CN103205480B - 一种用鱼皮或鱼骨生产胶原蛋白低聚肽的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种用鱼皮或鱼骨生产高品质胶原蛋白低聚肽的方法。具体步骤如下：将原料鱼皮或鱼骨经过清洗、破碎后与水按重量比1∶5～20混合并细化处理后杀菌、冷却，同时加入蛋白水解酶和乳酸菌进行第一次水解后经过离心、过滤后分离出未水解的固相部分和水解液，将水解液采用超滤膜进行超滤，将非透过的大分子肽液和一次水解完成后分离的未水解的固相部分混合后，同时加入蛋白酶和乳酸菌进行第二次水解，并经离心分离、过滤后进行超滤，将超滤膜透过的小分子低聚肽液和一次水解后收集的小分子低聚肽一起依次经过纯化，杀菌，浓缩，干燥得到分子量小的蛋白质低聚肽产品。本发明技术可以有效提高原料蛋白的利用率和产品得率，大幅提高产品质量。
Description
技术领域
本发明涉及一种胶原蛋白肽的制备方法，具体是一种采用鱼皮或鱼骨生产高品质胶原蛋白低聚肽的方法。
背景技术
胶原蛋白是一种高分子蛋白质，是动物体内含量最多的蛋白质，约占人体蛋白质的25％-33％，相当于人体重的6％，胶原蛋白是一种三维螺旋结构的蛋白质，主要存在于人体皮肤、骨骼、眼睛、牙齿、内脏等部位，是修复各损伤组织的重要原料物质，胶原蛋白可以使皮肤保持弹性与润泽，维持皮肤细腻光滑，在修复皮肤中有明显的功效。胶原蛋白肽是一种以胶原蛋白为原料经蛋白酶水解加工成的，且分子量比蛋白质小得多的肽类，在胶原蛋白肽中含有两个以上十个以下氨基酸的肽叫做胶原蛋白低聚肽，或叫胶原蛋白短肽或胶原蛋白小肽或是胶原蛋白寡肽，具有容易吸收，低过敏性，易溶于水，低粘度，在任何pH下可溶等物理特征，此外它还具有抗氧化、降血压、降血脂、抗菌等多种功效，具有很强的生物活性。由于胶原蛋白低聚肽的分子量小、易于渗透入皮肤中起到促进皮肤胶原代谢和再生的作用，因此已经被广泛应用于医药、食品、日用化工、生物合成等工业领域中，并日益受到消费者欢迎。
一般人们生产胶原蛋白制品的原料基本是采用猪、牛等陆生动物的皮、骨中提取，由于陆生动物生存环境恶劣，会导致很多动物疾病，使得从这些陆生动物上提取胶原蛋白存在一些不安全因素。而水生动物相比陆生动物更加安全、卫生、无害，并且含有丰富的蛋白质，所以人们逐渐开始研究从鱼皮、鱼骨等水生动物中提取的胶原蛋白肽。我国是世界第一水产品产量、水产养殖和水产品贸易大国。目前，我国水产品产量约占世界总产量的38％。2010年我国水产品总量5373万吨，海水产品2797.53万吨，占总产量的52.07％，淡水产品产量2574.47万吨，占总产量的47.93％。在水产品中，海水鱼类906.3万吨，淡水鱼类2225.6万吨，合计3131.9万吨。在水产品加工过程中，会产生大量的鱼骨、鱼皮等下脚料，这些下脚料是提取胶原蛋白良好原料。
在提取胶原蛋白肽的加工过程中，酶水解是肽制备过程中的十分关键的环节，通过酶水解将大分子的胶原蛋白分解成分子量较小的胶原蛋白肽。但是目前公开的胶原蛋白肽制备方法中大都是只采用了一次水解，在水解过程中存在水解度不高、蛋白质利用率较低等缺陷，造成很多原料的浪费，而且水解度不高便会出现水解后的蛋白肽分子量较大，而肽分子量的大小对肽产品的品质有重要的影响。
