反应完成。真空除去挥发性物质，使残余物分配在饱和NaHCO3水溶液(100mL)与EtOAc(100mL)之间，剧烈搅拌。分离水层，用EtOAc(50mL)萃取。用Na2SO4干燥合并的有机层，过滤，真空浓缩。使油状残余物结合硅胶，用25g硅胶柱纯化粗产物，用20-70％EtOAc／己烷梯度洗脱柱，得到3-氨基-1-[3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-1H-吡唑-4-腈(178mg，74％)，为白色粉末固体。
步骤5：向5mL微波反应瓶中导入3-氨基-1-(3-(6-叔丁基-1-氧代酞嗪 -2(1H)-基)-2-(羟基甲基)苯基)-1H-吡唑-4-腈(50mg，0.121mmol)、1-(4-溴苯基)乙酮(29mg，0.145mmol)、Pd2(dba)3(7.7mg，0.008mmol)、2-(二环己基膦基)-3,6-二甲氧基-2′-4′-6′-三-异丙基-1，1′-联苯(Brett-Phos)(9.1mg，0.017mmol)、碳酸铯(59mg，0.181mmol)并混悬于叔丁醇(1.5mL)中。通过交替真空和Ar气净化将反应瓶惰性化3次，然后在室温搅拌5分钟，得到不均匀混合物，颜色从紫红色变到红橙色。将该反应体系加热至100℃(外部)，在此过程中反应混合物的颜色～2分钟加热后变成橙色。1.5hr后，通过TLC判断反应完成。用EtOAc稀释该混合物，通过硅藻土垫过滤，与硅胶结合。用12g硅胶柱纯化粗产物，用30％-100％EtOAc／己烷梯度洗脱柱，得到3-(4-乙酰基-苯基氨基)-1-[3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-1H-吡唑-4-腈(40mg，62％)，为白色粉末。
步骤6：按照与实施例22步骤4相同的方法进行。因此，3-(4-乙酰基-苯基氨基)-1-[3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-1H-吡唑-4-腈(114mg，0.214mmol)得到粗甲酰胺，用硅胶使用12g RediSep硅胶柱纯化，用30％-100％(20％MeOH／EtOAc)／己烷梯度洗脱柱，得到3-(4-乙酰基-苯基氨基)-1-[3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-1H-吡唑-4-甲酰胺(99mg，84％，[M+H]+551)，为黄白色粉末。
实施例54
1-[3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-(吡啶-2-基氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
步骤1：向5mL微波反应瓶中导入3-氨基-1-(3-(6-叔丁基-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-2-(羟基甲基)苯基)-1H-吡唑-4-腈(25mg，0.060mmol)、2-溴吡啶(11mg，0.072mmol)、Pd2(dba)3(3.9mg，0.004mmol)、2-(二环己基膦基)-3,6-二甲氧基-2′-4′-6′-三-异丙基-1，1′-联苯(Brett-Phos)(4.5mg，0.008mmol)、碳酸铯(29.5mg，0.091mmol)并混悬于叔丁醇(0.609mL)中。通过交替真空和Ar气净化将反应瓶惰性化3次，然后在室温搅拌5分钟，得到不均匀混合物，颜色从紫红色变到红橙色。将该反应体系加热至100℃(外部)，在此过程中反应混合物的颜色～2分钟加热后变成橙色。2hr后，通过TLC判断反应完成。用EtOAc稀释该混合物，通过硅藻土垫过滤，与硅胶结合。用12g RediSep硅胶柱纯化粗产物，用30％-100％EtOAc／己烷梯度洗脱柱，得到1-[3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-(吡啶-2-基氨基)-1H-吡唑-4-腈(15mg，51％)，为白色粉末。
步骤2：按照与实施例22步骤4相同的方法进行。因此，1-[3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-(吡啶-2-基氨基)-1H-吡唑-4-腈(15mg，0.0305mmol)得到粗甲酰胺，用硅胶使用12g RediSep硅胶柱纯化，用30％-100％(20％MeOH／EtOAc)／己烷梯度洗脱柱，得到1-[3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-(吡啶-2-基氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(10mg，67％，[M+H]+510)，为黄白色粉末，其包含5-10％的吡啶水解的酰胺副产物。
