CN106720918A

CN106720918A - 一种富硒蛋白肽的制备工艺

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Publication number: CN106720918A
Application number: CN201510806803.0A
Authority: CN
Inventors: 邓小玲; 邓焱飞; 其他发明人请求不公开姓名
Original assignee: Dou Hao Bio Tech Ltd Chongqing
Current assignee: Dou Hao Bio Tech Ltd Chongqing
Priority date: 2015-11-22
Filing date: 2015-11-22
Publication date: 2017-05-31

Abstract

本发明涉及一种富硒蛋白肽的制备工艺，步骤如下：（1）蛋白肽酶解液的制备，采用新鲜猪血为原料，经溶血、酶解、脱色、超滤而得；（2）将壳聚糖、硒化合物和柠檬酸按一定比例混合，水相中制备纳米硒溶液；（3）将纳米硒溶液加入温度为55~65℃的蛋白肽酶解液中，得到混合液，将混合液加热至45~60℃反应1~2h，得到成液；（4）将所述成液浓缩、干燥得到成品。本发明充分利用蛋白资源，同时还避免了对环境的污染，同时以壳聚糖作为介质，吸附纳米硒与多肽，形成一个多功能的富含纳米硒和短肽链以及平衡氨基酸的活性肽蛋白粉，营养价值高、易吸收，亦能预防多种疾病。

Description

一种富硒蛋白肽的制备工艺

技术领域

本发明涉及膳食营养领域，具体涉及一种富硒蛋白肽的制备工艺。

背景技术

猪血蛋白肽是以猪血为原料，经溶血、酶解、脱色、超滤及干燥而得。猪血蛋白肽是一种高品质蛋白质原料，含有生长因子和小分子肽等多种功能性蛋白质，具有适口性好、蛋白质含量高、氨基酸平衡、吸收利用率高、附加值高等特点，这种蛋白肽对改善缺铁性贫血、调节免疫作用显著，可广泛应用于食品、保健食品和医药领域。目前猪血蛋白肽的应用鲜见报道。

发明内容

本发明的目的是公开一种可将猪血的蛋白利用发挥到最佳的酶解富硒蛋白肽的制备工艺。为了达到上述目的，本发明采用如下的技术方案：一种富硒蛋白肽的制备工艺，步骤如下：（1）蛋白肽酶解液的制备，以猪血为原料，经溶血、酶解、脱色、超滤而得；（2）将壳聚糖、硒化合物和柠檬酸按一定比例混合，水相中制备纳米硒溶液；（3）将所述纳米硒溶液加入温度为55~65℃的所述酶解液中，得到混合液，将混合液加热至 45~60℃反应 1~2h，得到成液；（4）将所述成液浓缩、干燥得到成品。

通过本发明的制备工艺：

1. 硒是人体生命活动中必需的微量元素之一，是人体内的抗氧化剂，能提高人体免疫力，具有多种生物功能。与无机硒相比，有机硒的利用价值好、易于吸收、毒性小等优势，逐渐代替无机硒，纳米硒则在许多方面更优于有机硒，低毒高效：其体外清除自由基效率为有机硒的 2.5 倍，为无机硒的 5 倍；而且纳米硒在是它在人体内的营养计量和毒性计量之间的范围较无机硒和有机硒要宽很多。壳聚糖是一种直链型高分子聚合物 , 具有良好的生物兼容性 , 在药用载体、医药等方面有广泛的应用，在人体内吸收率近 100％，具有提高免疫，抑制癌肿细胞生长，促进肝脾抗体形成，促进钙及矿物质的吸收，增殖双岐杆菌、乳酸菌等人体有益菌群，能预防多种疾病。将具有生物学意义的纳米硒与壳聚糖结合起来，纳米态的硒被壳聚糖吸附包裹成稳定的粒子，在与高生物活性的氨基酸螯合，产物兼有纳米硒和壳聚糖免疫调节，养颜抗衰，预防癌症及心血管疾病等功效，结合生物体极易消化利用的蛋白质，用于人们营养保健或者疾病治疗或辅助治疗，具有广泛的应用前景。

2. 猪血蛋白肽是一种高品质蛋白质原料，含有生长因子和小分子肽等多种功能性蛋白质，具有适口性好、蛋白质含量高、氨基酸平衡、吸收利用率高、附加值高等特点，这种蛋白肽对改善缺铁性贫血、调节免疫作用显著；利用酶解获得的该活性肽与由壳聚糖、硒化合物混合，由于壳聚糖大分子中有活泼的羟基和氨基，活性肽可以很好的反应结合在壳聚糖上，从而制得纳米硒并螯合成富硒蛋白肽，螯合的温度过高或过低，影响活性肽的活性，而且溶液的粘度减弱，壳聚糖对纳米硒以及活性肽的包裹吸附作用减弱，通过本发明的具体条件控制得到高活性、易吸收，富含纳米硒和短肽链以及平衡氨基酸的活性肽蛋白粉，易于消化吸收，提高机体免疫力，预防多种疾病，改善健康状况。

3. 柠檬酸可以促成纳米硒的形成，同时还为反应体系提供一个酸性环境；壳聚糖分子上的氨基性质活泼，具有很好的吸附能力，而且壳聚糖在酸性环境中所构成的微环境具有良好的悬浮、乳化、稳定作用，可以很好的稳定纳米硒的作用，壳聚糖还是一个很好的缓释载体，可以逐步将硒释放出来，起到持久补硒作用。

作为优选，所述壳聚糖、硒化合物和柠檬酸的质量比为80~100:1:10~15。

作为优选，步骤（2）中纳米硒溶液中所述壳聚糖质量分数为2×10^-4~5×10^-4，所述硒化合物的浓度为 2~3mmol/L，所述柠檬酸或柠檬酸的浓度为 5~7 g/L。

作为优选，所述壳聚糖为羧甲基壳聚糖、水溶性壳聚糖和壳寡糖中的一种或多种混合物。

作为优选，步骤（2）中将得到的所述纳米硒溶液进行超声波处理 30~60min。

超声波处理有利于粒子分散，使其粒度减小，降低聚合度，易于下一步的吸附。

作为优选，所述超声波功率为 100~150w、频率为 15~20kHz，连续处理 5~10min 后间歇 5min。

超声波可以一定程度上降低壳聚糖的分子量，而低分子量壳聚糖同超高分子量壳聚糖相比具有很强的杀菌和优越的生物活性，但是超声波功率过大、频率过快则会导致壳聚糖降解，间歇性的使用超声波处理，效果更显著。

作为优选，所述硒化合物为亚硒酸钠。

作为优选，步骤（4）中所述干燥方式为喷雾干燥，所述喷雾干燥进风口温度为200~230℃，出风口温度为 80~100℃。

通过实施上述的技术方案，本发明具有如下的有益效果：本发明利用猪血为原料，充分利用蛋白资源，同时还避免了对环境的污染，工艺中以酶解的方式得到多肽，其酶解彻底，得到的生物活性多肽含量高，而且免疫蛋白含量高，利于提高机体的免疫力，同时以壳聚糖作为介质，吸附纳米硒与多肽，形成一个多功能的富含纳米硒和短肽链以及平衡氨基酸的活性肽蛋白粉，营养价值高、易吸收，亦能预防多种疾病。

具体实施方式

实施例 1 ：

一种富硒蛋白肽的制备工艺，步骤如下：（1）蛋白肽酶解液的制备：a）采集新鲜猪血，以5g／L的柠檬酸钠抗凝，在4℃、8000r／min离心10min，收集下层沉淀，以获得红血球；将红血球加入同等体积的生理盐水冲洗并离心两次后加入2倍体积的蒸馏水，超声波细胞破碎辅助溶血20min，然后在4℃、4000r／min离心10min，得到血红蛋白溶液，于4℃保存备用； b）取血红蛋白溶液，加入适量的胰蛋白酶酶解，搅拌，2mol/LNaoH溶液维持体系pH8.0，45~50℃，6~10h；将酶解反应产物迅速升温至85℃并保持此温度10~15 分钟，再迅速冷却至50℃以下，调节pH值至7.0左右，8000r／min离心15min，获得上清酶解液，4℃冷藏备用；c）活性炭用量为酶解液总重的5~30％，温度55℃，搅拌脱色20~30min ；再进行粗滤处理后得粗滤酶解液；将粗滤酶解液在0.1~0.2Mpa 的工作压力和0~45℃的工作温度下，采用截留分子质量为1kD超滤膜进行超滤处理，收集1kD以下蛋白肽酶解液。

（2）将羧甲基壳聚糖、亚硒酸钠和柠檬酸按质量比为 80:1:10 混合，在水相中制备纳米硒溶液，温度控制在 60℃，溶液中壳聚糖质量分数为 2×10^-4，硒化合物的浓度为 2mmol/L，柠檬酸的浓度为 5 g/L ；（3）将纳米硒溶液加入温度为 60℃的酶解液中，得到混合液，混合液在 60℃螯合 2h，得到成液；（4）将所述成液浓缩、喷雾干燥得到成品，其中喷雾干燥时进风口温度为 200℃、出风口温度为 80℃。