天津商学院在2004年12月10日申请的专利号为200410096892.6，发明名称为一种高效酶解玉米蛋白制备生物活性低聚肽的技术的中国专利中提到可以进行二次酶解，但是该方法是针对植物蛋白肽的制备，在植物中提取蛋白肽和动物中提取蛋白肽存在很大的区别。除此之外，由于水生动物本身带有很重的腥味，特别是一些深海鱼，腥味更重，所以从鱼中提取胶原蛋白肽如果处理不当便会出现一些异味，产品在风味上欠佳。目前也公开了一些采用水生动物制备胶原蛋白的方法，这些方法涉及到去腥步骤，一般是在水解前采用食盐水等清洗，水解后采用酵母或乳酸菌发酵几个小时等方式去腥，如中国专利申请号：200810029603.9，发明名称：一种无苦腥味鱼类蛋白粉的制备方法，中国专利申请号：200610019333.4，发明名称：淡水鱼蛋白活性多肽水解液的制备方法，中国专利申请号：201110121718.2一种脱除海产鱼酶解液腥味的方法等，这些方法增加了处理工序，或者由于处理时间有限，鱼腥味往往不能去除彻底，此外，原料蛋白的利用率不能得到提高，造成生产成本的增加和原料的浪费。
发明内容
本发明根据现有技术的不足,提供一种用鱼皮或鱼骨生产高品质胶原蛋白低聚肽的方法，本发明专利采用蛋白酶与乳酸菌联合进行二次水解，可以有效提高原料鱼皮、鱼骨中胶原蛋白的溶出，提高胶原蛋白的水解利用率和水解度，改善胶原蛋白肽产品的风味，还可以抑制杂菌生长，提高产品品质的作用，并且可以有效控制产品中肽分子量分布，尤其是2肽、3肽等低聚肽的比例大幅增加，提高原料蛋白质的利用率，降低生产成本。
本发明的技术方案：所述一种用鱼皮或鱼骨生产高品质胶原蛋白低聚肽的方法，其特征在于具体步骤如下：
(1)将原料鱼皮或鱼骨经过清洗、破碎后与水按重量比1:5～20混合，并将混合物送入胶体磨进行微细化处理，使原料鱼皮或鱼骨充分分散均匀，并调制成蛋白质浓度在1％～10％原料液，具体通过在加工前测定原料鱼皮、鱼骨中的蛋白质含量，然后确定加水量来调节蛋白质浓度；
(2)将步骤(1)中配制的原料液在70～130℃的条件下杀菌2秒～15分钟，然后冷却到20～60℃之间，冷却采用板式冷却器、管式冷却器或自然冷却；
(3)在步骤(2)中杀菌处理后的原料液中加同时加入蛋白水解酶和乳酸菌进行第一次水解，第一次水解的条件为：温度20～60℃，pH2～10，时间2～5小时，蛋白水解酶与原料鱼皮或鱼骨的重量比为0.5％～5％，乳酸菌接种量按每吨原料液109～1014个菌数加入到原料液中；
(4)将步骤(3)中第一次水解后的水解液经过离心、过滤后分离出未水解固相部分和水解液液相部分，并将其分别收集起来；然后将收集的水解液液相部分采用截留分子量为1000～5000Da的超滤膜进行超滤，将超滤膜非透过的大分子肽液和透过的小分子低聚肽液分别收集起来；所述离心和过滤均采用现有的方式，先经过离心分离出水解的蛋白肽液，再进行过滤，得到透明度良好的蛋白质低聚肽液溶液；其中离心以卧螺离心或沉降离心式离心机离心较佳，过滤以板框过滤方式最佳；
(5)将步骤(4)中第一次水解后收集的未水解固相部分和超滤后收集的非透过的大分子肽液均匀混合形成第二次水解原料液，并加水控制第二次水解原料液中蛋白质浓度在1％～10％之间，具体是先通过测定未水解固相部分和超滤后收集的非透过的大分子肽液混合物中的蛋白质含量后，再定量加水配制，来调节蛋白质的浓度；