实施例55
1-[3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-(5-二甲基氨基甲基-吡啶-2-基氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
步骤1：向5mL微波反应瓶中导入3-氨基-1-(3-(6-叔丁基-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)-2-(羟基甲基)苯基)-1H-吡唑-4-腈(25mg，0.06mmol)、1-(6-氯吡啶-3-基)-N,N-二甲基甲胺(13mg，0.075mmol)、Pd2(dba)3(4mg，0.004mmol)、2-(二环己基膦基)-3,6-二甲氧基-2′-4′-6′-三-异丙基-1，1′-联苯(Brett-Phos)(4.5mg，0.008mmol)、碳酸铯(30mg，0.091mmol)并混悬于叔丁醇(0.609mL)中。通过交替真空和Ar气净化将反应瓶惰性化3次，然后在室温搅拌5分钟，得到不均匀混合物，颜色从紫红色变到红橙色。将该反应体系加热至100℃(外部)，在此过程中反应混合物的颜色～2分钟加热后变成橙色。4hr后，通过TLC判断反应完成。用EtOAc稀释该混合物，通过硅藻土垫过滤，与硅胶结合。用12g RediSep硅胶柱纯化粗产物，用30％-100％EtOAc／己烷梯度洗脱柱，得到1-[3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-(5-二甲基氨基甲基-吡啶-2-基氨基)-1H-吡唑-4-腈(18mg，54％)，为白色粉末。
步骤2.按照与实施例22步骤4相同的方法进行。因此，1-[3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-(5-二甲基氨基甲基-吡啶-2-基氨基)-1H-吡唑-4-腈(18mg，0.0328mmol)得到粗甲酰胺，用硅胶使用12g RediSep硅胶柱纯化，用30％-100％(20％MeOH／EtOAc)／己烷梯度洗脱柱得到1-[3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-(5-二甲基氨基甲基-吡啶-2-基氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(10mg，54％，[M+H]+567)，为黄白色粉末。
实施例56
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-苯基]-1H-吡唑-4-甲酰胺
步骤1：按照与实施例21步骤2类似的方法，将上述实施例41得到的1-(3-溴-2-甲酰基苯基)-1H-吡唑-4-腈(100mg，362μmol)转化成1-(3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)苯基)-1H-吡唑-4-腈(88mg，63％)。
步骤2：在25mL圆底烧瓶中，将1-(3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)-基)苯基)-1H-吡唑-4-腈(87mg，225μmol，Eq：1.00)和氢(二甲基磷酸-kP)(4.82mg，11.2μmol，Eq：0.05)与乙醇(1ml)和水(1.00ml)合并，得到无色溶液。将该反应混合物加热至85℃，搅拌45min。所需的反应时间后(转化检查我的LCMS和TLC)，使反应体系达到室温，真空除去溶剂。然后通过HPLC特氟隆滤膜过滤，通过反相HPLC，冻干过夜，得到1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-苯基]-1H-吡唑-4-甲酰胺(49mg，54％，[M+H]+406)。
生物学实施例
酪氨酸激酶(Btk)抑制测定
该测定是通过过滤捕获放射性33p磷酸化产物。Btk、生物素化的SH2肽底物(Src同源性)与ATP的相互作用导致肽底物的磷酸化。生物素化的 产物是结合的链霉抗生物素蛋白琼脂糖珠。所有结合的、放射性标记的产物通过闪烁计数器检测。
