CN105063144A - 一种利用猪血红蛋白制取抗菌肽的方法 - Google Patents

一种利用猪血红蛋白制取抗菌肽的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN105063144A
CN105063144A CN201510497498.1A CN201510497498A CN105063144A CN 105063144 A CN105063144 A CN 105063144A CN 201510497498 A CN201510497498 A CN 201510497498A CN 105063144 A CN105063144 A CN 105063144A
Authority
CN
China
Prior art keywords
antibacterial peptide
enzymolysis solution
pinprol
enzymolysis
abp
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201510497498.1A
Other languages
English (en)
Inventor
宁成勇
宁发子
宁成刚
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Dou Hao Bio Tech Ltd Chongqing
Original Assignee
Dou Hao Bio Tech Ltd Chongqing
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Dou Hao Bio Tech Ltd Chongqing filed Critical Dou Hao Bio Tech Ltd Chongqing
Priority to CN201510497498.1A priority Critical patent/CN105063144A/zh
Publication of CN105063144A publication Critical patent/CN105063144A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Landscapes

  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明公开了一种利用猪血红蛋白制取抗菌肽的方法,包括以下步骤:将猪全血分离得猪血球,再将猪血球溶血、酶解、脱色、超滤、真空浓缩、冻干,即得抗菌肽;所述胰蛋白酶的加酶量是3000U/g,在pH8、温度45℃~55℃条件下,酶解反应时间4~6h。本发明的利用猪血红蛋白制取抗菌肽的方法,成本低、效果好。

Description

一种利用猪血红蛋白制取抗菌肽的方法
技术领域
本发明属于生物技术领域,具体涉及一种利用猪血红蛋白制取抗菌肽的方法。
背景技术
抗菌肽(antibacterialpeptide,ABP)是生物体天然免疫防御系统的重要组成部分。抗菌肽具有抗菌谱广、热稳定性高、安全高效等诸多优点,食物源蛋白抗菌肽的制备成为生物领域的研究热点之一。
猪血是生猪屠宰加工过程中的主要副产物之一,营养价值很高,素有“液态肉”之称,我国猪血资源非常丰富,但利用率低,不超过10%,如被加工成血粉作为饲料添加剂,用于生化制药中血红素、蛋白胨的生产,这些产品附加值低,而大多数作为废弃物直接排出,造成了资源浪费和环境污染。
欧美、日本等发达国家将猪血开发成肽类试剂、肽类药物等多种功能食品及食品添加剂,普遍推广,利用率达50%以上。因此,以猪血为底物开发生物活性肽,可以提高生猪屠宰加工企业产品附加值,显示出巨大的市场前景。
研究表明,猪血中具有较强抗菌活性的多肽,因此开发研究一种从猪血中提取、纯化抗菌肽的成熟方法,可以一举多得。目前从猪血中提取抗菌肽的技术方法和产品尚未见报道。
发明内容
针对现有技术中存在的不足之处,本发明提供一种成本低、效果好的利用猪血红蛋白制取抗菌肽的方法。
本发明为达到以上目的,是通过这样的技术方案来实现的:提供一种利用猪血红蛋白制取抗菌肽的方法,包括以下步骤:
(1)采集新鲜猪血,以5g/L的柠檬酸钠抗凝,在4℃、8000r/min离心10min,收集下层沉淀,以获得红血球;在红血球中加入同等体积的蒸馏水,超声波细胞破碎辅助溶血20min,然后在4℃、4000r/min离心10min,得到血红蛋白溶液,于4℃保存备用。
(2)取适量血红蛋白溶液,加入胰蛋白酶酶解(加酶量2500-3500U/g),搅拌,1mol/LNaoH溶液或HCl溶液维持体系pH8.0,45-55℃,4-6h;将酶解反应产物迅速升温至85℃并保持此温度10~15分钟,再迅速冷却至0~30℃以终止酶解反应,调节pH值至7.0左右,8000r/min离心15min,获得上清酶解液,4℃冷藏备用。
(3)活性炭用量为酶解液总重的5-30%,温度55℃,搅拌脱色20-30min;再进行粗滤处理后得粗滤酶解液;将粗滤酶解液在0.1~0.2Mpa的工作压力和0~45℃的工作温度下,采用截留分子质量为10kD超滤膜进行超滤处理,以除去大分子蛋白类物质,得超滤酶解液;再将超滤酶解液依次进行真空浓缩、冷冻干燥,得抗菌肽,-20℃保存。
以上所述的一种利用猪血红蛋白制取抗菌肽的方法,其特征是:所述步骤(2)中胰蛋白酶是酶比活力10×104u/g;胰蛋白酶加酶量是3000U/g。
本发明的一种利用猪血红蛋白制取抗菌肽的方法,具有如下优点:
1.本发明所制备的抗菌肽是猪血红蛋白经生物酶水解而得,属于天然提取物,具有天然、无毒、无污染、无残留、无副作用、高效抗菌等特点,是一种新型的绿色抗微生物药物。
2.采用本发明方法提取的抗菌肽,具有广谱抗菌、抗病毒、不产生耐药性、有免疫调节作用等功能。
3.本发明所采用的原料来源广泛,价格低廉,经过本发明的技术转化可以有效的提高猪血副产物的附加值,对继续促进生猪产业的发展有重要的意义。
4.本发明的产品可以作为药品、保健食品、食品、食品添加剂、药物增效剂等,工艺科学合理,操作简单,具有较强的工业实施性。
具体实施方式
实施例1
(1)采集新鲜猪血100L,以5g/L的柠檬酸钠抗凝,在4℃、8000r/min离心10min,收集下层沉淀,以获得红血球约45L(固含30%);在红血球中加入45L蒸馏水,超声波细胞破碎辅助溶血20min,然后在4℃、4000r/min离心10min,得到血红蛋白溶液90L。
(2)取适量血红蛋白溶液,加入410g胰蛋白酶酶解(酶比活力为10×104u/g),搅拌,1mol/LNaoH溶液维持体系pH8.0,50℃,5h;将酶解反应产物迅速升温至85℃并保持此温度15分钟,再迅速冷却至0~30℃以终止酶解反应,调节pH值至7.0左右,8000r/min离心15min,获得上清酶解液90L。
(3)酶解液中加入活性炭用量15kg,温度55℃,搅拌脱色20-30min;再进行粗滤处理后得粗滤酶解液;将粗滤酶解液在0.1~0.2Mpa的工作压力和0~45℃的工作温度下,采用截留分子质量为10kD超滤膜进行超滤处理,收集超滤透过液78L;再将超滤透过液真空浓缩至30L,进行冷冻干燥,得抗菌肽1.68kg,-20℃保存。
检测结果,所得抗菌肽肽含量为92.01%,色泽白色细腻。
实施例2
(1)采集新鲜猪血50L,以5g/L的柠檬酸钠抗凝,在4℃、8000r/min离心10min,收集下层沉淀,以获得红血球约23L(固含30%);在红血球中加入23L蒸馏水,超声波细胞破碎辅助溶血20min,然后在4℃、4000r/min离心10min,得到血红蛋白溶液46L。
(2)取适量血红蛋白溶液,加入200g胰蛋白酶酶解(酶比活力为10×104u/g),搅拌,1mol/LNaoH溶液维持体系pH8.0,50℃,5h;将酶解反应产物迅速升温至85℃并保持此温度15分钟,再迅速冷却至0~30℃以终止酶解反应,调节pH值至7.0左右,8000r/min离心15min,获得上清酶解液46L。
(3)酶解液中加入活性炭用量10kg,温度55℃,搅拌脱色20-30min;再进行粗滤处理后得粗滤酶解液;将粗滤酶解液在0.1~0.2Mpa的工作压力和0~45℃的工作温度下,采用截留分子质量为10kD超滤膜进行超滤处理,收集超滤透过液78L;再将超滤透过液真空浓缩至30L,进行冷冻干燥,得抗菌肽0.96kg,-20℃保存。
检测结果,所得抗菌肽肽含量为94.41%,色泽白色细腻。