实施例 2 ：

一种富硒蛋白肽的制备工艺，步骤如下：（1）蛋白肽酶解液的制备同实施例1；（2）将羧甲基壳聚糖、亚硒酸钠和柠檬酸按质量比为 100:1:15 混合，在水相中制备纳米硒溶液，温度控制在 60℃，溶液中壳聚糖质量分数为 5×10^-4，硒化合物的浓度为 3mmol/L，柠檬酸的浓度为 7g/L ；（3）将纳米硒溶液加入温度为 55℃的酶解液中螯合 2h，得到成液；（4）将所述成液浓缩、喷雾干燥得到成品，其中喷雾干燥时进风口温度为220℃、出风口温度为 90℃。

实施例 3 ：

一种富硒蛋白肽的制备工艺，步骤如下：（1）蛋白肽酶解液的制备同实施例1；（2）将羧甲基壳聚糖、亚硒酸钠和维生素 C按质量比为 90:1:12 混合，在水相中制备纳米硒溶液，温度控制在 65℃保温 2 小时，再超声波 100W、15kHz 处理 30 分钟，处理 6 分钟间歇 7 分钟，溶液中壳聚糖质量分数为 5×10-4，硒化合物的浓度为 3mmol/L，柠檬酸的浓度为 6g/L ；（3）将纳米硒溶液加入温度为 60℃的酶解液中，螯合 1.5h，得到成液；（4）将所述成液浓缩、喷雾干燥得到成品，其中喷雾干燥时进风口温度为 230℃、出风口温度为 100℃。

实施例 4 ：

一种富硒蛋白肽的制备工艺，步骤如下：（1）蛋白肽酶解液的制备同实施例1；（2）将羧甲基壳聚糖、亚硒酸钠和柠檬酸按质量比为 90:1:12 混合，在水相中制备纳米硒溶液，温度控制在 65℃保温 2 小时，再超声波 150W、20kHz 处理 60 分钟，处理 10 分钟间歇 10 分钟，溶液中壳聚糖质量分数为 5×10^-4，硒化合物的浓度为 3mmol/L，柠檬酸的浓度为 6g/L ；（3）将纳米硒溶液加入温度为 60℃的酶解液中，混合，在 45℃螯合 1.5h，得到成液；（4）将所述成液浓缩、喷雾干燥得到成品，其中喷雾干燥时进风口温度为 230℃、出风口温度为 100℃。

实施例 5 ：

一种富硒蛋白肽的制备工艺，步骤如下：（1）蛋白肽酶解液的制备同实施例1；（2）将羧甲基壳聚糖、亚硒酸钠和柠檬酸按质量比为 90:1:12 混合，在水相中制备纳米硒溶液，温度控制在 65℃保温 2 小时，再超声波 120W、18kHz 处理 50 分钟，处理 5 分钟间歇 5 分钟，溶液中壳聚糖质量分数为 5×10^-4，硒化合物的浓度为 3mmol/L，柠檬酸的浓度为 7g/L ；（3）将纳米硒溶液加入温度为 60℃的酶解液中，混合，在 45℃螯合 1.5h，得到成液；（4）将所述成液浓缩、喷雾干燥得到成品，其中喷雾干燥时进风口温度为 220℃、出风口温度为 90℃。

对上述实施例的工艺将等量的猪血制备所得到的成品进行活性肽含量以及大小的检测以及功效检测。

活性寡肽含量：取等量的成品溶于等量的水中，得到检测液进行检测；其中活性肽含量检测所用仪器为日立L-8800 型氨基酸自动分析仪，活性肽的大小检测仪器为高效液相色谱仪；功效检测是对抵抗力差的人进行临床试验。

结果如表1

表1 ：

	活性寡肽含量	活性肽分子量＜1000Da	活性肽分子量≥1000Da
				实施例1	86%	93%	7%
实施例2	84%	93%	7%
				实施例3	93%	97%	3%
实施例4	92%	96%	4%
				实施例5	92%	96%	4%

从上表中可以看出，实施例所得到的寡肽分子量集中在1000Da 以下，更加利于吸收消化；纳米硒与所得活性肽螯合的条件以及喷雾干燥的温度控制，影响着其螯合效果，直接影响产品中活性肽的含量和质量。