(6)在步骤(5)中调制好的第二次水解原料液中同时加入蛋白水解酶和乳酸菌进行第二次水解，第二次水解的条件为：温度20～60℃，pH2-10，时间1～5小时，蛋白水解酶与二次水解原料液中蛋白质的质量比为1％～6％，乳酸菌接种量按每吨第二次水解原料液中109～1014个菌数加入到第二次水解液中；
(7)对步骤(6)对第二次水解后的水解液先离心分离、过滤后采用截留分子量为1000～5000Da超滤膜超滤，并将超滤膜透过的小分子低聚肽液收集起来；所述离心和过滤均采用现有的方式，其中离心以卧螺离心或沉降离心式离心机离心较佳，过滤以板框过滤方式最佳；
(8)将步骤(4)中第一次水解液超滤后透过的小分子低聚肽液与步骤(7)中第二次水解液超滤后的透过的小分子低聚肽液一起依次经过纯化，杀菌，浓缩，干燥，得到分子量小的蛋白质低聚肽产品。
在步骤(3)和步骤(6)中所使用的蛋白水解酶包括碱性蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、无花果蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶中的一种或其中任意两种混合。在步骤(3)中第一次水解的混合酶为碱性蛋白酶或中性蛋白酶分别与胃蛋白酶或酸性蛋白酶按照1～2:2～1的质量比混合最佳；步骤(6)中第二次水解的混合酶采用木瓜蛋白酶或风味蛋白酶分别与胃蛋白酶或酸性蛋白酶按照1～3:3～1的质量比混合最佳。
在步骤(3)和步骤(6)所使用的乳酸菌为保加利亚乳杆菌(L.bulgaricus)、干酪乳杆菌(L.casei)、嗜酸乳杆菌(L.acidophilus)、瑞士乳杆菌(L.helviticus)、短乳杆菌(L.brevis)、发酵乳杆菌(L.fementi)、德氏乳酸杆菌(L.delbrueckii)；乳酸链球菌(S.lactis)、丁二酮乳酸链球菌(S.diacetilactis)、乳酪链球菌(S.creamoris)、嗜热乳链球菌(S.thermophilus)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)的任意一种乳酸菌或任意两种乳酸菌混合，且任意两种乳酸菌混合的菌数比或质量比为1～3:3～1。其中以保加利亚乳杆菌与嗜热乳酸链球菌，或德氏乳酸杆菌与嗜热乳酸链球菌，或德氏乳酸杆菌与保加利亚乳杆菌组合为优选。
在步骤(4)和步骤(7)中所使用的超滤膜采用无机膜或有机膜，无机膜包括陶瓷膜和金属膜，有机膜包括纤维素衍生物(cellulose derivatives)、聚碳酸酯(PC)、聚偏氟乙烯(PVDF)、聚醚砜(PES)、聚丙烯(PP)、聚砜(PS)、聚丙稀腈(PAN)、聚氯乙稀(PVC)；所述超滤的条件为：温度5-65℃，pH值1-14，进水压力0.1-1.0Mpa，跨膜压降0.1-0.5Mpa。
所述步骤(1)中的原料鱼皮或鱼骨包括GB18406国家无公害水产品卫生要求的深海或淡水鱼的鱼皮、鱼骨，可以是新鲜的或是晾干后的鱼皮、鱼骨，在选用晾干的鱼皮、鱼骨需要经过1-15小时、0-50℃的温度条件下浸泡后再清洗、破碎，并按浸泡后鱼皮、鱼骨湿重与水按1:5～20的比例混合，通过胶体磨细化处理。
步骤(2)和步骤(8)中的杀菌均采用常压杀菌或超高温瞬时杀菌，其中常压杀菌的温度：70-100℃，时间10秒-15分钟；超高温瞬时杀菌的温度105-130℃，时间2秒-30秒。
步骤(8)中的纯化包括经树脂或纳滤脱盐、活性炭脱色两个步骤；杀菌后采用真空浓缩，冷冻或喷雾干燥，得到小分子量的胶原蛋白低聚肽产品。
本发明的有益效果：
(1)本发明将原料鱼皮或鱼骨经过清洗、破碎后，通过胶体磨微细化处理，使原料鱼皮或鱼骨充分分散均匀形成原料液体，有利于酶解过程的进行，提高酶解效果；
(2)本发明将第一次水解后分离的固相部分与超滤非透过部分合起来进行第二次水解，大大提高了原料蛋白的利用率，提高了蛋白肽的得率，减少酶的用量，降低生产成本；同时，采用1000～5000Da的超滤膜超滤，可以有效的除去肽液中的来自鱼皮中的色素成分和因为美拉德反应产生的色素物质，提高产品的白度；
(3)本发明采用蛋白酶与乳酸菌联合水解，乳酸菌在发酵过程中能产生蛋白酶、乳酸、细菌素等成分，可以有效提高原料蛋白的水解利用率和水解度；
(4)在水解过程中乳酸菌产生的乳酸，有助于鱼皮、鱼骨中胶原蛋白的溶出，提高蛋白质的水解效果和肽的得率，并有利于鱼皮、鱼骨在水解完成后的渣-液离心分离和过滤效果；乳酸菌产生的蛋白酶则有利于提高蛋白质的水解效果；实验结果表明，乳酸菌发酵产生的乳酸，可以提高鱼皮和鱼骨颗粒中的胶原蛋白的溶出，提高蛋白质的水解效果，在水解完成后的离心分离和过滤过程中，分离效果和分离速度大大提高；
(5)乳酸菌发酵产生的细菌素和乳酸，在酶水解过程中可以抑制杂菌生长，提高产品品质；
(6)乳酸菌发酵还可以消除水解液中的异味，包括鱼腥味、异臭味，由于发酵与酶水解同步进行，发酵时间延长，脱腥效果显著，采用本工艺加工的产品中没有任何鱼腥味和其他异臭味，有效改善胶原蛋白肽产品的风味；
采用本发明技术可以有效提高原料蛋白的利用率和产品得率，产品原料蛋白的利用率由通常的40％-45％提高到60％-70％，降低了生产成本。此外，产品中低聚肽成分，尤其分子量小于580Da的低聚肽的比例大幅增加，产品中分子量小于580Da的低聚肽的比例由通常的40％-50％提高到65％-75％，产品品质大幅提高。
说明书附图
图1是本发明的工艺流程图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明作进一步的说明。如图1所述本发明的工艺流程为：原料鱼皮或鱼骨的处理(包括清洗、破碎、加水混合、微细化分散处理)→原料液的杀菌、冷却→第一次蛋白水解酶-乳酸菌联合水解→第一次水解液分离→第一次分离液超滤→收集第一次水解液分离的固相部分和超滤非透过部分，进行第二次蛋白水解酶-乳酸菌联合水解→第二次水解液分离→第二次分离液超滤→第一次和第二次超滤透过液合并→纯化(脱盐、脱色)→杀菌→浓缩→干燥。
实施例一：所述一种用鱼皮或鱼骨生产高品质胶原蛋白低聚肽的方法，其特征在于具体步骤如下：
(1)将符合GB18406国家无公害水产品卫生要求的新鲜罗非鱼皮经过清洗、破碎后与水按重量比1:12混合，并将混合物过胶体磨进行微细化处理，使原料鱼皮或鱼骨充分分散均匀制成蛋白质浓度在2％左右原料液；