测定的板是96-孔聚丙烯(Greiner)和96孔1.2μm亲水性PVDF过滤板(Millipore)。在此处报道的浓度是最终测定浓度：在DMSO(Burdick和Jackson)中的10-100μM化合物、5-10nM Btk酶(His-标记的，全长)、30μM肽底物(生物素-Aca-AAAEEIYGEI-NH2)、100μM ATP(西格玛(Sigma))、8mM咪唑（西格玛，pH7.2)、8mM甘油-2-磷酸(西格玛)、200μM EGTA(罗氏诊断(Roche Diagnostics))，1mM MnCl2(西格玛)，20mM MgCl2(西格玛)，0.1mg／ml BSA(西格玛)，2mM DTT(西格玛)、1μCi33P ATP(Amersham)、20％链霉抗生物素蛋白琼脂糖珠(Amersham)、50mM EDTA（Gibco)、2M NaCl(Gibco)、2M NaCl w／1％磷酸(Gibco)，microscint-20(铂尔金爱尔默(Perkin Elmer)。
使用从标准的96孔板测定模板产生的数据，从每个化合物的10个数据点计算IC50测定值。在每个板上测试一种对照化合物和七种未知抑制剂，每个板进行两次。典型地，以半对数(half-log)稀释化合物，从100μM开始并且以3nM结束。对照化合物是星形孢菌素。在不存在肽底物时计数背景。在存在肽底物时，测定总活性。使用下列方法来测定Btk抑制。
1)样品制备：将测试化合物以半对数增量，在测定缓冲液(咪唑，甘油-2-磷酸，EGTA，MnCl2，MgCl2，BSA)中稀释。
2)珠制备
a.)通过在500g离心漂洗珠 
b.)用PBS和EDTA重构所述珠，产生20％珠的浆状物
3)在30℃预温育不含底物的反应混合物(测定缓冲液，DTT，ATP，33P ATP)和具有底物的混合物(测定缓冲液，DTT，ATP，33P ATP，肽底物)达15分钟。
4)为了起始测定，在室温预温育10μL在酶缓冲液(咪唑，甘油-2-磷酸，BSA)中的Btk和10μL的测试化合物达10分钟。
5)将30μL不含有或含有底物的反应混合物加入到Btk和化合物中。
6)在30℃温育50μL的总测定混合物达30分钟。
7)将40μL的测定物转移到过滤板中的150μL珠浆状物中来终止反应。
8)在30分钟后，用下列步骤洗涤过滤板：
a.3x250μL NaCl
b.3x250μLNaCl，其包含1％磷酸
c.1x250μL H2O
9)在65℃干燥板1小时或在室温干燥板过夜。
10)加入50μL microscint-20并在闪烁计数器上计数33p cpm。
从以cpm表示的原始数据计算百分比活性
百分比活性=(样品-bkg)／(总活性-bkg)x100
使用一位点(one-site)剂量反应S形曲线模型从百分比活性计算IC50
y=A+((B-A)／(1+((x／C)D))))
x=化合物(cmpd)浓度，y=％活性，A＝min，B＝max，C=IC50，D=1(希尔(hill)斜率)
通过CD69表达测量的全血中的B细胞活化的抑制
用于测试Btk抑制剂抑制在人血液中B细胞的B细胞受体介导的活化的能力的程序如下：
人全血(HWB)获自健康志愿者，满足以下限制：24hr不用药，不吸烟者。通过静脉穿刺将血液收集到用肝素钠抗凝化的Vacutainer管中。测试化合物在PBS中稀释至10倍所需初始药物浓度(20x)，接着在10％的在PBS中的DMSO中三倍系列稀释，得到9点的剂量响应曲线。将5.5μl的每种化合物稀释液一式两份添加到2ml96孔V型底的板(Analytical Sales和Services，#59623-23)上；向对照和无刺激孔中添加5.5μl的10％在PBS中的DMSO。向每孔添加HWB(100μl)，在混合后将板在37C、5％CO2、100％湿度温育30分钟。在搅拌下向每孔(无刺激孔除外)添加羊F(ab’)2抗 人IgM(Southern Biotech，#2022-14)(10μl的500μg／ml溶液，50μg／ml最终浓度)，并且将板温育另外20小时。
在20小时温育结束时，将样品与荧光探针标记的抗体(15μl PE小鼠抗人CD20，BD Pharmingen，#555623，和／或20μl APC小鼠抗人CD69，BD Pharmingen#555533)在37C、5％CO2、100％湿度温育30分钟。包括用于补偿调节和初始电压设置的诱导对照、未染色的和单染色剂。然后将样品用1ml的1X Pharmingen Lyse Buffer(BD Pharmingen#555899)裂解，并且将板在1800rpm离心5分钟。通过抽吸除去上清液，将残留的团粒用另外1ml的1X Pharmingen Lyse Buffer再次裂解，并且将板如前离心(spun down)。吸出上清液，将残留的团粒在FACs缓冲液(PBS+1％FBS)中洗涤。在最后旋转后，除去上清液，并且将团粒重悬浮在180μl的FACs缓冲液中。将样品转移至适于在BD LSR II流式细胞器的HTS96孔体系上运行的96孔板。
