CN110477402A - 鱼肽、鱼骨肽、海参肽和人参肽复合营养品及其制备方法 - Google Patents
鱼肽、鱼骨肽、海参肽和人参肽复合营养品及其制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种鱼肽、鱼骨肽、海参肽和人参肽复合营养品及其制备方法,制备方法包括:分离淡水鱼鱼肉与鱼骨,将鱼肉置于绞肉机内绞碎,再将海参置于绞肉机内绞碎,将绞碎后的鱼肉和海参肉按一定比例混合,再与去离子水一通加入匀浆机,制得混合料浆;将混合料浆进行多次酶解得到第一多肽液;将分离出来的淡水鱼鱼骨去油脂后制成鱼骨粉,将鱼骨粉酶解获得第二多肽液;将人参切片再进行酶解制得第三多肽液;将第一多肽液、第二多肽液和第三多肽液合并,然后通过超滤膜筛选出其中小分子肽,真空冷冻干燥即得。本发明通过将淡水鱼肽、海参肽、人参肽及鱼骨胶原肽复合,针对术后伤口恢复、增强身体免疫力方面有较好效果。
Description
技术领域
本发明涉及食品加工领域。更具体地说,本发明涉及一种鱼肽、鱼骨肽、海参肽和人参肽复合营养品及其制备方法。
背景技术
淡水鱼具有营养丰富、蛋白质含量高等特点,含蛋白质、脂肪、18种氨基酸等,还含有人体必需的钙、磷、铁及多种维生素,适用于身体虚弱、低蛋白血症、脾胃气虚、营养不良之人食用,但是,目前市面上的淡水鱼大多仍为直接加热食用,无法改变原有蛋白质的大分子结构,其有效成分并不能完全发挥和利用。
海参是珍贵的海珍品,迄今已发现海参体内含有多种生理活性成分,具有极高的国内食疗价值,然而海参加工目前大多停留在初级加工阶段,由于资源利用率低,加工过程产生的下脚料浪费等原因造成资源浪费,甚至是环境污染。
人参在我国的中药领域中具有重要的地位,长期以来都被奉为非常名贵的中药植物,具有多种药物活性。其药用部位主要是其根部,该根部含有皂甙、人参酸、蛋白质、聚炔醇、有机酯、人参多糖、维生素、甾醇、多肽、挥发性组分等等,具有补原益气、生津安神、舒张血管、兴奋神经、改善血液循环、增强心脏收缩等多种功效。但是目前人参的食用方式方面仍然单一,如与其他家禽肉炖汤,人参中大部分的营养成分不容易被人体吸收而浪费掉。
随着科技的发展,人们发现肽是分子结构介于氨基酸和蛋白质之间的一类化合物,使蛋白质具有一定的生理功能。在人类的生命活动中,肽在体内的消化吸收优于游离的氨基酸,且有着区别于氨基酸的体内输送体系。某些短肽在提供人体生长、发育所必需的营养物质的同时,还能够防病治病,调节人体机能。将上述几种原料中包含的动物或植物蛋白分解成人体更易吸收的肽分子能提高上述原料的利用率,增强原料的食疗效果。但是目前均只出现单一的淡水鱼肽、海参肽或者人参肽产品,这类产品的功效单一,效果有限。
发明内容
本发明的一个目的是解决至少上述问题,并提供至少后面将说明的优点。
本发明还有一个目的是提供一种鱼肽、鱼骨肽、海参肽和人参肽复合营养品的制备方法,将淡水鱼肽、海参肽、人参肽及鱼骨胶原肽复合,形成了较好的协同增效效果,针对术后伤口恢复、增强身体免疫力方面有较好效果。
为了实现根据本发明的这些目的和其它优点,提供了一种鱼肽、鱼骨肽、海参肽和人参肽复合营养品的制备方法,包括以下步骤:
步骤一、分离淡水鱼鱼肉与鱼骨,将鱼肉置于绞肉机内绞碎,再将海参置于绞肉机内绞碎,将绞碎后的鱼肉和海参肉以5~6:1的重量比混合均匀,得混合料,将混合料与去离子水以1:10的重量比加入匀浆机,制得混合料浆;
步骤二、向混合料浆中加入胰蛋白酶和木瓜蛋白酶进行酶解,得第一酶解液,酶解的pH值为8.0~9.0,酶解温度为37℃,酶解时长为2~3h,胰蛋白酶重量为绞碎后的鱼肉和海参肉总重量的1.5%,木瓜蛋白酶重量为绞碎后的鱼肉和海参肉总重量的3%,将第一酶解液以10000~12000r/min的转速离心10~15min,取上清液,向上清液中加入肠激酶和大麦内肽酶进行再次酶解,得第二酶解液,再次酶解的pH值为4.5~5.5,酶解温度为40℃,酶解时长为1~2h,肠激酶重量为绞碎后的鱼肉和海参肉总重量的1%,大麦内肽酶重量为绞碎后的鱼肉和海参肉总重量的0.5%,将第二酶解液升温至85~95℃,保持8~12min,进行高温灭酶,得第一多肽液;
步骤三、取与绞碎后的鱼肉相同重量的淡水鱼鱼骨烘干,按料液比为1:30~35g/ml加入体积分数为10%的乙酸乙酯溶液,将混有淡水鱼鱼骨的乙酸乙酯溶液置于温度为40~45℃,气压为2~3Mpa的环境中高压处理30~45min,接着将淡水鱼鱼骨取出用去离子水洗涤干净沥干,超微粉碎,制成粒径10~20μm的鱼骨粉,向鱼骨粉中按料液比为1:20~25g/ml加入浓度为1mol/L的乙酸溶液浸泡24h,再以气压为0.5~1KPa,温度为40~45℃条件减压旋蒸1~1.5h,得粗提液,向粗提液中加入复合蛋白酶和枯草芽孢杆菌酶解,酶解的pH值为6.0~7.0,酶解温度为37℃,酶解时长为2~3h,复合蛋白酶重量为鱼骨粉重量的1%,枯草芽孢杆菌的接种量为每千克鱼骨粉10~15个菌落数,将酶解后的粗提液以10000~12000r/min的转速离心10~15min,取上清液升温至85~95℃,保持8~12min,进行高温灭酶灭菌,得第二多肽液;
步骤四、称取重量为绞碎后的鱼肉和海参肉总重量10%的人参切成厚度不超过2mm的薄片,向切好的人参中加入人参重量5倍的黄酒浸泡4~6h,将浸泡有人参的黄酒置于气压为2~3Mpa,温度为70~80℃的环境中高压处理30~45min,将高压处理后的人参取出捣碎并加入人参重量15倍的去离子水,再加入人参重量1%的纤维素酶和3%的菠萝蛋白酶,调节pH值为5~7,在50℃下进行保温酶解1~1.5h,将酶解后的粗提液以10000~12000r/min的转速离心10~15min,取上清液升温至85~95℃,保持8~12min,进行高温灭酶,得第三多肽液;
步骤五、将第一多肽液、第二多肽液和第三多肽液合并,通过截留分子量为500~2000D超滤膜,再进行真空冷冻干燥得粉状的复合营养品,真空冷冻干燥的温度为-15~-30℃,气压为30~40Pa。
优选的是,步骤五中将第一多肽液、第二多肽液和第三多肽液合并后还加入鱼肉、海参肉、鱼骨和人参总重量0.5~1.5%的转肽酶,调节pH值为6~7,在40℃下进行保温反应1~1.5h,再升温至85~95℃,保持8~12min,进行高温灭酶。
优选的是,所述淡水鱼为乌鳢。
优选的是,所述淡水鱼为鳜鱼。
优选的是,所述淡水鱼为人工养殖的大鲵鱼。
优选的是,加入转肽酶后的反应过程中进行超声搅拌,超声频率为30~32KHz。
本发明还提供由上述鱼肽、鱼骨肽、海参肽和人参肽复合营养品的制备方法制作出来的鱼肽、鱼骨肽、海参肽和人参肽复合营养品,以及由该鱼肽、鱼骨肽、海参肽和人参肽复合营养品配制的营养液。
本发明至少包括以下有益效果:本发明通过将淡水鱼肽、海参肽、人参肽及鱼骨胶原肽复合,形成了较好的协同增效效果,针对术后伤口恢复、增强身体免疫力方面有较好效果,尤其是通过转肽酶催化淡水鱼肽、海参肽、人参肽及鱼骨胶原肽之间的转肽反应后,将动物肽和植物肽有机的结合,效果更佳明显。
