CN105734102B - 胶原蛋白肽的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种胶原蛋白肽的制备方法，所述胶原蛋白肽的制备方法包括以下步骤：(1)将鱼皮与水按质量比为1：(2‑6)混合，在90‑100℃下提取1‑3小时，得到提取液，并调节pH至5‑10；(2)将酶和酶保活剂加入到45‑75℃的提取液中水解1‑5小时；(3)在85‑100℃水浴下灭酶5‑15分钟，得到酶解液；(4)将酶解液用活性炭进行脱腥、脱色，过滤，得到脱色液；(5)将脱色液超滤、冻干。本发明胶原蛋白肽的制备方法，产品得率高，抑菌性能好，养颜润肤效果佳。本发明所用的原料中无有害物质，不污染环境，而且本发明原料来源广泛，制备工艺简单，产品具有美容养颜、促进细胞生长、抗衰老的作用。
Description
技术领域
本发明涉及保健食品技术领域，具体涉及一种胶原蛋白肽的制备方法。
背景技术
现代营养学研究发现，人类摄食蛋白质经消化道的酶作用后，大多是以小肽形式消化吸收，肽营养作用的另一新认识是蛋白质在酶解过程中可以产生一些具有特殊生理调节功能的生物活性肽。
胶原蛋白是一种重要的功能性多糖蛋白质，与细胞再生、分化、运动、免疫、关节润滑、血压抑制、伤口愈合、衰老及疾病等有极其密切的关系。胶原蛋白肽，胶原蛋白的酶解产物，是一种天然的生物产品，具有胶原蛋白诸多的生理活性和胶原蛋白所不具有的特性，作为一种新兴的功能性蛋白配料近年来在国内外发展迅速，因其显著的生理活性广泛应用于功能性食品、保健食品、化妆品和药品。
胶原蛋白肽，顾名思义，是以胶原蛋白为原料来源的肽类物质。日本Nippi公司定义为：胶原蛋白是一种动物性食材中所普遍含有的蛋白质，通过热变性提炼出胶原蛋白，使用蛋白分解酶对其进行部分加水分解，降低分子量而形成的物质，称为胶原蛋白肽。
胶原蛋白肽除了具有多肽的典型特征(包括分子量小、易吸收，无抗原性、不过敏，安全性高、无副作用，生物活性高、作用准确，载体运输能力强等)外，因其结构特殊，脯氨酸和羟脯氨酸含量明显高于其他蛋白原料来源的活性肽，又具有其他多肽所不具备的功能。大量的国内外研究证实，胶原蛋白肽具有显著的美容(抗皱、美白、修复、保湿、滋养、丰胸、改善皮肤弹性、抗辐射等)、促进骨骼关节健康(促进骨细胞生成、加速骨骼发育、提高骨骼坚固性、缓解关节疼痛、改善关节软骨内蛋白多糖的耗损等)、控制体重等功效。因此胶原蛋白肽被称为“皮肤的软黄金”、“肤中之肤、骨中之骨”，广泛用于化妆品、补钙食品、保健食品、特殊营养食品、医用材料及医药中。
本发明提供了一种胶原蛋白肽的制备方法，易于吸收，并且蛋白的活性高。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明所要解决的技术问题是提供一种胶原蛋白肽的制备方法。
为实现上述目的，本发明所采用的技术解决方案是：
一种胶原蛋白肽的制备方法，包括以下步骤：
(1)将鱼皮与水按质量比为1：(2-6)混合，在90-100℃下提取1-3小时，得到提取液，并调节pH至5-10；
(2)将酶和酶保活剂加入到45-75℃的提取液中水解1-5小时；
(3)在85-100℃水浴下灭酶5-15分钟，得到酶解液；
(4)将酶解液用活性炭进行脱腥、脱色，过滤，得到脱色液；
(5)将脱色液超滤、冻干。
所述的步骤(1)中调节pH值可以采用NaOH溶液、HCl溶液等。
优选地，所述步骤(2)中酶的加入量为鱼皮质量的1-10％，酶保活剂的加入量为鱼皮质量的0.2-2％。
优选地，所述步骤(2)中的酶为无花果蛋白酶、胰蛋白酶、菠萝蛋白酶中一种或多种的混合物。
更优选地，所述步骤(2)中的酶由无花果蛋白酶、胰蛋白酶、菠萝蛋白酶混合而成，所述无花果蛋白酶、胰蛋白酶、菠萝蛋白酶的质量比为(1-3)：(1-3)：(1-3)。
优选地，所述步骤(2)中的酶保活剂为蔗果三糖、异麦芽酮糖醇、壳三糖中一种或多种的混合物。
更优选地，所述步骤(2)中的酶保活剂由蔗果三糖、异麦芽酮糖醇、壳三糖混合而成，所述蔗果三糖、异麦芽酮糖醇、壳三糖的质量比为(1-3)：(1-3)：(1-3)。
优选地，所述步骤(4)中的活性炭与酶解液的固液比(0.01-0.1)g/ml。
优选地，所述步骤(4)中的过滤为板框过滤机过滤，采用150-200目的滤布。
优选地，所述步骤(5)中的超滤为用截留分子量50-150kD的超滤膜超滤。