(2)将步骤(1)中配制的原料液在120℃的高温下杀菌5秒，然后采用板式冷却器冷却到冷却到50℃；
(3)在步骤(2)中杀菌处理后的原料液中加同时加入碱性蛋白水解酶和德氏乳酸杆菌(L.delbrueckii)进行第一次水解，第一次水解的条件为：酶水解条件为50℃，初始pH8.0，时间3小时，碱性蛋白水解酶与原料鱼皮或鱼骨的重量比为1％，德氏乳酸杆菌接种量按每吨原料液中加入1012个的菌数加入到原料液中；
(4)将步骤(3)中第一次水解后的水解液经过采用沉降式离心和板框过滤方式分离出未水解的固相部分和水解液液相部分，并将其分别收集起来；然后将收集的水解液液相部分采用截留分子量(molecular weightcutoff)为2000Da超滤膜进行超滤，将超滤膜非透过的大分子肽液和透过的小分子低聚肽液分别收集起来；
(5)将步骤(4)中第一次水解后收集的未水解的固相部分和超滤后收集的非透过的大分子肽液均匀混合形成第二次水解原料液，测定分离成分中的蛋白质含量，再定量加水控制第二次水解原料液中蛋白质浓度在5％；
(6)在步骤(5)中调制好的第二次水解原料液中同时加入木瓜蛋白酶和保加利亚乳杆菌进行第二次水解，第二次水解的条件为：温度45℃，pH6.5，时间4小时，木瓜蛋白酶与第二次水解原料液中蛋白质的质量比为1.5％，保加利亚乳杆菌接种量按每吨第二次水解原料液中5*1012个菌数加入到第二次水解液中；
(7)对步骤(6)对第二次水解后的水解液经卧螺离心、板框过滤后，进一步采用截留分子量为2000Da超滤膜超滤，将超滤膜透过的小分子低聚肽液收集起来；
(8)将步骤(4)中第一次水解液超滤后透过的小分子低聚肽液与步骤(7)中第二次水解液超滤后的透过的小分子低聚肽液一起依次经过树脂脱盐、活性炭脱色后，在120℃的调节高温杀菌3秒，然后经过真空浓缩，冷冻或喷雾干燥，得到小分子量的胶原蛋白低聚肽产品。
实施例二
所述一种用鱼皮或鱼骨生产高品质胶原蛋白低聚肽的方法，其特征在于具体步骤如下：
(1)淡水白鲢鱼在加工鱼糜的过程中会产生大量的副产物——新鲜鱼皮和鱼骨渣，将符合GB18406国家无公害水产品卫生要求的白鲢鱼糜加工过程中产生的新鲜白鲢鱼皮、鱼骨渣经过清洗、破碎后与水按重量比1:16混合，并将混合物过胶体磨进行微细化处理，使原料鱼皮或鱼骨充分分散均匀制成蛋白质浓度在3-5％原料液；
(2)将步骤(1)中配制的原料液在90℃的条件下常压杀菌90秒，然后采用管式冷却器冷却到42℃；
(3)在步骤(2)中杀菌处理后的原料液中加同时加入碱性蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶和嗜热乳酸链球菌进行第一次水解，第一次水解的条件为：温度42℃，初始pH7.0，时间5小时，碱性蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶按照质量比为1:1:1混合，三种酶混合后的量与原料鱼皮或鱼骨的重量比为1.5％，嗜热乳酸链球菌(S.thermophilus)接种量按每吨原料液中加入1013个的菌数加入到原料液中；