本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现,部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明,以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
需要说明的是,下述实施方案中所述实验方法,如无特殊说明,均为常规方法,所述试剂和材料,如无特殊说明,均可从商业途径获得。
<实施例1>
一种鱼肽、鱼骨肽、海参肽和人参肽复合营养品的制备方法,包括以下步骤:
步骤一、分离乌鳢鱼肉与鱼骨,将鱼肉置于绞肉机内绞碎,再将海参置于绞肉机内绞碎,将称取5kg绞碎后的鱼肉和1kg的海参肉混合均匀,得混合料,将上述混合料与60kg去离子水加入匀浆机,制得混合料浆;
步骤二、向混合料浆中加入90g胰蛋白酶和180g木瓜蛋白酶进行酶解,得第一酶解液,酶解的pH值为8.0,酶解温度为37℃,酶解时长为2h,将第一酶解液以10000r/min的转速离心10min,取上清液,向上清液中加入60g肠激酶和30g大麦内肽酶进行再次酶解,得第二酶解液,再次酶解的pH值为4.5,酶解温度为40℃,酶解时长为1h,将第二酶解液升温至85℃,保持8min,进行高温灭酶,得第一多肽液;
步骤三、取5kg乌鳢鱼骨烘干,按料液比为1:30g/ml加入体积分数为10%的乙酸乙酯溶液,将混有乌鳢鱼骨的乙酸乙酯溶液置于温度为40℃,气压为2Mpa的环境中高压处理30min,接着将乌鳢鱼骨取出用去离子水洗涤干净沥干,超微粉碎,制成粒径10μm的鱼骨粉,向鱼骨粉中按料液比为1:20g/ml加入浓度为1mol/L的乙酸溶液浸泡24h,再以气压为0.5KPa,温度为40℃条件减压旋蒸1h,得粗提液,向粗提液中加入复合蛋白酶和枯草芽孢杆菌酶解,酶解的pH值为6.0,酶解温度为37℃,酶解时长为2h,复合蛋白酶重量为鱼骨粉重量的1%,枯草芽孢杆菌的接种量为每千克鱼骨粉10个菌落数,将酶解后的粗提液以10000r/min的转速离心10min,取上清液升温至85℃,保持8min,进行高温灭酶灭菌,得第二多肽液;
步骤四、称取600g人参切成厚度不超过2mm的薄片,向切好的人参中加入3kg的黄酒浸泡4h,将浸泡有人参的黄酒置于气压为2Mpa,温度为70℃的环境中高压处理30min,将高压处理后的人参取出捣碎并加入9kg的去离子水,再加入6g的纤维素酶和18g的菠萝蛋白酶,调节pH值为5,在50℃下进行保温酶解1h,将酶解后的粗提液以10000r/min的转速离心10min,取上清液升温至85℃,保持8min,进行高温灭酶,得第三多肽液;
步骤五、将第一多肽液、第二多肽液和第三多肽液合并,加入58g转肽酶,调节pH值为6,在40℃下进行保温反应1h,反应期间进行超声搅拌,超声频率为30KHz,再升温至85℃,保持8min,进行高温灭酶,再通过截留分子量为500D超滤膜,再进行真空冷冻干燥,真空冷冻干燥的温度为-15℃,气压为30Pa。
<实施例2>
一种鱼肽、鱼骨肽、海参肽和人参肽复合营养品的制备方法,包括以下步骤:
步骤一、分离乌鳢鱼肉与鱼骨,将鱼肉置于绞肉机内绞碎,再将海参置于绞肉机内绞碎,将称取6kg绞碎后的鱼肉和1kg的海参肉混合均匀,得混合料,将上述混合料与70kg去离子水加入匀浆机,制得混合料浆;
步骤二、向混合料浆中加入105g胰蛋白酶和210g木瓜蛋白酶进行酶解,得第一酶解液,酶解的pH值为9.0,酶解温度为37℃,酶解时长为3h,将第一酶解液以12000r/min的转速离心15min,取上清液,向上清液中加入70g肠激酶和35g大麦内肽酶进行再次酶解,得第二酶解液,再次酶解的pH值为5.5,酶解温度为40℃,酶解时长为2h,将第二酶解液升温至95℃,保持12min,进行高温灭酶,得第一多肽液;
步骤三、取6kg乌鳢鱼骨烘干,按料液比为1:35g/ml加入体积分数为10%的乙酸乙酯溶液,将混有乌鳢鱼骨的乙酸乙酯溶液置于温度为45℃,气压为3Mpa的环境中高压处理45min,接着将乌鳢鱼骨取出用去离子水洗涤干净沥干,超微粉碎,制成粒径20μm的鱼骨粉,向鱼骨粉中按料液比为1:25g/ml加入浓度为1mol/L的乙酸溶液浸泡24h,再以气压为1KPa,温度为45℃条件减压旋蒸1.5h,得粗提液,向粗提液中加入复合蛋白酶和枯草芽孢杆菌酶解,酶解的pH值为7.0,酶解温度为37℃,酶解时长为3h,复合蛋白酶重量为鱼骨粉重量的1%,枯草芽孢杆菌的接种量为每千克鱼骨粉15个菌落数,将酶解后的粗提液以12000r/min的转速离心15min,取上清液升温至95℃,保持12min,进行高温灭酶灭菌,得第二多肽液;
步骤四、称取700g人参切成厚度不超过2mm的薄片,向切好的人参中加入3.5kg的黄酒浸泡6h,将浸泡有人参的黄酒置于气压为3Mpa,温度为80℃的环境中高压处理45min,将高压处理后的人参取出捣碎并加入10.5kg的去离子水,再加入7g的纤维素酶和21g的菠萝蛋白酶,调节pH值为7,在50℃下进行保温酶解1.5h,将酶解后的粗提液以12000r/min的转速离心15min,取上清液升温至95℃,保持12min,进行高温灭酶,得第三多肽液;
步骤五、将第一多肽液、第二多肽液和第三多肽液合并,加入205.5g转肽酶,调节pH值为7,在40℃下进行保温反应1.5h,反应期间进行超声搅拌,超声频率为32KHz,再升温至95℃,保持12min,进行高温灭酶,再通过截留分子量为2000D超滤膜,再进行真空冷冻干燥,真空冷冻干燥的温度为-30℃,气压为40Pa。
<实施例3>
一种鱼肽、鱼骨肽、海参肽和人参肽复合营养品的制备方法,包括以下步骤:
步骤一、分离乌鳢鱼肉与鱼骨,将鱼肉置于绞肉机内绞碎,再将海参置于绞肉机内绞碎,将称取5.5kg绞碎后的鱼肉和1kg的海参肉混合均匀,得混合料,将上述混合料与65kg去离子水加入匀浆机,制得混合料浆;
步骤二、向混合料浆中加入97.5g胰蛋白酶和195g木瓜蛋白酶进行酶解,得第一酶解液,酶解的pH值为8.5,酶解温度为37℃,酶解时长为2.5h,将第一酶解液以11000r/min的转速离心13min,取上清液,向上清液中加入65g肠激酶和32.5g大麦内肽酶进行再次酶解,得第二酶解液,再次酶解的pH值为5,酶解温度为40℃,酶解时长为1.5h,将第二酶解液升温至90℃,保持10min,进行高温灭酶,得第一多肽液;
步骤三、取5.5kg乌鳢鱼骨烘干,按料液比为1:33g/ml加入体积分数为10%的乙酸乙酯溶液,将混有乌鳢鱼骨的乙酸乙酯溶液置于温度为43℃,气压为2.5Mpa的环境中高压处理38min,接着将乌鳢鱼骨取出用去离子水洗涤干净沥干,超微粉碎,制成粒径15μm的鱼骨粉,向鱼骨粉中按料液比为1:23g/ml加入浓度为1mol/L的乙酸溶液浸泡24h,再以气压为0.8KPa,温度为43℃条件减压旋蒸1.3h,得粗提液,向粗提液中加入复合蛋白酶和枯草芽孢杆菌酶解,酶解的pH值为6.5,酶解温度为37℃,酶解时长为2.5h,复合蛋白酶重量为鱼骨粉重量的1%,枯草芽孢杆菌的接种量为每千克鱼骨粉13个菌落数,将酶解后的粗提液以11000r/min的转速离心13min,取上清液升温至90℃,保持10min,进行高温灭酶灭菌,得第二多肽液;
步骤四、称取650g人参切成厚度不超过2mm的薄片,向切好的人参中加入3.25kg的黄酒浸泡5h,将浸泡有人参的黄酒置于气压为2.5Mpa,温度为75℃的环境中高压处理38min,将高压处理后的人参取出捣碎并加入9.75kg的去离子水,再加入6.5g的纤维素酶和19.5g的菠萝蛋白酶,调节pH值为6,在50℃下进行保温酶解1.3h,将酶解后的粗提液以11000r/min的转速离心13min,取上清液升温至90℃,保持10min,进行高温灭酶,得第三多肽液;
步骤五、将第一多肽液、第二多肽液和第三多肽液合并,加入126.5g转肽酶,调节pH值为6.5,在40℃下进行保温反应1.3h,反应期间进行超声搅拌,超声频率为31KHz,再升温至90℃,保持10min,进行高温灭酶,再通过截留分子量为1250D超滤膜,再进行真空冷冻干燥,真空冷冻干燥的温度为-23℃,气压为35Pa。
<实施例4>
一种鱼肽、鱼骨肽、海参肽和人参肽复合营养品的制备方法,包括以下步骤:
步骤一、分离乌鳢鱼肉与鱼骨,将鱼肉置于绞肉机内绞碎,再将海参置于绞肉机内绞碎,将称取5.5kg绞碎后的鱼肉和1kg的海参肉混合均匀,得混合料,将上述混合料与65kg去离子水加入匀浆机,制得混合料浆;
步骤二、向混合料浆中加入97.5g胰蛋白酶和195g木瓜蛋白酶进行酶解,得第一酶解液,酶解的pH值为8.5,酶解温度为37℃,酶解时长为2.5h,将第一酶解液以11000r/min的转速离心13min,取上清液,向上清液中加入65g肠激酶和32.5g大麦内肽酶进行再次酶解,得第二酶解液,再次酶解的pH值为5,酶解温度为40℃,酶解时长为1.5h,将第二酶解液升温至90℃,保持10min,进行高温灭酶,得第一多肽液;
步骤三、取5.5kg乌鳢鱼骨烘干,按料液比为1:33g/ml加入体积分数为10%的乙酸乙酯溶液,将混有乌鳢鱼骨的乙酸乙酯溶液置于温度为43℃,气压为2.5Mpa的环境中高压处理38min,接着将乌鳢鱼骨取出用去离子水洗涤干净沥干,超微粉碎,制成粒径15μm的鱼骨粉,向鱼骨粉中按料液比为1:23g/ml加入浓度为1mol/L的乙酸溶液浸泡24h,再以气压为0.8KPa,温度为43℃条件减压旋蒸1.3h,得粗提液,向粗提液中加入复合蛋白酶和枯草芽孢杆菌酶解,酶解的pH值为6.5,酶解温度为37℃,酶解时长为2.5h,复合蛋白酶重量为鱼骨粉重量的1%,枯草芽孢杆菌的接种量为每千克鱼骨粉13个菌落数,将酶解后的粗提液以11000r/min的转速离心13min,取上清液升温至90℃,保持10min,进行高温灭酶灭菌,得第二多肽液;
步骤四、称取650g人参切成厚度不超过2mm的薄片,向切好的人参中加入3.25kg的黄酒浸泡5h,将浸泡有人参的黄酒置于气压为2.5Mpa,温度为75℃的环境中高压处理38min,将高压处理后的人参取出捣碎并加入9.75kg的去离子水,再加入6.5g的纤维素酶和19.5g的菠萝蛋白酶,调节pH值为6,在50℃下进行保温酶解1.3h,将酶解后的粗提液以11000r/min的转速离心13min,取上清液升温至90℃,保持10min,进行高温灭酶,得第三多肽液;
步骤五、将第一多肽液、第二多肽液和第三多肽液合并,再通过截留分子量为1250D超滤膜,再进行真空冷冻干燥,真空冷冻干燥的温度为-23℃,气压为35Pa。
<实施例5>
一种鱼肽、鱼骨肽、海参肽和人参肽复合营养品的制备方法,包括以下步骤:
步骤一、分离鳜鱼鱼肉与鱼骨,将鱼肉置于绞肉机内绞碎,再将海参置于绞肉机内绞碎,将称取5kg绞碎后的鱼肉和1kg的海参肉混合均匀,得混合料,将上述混合料与60kg去离子水加入匀浆机,制得混合料浆;
步骤二、向混合料浆中加入90g胰蛋白酶和180g木瓜蛋白酶进行酶解,得第一酶解液,酶解的pH值为8.0,酶解温度为37℃,酶解时长为2h,将第一酶解液以10000r/min的转速离心10min,取上清液,向上清液中加入60g肠激酶和30g大麦内肽酶进行再次酶解,得第二酶解液,再次酶解的pH值为4.5,酶解温度为40℃,酶解时长为1h,将第二酶解液升温至85℃,保持8min,进行高温灭酶,得第一多肽液;
步骤三、取5kg鳜鱼鱼骨烘干,按料液比为1:30g/ml加入体积分数为10%的乙酸乙酯溶液,将混有鳜鱼鱼骨的乙酸乙酯溶液置于温度为40℃,气压为2Mpa的环境中高压处理30min,接着将鳜鱼鱼骨取出用去离子水洗涤干净沥干,超微粉碎,制成粒径10μm的鱼骨粉,向鱼骨粉中按料液比为1:20g/ml加入浓度为1mol/L的乙酸溶液浸泡24h,再以气压为0.5KPa,温度为40℃条件减压旋蒸1h,得粗提液,向粗提液中加入复合蛋白酶和枯草芽孢杆菌酶解,酶解的pH值为6.0,酶解温度为37℃,酶解时长为2h,复合蛋白酶重量为鱼骨粉重量的1%,枯草芽孢杆菌的接种量为每千克鱼骨粉10个菌落数,将酶解后的粗提液以10000r/min的转速离心10min,取上清液升温至85℃,保持8min,进行高温灭酶灭菌,得第二多肽液;
步骤四、称取600g人参切成厚度不超过2mm的薄片,向切好的人参中加入3kg的黄酒浸泡4h,将浸泡有人参的黄酒置于气压为2Mpa,温度为70℃的环境中高压处理30min,将高压处理后的人参取出捣碎并加入9kg的去离子水,再加入6g的纤维素酶和18g的菠萝蛋白酶,调节pH值为5,在50℃下进行保温酶解1h,将酶解后的粗提液以10000r/min的转速离心10min,取上清液升温至85℃,保持8min,进行高温灭酶,得第三多肽液;
步骤五、将第一多肽液、第二多肽液和第三多肽液合并,加入58g转肽酶,调节pH值为6,在40℃下进行保温反应1h,反应期间进行超声搅拌,超声频率为30KHz,再升温至85℃,保持8min,进行高温灭酶,再通过截留分子量为500D超滤膜,再进行真空冷冻干燥,真空冷冻干燥的温度为-15℃,气压为30Pa。
<实施例6>
一种鱼肽、鱼骨肽、海参肽和人参肽复合营养品的制备方法,包括以下步骤:
步骤一、分离鳜鱼鱼肉与鱼骨,将鱼肉置于绞肉机内绞碎,再将海参置于绞肉机内绞碎,将称取6kg绞碎后的鱼肉和1kg的海参肉混合均匀,得混合料,将上述混合料与70kg去离子水加入匀浆机,制得混合料浆;
步骤二、向混合料浆中加入105g胰蛋白酶和210g木瓜蛋白酶进行酶解,得第一酶解液,酶解的pH值为9.0,酶解温度为37℃,酶解时长为3h,将第一酶解液以12000r/min的转速离心15min,取上清液,向上清液中加入70g肠激酶和35g大麦内肽酶进行再次酶解,得第二酶解液,再次酶解的pH值为5.5,酶解温度为40℃,酶解时长为2h,将第二酶解液升温至95℃,保持12min,进行高温灭酶,得第一多肽液;
步骤三、取6kg鳜鱼鱼骨烘干,按料液比为1:35g/ml加入体积分数为10%的乙酸乙酯溶液,将混有鳜鱼鱼骨的乙酸乙酯溶液置于温度为45℃,气压为3Mpa的环境中高压处理45min,接着将鳜鱼鱼骨取出用去离子水洗涤干净沥干,超微粉碎,制成粒径20μm的鱼骨粉,向鱼骨粉中按料液比为1:25g/ml加入浓度为1mol/L的乙酸溶液浸泡24h,再以气压为1KPa,温度为45℃条件减压旋蒸1.5h,得粗提液,向粗提液中加入复合蛋白酶和枯草芽孢杆菌酶解,酶解的pH值为7.0,酶解温度为37℃,酶解时长为3h,复合蛋白酶重量为鱼骨粉重量的1%,枯草芽孢杆菌的接种量为每千克鱼骨粉15个菌落数,将酶解后的粗提液以12000r/min的转速离心15min,取上清液升温至95℃,保持12min,进行高温灭酶灭菌,得第二多肽液;
步骤四、称取700g人参切成厚度不超过2mm的薄片,向切好的人参中加入3.5kg的黄酒浸泡6h,将浸泡有人参的黄酒置于气压为3Mpa,温度为80℃的环境中高压处理45min,将高压处理后的人参取出捣碎并加入10.5kg的去离子水,再加入7g的纤维素酶和21g的菠萝蛋白酶,调节pH值为7,在50℃下进行保温酶解1.5h,将酶解后的粗提液以12000r/min的转速离心15min,取上清液升温至95℃,保持12min,进行高温灭酶,得第三多肽液;
步骤五、将第一多肽液、第二多肽液和第三多肽液合并,加入205.5g转肽酶,调节pH值为7,在40℃下进行保温反应1.5h,反应期间进行超声搅拌,超声频率为32KHz,再升温至95℃,保持12min,进行高温灭酶,再通过截留分子量为2000D超滤膜,再进行真空冷冻干燥,真空冷冻干燥的温度为-30℃,气压为40Pa。
<实施例7>
一种鱼肽、鱼骨肽、海参肽和人参肽复合营养品的制备方法,包括以下步骤:
步骤一、分离鳜鱼鱼肉与鱼骨,将鱼肉置于绞肉机内绞碎,再将海参置于绞肉机内绞碎,将称取5.5kg绞碎后的鱼肉和1kg的海参肉混合均匀,得混合料,将上述混合料与65kg去离子水加入匀浆机,制得混合料浆;
步骤二、向混合料浆中加入97.5g胰蛋白酶和195g木瓜蛋白酶进行酶解,得第一酶解液,酶解的pH值为8.5,酶解温度为37℃,酶解时长为2.5h,将第一酶解液以11000r/min的转速离心13min,取上清液,向上清液中加入65g肠激酶和32.5g大麦内肽酶进行再次酶解,得第二酶解液,再次酶解的pH值为5,酶解温度为40℃,酶解时长为1.5h,将第二酶解液升温至90℃,保持10min,进行高温灭酶,得第一多肽液;
步骤三、取5.5kg鳜鱼鱼骨烘干,按料液比为1:33g/ml加入体积分数为10%的乙酸乙酯溶液,将混有鳜鱼鱼骨的乙酸乙酯溶液置于温度为43℃,气压为2.5Mpa的环境中高压处理38min,接着将鳜鱼鱼骨取出用去离子水洗涤干净沥干,超微粉碎,制成粒径15μm的鱼骨粉,向鱼骨粉中按料液比为1:23g/ml加入浓度为1mol/L的乙酸溶液浸泡24h,再以气压为0.8KPa,温度为43℃条件减压旋蒸1.3h,得粗提液,向粗提液中加入复合蛋白酶和枯草芽孢杆菌酶解,酶解的pH值为6.5,酶解温度为37℃,酶解时长为2.5h,复合蛋白酶重量为鱼骨粉重量的1%,枯草芽孢杆菌的接种量为每千克鱼骨粉13个菌落数,将酶解后的粗提液以11000r/min的转速离心13min,取上清液升温至90℃,保持10min,进行高温灭酶灭菌,得第二多肽液;
步骤四、称取650g人参切成厚度不超过2mm的薄片,向切好的人参中加入3.25kg的黄酒浸泡5h,将浸泡有人参的黄酒置于气压为2.5Mpa,温度为75℃的环境中高压处理38min,将高压处理后的人参取出捣碎并加入9.75kg的去离子水,再加入6.5g的纤维素酶和19.5g的菠萝蛋白酶,调节pH值为6,在50℃下进行保温酶解1.3h,将酶解后的粗提液以11000r/min的转速离心13min,取上清液升温至90℃,保持10min,进行高温灭酶,得第三多肽液;
步骤五、将第一多肽液、第二多肽液和第三多肽液合并,加入126.5g转肽酶,调节pH值为6.5,在40℃下进行保温反应1.3h,反应期间进行超声搅拌,超声频率为31KHz,再升温至90℃,保持10min,进行高温灭酶,再通过截留分子量为1250D超滤膜,再进行真空冷冻干燥,真空冷冻干燥的温度为-23℃,气压为35Pa。
<实施例8>
一种鱼肽、鱼骨肽、海参肽和人参肽复合营养品的制备方法,包括以下步骤:
步骤一、分离鳜鱼鱼肉与鱼骨,将鱼肉置于绞肉机内绞碎,再将海参置于绞肉机内绞碎,将称取5.5kg绞碎后的鱼肉和1kg的海参肉混合均匀,得混合料,将上述混合料与65kg去离子水加入匀浆机,制得混合料浆;
步骤二、向混合料浆中加入97.5g胰蛋白酶和195g木瓜蛋白酶进行酶解,得第一酶解液,酶解的pH值为8.5,酶解温度为37℃,酶解时长为2.5h,将第一酶解液以11000r/min的转速离心13min,取上清液,向上清液中加入65g肠激酶和32.5g大麦内肽酶进行再次酶解,得第二酶解液,再次酶解的pH值为5,酶解温度为40℃,酶解时长为1.5h,将第二酶解液升温至90℃,保持10min,进行高温灭酶,得第一多肽液;
步骤三、取5.5kg鳜鱼鱼骨烘干,按料液比为1:33g/ml加入体积分数为10%的乙酸乙酯溶液,将混有鳜鱼鱼骨的乙酸乙酯溶液置于温度为43℃,气压为2.5Mpa的环境中高压处理38min,接着将鳜鱼鱼骨取出用去离子水洗涤干净沥干,超微粉碎,制成粒径15μm的鱼骨粉,向鱼骨粉中按料液比为1:23g/ml加入浓度为1mol/L的乙酸溶液浸泡24h,再以气压为0.8KPa,温度为43℃条件减压旋蒸1.3h,得粗提液,向粗提液中加入复合蛋白酶和枯草芽孢杆菌酶解,酶解的pH值为6.5,酶解温度为37℃,酶解时长为2.5h,复合蛋白酶重量为鱼骨粉重量的1%,枯草芽孢杆菌的接种量为每千克鱼骨粉13个菌落数,将酶解后的粗提液以11000r/min的转速离心13min,取上清液升温至90℃,保持10min,进行高温灭酶灭菌,得第二多肽液;
步骤四、称取650g人参切成厚度不超过2mm的薄片,向切好的人参中加入3.25kg的黄酒浸泡5h,将浸泡有人参的黄酒置于气压为2.5Mpa,温度为75℃的环境中高压处理38min,将高压处理后的人参取出捣碎并加入9.75kg的去离子水,再加入6.5g的纤维素酶和19.5g的菠萝蛋白酶,调节pH值为6,在50℃下进行保温酶解1.3h,将酶解后的粗提液以11000r/min的转速离心13min,取上清液升温至90℃,保持10min,进行高温灭酶,得第三多肽液;
步骤五、将第一多肽液、第二多肽液和第三多肽液合并,再通过截留分子量为1250D超滤膜,再进行真空冷冻干燥,真空冷冻干燥的温度为-23℃,气压为35Pa。
<实施例9>
一种鱼肽、鱼骨肽、海参肽和人参肽复合营养品的制备方法,包括以下步骤:
步骤一、分离人工养殖的大鲵鱼鱼肉与鱼骨,将鱼肉置于绞肉机内绞碎,再将海参置于绞肉机内绞碎,将称取5kg绞碎后的鱼肉和1kg的海参肉混合均匀,得混合料,将上述混合料与60kg去离子水加入匀浆机,制得混合料浆;
步骤二、向混合料浆中加入90g胰蛋白酶和180g木瓜蛋白酶进行酶解,得第一酶解液,酶解的pH值为8.0,酶解温度为37℃,酶解时长为2h,将第一酶解液以10000r/min的转速离心10min,取上清液,向上清液中加入60g肠激酶和30g大麦内肽酶进行再次酶解,得第二酶解液,再次酶解的pH值为4.5,酶解温度为40℃,酶解时长为1h,将第二酶解液升温至85℃,保持8min,进行高温灭酶,得第一多肽液;
步骤三、取5kg大鲵鱼鱼骨烘干,按料液比为1:30g/ml加入体积分数为10%的乙酸乙酯溶液,将混有大鲵鱼鱼骨的乙酸乙酯溶液置于温度为40℃,气压为2Mpa的环境中高压处理30min,接着将大鲵鱼鱼骨取出用去离子水洗涤干净沥干,超微粉碎,制成粒径10μm的鱼骨粉,向鱼骨粉中按料液比为1:20g/ml加入浓度为1mol/L的乙酸溶液浸泡24h,再以气压为0.5KPa,温度为40℃条件减压旋蒸1h,得粗提液,向粗提液中加入复合蛋白酶和枯草芽孢杆菌酶解,酶解的pH值为6.0,酶解温度为37℃,酶解时长为2h,复合蛋白酶重量为鱼骨粉重量的1%,枯草芽孢杆菌的接种量为每千克鱼骨粉10个菌落数,将酶解后的粗提液以10000r/min的转速离心10min,取上清液升温至85℃,保持8min,进行高温灭酶灭菌,得第二多肽液;
步骤四、称取600g人参切成厚度不超过2mm的薄片,向切好的人参中加入3kg的黄酒浸泡4h,将浸泡有人参的黄酒置于气压为2Mpa,温度为70℃的环境中高压处理30min,将高压处理后的人参取出捣碎并加入9kg的去离子水,再加入6g的纤维素酶和18g的菠萝蛋白酶,调节pH值为5,在50℃下进行保温酶解1h,将酶解后的粗提液以10000r/min的转速离心10min,取上清液升温至85℃,保持8min,进行高温灭酶,得第三多肽液;
步骤五、将第一多肽液、第二多肽液和第三多肽液合并,加入58g转肽酶,调节pH值为6,在40℃下进行保温反应1h,反应期间进行超声搅拌,超声频率为30KHz,再升温至85℃,保持8min,进行高温灭酶,再通过截留分子量为500D超滤膜,再进行真空冷冻干燥,真空冷冻干燥的温度为-15℃,气压为30Pa。
<实施例10>
一种鱼肽、鱼骨肽、海参肽和人参肽复合营养品的制备方法,包括以下步骤:
步骤一、分离人工养殖的大鲵鱼鱼肉与鱼骨,将鱼肉置于绞肉机内绞碎,再将海参置于绞肉机内绞碎,将称取6kg绞碎后的鱼肉和1kg的海参肉混合均匀,得混合料,将上述混合料与70kg去离子水加入匀浆机,制得混合料浆;
步骤二、向混合料浆中加入105g胰蛋白酶和210g木瓜蛋白酶进行酶解,得第一酶解液,酶解的pH值为9.0,酶解温度为37℃,酶解时长为3h,将第一酶解液以12000r/min的转速离心15min,取上清液,向上清液中加入70g肠激酶和35g大麦内肽酶进行再次酶解,得第二酶解液,再次酶解的pH值为5.5,酶解温度为40℃,酶解时长为2h,将第二酶解液升温至95℃,保持12min,进行高温灭酶,得第一多肽液;
步骤三、取6kg大鲵鱼鱼骨烘干,按料液比为1:35g/ml加入体积分数为10%的乙酸乙酯溶液,将混有大鲵鱼鱼骨的乙酸乙酯溶液置于温度为45℃,气压为3Mpa的环境中高压处理45min,接着将大鲵鱼鱼骨取出用去离子水洗涤干净沥干,超微粉碎,制成粒径20μm的鱼骨粉,向鱼骨粉中按料液比为1:25g/ml加入浓度为1mol/L的乙酸溶液浸泡24h,再以气压为1KPa,温度为45℃条件减压旋蒸1.5h,得粗提液,向粗提液中加入复合蛋白酶和枯草芽孢杆菌酶解,酶解的pH值为7.0,酶解温度为37℃,酶解时长为3h,复合蛋白酶重量为鱼骨粉重量的1%,枯草芽孢杆菌的接种量为每千克鱼骨粉15个菌落数,将酶解后的粗提液以12000r/min的转速离心15min,取上清液升温至95℃,保持12min,进行高温灭酶灭菌,得第二多肽液;
步骤四、称取700g人参切成厚度不超过2mm的薄片,向切好的人参中加入3.5kg的黄酒浸泡6h,将浸泡有人参的黄酒置于气压为3Mpa,温度为80℃的环境中高压处理45min,将高压处理后的人参取出捣碎并加入10.5kg的去离子水,再加入7g的纤维素酶和21g的菠萝蛋白酶,调节pH值为7,在50℃下进行保温酶解1.5h,将酶解后的粗提液以12000r/min的转速离心15min,取上清液升温至95℃,保持12min,进行高温灭酶,得第三多肽液;
步骤五、将第一多肽液、第二多肽液和第三多肽液合并,加入205.5g转肽酶,调节pH值为7,在40℃下进行保温反应1.5h,反应期间进行超声搅拌,超声频率为32KHz,再升温至95℃,保持12min,进行高温灭酶,再通过截留分子量为2000D超滤膜,再进行真空冷冻干燥,真空冷冻干燥的温度为-30℃,气压为40Pa。
<实施例11>
一种鱼肽、鱼骨肽、海参肽和人参肽复合营养品的制备方法,包括以下步骤:
步骤一、分离人工养殖的大鲵鱼鱼肉与鱼骨,将鱼肉置于绞肉机内绞碎,再将海参置于绞肉机内绞碎,将称取5.5kg绞碎后的鱼肉和1kg的海参肉混合均匀,得混合料,将上述混合料与65kg去离子水加入匀浆机,制得混合料浆;
步骤二、向混合料浆中加入97.5g胰蛋白酶和195g木瓜蛋白酶进行酶解,得第一酶解液,酶解的pH值为8.5,酶解温度为37℃,酶解时长为2.5h,将第一酶解液以11000r/min的转速离心13min,取上清液,向上清液中加入65g肠激酶和32.5g大麦内肽酶进行再次酶解,得第二酶解液,再次酶解的pH值为5,酶解温度为40℃,酶解时长为1.5h,将第二酶解液升温至90℃,保持10min,进行高温灭酶,得第一多肽液;
步骤三、取5.5kg大鲵鱼鱼骨烘干,按料液比为1:33g/ml加入体积分数为10%的乙酸乙酯溶液,将混有大鲵鱼鱼骨的乙酸乙酯溶液置于温度为43℃,气压为2.5Mpa的环境中高压处理38min,接着将大鲵鱼鱼骨取出用去离子水洗涤干净沥干,超微粉碎,制成粒径15μm的鱼骨粉,向鱼骨粉中按料液比为1:23g/ml加入浓度为1mol/L的乙酸溶液浸泡24h,再以气压为0.8KPa,温度为43℃条件减压旋蒸1.3h,得粗提液,向粗提液中加入复合蛋白酶和枯草芽孢杆菌酶解,酶解的pH值为6.5,酶解温度为37℃,酶解时长为2.5h,复合蛋白酶重量为鱼骨粉重量的1%,枯草芽孢杆菌的接种量为每千克鱼骨粉13个菌落数,将酶解后的粗提液以11000r/min的转速离心13min,取上清液升温至90℃,保持10min,进行高温灭酶灭菌,得第二多肽液;
步骤四、称取650g人参切成厚度不超过2mm的薄片,向切好的人参中加入3.25kg的黄酒浸泡5h,将浸泡有人参的黄酒置于气压为2.5Mpa,温度为75℃的环境中高压处理38min,将高压处理后的人参取出捣碎并加入9.75kg的去离子水,再加入6.5g的纤维素酶和19.5g的菠萝蛋白酶,调节pH值为6,在50℃下进行保温酶解1.3h,将酶解后的粗提液以11000r/min的转速离心13min,取上清液升温至90℃,保持10min,进行高温灭酶,得第三多肽液;