本发明胶原蛋白肽的制备方法，产品得率高，抑菌性能好，养颜润肤效果佳。本发明所用的原料中无有害物质，不污染环境，而且本发明原料来源广泛，制备工艺简单，产品具有美容养颜、促进细胞生长、抗衰老的作用。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的说明，以下所述，仅是对本发明的较佳实施例而已，并非对本发明做其他形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更为同等变化的等效实施例。凡是未脱离本发明方案内容，依据本发明的技术实质对以下实施例所做的任何简单修改或等同变化，均落在本发明的保护范围内。
实施例中各原料介绍：
蔗果三糖，CAS号：470-69-9。
异麦芽酮糖醇，CAS号：64519-82-0。
壳三糖，CAS号：41708-93-4。
无花果蛋白酶，CAS号：9001-33-6，济南鲁源生物科技有限公司提供，酶活200U/mg。
胰蛋白酶，CAS号：9002-07-7，郑州好兄弟化工产品有限公司提供，酶活200U/mg。
菠萝蛋白酶，CAS号：9001-00-7，山东圣协生物科技有限公司提供，酶活200U/mg。
活性炭，CAS号：64365-11-3，采用青岛嘉德滤料有限公司生产的50目活性炭。
实施例1
胶原蛋白肽的制备方法，包括以下步骤：
(1)将鱼皮与去离子水按质量比为1：4混合，在95℃下提取1.5小时，得到提取液，并用2mol/L的氢氧化钠溶液调节pH至7.6；
(2)将酶和酶保活剂加入到60℃的提取液中搅拌混合均匀，其中酶的加入量为鱼皮质量的4.5％，酶保活剂的加入量为鱼皮质量的0.6％(即每100克鱼皮加入酶4.5克、酶保活剂0.6克)，保持温度为60℃，水解2小时，得到水解后产物；
(3)然后将水解后产物置于95℃水浴下10分钟灭酶，得到酶解液；
(4)将活性炭与酶解液按固液比为0.02混合(即每100ml酶解液加入2克活性炭)，得到混合液；将混合液300转/分搅拌20分钟进行脱腥、脱色，然后采用板框过滤机过滤，滤布为180目，得到脱色液；
(5)取脱色液用截留分子量100kD的超滤膜超滤，收集滤液，在-30℃下冻干，得到实施例1制备的胶原蛋白肽。
所述步骤(2)中的酶由无花果蛋白酶、胰蛋白酶、菠萝蛋白酶按质量比为1：1：1搅拌混合均匀得到。
所述步骤(2)中的酶保活剂由蔗果三糖、异麦芽酮糖醇、壳三糖按质量比为1：1：1搅拌混合均匀得到。
实施例2
与实施例1基本相同，区别仅仅在于：所述的酶由蔗无花果蛋白酶、胰蛋白酶按质量比为1：1搅拌混合均匀得到。即可制得实施例2的胶原蛋白肽。
实施例3
与实施例1基本相同，区别仅仅在于：所述的酶由无花果蛋白酶、菠萝蛋白酶按质量比为1：1搅拌混合均匀得到。即可制得实施例3的胶原蛋白肽的制备方法。
实施例4
与实施例1基本相同，区别仅仅在于：所述的酶由胰蛋白酶、菠萝蛋白酶按质量比为1：1搅拌混合均匀得到。即可制得实施例4的胶原蛋白肽的制备方法。
实施例5
与实施例1基本相同，区别仅仅在于：所述的酶保活剂由蔗果三糖、异麦芽酮糖醇按质量比为1：1搅拌混合均匀得到。即可制得实施例5的胶原蛋白肽。
实施例6
与实施例1基本相同，区别仅仅在于：所述的酶保活剂由蔗果三糖、壳三糖按质量比为1：1搅拌混合均匀得到。即可制得实施例6的胶原蛋白肽。
实施例7
与实施例1基本相同，区别仅仅在于：所述的酶保活剂由异麦芽酮糖醇、壳三糖按质量比为1：1搅拌混合均匀得到。即可制得实施例7的胶原蛋白肽。
测试例1
对实施例1-7中步骤(1)的鱼皮和步骤(5)制备的胶原蛋白肽进行称重，计算产品得率，产品得率(％)＝胶原蛋白肽的质量/鱼皮的质量×100％，具体结果见表1。
表1：产品得率测试表
| 产品得率/％ | |
| 实施例1 | 15.2 |
| 实施例2 | 9.5 |
| 实施例3 | 9.4 |
| 实施例4 | 9.7 |
| 实施例5 | 10.1 |
| 实施例6 | 10.5 |
| 实施例7 | 9.8 |
比较实施例1与实施例2-4，实施例1(无花果蛋白酶、胰蛋白酶、菠萝蛋白酶)产品得率明显高于实施例2-4(无花果蛋白酶、胰蛋白酶、菠萝蛋白酶中任意两种复配)。比较实施例1与实施例5-7，实施例1(蔗果三糖、异麦芽酮糖醇、壳三糖)产品得率明显高于实施例2-4(蔗果三糖、异麦芽 酮糖醇、壳三糖中任意两种复配)。
测试例2
将实施例1-7制备的胶原蛋白肽的制备方法，置于25℃，相对湿度85％环境下保藏半年，采用《GB/T 4789.2-2010食品卫生微生物学检验菌落总数测定》进行菌落总数测试。具体测试结果见表2。