(4)将步骤(3)中第一次水解后的水解液经过采用沉降离心机离心和板框过滤方式过滤分离出未水解的固相部分和水解液液相部分，并将其分别收集起来；然后将收集的水解液液相部分采用截留分子量(molecularweight cutoff)为3000Da超滤膜进行超滤，将超滤膜非透过的大分子肽液和透过的小分子低聚肽液分别收集起来；
(5)将步骤(4)中第一次水解后收集的未水解的固相部分和超滤后收集的非透过大分子肽液均匀混合形成第二次水解原料液，测定分离成分中的蛋白质含量，再定量加水控制第二次水解原料液中蛋白质浓度在3-5％；
(6)在步骤(5)中调至好的第二次水解原料液中同时加入由木瓜蛋白酶和胃蛋白酶按照质量比为2:1的比例混合后的混合酶，和保加利亚乳杆菌进行第二次水解，第二次水解的条件为：酶水解条件为50℃，初始pH6.5，时间2小时，木瓜蛋白酶和胃蛋白酶与第二次水解原料液中蛋白质的质量比为2.5％，保加利亚乳杆菌接种量按每吨第二次水解原料液中1014个菌数加入到第二次水解液中；
(7)对步骤(6)对第二次水解后的水解液采用采用沉降离心机离心和板框过滤后，进一步采用截留分子量为3000Da超滤膜超滤，将超滤膜透过的小分子低聚肽液收集起来；
(8)将步骤(4)中第一次水解液超滤后透过的小分子低聚肽液与步骤(7)中第二次水解液超滤后的透过的小分子低聚肽液一起依次经过树脂脱盐、活性炭脱色，后，在110℃条件下高温杀菌6秒，然后经过真空浓缩，冷冻或喷雾干燥，得到小分子量的胶原蛋白低聚肽产品。
实施例三
所述一种用鱼皮或鱼骨生产高品质胶原蛋白低聚肽的方法，其特征在于具体步骤如下：
(1)将符合GB18406国家无公害水产品卫生要求的深海鳕鱼干鱼皮清洗后在10℃冷水中浸泡过夜，然后将浸泡过的深海鳕鱼湿鱼皮破碎后与水按重量比1:18混合，其中海鳕鱼鱼皮的重量采用其干重，并将混合物过胶体磨进行微细化处理，使原料鱼皮或鱼骨充分分散均匀制成蛋白质浓度在3.5％的原料液；
(2)将步骤(1)中配制的原料液在110℃的高温杀菌10秒，然后采用板式冷却器冷却到45℃；
(3)在步骤(2)中杀菌处理后的原料液中加同时加入碱性蛋白酶、胃蛋白酶、德氏乳酸杆菌(L.delbrueckii)、嗜热乳链球菌(S.thermophilus)第一次酶水解进行第一次水解，第一次水解的条件为：温度45℃，初始pH7.0，时间2小时，碱性蛋白酶、胃蛋白酶的质量比为2:1，两混合酶总量与原料鱼皮干重的重量比为3％，德氏乳酸杆菌盒嗜热乳链球菌按活菌数1:1的比例混合，接种量按每吨原料液中加入5*1013个的菌数加入到原料液中；
(4)将步骤(3)中第一次水解后的水解液经过卧螺离心机-管式离心机离心两次连续离心后，再采用板框过滤分离出未水解的固相部分和水解液液相部分，并将其分别收集起来；然后将收集的水解液液相部分采用截留分子量(molecular weight cutoff)为5000Da超滤膜进行超滤，将超滤膜非透过的大分子肽液和透过的小分子低聚肽液分别收集起来；
(5)将步骤(4)中第一次水解后收集的未水解的固相部分和超滤后收集的非透过大分子肽液均匀混合形成第二次水解原料液，测定分离成分中的蛋白质含量，再定量加水控制第二次水解原料液中蛋白质浓度在3.5％；