步骤五、将第一多肽液、第二多肽液和第三多肽液合并,加入126.5g转肽酶,调节pH值为6.5,在40℃下进行保温反应1.3h,反应期间进行超声搅拌,超声频率为31KHz,再升温至90℃,保持10min,进行高温灭酶,再通过截留分子量为1250D超滤膜,再进行真空冷冻干燥,真空冷冻干燥的温度为-23℃,气压为35Pa。
<实施例12>
一种鱼肽、鱼骨肽、海参肽和人参肽复合营养品的制备方法,包括以下步骤:
步骤一、分离人工养殖的大鲵鱼鱼肉与鱼骨,将鱼肉置于绞肉机内绞碎,再将海参置于绞肉机内绞碎,将称取5.5kg绞碎后的鱼肉和1kg的海参肉混合均匀,得混合料,将上述混合料与65kg去离子水加入匀浆机,制得混合料浆;
步骤二、向混合料浆中加入97.5g胰蛋白酶和195g木瓜蛋白酶进行酶解,得第一酶解液,酶解的pH值为8.5,酶解温度为37℃,酶解时长为2.5h,将第一酶解液以11000r/min的转速离心13min,取上清液,向上清液中加入65g肠激酶和32.5g大麦内肽酶进行再次酶解,得第二酶解液,再次酶解的pH值为5,酶解温度为40℃,酶解时长为1.5h,将第二酶解液升温至90℃,保持10min,进行高温灭酶,得第一多肽液;
步骤三、取5.5kg大鲵鱼鱼骨烘干,按料液比为1:33g/ml加入体积分数为10%的乙酸乙酯溶液,将混有大鲵鱼鱼骨的乙酸乙酯溶液置于温度为43℃,气压为2.5Mpa的环境中高压处理38min,接着将大鲵鱼鱼骨取出用去离子水洗涤干净沥干,超微粉碎,制成粒径15μm的鱼骨粉,向鱼骨粉中按料液比为1:23g/ml加入浓度为1mol/L的乙酸溶液浸泡24h,再以气压为0.8KPa,温度为43℃条件减压旋蒸1.3h,得粗提液,向粗提液中加入复合蛋白酶和枯草芽孢杆菌酶解,酶解的pH值为6.5,酶解温度为37℃,酶解时长为2.5h,复合蛋白酶重量为鱼骨粉重量的1%,枯草芽孢杆菌的接种量为每千克鱼骨粉13个菌落数,将酶解后的粗提液以11000r/min的转速离心13min,取上清液升温至90℃,保持10min,进行高温灭酶灭菌,得第二多肽液;
步骤四、称取650g人参切成厚度不超过2mm的薄片,向切好的人参中加入3.25kg的黄酒浸泡5h,将浸泡有人参的黄酒置于气压为2.5Mpa,温度为75℃的环境中高压处理38min,将高压处理后的人参取出捣碎并加入9.75kg的去离子水,再加入6.5g的纤维素酶和19.5g的菠萝蛋白酶,调节pH值为6,在50℃下进行保温酶解1.3h,将酶解后的粗提液以11000r/min的转速离心13min,取上清液升温至90℃,保持10min,进行高温灭酶,得第三多肽液;
步骤五、将第一多肽液、第二多肽液和第三多肽液合并,再通过截留分子量为1250D超滤膜,再进行真空冷冻干燥,真空冷冻干燥的温度为-23℃,气压为35Pa。
<对比例1>
一种乌鳢肽营养粉的制备方法,包括以下步骤:
步骤一、分离乌鳢鱼肉与鱼骨,将鱼肉置于绞肉机内绞碎,称取5.5kg绞碎后的鱼肉与55kg去离子水加入匀浆机,制得混合料浆;
步骤二、向混合料浆中加入82.5g胰蛋白酶和165g木瓜蛋白酶进行酶解,得第一酶解液,酶解的pH值为8.5,酶解温度为37℃,酶解时长为2.5h,将第一酶解液以11000r/min的转速离心13min,取上清液,向上清液中加入55g肠激酶和27.5g大麦内肽酶进行再次酶解,得第二酶解液,再次酶解的pH值为5,酶解温度为40℃,酶解时长为1.5h,将第二酶解液升温至90℃,保持10min,进行高温灭酶,得乌鳢多肽液;
步骤三、将乌鳢多肽液通过截留分子量为1250D超滤膜,再进行真空冷冻干燥,真空冷冻干燥的温度为-23℃,气压为35Pa。
<对比例2>
一种鳜鱼肽营养粉的制备方法,包括以下步骤:
步骤一、分离鳜鱼鱼肉与鱼骨,将鱼肉置于绞肉机内绞碎,称取5.5kg绞碎后的鱼肉与55kg去离子水加入匀浆机,制得混合料浆;
步骤二、向混合料浆中加入82.5g胰蛋白酶和165g木瓜蛋白酶进行酶解,得第一酶解液,酶解的pH值为8.5,酶解温度为37℃,酶解时长为2.5h,将第一酶解液以11000r/min的转速离心13min,取上清液,向上清液中加入55g肠激酶和27.5g大麦内肽酶进行再次酶解,得第二酶解液,再次酶解的pH值为5,酶解温度为40℃,酶解时长为1.5h,将第二酶解液升温至90℃,保持10min,进行高温灭酶,得鳜鱼多肽液;
步骤三、将鳜鱼多肽液通过截留分子量为1250D超滤膜,再进行真空冷冻干燥,真空冷冻干燥的温度为-23℃,气压为35Pa。
<对比例3>
一种大鲵鱼肽营养粉的制备方法,包括以下步骤:
步骤一、分离人工养殖的大鲵鱼鱼肉与鱼骨,将鱼肉置于绞肉机内绞碎,称取5.5kg绞碎后的鱼肉与55kg去离子水加入匀浆机,制得混合料浆;
步骤二、向混合料浆中加入82.5g胰蛋白酶和165g木瓜蛋白酶进行酶解,得第一酶解液,酶解的pH值为8.5,酶解温度为37℃,酶解时长为2.5h,将第一酶解液以11000r/min的转速离心13min,取上清液,向上清液中加入55g肠激酶和27.5g大麦内肽酶进行再次酶解,得第二酶解液,再次酶解的pH值为5,酶解温度为40℃,酶解时长为1.5h,将第二酶解液升温至90℃,保持10min,进行高温灭酶,得大鲵鱼多肽液;
步骤三、将大鲵鱼多肽液通过截留分子量为1250D超滤膜,再进行真空冷冻干燥,真空冷冻干燥的温度为-23℃,气压为35Pa。
<对比例4>
一种海参肽营养粉的制备方法,包括以下步骤:
步骤一、将海参置于绞肉机内绞碎,称取1kg绞碎后的海参肉与10kg去离子水加入匀浆机,制得混合料浆;
步骤二、向混合料浆中加入15g胰蛋白酶和30g木瓜蛋白酶进行酶解,得第一酶解液,酶解的pH值为8.5,酶解温度为37℃,酶解时长为2.5h,将第一酶解液以11000r/min的转速离心13min,取上清液,向上清液中加入10g肠激酶和5g大麦内肽酶进行再次酶解,得第二酶解液,再次酶解的pH值为5,酶解温度为40℃,酶解时长为1.5h,将第二酶解液升温至90℃,保持10min,进行高温灭酶,得海参多肽液;
步骤三、将海参多肽液通过截留分子量为1250D超滤膜,再进行真空冷冻干燥,真空冷冻干燥的温度为-23℃,气压为35Pa。
<对比例5>
一种乌鳢鱼骨胶原肽营养粉的制备方法,包括以下步骤:
步骤一、分离乌鳢鱼肉与鱼骨,取5.5kg乌鳢鱼骨烘干,按料液比为1:50g/ml加入浓度为0.2mol/L的盐酸溶液,浸泡5.5h,再将乌鳢鱼骨取出用去离子水洗涤干净沥干,按料液比为1:33g/ml加入体积分数为10%的乙酸乙酯溶液,将混有乌鳢鱼骨的乙酸乙酯溶液置于温度为43℃,气压为2.5Mpa的环境中高压处理38min,接着将乌鳢鱼骨取出用去离子水洗涤干净沥干,超微粉碎,制成粒径15μm的鱼骨粉,向鱼骨粉中按料液比为1:23g/ml加入浓度为1mol/L的乙酸溶液浸泡24h,再以气压为0.8KPa,温度为43℃条件减压旋蒸1.3h,得粗提液,向粗提液中加入复合蛋白酶和枯草芽孢杆菌酶解,酶解的pH值为6.5,酶解温度为37℃,酶解时长为2.5h,复合蛋白酶重量为鱼骨粉重量的1%,枯草芽孢杆菌的接种量为每千克鱼骨粉13个菌落数,将酶解后的粗提液以11000r/min的转速离心13min,取上清液升温至90℃,保持10min,进行高温灭酶灭菌,得乌鳢鱼骨胶原多肽液;
步骤二、将乌鳢鱼骨胶原多肽液通过截留分子量为1250D超滤膜,再进行真空冷冻干燥,真空冷冻干燥的温度为-23℃,气压为35Pa。
<对比例6>
一种鳜鱼骨胶原肽营养粉的制备方法,包括以下步骤:
步骤一、分离鳜鱼鱼肉与鱼骨,取5.5kg鳜鱼鱼骨烘干,按料液比为1:50g/ml加入浓度为0.2mol/L的盐酸溶液,浸泡5.5h,再将鳜鱼鱼骨取出用去离子水洗涤干净沥干,按料液比为1:33g/ml加入体积分数为10%的乙酸乙酯溶液,将混有鳜鱼鱼骨的乙酸乙酯溶液置于温度为43℃,气压为2.5Mpa的环境中高压处理38min,接着将鳜鱼鱼骨取出用去离子水洗涤干净沥干,超微粉碎,制成粒径15μm的鱼骨粉,向鱼骨粉中按料液比为1:23g/ml加入浓度为1mol/L的乙酸溶液浸泡24h,再以气压为0.8KPa,温度为43℃条件减压旋蒸1.3h,得粗提液,向粗提液中加入复合蛋白酶和枯草芽孢杆菌酶解,酶解的pH值为6.5,酶解温度为37℃,酶解时长为2.5h,复合蛋白酶重量为鱼骨粉重量的1%,枯草芽孢杆菌的接种量为每千克鱼骨粉13个菌落数,将酶解后的粗提液以11000r/min的转速离心13min,取上清液升温至90℃,保持10min,进行高温灭酶灭菌,得鳜鱼骨胶原多肽液;
步骤二、将鳜鱼骨胶原多肽液通过截留分子量为1250D超滤膜,再进行真空冷冻干燥,真空冷冻干燥的温度为-23℃,气压为35Pa。
<对比例7>
一种大鲵鱼骨胶原肽营养粉的制备方法,包括以下步骤:
步骤一、分离人工养殖的大鲵鱼鱼肉与鱼骨,取5.5kg大鲵鱼鱼骨烘干,按料液比为1:50g/ml加入浓度为0.2mol/L的盐酸溶液,浸泡5.5h,再将大鲵鱼鱼骨取出用去离子水洗涤干净沥干,按料液比为1:33g/ml加入体积分数为10%的乙酸乙酯溶液,将混有大鲵鱼鱼骨的乙酸乙酯溶液置于温度为43℃,气压为2.5Mpa的环境中高压处理38min,接着将大鲵鱼鱼骨取出用去离子水洗涤干净沥干,超微粉碎,制成粒径15μm的鱼骨粉,向鱼骨粉中按料液比为1:23g/ml加入浓度为1mol/L的乙酸溶液浸泡24h,再以气压为0.8KPa,温度为43℃条件减压旋蒸1.3h,得粗提液,向粗提液中加入复合蛋白酶和枯草芽孢杆菌酶解,酶解的pH值为6.5,酶解温度为37℃,酶解时长为2.5h,复合蛋白酶重量为鱼骨粉重量的1%,枯草芽孢杆菌的接种量为每千克鱼骨粉13个菌落数,将酶解后的粗提液以11000r/min的转速离心13min,取上清液升温至90℃,保持10min,进行高温灭酶灭菌,得大鲵鱼骨胶原多肽液;
步骤二、将大鲵鱼骨胶原多肽液通过截留分子量为1250D超滤膜,再进行真空冷冻干燥,真空冷冻干燥的温度为-23℃,气压为35Pa。
<对比例8>
一种人参肽营养粉的制备方法,包括以下步骤:
步骤一、称取650g人参切成厚度不超过2mm的薄片,向切好的人参中加入3.25kg的黄酒浸泡5h,将浸泡有人参的黄酒置于气压为2.5Mpa,温度为75℃的环境中高压处理38min,将高压处理后的人参取出捣碎并加入9.75kg的去离子水,再加入6.5g的纤维素酶和19.5g的菠萝蛋白酶,调节pH值为6,在50℃下进行保温酶解1.3h,将酶解后的粗提液以11000r/min的转速离心13min,取上清液升温至90℃,保持10min,进行高温灭酶,得人参多肽液;
步骤二、将人参多肽液通过截留分子量为1250D超滤膜,再进行真空冷冻干燥,真空冷冻干燥的温度为-23℃,气压为35Pa。
<体表创伤促愈试验>
1、试验方法如下:
取体重4~5kg的新西兰兔126只,随机分为A~N组和对照组,每组6只,先以脱毛剂对新西兰兔背部脱毛,24h后以1%戊巴比妥钠30mg/kg耳缘静脉注射麻醉,无菌条件下使用7号注射器针头在脱毛区皮肤划1×1cm“#”型划伤(以渗血而无明显出血为度),再采用5%碘伏消毒清洗创面及周围皮肤,A~T组及对照组均采用传统棉纱敷料覆盖创面,使用纱布绷带腹部缠绕固定。将实施例1~12和对比例1~8分别按1g:10ml去离子水调配成营养液,A~L组分别以实施例1~12按新西兰兔每千克体重用50ml营养液的比例灌胃,M~T组分别以对比例1~8按新西兰兔每千克体重用50ml营养液的比例灌胃,对照组用等量生理盐水灌胃,每日一次,新西兰兔正常饮食,每日更换一次棉纱敷料,每日观察记录创面情况,连续12天。
2、临床评价标准:
创面红肿消退:肉眼观察,创面无明显红肿、渗出停止;
创面结痂时间:肉眼观察,创面开始形成干燥的痂皮为时间节点;
创面愈合时间:肉眼观察,创面完全上皮化,形成粉红色干燥创面为时间节点。
3、统计学处理:所有数据采用SPSS17.0软件进行统计学处理。所有数据均用均数±标准差(x±s)表示,21组之间采用t检验,以P<0.05为差异具有统计学意义,试验结果如表1所示:
表1
从表1可以看出,A~L组(实施例组)相比于对照组无论在红肿消退时间、创面结痂时间还是创面愈合时间上,均具有较明显的差异,而M~T组(对比例组)相比于对照组差异较小,说明通过将淡水鱼肽、海参肽、人参肽及鱼骨胶原肽复合,尤其是通过转肽酶催化转肽反应后,得到的营养粉对体表创伤有较好的促进愈合作用,而单一组分的淡水鱼肽、海参肽、人参肽或鱼骨胶原肽的效果则不太明显。
<小鼠免疫力试验>
取体重25~30g昆明种小鼠210只,随机分为a~t组和对照组,每组10只,将实施例1~12和对比例1~8分别按1g:10ml去离子水调配成营养液,a~l组分别以实施例1~12按小鼠每10克体重用0.2ml营养液的比例灌胃,m~t组分别以对比例1~8按小鼠每10克体重用0.2ml营养液的比例灌胃,对照组用等量生理盐水灌胃,每日一次,共7次。于末次给药前24h,各组小鼠均腹腔注射6%淀粉肉汤溶液1ml/只。实验时在无菌条件下,取鸡血以生理盐水洗涤3次,配成5%RBC-NS悬浮液,并给每只小鼠腹腔注射1ml,0.5h后腹腔注射生理盐水2ml/只,揉摩腹部,处死并开腹取腹水。将腹水离心,取沉淀物涂片,每鼠涂3张,放置凉干,Wright染色,每片油镜下计数100个巨噬细胞(MΦ),从中计数已吞噬鸡RBC的MΦ数及被吞噬的鸡红细胞(CRBC)总数,并求出每鼠的平均吞噬率及吞噬指数,结果见表2。
表2
组别 | 吞噬率(%) | 吞噬指数 |
对照组 | 31.6±6.77 | 1.87±0.19 |
a组(实施例1) | 69.3±5.56** | 2.92±0.21* |
b组(实施例2) | 70.5±7.12** | 2.85±0.36* |
c组(实施例3) | 72.7±6.25** | 2.83±0.18* |
d组(实施例4) | 63.9±3.14* | 2.96±0.25* |
e组(实施例5) | 67.2±5.46** | 3.01±0.16* |
f组(实施例6) | 68.5±4.35** | 2.95±0.22* |
g组(实施例7) | 70.3±5.19** | 2.93±0.34* |
h组(实施例8) | 60.3±2.72* | 3.04±0.28* |
i组(实施例9) | 71.8±4.37** | 2.94±0.28* |
j组(实施例10) | 70.5±4.84** | 2.99±0.31* |
k组(实施例11) | 73.7±3.89** | 3.04±0.16* |
l组(实施例12) | 64.6±4.33* | 2.87±0.47* |
m组(对比例1) | 46.9±3.57 | 2.17±0.32 |
n组(对比例2) | 49.5±6.34 | 2.21±0.24 |
o组(对比例3) | 48.1±4.55 | 2.14±0.33 |
p组(对比例4) | 45.8±5.96 | 2.19±0.23 |
q组(对比例5) | 50.2±6.43* | 2.28±0.17 |
r组(对比例6) | 49.3±4.53 | 2.30±0.29 |
s组(对比例7) | 51.1±5.69 | 2.29±0.27 |
t组(对比例8) | 52.7±5.41* | 2.31±0.06 |
从表2可以看出,a~l组(实施例组)相比于对照组在吞噬率和吞噬指数上均有明显提高,而m~t组(对比例组)相比于对照组差异较小,说明通过将淡水鱼肽、海参肽、人参肽及鱼骨胶原肽复合,尤其是通过转肽酶催化转肽反应后,得到的营养粉可显著提高加小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡RBC的能力,表明其具有非特异免疫促进功能,而单一组分的淡水鱼肽、海参肽、人参肽或鱼骨胶原肽的效果则不太明显。
尽管本发明的实施方案已公开如上,但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用,它完全可以被适用于各种适合本发明的领域,对于熟悉本领域的人员而言,可容易地实现另外的修改,因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下,本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的实施例。
Claims (8)
1.鱼肽、鱼骨肽、海参肽和人参肽复合营养品的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
步骤一、分离淡水鱼鱼肉与鱼骨,将鱼肉置于绞肉机内绞碎,再将海参置于绞肉机内绞碎,将绞碎后的鱼肉和海参肉以5~6:1的重量比混合均匀,得混合料,将混合料与去离子水以1:10的重量比加入匀浆机,制得混合料浆;
步骤二、向混合料浆中加入胰蛋白酶和木瓜蛋白酶进行酶解,得第一酶解液,酶解的pH值为8.0~9.0,酶解温度为37℃,酶解时长为2~3h,胰蛋白酶重量为绞碎后的鱼肉和海参肉总重量的1.5%,木瓜蛋白酶重量为绞碎后的鱼肉和海参肉总重量的3%,将第一酶解液以10000~12000r/min的转速离心10~15min,取上清液,向上清液中加入肠激酶和大麦内肽酶进行再次酶解,得第二酶解液,再次酶解的pH值为4.5~5.5,酶解温度为40℃,酶解时长为1~2h,肠激酶重量为绞碎后的鱼肉和海参肉总重量的1%,大麦内肽酶重量为绞碎后的鱼肉和海参肉总重量的0.5%,将第二酶解液升温至85~95℃,保持8~12min,进行高温灭酶,得第一多肽液;
步骤三、取与绞碎后的鱼肉相同重量的淡水鱼鱼骨烘干,按料液比为1:30~35g/ml加入体积分数为10%的乙酸乙酯溶液,将混有淡水鱼鱼骨的乙酸乙酯溶液置于温度为40~45℃,气压为2~3Mpa的环境中高压处理30~45min,接着将淡水鱼鱼骨取出用去离子水洗涤干净沥干,超微粉碎,制成粒径10~20μm的鱼骨粉,向鱼骨粉中按料液比为1:20~25g/ml加入浓度为1mol/L的乙酸溶液浸泡24h,再以气压为0.5~1KPa,温度为40~45℃条件减压旋蒸1~1.5h,得粗提液,向粗提液中加入复合蛋白酶和枯草芽孢杆菌酶解,酶解的pH值为6.0~7.0,酶解温度为37℃,酶解时长为2~3h,复合蛋白酶重量为鱼骨粉重量的1%,枯草芽孢杆菌的接种量为每千克鱼骨粉10~15个菌落数,将酶解后的粗提液以10000~12000r/min的转速离心10~15min,取上清液升温至85~95℃,保持8~12min,进行高温灭酶灭菌,得第二多肽液;
步骤四、称取重量为绞碎后的鱼肉和海参肉总重量10%的人参切成厚度不超过2mm的薄片,向切好的人参中加入人参重量5倍的黄酒浸泡4~6h,将浸泡有人参的黄酒置于气压为2~3Mpa,温度为70~80℃的环境中高压处理30~45min,将高压处理后的人参取出捣碎并加入人参重量15倍的去离子水,再加入人参重量1%的纤维素酶和3%的菠萝蛋白酶,调节pH值为5~7,在50℃下进行保温酶解1~1.5h,将酶解后的粗提液以10000~12000r/min的转速离心10~15min,取上清液升温至85~95℃,保持8~12min,进行高温灭酶,得第三多肽液;
步骤五、将第一多肽液、第二多肽液和第三多肽液合并,通过截留分子量为500~2000D超滤膜,再进行真空冷冻干燥即可得粉状的复合营养品,真空冷冻干燥的温度为-15~-30℃,气压为30~40Pa。
2.如权利要求1所述鱼肽、鱼骨肽、海参肽和人参肽复合营养品的制备方法,其特征在于,步骤五中将第一多肽液、第二多肽液和第三多肽液合并后还加入鱼肉、海参肉、鱼骨和人参总重量0.5~1.5%的转肽酶,调节pH值为6~7,在40℃下进行保温反应1~1.5h,再升温至85~95℃,保持8~12min,进行高温灭酶。
3.如权利要求1所述鱼肽、鱼骨肽、海参肽和人参肽复合营养品的制备方法,其特征在于,所述淡水鱼为乌鳢。
4.如权利要求1所述鱼肽、鱼骨肽、海参肽和人参肽复合营养品的制备方法,其特征在于,所述淡水鱼为鳜鱼。
5.如权利要求1所述鱼肽、鱼骨肽、海参肽和人参肽复合营养品的制备方法,其特征在于,所述淡水鱼为人工养殖的大鲵鱼。
6.如权利要求2所述鱼肽、鱼骨肽、海参肽和人参肽复合营养品的制备方法,其特征在于,加入转肽酶后的反应过程中进行超声搅拌,超声频率为30~32KHz。
7.一种鱼肽、鱼骨肽、海参肽和人参肽复合营养品,其特征在于,所述鱼肽、鱼骨肽、海参肽和人参肽复合营养品由权利要求1~6中任意一项所述的制备方法得到。
8.一种使用如权利要求7所述鱼肽、鱼骨肽、海参肽和人参肽复合营养品配制的营养液。
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