采用适合所用荧光团的激发和发射波长，获取数据并且采用Cell Quest Software获得百分比阳性细胞值。结果最初用FACS分析软件(Flow Jo)分析。测试化合物的IC50定义为使CD69阳性细胞的百分比下降50％的浓度，所述CD69阳性细胞在用抗IgM刺激后也是CD20阳性的(8个对照孔的平均，在扣除8个无刺激背景的孔的平均值后)。IC50值是使用XLfit软件版本3，公式201计算的。
该测定的代表性化合物的数据列于下表II中。
表II.
B-细胞活化的抑制-在Ramos细胞中的B细胞FLlPR测定
通过测定测试化合物对于抗-IgM刺激的B细胞应答的影响，证明本发 明的化合物对B细胞活化的抑制。
B细胞FLIPR测定是测定潜在抑制剂对于由抗-IgM抗体刺激导致的细胞内钙增加的影响的、基于细胞的功能方法。将Ramos细胞(人Burkitt’s淋巴瘤细胞系。ATCC-No.CRL-1596)培养在生长培养基(下述)中。在测定前一天，将Ramos细胞重悬浮在新鲜的生长培养基(与上相同)中并且以0.5x106／mL的浓度放置在组织培养瓶中。在测定当天，对细胞计数并且将其以1x106／mL的浓度放入在组织培养瓶中补充了1μMFLUO-3AM(TefLabs目录号0116，在无水DMSO和10％嵌段聚醚酸(Pluronic acid)中制备)的生长培养基中，并且在37℃(4％CO2)温育1小时。为了去除细胞外染料，通过离心(5分钟，1000rpm)收集细胞，并以1x106细胞／mL重新悬浮在FLIPR缓冲液(下述)中，接着以1x105细胞／孔分配在96-孔聚-D-赖氨酸包被的黑色／透明的板(BD目录号356692)中。加入从100μM到0.03μM范围内的各个浓度(7个浓度，下面详述)的测试化合物，并且使其与细胞一起在室温温育30分钟。通过加入10μg／mL抗-IgM(Southern Biotech，目录号2020-01)刺激Ramos细胞Ca2+信号传导并且在FLIPR(Molecular Devices，使用具有在480nM激发的氩激光器的CCD照相机捕获96孔板的图像)上测量。
介质／缓冲液：
生长培养基：RPMI1640培养基，其含有L-谷氨酰胺(Invitrogen，目录号61870-010)，10％胎牛血清(FBS，Summit Biotechnology目录号FP-100-05)；1mM丙酮酸钠(Invitrogen目录号11360-070)。
FLIPR缓冲液：HBSS(Invitrogen，目录号141175-079)，2mMCaCl2(西格玛，目录号C-4901)，HEPES(Invitrogen，目录号15630-080)，2.5mM丙磺舒(西格玛，目录号P-8761)，0.1％BSA(西格玛，目录号A-7906)，11mM葡萄糖(西格玛，目录号G-7528)。
化合物稀释细节：
为了获得100μM的最高最终测定浓度，将24μL的10mM化合物贮存溶液(在DMSO中制备)直接加入到576μL的FLIPR缓冲液中。将测试化 合物稀释在FLIPR缓冲液中(使用Biomek2000自动移液器)得到下列稀释方案：溶剂，1.00x10-4M，1.00x10-5，3.16x10-6，1.00x10-6，3.16x10-7，1.00x10-7，3.16x10-8。
测定和分析：
使用最大-最小统计(使用Molecular Devices FLIPR对照和统计输出软件，从由加入所述刺激抗体导致的峰减去静止的基线)报道钙的细胞内增加。使用非线性曲线拟合(GraphPad Prism软件)确定IC50。
小鼠胶原蛋白-诱导的关节炎(mCIA)
在第0天，将小鼠用II型胶原蛋白在完全弗氏佐剂(CFA)中的乳剂注射，在尾巴基部或在背部上的几个位置皮内注射(i.d.)。在胶原免疫之后，动物将在约21至35天出现关节炎。关节炎的发作通过在第21天系统施用在不完全弗氏佐剂(IFA；i.d.)中的胶原蛋白而同步(增强)。在第20天之后每天检查动物轻微关节炎(1或2分；参考下面的评分描述)的任何发作，这是增强的信号。在增强后，将小鼠评分并且将候选的治疗剂以预定的时间(典型地2-3周)和剂量给药频率剂量给药，每天一次(QD)或每天两次(BID)。
大鼠胺原蛋白 - 诱导的关节炎(rCIA)
在第0天，将大鼠用II型牛胶原蛋白在不完全弗氏佐剂(IFA)中的乳剂注射，在背部上的几个位置皮内注射(i.d.)。在约第7天在尾巴基部或背部的备选位点提供胶原蛋白乳剂的加强注射(i.d.)。在初始胶原蛋白注射之后的12-14天通常观察到关节炎。从第14天起，如下面所述(关节炎的评价)可以评价动物的关节炎的进展。将动物用候选的治疗剂以预防的方式，开始于二次激发时剂量给药，并且以预定的时间(典型地2-3周)和剂量给药频率剂量给药，每天一次(QD)或每天两次(BID)。
关节炎的评价：
在两种模型中，使用评分系统对爪和肢关节的炎症发展进行定量，所述的评分系统包括按照下面所述的标准对4个爪的评估：