功效检测：

以体质弱、经常感冒、头晕、疲劳乏力者300 人为临床试验对象，对照组1、对照组2和试验组各100 人，

其年龄分布如表2 ：

表2 ：

	30岁以下	30-50岁	50岁以上
				试验组	26	35	39
对照组1	28	34	38
				对照组2	33	35	32

其中，试验组服用实施例1 所得到的成品，对照组 1 服用猪血蛋白肽，对照组 2 不服用任何蛋白粉，服用方法和剂量为：每餐饭后 1 小时温水送服，一天 3 次，每次5g，连续服用 6 个月。

结果：根据显效、有效和无效三个标准来评判，经观察 1 年：显效为头晕、疲劳乏力症状消失，无感冒；有效为偶有头晕、乏力症状，基本无感冒；无效为症状无改善，仍表现为头晕、疲劳乏力，经常感冒。

结果见表 3 ：

表 3 ：

	显效	有效	无效	总有效率
					试验组	89	9	2	98%
对照组1	2	19	79	21%
					对照组2	0	3	97	3%

结果显示：服用富硒活性肽产品（试验组）可以提高机体的免疫力，极大地改善其健康状况，服用单一的活性肽产品（对照组1）可以一定程度上改善机体的健康，但效果不明显。

本发明得到的产品也同样适用于动物食用，同样具有提高免疫力、改善健康状况的功效。

Claims

1.一种富硒蛋白肽的制备工艺，步骤如下：（1）蛋白肽酶解液的制备，以猪血为原料，经溶血、酶解、脱色、超滤而得；（2）将壳聚糖、硒化合物和柠檬酸按一定比例混合，水相中制备纳米硒溶液；（3）将所述纳米硒溶液加入温度为55~65℃的所述酶解液中，得到混合液，将混合液加热至 45~60℃反应 1~2h，得到成液；（4）将所述成液浓缩、干燥得到成品。

2.根据权利要求 1 所述一种富硒蛋白肽的制备工艺，其特征在于：所述蛋白肽酶解液的制备步骤如下：

a)采集新鲜猪血，以5g／L的柠檬酸钠抗凝，在4℃、8000r／min离心10min，收集下层沉淀，以获得红血球；将红血球加入同等体积的生理盐水冲洗并离心两次后加入2倍体积的蒸馏水，超声波细胞破碎辅助溶血20min，然后在4℃、4000r／min离心10min，得到血红蛋白溶液，于4℃保存备用；

b）取血红蛋白溶液，加入适量的胰蛋白酶酶解，搅拌，2mol/LNaoH溶液维持体系pH8.0，45~50℃，6~10h；将酶解反应产物迅速升温至85℃并保持此温度10~15 分钟，再迅速冷却至50℃以下，调节pH值至7.0左右，8000r／min离心15min，获得上清酶解液，4℃冷藏备用；

c）活性炭用量为酶解液总重的5~30％，温度55℃，搅拌脱色20~30min ；再进行粗滤处理后得粗滤酶解液；将粗滤酶解液在0.1~0.2Mpa 的工作压力和0~45℃的工作温度下，采用截留分子质量为1kD超滤膜进行超滤处理，收集1kD以下蛋白肽酶解液。

3.根据权利要求 1 所述一种富硒蛋白肽的制备工艺，其特征在于：所述壳聚糖、硒化合物和柠檬酸的质量比为 80~100:1:10~15。

4.根据权利要求 3 所述一种富硒蛋白肽的制备工艺，其特征在于：步骤（2）中纳米硒溶液中所述壳聚糖质量分数为 2×10^-4~5×10^-4，所述硒化合物的浓度为 2~3mmol/L，所述柠檬酸的浓度为 5~7 g/L。

5.根据权利要求 3 所述一种富硒蛋白肽的制备工艺，其特征在于：所述壳聚糖为羧甲基壳聚糖、水溶性壳聚糖和壳寡糖中的一种或多种混合物。

6.根据权利要求 1 所述一种富硒蛋白肽的制备工艺，其特征在于：步骤（2）中将得到的所述纳米硒溶液进行超声波处理 30~60min。

7.根据权利要求 6 所述一种富硒蛋白肽的制备工艺，其特征在于：所述超声波功率为 100~150w、频率为 15~20kHz，连续处理 5~10min 后间歇 5min。

8.根据权利要求 1 所述一种富硒蛋白肽的制备工艺，其特征在于：所述硒化合物为亚硒酸钠。

9.根据权利要求 1 所述一种富硒蛋白肽的制备工艺，其特征在于：步骤（4）中所述干燥方式为喷雾干燥，所述喷雾干燥进风口温度为 200~230℃，出风口温度为80~100℃。