(6)在步骤(5)中调制好的第二次水解原料液中同时加入中性蛋白酶、胃蛋白酶、嗜热乳链球菌(S.thermophilus)、保加利亚乳杆菌(L.bulgaricus)进行第二次酶水解，第二次水解的条件为：温度为55℃，初始pH7.0，时间2小时，中性蛋白酶、胃蛋白酶的质量比为1:1，中性蛋白酶和胃蛋白酶混合后的量与二次水解原料液中蛋白质的质量比3.5％，加酶量为第二次水解原料液中蛋白质质量比的2.0％，嗜热乳链球菌(S.thermophilus)与保加利亚乳杆菌(L.bulgaricus)两个按活菌数1:1的比例加入，混合而成的乳酸菌按每吨水解液1*1013个菌数加入到第二次水解液中；
(7)对步骤(6)对第二次水解后的水解液采用沉降离心，板框过滤后，进一步采用截留分子量为5000Da超滤膜超滤，将超滤膜透过的小分子低聚肽液收集起来；
(8)将步骤(4)中第一次水解液超滤后透过的小分子低聚肽液与步骤(7)中第二次水解液超滤后的透过的小分子低聚肽液一起依次经过纳滤脱盐、活性炭脱色后，在130℃的条件下高温杀菌2秒钟，然后经过真空浓缩，冷冻或喷雾干燥，得到小分子量的胶原蛋白低聚肽产品，产品中分子量小于580Da的低聚肽的比例达到70％。
采用以上实施例中制备的胶原蛋白低聚肽成分，尤其是2肽、3肽等低聚肽的比例大幅增加，产品中分子量小于580Da的低聚肽的比例由通常的40％-50％提高到65％-75％，产品品质大幅提高。
Claims (7)
1.一种用鱼皮或鱼骨生产胶原蛋白低聚肽的方法，其特征在于具体步骤如下：
(1)将原料鱼皮或鱼骨经过清洗、破碎后与水按重量比1:5～20混合，并将混合物送入胶体磨进行微细化处理，使原料鱼皮或鱼骨充分分散均匀，并调配成蛋白质浓度在1％～10％原料液；
(2)将步骤(1)中配制的原料液在70～130℃的条件下杀菌2秒～15分钟，然后冷却到20～60℃之间；
(3)在步骤(2)中杀菌冷却后的原料液中同时加入蛋白水解酶和乳酸菌进行第一次水解，第一次水解的条件为：温度20～60℃，pH2～10，时间2～5小时，蛋白水解酶与原料鱼皮或鱼骨的重量比为1.5％～5％，乳酸菌接种量按每吨原料液109～1014个菌数加入到原料液中；
(4)将步骤(3)中第一次水解后的水解液经过离心、过滤后分离出未水解的固相部分和水解液液相部分，并将其分别收集起来；然后将收集的水解液液相部分采用截留分子量为1000～2000Da的超滤膜进行超滤，将超滤膜非透过的大分子肽液和透过的小分子低聚肽液分别收集起来；
(5)将步骤(4)中第一次水解后收集的未水解的固相部分和超滤后收集的非透过的大分子肽液均匀混合形成第二次水解原料液，并加水控制第二次水解原料液中蛋白质浓度在1％～10％之间；
(6)在步骤(5)中调制好的第二次水解原料液中同时加入蛋白水解酶和乳酸菌进行第二次水解，第二次水解的条件为：温度20～60℃，pH2-10，时间1～5小时，蛋白水解酶与第二次水解原料液中蛋白质的质量比为0.5％～5％，乳酸菌接种量按每吨第二次水解原料液中109～1014个菌数加入到第二次水解液中；
(7)对步骤(6)对第二次水解后的水解液经过离心分离，并过滤后采用截留分子量为1000～2000Da超滤膜超滤，将超滤膜透过的小分子低聚肽液收集起来；
(8)将步骤(4)中第一次水解液超滤后透过的小分子低聚肽液与步骤(7)中第二次水解液超滤后的透过的小分子低聚肽液一起依次经过纯化，杀菌，浓缩，干燥，得到分子量小的蛋白质低聚肽产品；