评分：1=爪或一个趾的肿胀和／或发红。
2=两个或更多个关节肿胀。
3=爪的总体肿胀，涉及多于两个关节。
4=整个爪和趾的严重关节炎。
如下进行评估：在第0天进行基线测量，在第一个征候或肿胀时再次开始，每周可达三次，直至实验结束。通过将四个单爪评分加和来获得每只小鼠的关节炎指数，每只动物的最大分数为16。
大鼠体内哮喘模型
将雄性棕挪威(Brown-Norway)大鼠用在0.2ml明矾中的100μgOA(卵清蛋白)每周i.p.致敏一次，致敏三周(第0、7和14天)。在第21天(最后致敏后一周)，将大鼠用溶剂或化合物制剂皮下q.d.剂量下药，0.5小时后进行OA气溶胶激发(1％OA，历时45分钟)并且在激发4或24小时后终止。在处死时，从所有动物收集血清和血浆用于分别进行血清学研究和PK。插入气管套管并且将肺用PBS灌洗3X。分析BAL流体的总白细胞数和差别白细胞计数。细胞等份试样(20-100μl)中的总白细胞数是通过Coulter Counter确定的。对于差别白细胞计数，将50-200μl样品在Cytospin中离心并且用Diff-Quik将载玻片染色。采用标准形态学标准，在光学显微镜下计数单核细胞、嗜酸性粒细胞、中性白细胞和淋巴细胞的比例，并且用百分比表示。Btk的代表性抑制剂显示：OA致敏的和激发的大鼠的BAL中总白细胞计数与对照水平相比下降。
已经通过举例说明和实施例的方式比较详细地描述了上述发明，以用于阐述和理解的目的。对于本领域技术人员显而易见的是，可以在后附权利要求的范围内进行改变和改进。因此，应该理解上述说明意在是举例说明性的而不是限制性的。因此，本发明的范围不应该参考上述说明书而确定，而应该参考下列后附的权利要求以及由权利要求授权的等价物的全部范围而确定。
将本申请中引用的全部专利、专利申请和出版物的全部内容通过引用并入本文作为参考以满足全部目的到这样的程度，就如同每个专利、专利申请或出版物是分别指明的一样。

Claims (7)

1.式I的化合物，
其中：
是双键；
A是被一个或多个A’取代的吡唑基；
A’是-NHR；
R是-R1、-R1-R2-R3、-R1-R3；
R1是芳基、杂芳基、或与杂环烷基稠合的杂芳基，它们各自任选地被一个或多个R1’或R1”取代；
R1’各自独立地是卤素、氰基；
R1”各自独立地是C1-6烷基、C1-6烷氧基，它们各自任选地被一个或多个R1”’取代；
R1”’各自独立地是羟基、卤素、或杂环烷基；
R2是-C(＝O)、或-S(＝O)2；
R3是H或R4；
R4是C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷基氨基、杂环烷基、(C1-6烷基)杂环烷基，它们各自任选地被一个或多个C1-6烷基、卤素、二(C1-6烷基)氨基、羟基、羟基C1-6烷基取代，其中两个C1-6烷基可以一起形成环；
Q是CH；
X是N；
Y0是H；
Y1是Y1b；
Y1b是叔丁基或异丙基；
Y2是H；
Y3是H或F；且
Y4是H或C1-6羟基烷基；
其中杂芳基是指5至12个环原子的单环或双环基团，其具有至少一个芳族环，每个环含有4至8个原子，结合有一个或多个N、O或S杂原子，其余环原子是碳，其中杂芳基的连接点在芳族环上；杂环烷基表示由1至2个环组成的一价饱和环状基团，每个环3至8个原子，其结合有一个或多个选自N、O或S(O)0-2的环杂原子；
或其药学可接受的盐。
2.权利要求1的化合物，其中Y0是H，Y2是H，且Y4是羟基甲基。
3.权利要求1的化合物，其中Y1是叔丁基。
4.权利要求1-3的任一项的化合物，其中Y3是F。
5.化合物，其选自：
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-[4-(1-羟基-1-甲基-乙基)-苯基氨基]-1H-吡唑-4-甲酰胺；
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-(5-氯-吡啶-2-基氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺；
3-[5-(2-氮杂环丁烷-1-基-1，1-二甲基-乙氧基)-吡啶-2-基氨基]-1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-1H-吡唑-4-甲酰胺；
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-(5-甲基-4，5，6，7-四氢-吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺；
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-(吡啶-2-基氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺；