表2：菌落总数测试表cfu/g
| 菌落总数 | |
| 实施例1 | 1.8×10<sup>3</sup> |
| 实施例2 | 4.3×10<sup>3</sup> |
| 实施例3 | 5.2×10<sup>3</sup> |
| 实施例4 | 5.7×10<sup>3</sup> |
| 实施例5 | 5.2×10<sup>3</sup> |
| 实施例6 | 4.6×10<sup>3</sup> |
| 实施例7 | 4.9×10<sup>3</sup> |
发明人意外的发现，在添加酶和酶保活剂后，菌落总数明显下降，产品的抑菌性能明显提高，保质期得以大幅延长。比较实施例1和实施例2-4，实施例1(无花果蛋白酶、胰蛋白酶、菠萝蛋白酶)抑菌性能明显高于实施例2-4(无花果蛋白酶、胰蛋白酶、菠萝蛋白酶中任意两种复配)。比较实施例1与实施例5-7，实施例1(蔗果三糖、异麦芽酮糖醇、壳三糖)抑菌性能明显高于实施例2-4(蔗果三糖、异麦芽酮糖醇、壳三糖中任意两种复配)。
测试例2
对实施例1-7进行养颜润肤效果测试。
每组对象：50名临床观察病例，症状表现为：皮肤松弛、油腻、颜色暗淡、出现雀斑、红痘，其中男性25名，女性25名(年龄20-60岁)。
测试对象每日早上9点、下午5点两次饮用，每组分别使用实施例1-4制备的胶原蛋白肽的制备方法3克，取300mL温度为45℃的水冲泡，连续一个月，进行测试。
疗效标准：
(1)显效：皮肤更水润，出油量明显减少，白皙度提高30％；
(2)有效：皮肤水润，出油量减少，白皙度提高10％；
(3)无效：治疗前后无明显症状改善，或加重。
具体测试数据见表3。
表3：治疗效果测试结果表
| 显效 | 有效 | 无效 | |
| 实施例1 | 45 | 5 | 0 |
| 实施例2 | 33 | 14 | 3 |
| 实施例3 | 30 | 15 | 5 |
| 实施例4 | 31 | 15 | 4 |
| 实施例5 | 34 | 12 | 4 |
| 实施例6 | 33 | 11 | 6 |
| 实施例7 | 35 | 13 | 2 |
实验证明，本发明的胶原蛋白肽的制备方法茶能够有效改善皮肤松弛、油腻、颜色暗淡症状。比较实施例1与实施例2-4，实施例1(无花果蛋白酶、胰蛋白酶、菠萝蛋白酶复配)治疗效果明显优于实施例2-4(无花果蛋白酶、胰蛋白酶、菠萝蛋白酶中任意两种复配)。比较实施例1与实施例5-7，实施例1(蔗果三糖、异麦芽酮糖醇、壳三糖复配)治疗效果明显优于实施例2-4(蔗果三糖、异麦芽酮糖醇、壳三糖中任意两种复配)。
Claims (5)
1.一种胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将鱼皮与水按质量比为1：2-6混合，在90-100℃下提取1-3小时，得到提取液，并调节pH至5-10；
(2)将酶和酶保活剂加入到45-75℃的提取液中水解1-5小时；
(3)在85-100℃水浴下灭酶5-15分钟，得到酶解液；
(4)将酶解液用活性炭进行脱腥、脱色，过滤，得到脱色液；
(5)将脱色液超滤、冻干；
所述的酶保活剂由蔗果三糖、异麦芽酮糖醇、壳三糖混合而成，所述蔗果三糖、异麦芽酮糖醇、壳三糖的质量比为1-3：1-3：1-3；
所述的酶由无花果蛋白酶、胰蛋白酶、菠萝蛋白酶混合而成，所述无花果蛋白酶、胰蛋白酶、菠萝蛋白酶的质量比为1-3：1-3：1-3。
2.如权利要求1所述的胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于：活性炭与酶解液的固液比(0.01-0.1)g/ml。
3.如权利要求1所述的胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于：过滤为板框过滤机过滤，采用150-200目的滤布。
4.如权利要求1所述的胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于：所述的超滤为用截留分子量50-150kD的超滤膜超滤。
5.如权利要求1所述的胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中酶的加入量为鱼皮质量的1-10％，酶保活剂的加入量为鱼皮质量的0.2-2％。
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