其中，在步骤(3)中第一次水解采用碱性蛋白酶，或碱性蛋白酶与胃蛋白酶按照1～2:2～1的质量比混合，或碱性蛋白酶与酸性蛋白酶按照1～2:2～1的质量比混合，或中性蛋白酶与胃蛋白酶按照1～2:2～1的质量比混合，或中性蛋白酶与酸性蛋白酶按照1～2:2～1的质量比混合，或碱性蛋白酶、中性蛋白酶和酸性蛋白酶按照质量比为1～3:1～3:1～3的比例混合；在步骤(6)中第二次水解采用木瓜蛋白酶，或木瓜蛋白酶与胃蛋白酶按照1～3:3～1的质量比混合而成，或木瓜蛋白酶与酸性蛋白酶按照1～3:3～1的质量比混合而成，或风味蛋白酶与胃蛋白酶按照1～3:3～1的质量比混合而成，或风味蛋白酶与酸性蛋白酶按照1～3:3～1的质量比混合而成，或碱性蛋白酶、中性蛋白酶和酸性蛋白酶按照质量比为1～3:1～3:1～3的比例混合。
2.根据权利要求1所述的一种用鱼皮或鱼骨生产胶原蛋白低聚肽的方法，其特征是：在步骤(3)和步骤(6)中所使用的乳酸菌为保加利亚乳杆菌、干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌、瑞士乳杆菌、短乳杆菌、发酵乳杆菌、德氏乳酸杆菌；乳酸链球菌、丁二酮乳酸链球菌、乳酪链球菌、嗜热乳链球菌、植物乳杆菌的任意一种乳酸菌或任意两种乳酸菌混合，且任意两种乳酸菌混合的菌数比或质量比为1～3:3～1。
3.根据权利要求1所述的一种用鱼皮或鱼骨生产胶原蛋白低聚肽的方法，其特征是：在步骤(4)和步骤(7)中所使用的超滤膜采用无机膜或有机膜，无机膜包括陶瓷膜和金属膜，有机膜包括纤维素衍生物、聚碳酸酯、聚偏氟乙烯、聚醚砜、聚丙烯、聚砜、聚丙稀腈、聚氯乙稀；所述超滤的条件为：温度5-65℃，pH值1-14，进水压力0.1-1.0Mpa，跨膜压降0.1-0.5Mpa。
4.根据权利要求1所述的一种用鱼皮或鱼骨生产胶原蛋白低聚肽的方法，其特征是：所述步骤(1)中的原料鱼皮或鱼骨包括GB18406国家无公害水产品卫生要求的深海或淡水鱼的鱼皮、鱼骨，可以是新鲜的或是晾干后的鱼皮、鱼骨，在选用晾干的鱼皮、鱼骨，鱼皮、鱼骨需要在0-50℃的温度条件下浸泡1-15小时后再清洗、破碎，并按浸泡后鱼皮、鱼骨干重与水按1:5～20的比例混合，通过胶体磨细化处理。
5.根据权利要求1所述的一种用鱼皮或鱼骨生产胶原蛋白低聚肽的方法，其特征是：步骤(2)和步骤(8)中的杀菌均采用常压杀菌或超高温瞬时杀菌，其中常压杀菌的温度：70-100℃，时间10秒-15分钟；超高温瞬时杀菌的温度105-130℃，时间2秒-30秒。
6.根据权利要求1所述的一种用鱼皮或鱼骨生产胶原蛋白低聚肽的方法，其特征是：步骤(8)中的纯化包括经树脂或纳滤脱盐、活性炭脱色两个步骤；杀菌后采用真空浓缩，冷冻或喷雾干燥，得到小分子量的胶原蛋白低聚肽产品。
7.根据权利要求2所述的一种用鱼皮或鱼骨生产胶原蛋白低聚肽的方法，其特征是：在步骤(3)和步骤(6)中的复合乳酸菌是采用保加利亚乳杆菌与嗜热乳酸链球菌，或德氏乳酸杆菌与嗜热乳酸链球菌，或德氏乳酸杆菌与保加利亚乳杆菌分别按照1～3:3～1的质量比混合而成。
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