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-(4-甲磺酰基-苯基氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺；
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-(1-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺；
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-(吡嗪-2-基氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺；
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-(5-氟-吡啶-2-基氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺；
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-(1，5-二甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺；
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-(5-三氟甲基-吡啶-2-基氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺；
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-(5-甲基-吡啶-2-基氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺；
1-[3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-(1，5-二甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺；
1-[3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-(5-氟-吡啶-2-基氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺；
1-[3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-(吡嗪-2-基氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺；
1-[3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-(5-甲基-吡啶-2-基氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺；
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-(5-甲磺酰基-吡啶-2-基氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺；
1-[3-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-(5-氰基-吡啶-2-基氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺；
3-(4-乙酰基-苯基氨基)-1-[3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-1H-吡唑-4-甲酰胺；
1-[3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-(吡啶-2-基氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺；和
1-[3-(6-叔丁基-1-氧代-1H-酞嗪-2-基)-2-羟基甲基-苯基]-3-(5-二甲基氨基甲基-吡啶-2-基氨基)-1H-吡唑-4-甲酰胺。
6.药物组合物，其包含权利要求1-5的任一项的化合物与至少一种药学可接受的载体、赋形剂或稀释剂。
7.权利要求1-5任一项的化合物在制备用于治疗炎性病症和/或自身免疫病症的药物中的用途。
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