Claims (3)

1.一种利用猪血红蛋白制取抗菌肽的方法,其特征是包括以下步骤:
(1)采集新鲜猪血,以5g/L的柠檬酸钠抗凝,在4℃、8000r/min离心10min,收集下层沉淀,以获得红血球;在红血球中加入同等体积的蒸馏水,超声波细胞破碎辅助溶血20min,然后在4℃、4000r/min离心10min,得到血红蛋白溶液,于4℃保存备用;
(2)取适量血红蛋白溶液,加入一定量的胰蛋白酶酶解,搅拌,1mol/LNaoH溶液维持体系pH8.0,45-55℃,4-6h;将酶解反应产物迅速升温至85℃并保持此温度10~15分钟,再迅速冷却至0~30℃以终止酶解反应,调节pH值至7.0左右,8000r/min离心15min,获得上清酶解液,4℃冷藏备用;
(3)活性炭用量为酶解液总重的5-30%,温度55℃,搅拌脱色20-30min;再进行粗滤处理后得粗滤酶解液;将粗滤酶解液在0.1~0.2Mpa的工作压力和0~45℃的工作温度下,采用截留分子质量为10kD超滤膜进行超滤处理,以除去大分子蛋白类物质,得超滤酶解液;再将超滤酶解液依次进行真空浓缩、冷冻干燥,得抗菌肽,-20℃保存。
2.根据权利要求1所述的一种利用猪血红蛋白制取抗菌肽的方法,其特征是:所述步骤(2)中胰蛋白酶是酶比活力10×104u/g。
3.根据权利要求1所述的一种利用猪血红蛋白制取抗菌肽的方法,其特征是:所述步骤(2)中胰蛋白酶加酶量是3000U/g。
CN201510497498.1A 2015-08-14 2015-08-14 一种利用猪血红蛋白制取抗菌肽的方法 Pending CN105063144A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510497498.1A CN105063144A (zh) 2015-08-14 2015-08-14 一种利用猪血红蛋白制取抗菌肽的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510497498.1A CN105063144A (zh) 2015-08-14 2015-08-14 一种利用猪血红蛋白制取抗菌肽的方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN105063144A true CN105063144A (zh) 2015-11-18

Family

ID=54492651

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201510497498.1A Pending CN105063144A (zh) 2015-08-14 2015-08-14 一种利用猪血红蛋白制取抗菌肽的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105063144A (zh)

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105384522A (zh) * 2015-11-23 2016-03-09 重庆三零三科技有限公司 一种富硒蛋白肽叶面肥的制备方法
CN105410903A (zh) * 2015-11-23 2016-03-23 重庆三零三科技有限公司 一种活性蛋白肽阿胶保健口服液
CN105779548A (zh) * 2016-05-16 2016-07-20 中国科学院兰州化学物理研究所 一种驼血多肽的制备纯化方法
CN106720918A (zh) * 2015-11-22 2017-05-31 重庆都好生物科技有限公司 一种富硒蛋白肽的制备工艺
CN108796014A (zh) * 2018-05-18 2018-11-13 兰溪市沉默生物科技有限公司 一种鳖类血红蛋白肽
CN112322683A (zh) * 2020-11-23 2021-02-05 中国农业大学 一种10l规模化提取鸡血抗菌肽的方法

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106720918A (zh) * 2015-11-22 2017-05-31 重庆都好生物科技有限公司 一种富硒蛋白肽的制备工艺
CN105384522A (zh) * 2015-11-23 2016-03-09 重庆三零三科技有限公司 一种富硒蛋白肽叶面肥的制备方法
CN105410903A (zh) * 2015-11-23 2016-03-23 重庆三零三科技有限公司 一种活性蛋白肽阿胶保健口服液
CN105779548A (zh) * 2016-05-16 2016-07-20 中国科学院兰州化学物理研究所 一种驼血多肽的制备纯化方法
CN105779548B (zh) * 2016-05-16 2019-04-26 中国科学院兰州化学物理研究所 一种驼血多肽的制备纯化方法
CN108796014A (zh) * 2018-05-18 2018-11-13 兰溪市沉默生物科技有限公司 一种鳖类血红蛋白肽
CN112322683A (zh) * 2020-11-23 2021-02-05 中国农业大学 一种10l规模化提取鸡血抗菌肽的方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN105063144A (zh) 一种利用猪血红蛋白制取抗菌肽的方法
CN104710525B (zh) 一种金枪鱼鱼骨胶原蛋白源锌螯合胶原肽及其制备方法和用途
CN102808010A (zh) 一种酶解金枪鱼碎肉蛋白制备降压肽的方法
Castro‐Muñoz et al. Recovery of protein‐based compounds from meat by‐products by membrane‐assisted separations: a review
CN103330046A (zh) 一种脱腥鲢鱼蛋白粉的生产方法
CN102887947A (zh) 以鸭血为原料小分子血肽血红素铁和血浆蛋白的生产工艺
CN106174436A (zh) 一种复合酶解鱼骨素的制备方法
CN104961823A (zh) 一种适用于大规模制备食品级卵白蛋白的提纯方法
CN103627768A (zh) 鱼皮胶原蛋白生物活性小肽及其制备方法
CN102228125B (zh) 海藻活性肽的制备方法
CN1985852A (zh) 利用海参煮汁提取海参多糖等多种活性成分的方法
CN104694606A (zh) 一种用复合酶水解牡蛎蛋白制备小分子肽的方法
CN105918609A (zh) 一种以咸鸭蛋清为原料制备多肽蛋白粉的方法
CN103266156A (zh) 利用分步酶解技术制备鹿血蛋白肽的方法
CN104472848A (zh) 一种基于模拟消化制备海洋低值贝类低聚肽的方法
CN105112486A (zh) 一种利用鸭血制取抗菌肽的方法
CN106480145A (zh) 一种小分子牡蛎多肽的提取方法
CN101744092B (zh) 一种羊血红蛋白多肽粉及其制备方法
CN101948898B (zh) 一种纳米胶原寡肽的制备方法
CN107136296B (zh) 高凝胶性血浆蛋白粉及其制备方法
CN105002250A (zh) 一种利用鸭骨制备降血压肽的方法
CN108101980B (zh) 一种高纯度藻蓝色素的制备方法
CN113136409B (zh) 一种食品级低盐分海洋鱼低聚肽的制备方法
CN115449535A (zh) 一种骨源胶原三肽及其制备方法
CN105154506A (zh) 一种食品级低盐分海洋鱼低聚肽粉及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20151118

WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication