CN108893514B - 一种具有抗氧化活性的乳清蛋白肽-硒螯合物及其制备方法和应用 - Google Patents
一种具有抗氧化活性的乳清蛋白肽-硒螯合物及其制备方法和应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种具有抗氧化活性的乳清蛋白肽‑硒螯合物的制备方法，包括以下步骤：(1)采用蛋白酶对乳清蛋白进行有限酶解，酶解结束后灭酶，冷冻离心，上清液透析后冻干；(2)乳清蛋白肽复合物通过超滤膜分离出不同分子量的肽段，筛选出分子量为3‑5kDa的肽段；(3)采用微波辅助螯合法使无机物亚硒酸钠中的硒与乳清蛋白肽进行螯合，制备乳清蛋白肽‑硒螯合物；(4)进行冷冻干燥。本发明还公开了上述制备方法制备得到的乳清蛋白肽‑硒螯合物及应用。本发明制备工艺简单，可大量生产；制备的乳清蛋白肽‑硒螯合物抗氧化活性高，具有独特的螯合机制和转运机制，安全无毒、易被吸收、可同时补充氨基酸和硒，可进制备成休闲食品、营养保健品或药品。
Description
技术领域
本发明涉及乳源活性肽领域，特别涉及一种具有抗氧化活性的乳清蛋白肽-硒螯合物及其制备方法和应用。
背景技术
乳清蛋白是从牛乳中酪蛋白沉淀分离提取出来时保留在上清液中的珍贵蛋白质组分的统称。它含有人体必需的8种氨基酸，且配比合理，接近人体的需求比例，不仅容易消化，还具有生物利用度和蛋白质功效比高等优点，是蛋白质中的精品，也是公认的人体优质蛋白质补充剂之一。
随着乳源活性肽研究与产品开发的兴起，发现乳清蛋白中含有具有免疫调节、降血压、降血糖、降胆固醇、抗氧化、抗菌和抗病毒等生物活性的潜在肽段。目前，已有研究利用其中的α-乳白蛋白、β-乳球蛋白制取抗氧化肽。尽管已发现的乳清蛋白源生物活性肽段种类还比较少，并且许多生物活性肽的作用机理尚未完全阐明。但随着研究水平的逐步深入，乳清蛋白中潜在生物活性肽片段可以借助合适的酶解或其他方法释放出来。值得注意的是酶解后的多肽溶液结构复杂，含有不同分子量的肽段。
不同分子量的多肽具有不同的抗氧化活性。在大多数的体外测定实验中，低分子量的肽段较其它肽段组分具有显著的抗氧化能力。蔡路昀等报道草鱼鱼皮蛋白水解物经过分离，肽段组分(分子量＜3kDa)清除DPPH自由基效果显著，清除率为70.14％，可作为功能性天然抗氧化剂添加到保健食品中。古丽巴哈尔·卡吾力等研究发现，不同分子量分布的肽段中3-10kDa组分超氧阴离子清除能力、DPPH自由基清除能力、羟自由基清除能力显著高于其余分子量肽段。因此，分离并筛选出抗氧化性较高的肽段组分十分必要。
硒元素是维持生物体机能，包括生长、发育、繁衍等不可或缺的微量元素，必须从外界摄取。人体缺硒不仅会造成体内重要器官的功能失调，还会提高糖尿病、肿瘤、心血管疾病、白内障、克山病等疾病的发病率。目前，补硒剂主要有两类，一是无机硒，如亚硒酸钠、硒酸钠；二是有机硒，包括有机硒制剂、富硒地区出产的天然产物、以及人工生物转化的微生物产品等，如硒代蛋氨酸、富硒鸡蛋、富硒酵母、富硒螺旋藻等。然而大多数无机硒化合物毒性较强，最低致死量相对较小，其应用受到一定的限制。人工合成的有机硒化合物的生物安全性明显高于人工合成或天然的无机硒化物，甚至有些功能活性优于无机硒。因此，具有较高生物活性和较低毒副作用的有机硒化合物具有更广阔的发展前景。
发明内容
为了克服现有技术的上述缺点与不足，本发明的目的在于提供一种具有抗氧化活性的乳清蛋白肽-硒螯合物的制备方法，具有工艺操作简便、安全性高的优点，制备得到的乳清蛋白肽-硒螯合物抗氧化活性高。
本发明的另一目的在于提供上述制备方法制备得到的具有抗氧化活性的乳清蛋白肽-硒螯合物。
本发明的再一目的在于提供上述具有抗氧化活性的清蛋白肽-硒螯合物的应用。
本发明的目的通过以下技术方案实现：
一种具有抗氧化活性的乳清蛋白肽-硒螯合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)采用蛋白酶对乳清蛋白进行有限酶解，酶解结束后灭酶，冷冻离心，上清液透析后冻干得到乳清蛋白肽复合物；
(2)步骤(1)得到的乳清蛋白肽复合物通过超滤膜分离出不同分子量的肽段，进而筛选出分子量为3-5kDa的肽段作为抗氧化活性较高的肽段；
(3)采用微波辅助螯合法使无机物亚硒酸钠中的硒与乳清蛋白肽进行螯合，制备乳清蛋白肽-硒螯合物；
(4)将乳清蛋白肽-硒螯合物进行冷冻干燥。
步骤(1)所述酶解，具体为：
将乳清蛋白溶解在蒸馏水中使质量浓度达1.0-5.0％，用NaOH溶液调节pH至7.0-11.0，称取0.750-0.850g蛋白酶加入250mL乳清蛋白溶液中，混匀后封口，置于40-60℃的恒温水浴震荡器中，搅拌条件下酶解3-5h。
所述灭酶，具体为：
置沸水浴中灭酶10-15min。
所述冻干，步骤(1)所述蛋白酶为碱性蛋白酶、中性蛋白酶中的至少一种。
步骤(2)所述步骤(1)得到的乳清蛋白肽复合物通过超滤膜分离出不同分子量的肽段，进而筛选出分子量为3-5kDa的肽段作为抗氧化活性较高的肽段，具体为：将步骤(1)的得到的乳清蛋白肽复合物加入到蒸馏水中并充分混和，得到多肽溶液；将多肽溶液通过0.22μm过滤膜过滤；将获得的混合物放入超滤装置，过滤过程中用高纯氮加压，压力为0.03-0.05MPa，使用超滤膜截留，得到分子量3-5kDa的乳清蛋白肽，作为抗氧化活性较高的肽段；所述超滤膜的膜材料为亲水性聚醚砜膜，带负电。
步骤(3)所述的采用微波辅助螯合法使无机物亚硒酸钠中的硒与乳清蛋白肽进行螯合，制备乳清蛋白肽-硒螯合物，具体为：
将步骤(2)得到的乳清蛋白肽复合物与0.5mol/mL的亚硒酸钠溶液按体积比1：2-4：5混合，调节pH值至7-8，在微波反应器中持续反应3-4min，接着放入90-95℃的水浴锅中加热20-30min，反应后冷却，将所得螯合溶液浓缩至原体积1/3-1/5，加入5-8倍体积95％乙醇，静置8-10h，待絮状物完全析出，离心，去除上清液，即得乳清蛋白肽-硒螯合物。
步骤(3)所述微波辅助螯合法中的微波功率为400-700W。
步骤(4)所述将乳清蛋白肽-硒螯合物进行冷冻干燥，具体为：
将乳清蛋白肽-硒螯合物放置在-80℃的冰箱中预冷2-4h后，在真空冷冻干燥机中冻干24-48h，制成粉末。
所述的乳清蛋白肽-硒螯合物的制备方法制备得到的乳清蛋白肽-硒螯合物。
所述的乳清蛋白肽-硒螯合物用于制备营养保健品或药品。
与现有技术相比，本发明具有以下优点和有益效果：
(1)本发明的制备方法，通过控制乳清蛋白酶解时间和复合酶比例，并进行超滤膜分离筛选得到具有高硒螯合活性和抗氧化活性的生物活性肽，制备得到的乳清蛋白肽-硒螯合物中硒含量为2436-4138μg/g。
(2)本发明制备得到的乳清蛋白肽-硒螯合物具有独特的螯合机制和吸收机制。通过紫外扫描可初步判断，乳清蛋白肽-硒螯合物是一种不同于乳清蛋白肽和亚硒酸钠的新物质；进一步地，通过红外光谱发现，乳清蛋白肽与硒离子发生螯合的位置可能是-NH-C＝O上的-NH，-COOH上的-OH和末端-NH2。有机微量元素是利用配位体的转运系统吸收，而不是微量元素的转运系统。通过肽的转运系统，螯合物完整透过肠黏膜层进人血液，大大提高了硒元素的利用率。同时，有机微量元素受到配位体的保护，不易受到胃肠道内不利于硒吸收的物理化学因素影响。
(3)本发明采用微波辅助合成法螯合无机物亚硒酸钠中的硒离子和一定分子量的乳清蛋白肽，制备有机的具有抗氧化活性的生物活性肽-硒螯合物。微波作为一种电磁波，能高速促使分子极化旋转，增加反应物分子的碰撞频率。微波加热的非传导性加热效应，可以加速化学反应的进行。
(4)本发明具有工艺操作简便、安全性高的优点，所涉及的设备较少且容易操作，工艺不繁琐和反应条件较固相合成温和，可实现大规模生产。
附图说明
图1为本发明的实施例1的乳清蛋白肽-硒螯合物的制备流程。
图2为本发明的实施例1中超滤分离得到的不同分子量乳清蛋白肽段的还原能力测试结果。
图3为本发明的实施例1中超滤分离得到的不同分子量乳清蛋白肽段的DPPH自由基清除能力测试结果。
图4为本发明的实施例1中超滤分离得到的不同分子量乳清蛋白肽段的超氧阴离子清除能力测试结果。
图5为本发明的实施例1超滤分离得到的不同分子量乳清蛋白肽段的羟自由基清除能力测试结果。
图6为硒标准品的标准曲线。
图7为本发明的实施例1中不同质量浓度的乳清蛋白肽、亚硒酸钠、乳清蛋白肽-硒螯合物的总抗氧化能力。
图8为本发明的实施例1中乳清蛋白肽的紫外扫描图。
图9为本发明的实施例1中亚硒酸钠的紫外扫描图。
图10为本发明的实施例1中乳清蛋白肽-硒螯合物的紫外扫描图。
图11为本发明的实施例1中乳清蛋白肽和乳清蛋白肽-硒螯合物的红外光谱图。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明作进一步地详细说明，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1
如图1所示，本实施例的乳清蛋白肽-硒螯合物的制备方法包括以下步骤：
步骤(1)，天平准确称取12.5g乳清蛋白粉于500mL蓝盖瓶中，加入250mL蒸馏水，充分溶解，配制成质量体积浓度为5.0％的乳清蛋白溶液。用1mol/L的NaOH溶液调节乳清蛋白溶液pH至10.5，称取0.750g蛋白酶加入溶液中，迅速混匀，封口。将此溶液至于60℃的恒温水浴震荡器中，180r/min条件下酶解5h。酶解结束后置沸水浴中灭酶10min。4℃、4000r/min冷冻离心10min，上清液透析后冻干，于-20℃的干燥装置中贮存，待用。
步骤(1)中所述酶采用碱性蛋白酶。
步骤(2)，将250mg混合多肽组分加入到6mL蒸馏水中并充分混和。将多肽溶液通过0.22μm过滤膜过滤。将获得的混合物放入超滤装置，控制操作参数。过滤过程中用高纯氮加压，压力为0.03-0.05MPa，用磁力搅拌器连续低速搅拌。使用3、5、10kDa的一次性超滤膜截留，得到四个截留组分：＜3、3-5、5-10和＞10kDa。将所得多肽组分保存在-4℃的干燥装置中备用。
经抗氧化试剂盒测试(结果见表1和图2-5)，分子量3-5kDa的乳清蛋白肽的还原能力、DPPH自由基清除能力、超氧阴离子清除能力、羟自由基清除能力均高于其他分子量的乳清蛋白肽。
表1不同分子量的乳清蛋白肽段抗氧化活性测定结果
步骤(2)中所述超滤膜的膜材料为亲水性聚醚砜膜，带负电。
步骤(3)，取步骤(2)得到的的乳清蛋白肽(3-5kDa)溶液20mL，按比例加入0.5mol/mL的亚硒酸钠溶液，二者体积比为(亚硒酸钠溶液：多肽复合物溶液＝)1：2，调节pH值至8。混合液在微波反应器中持续3min，微波功率为400W，接着放入90℃的水浴锅中加热30min，反应后冷却，将所得螯合溶液浓缩至原体积1/5，加入5倍体积95％乙醇，低温静置8-10h。待絮状物完全析出，离心(8000r/min,5min)，去除上清液，即得乳清蛋白肽-硒螯合物。
步骤(4)，螯合反应结束后，将乳清蛋白肽-硒螯合物放置在-80℃的冰箱中预冷2h后，在真空冷冻干燥机中冻干24h，制成粉末。
采用比色法测定硒含量。具体实验步骤，如下：
(1)标准曲线的测定
制备硒标准使用液(50.0μg/L)，分别准确吸取0、0.200、1.00、2.00和4.00mL，相当于含有硒的质量为0、0.010、0.050、0.100及0.200μg，加(1+9)盐酸溶液至5mL后，加入20mL的EDTA混合液，用氨水(1+1)溶液及盐酸(1+9)溶液调至淡红橙色(pH 1.5～2.0)。以下步骤在暗室操作：加DAN试剂(1g/L)3mL，混匀后，置沸水浴中加热5min，取出冷却后，加环己烷6mL，振摇4min，将全部溶液移入分液漏斗，待分层后弃去水层，小心将环己烷层由分液漏斗上口倾入带盖试管中，勿使环己烷中混入水滴。环己烷中反应产物为4,5-苯并苤硒脑，置于10mm比色皿中，在荧光分光光度计上进行测定。(参考条件为：激发光波长376nm、发射光波长520nm)。以硒的质量浓度(μg/mL)为横坐标，荧光强度为纵坐标，制作标准曲线(见图6)。
表2硒标准品系列浓度的荧光值
方程式，如式1所示。
y＝6495.6x+342.18(R2＝0.9389)…………………………………(1)
(2)样品处理
称取试样0.1g左右，放入25mL烧瓶中，加入5mL消化液低温消化，直至样液呈无色透明停止。冷却后，消化液转入100mL的烧杯，用蒸馏水洗涤烧瓶中残留的消化样液，合并到烧杯中，上述消化液，用40％NaOH溶液调节pH7.0左右，最后将溶液定容到50mL，待测。
(3)样品中硒含量的测定
准确吸取消化处理好的样品5mL，置于分液漏斗中，按照标准曲线进行操作。将样品荧光值带入标准曲线公式，得出所取试样中硒的标准质量浓度。
按式(2)计算：
硒含量/(μg/g)＝pV/mN………………………………………………(2)
式中：
p为从标准曲线中查得的相当于硒的标准质量浓度/(μg/mL)；
V为萃取所得的样品体积/mL；
m为样品的质量/g；
N为用于测定的样品体积占总定容后样品的体积分数。
测定制备的乳清蛋白肽-硒螯合物中硒含量为2436-4138μg/g。
采用试剂盒测定抗氧化活性，具体步骤如下：
(1)总抗氧化能力(T-AOC)能力
严格按照总抗氧化能力(T-AOC)测试盒说明书的操作步骤进行。
计算公式如下：
表3不同质量浓度的乳清蛋白肽、亚硒酸钠、乳清蛋白肽-硒螯合物的总抗氧化能力
由表3和图7可知，在一定质量浓度范围内，随着质量浓度的增大，多肽、乳清蛋白肽-硒螯合物、亚硒酸钠的吸光值不断升高，总抗氧化能力不断增强，说明样品质量浓度越大，其抗氧化作用越强，两者存在着一定的剂量依赖关系。多肽、亚硒酸钠的抗氧化能力始终低于同质量浓度的乳清蛋白肽-硒螯合物。
对乳清蛋白肽、亚硒酸钠、乳清蛋白肽-硒螯合物进行紫外扫描，通过比较三者之间最大吸收波长是否发生位移或者有新的吸收峰产生，间接来说明了是否有新的物质生成。
表4乳清蛋白肽、亚硒酸钠、乳清蛋白肽-硒螯合物的紫外扫描结果
由表4与图8-10可知，乳清蛋白肽-硒螯合物(见图10)与乳清蛋白肽(见图8)、亚硒酸钠(见图9)的紫外扫描结果在吸光度位置上都有所不同，样品在波长275nm附近出现新的吸收峰。原因可能是螯合物的生成会使其配位体对光吸收性能发生改变，这反映肽与硒结合后相应原子的价电子跃迁不同，初步判断乳清蛋白肽-硒螯合物是一种不同于乳清蛋白肽和亚硒酸钠的新物质。
对乳清蛋白肽、亚硒酸钠、乳清蛋白肽-硒螯合物进行红外光谱检测，初步解释乳清蛋白肽与硒离子螯合机制。采用溴化钾压片法制样：取2mg样品和200mg干燥的溴化钾一同放入玛瑙研钵研磨混匀，且粉末的粒度在1μm以下，将其装入10mm红外专用模具内，在油压机上压制透明薄片，所制透明薄片放入检测室内扫描测定。扫描范围为4000～450cm-1。
表5乳清蛋白肽-硒螯合物和乳清蛋白肽的红外光谱数据表
由表5与图11可知，乳清蛋白肽的红外光谱图中，3415.66cm-1处出现-OH与-NH伸缩振动频率重叠的宽吸收峰，而在乳清蛋白肽-硒螯合物光谱图中波数增大至3454.31cm-1，且窄而尖、强度减弱。可能是Se4+与-OH或者-NH基团发生反应，导致电子云密度增大。
乳清蛋白肽红外光谱图中-NH-C＝O上-C＝O的吸收峰在1502.50cm-1处，与硒螯合后在1519.86cm-1处，变化不大。-NH-C＝O上-NH的吸收峰在1146.41cm-1处，与硒螯合后，吸收峰消失。说明与Se4+发生螯合的位置可能是-NH-C＝O上的-NH基团。
有关羧酸根的配位方式可根据ΔV(COO-)的值进行判断，如果ΔV(COO-)的值小于自由羧酸根离子的ΔV(COO-)值，则是以螯合或桥连的形式与金属离子结合；反之，则是以单齿方式结合的。由表5可以看出，乳清蛋白肽的ΔV(COO-)是242.88，乳清蛋白肽-硒螯合物的ΔV(COO-)是180，乳清蛋白肽-硒螯合物的ΔV小于乳清蛋白肽的ΔV，说明羧酸根是以螯合或桥连的形式与金属离子配位。
乳清蛋白肽红外光谱图中-COO-上-C＝O的吸收峰在1746.68cm-1处，与硒螯合后没什么变化。而-COOH对称伸缩振动有变化，说明与Se4+发生螯合的位置可能是-COOH上的-OH。
乳清蛋白肽末端-NH2的面内弯曲振动和与未螯合的乳清蛋白肽相比吸收峰蓝移，且强度减弱，而面外弯曲振动吸收峰变化不大，可能是Se4+与-NH2发生了反应导致。
综上所述，乳清蛋白肽与硒离子发生螯合的位置可能是-NH-C＝O上的-NH，-COOH上的-OH和末端-NH2。
实施例2
步骤(1)中，天平准确称取2.5g乳清蛋白粉于500mL蓝盖瓶中，加入250mL蒸馏水，充分溶解，配制成质量体积浓度为1.0％的乳清蛋白溶液。用1mol/L的NaOH溶液调节乳清蛋白溶液pH至10.5，称取0.750g中性蛋白酶加入溶液中，迅速混匀，封口。将此溶液至于60℃的恒温水浴震荡器中，180r/min条件下酶解5h。酶解结束后置沸水浴中灭酶10min。4℃、4000r/min冷冻离心10min，上清液透析后冻干，于-20℃的干燥装置中贮存，待用。
步骤(1)中所述酶采用中性蛋白酶。
步骤(2)中，将300mg混合多肽组分加入到6mL蒸馏水中并充分混和。将多肽溶液通过0.22μm过滤膜过滤。将获得的混合物放入超滤装置，控制操作参数。过滤过程中用高纯氮加压，压力为0.03-0.05MPa，用磁力搅拌器连续低速搅拌。使用10、5、3kDa的一次性超滤膜截留，得到四个截留组分：＜3、3-5、5-10和＞10kDa。将所得多肽组分保存在-4℃的干燥装置中备用。
步骤(2)中所述超滤膜的膜材料为亲水性聚醚砜膜，带负电。
步骤(3)中，取步骤(2)得到的的乳清蛋白肽(3-5kDa)溶液20mL，按比例加入0.5mol/mL的亚硒酸钠溶液，二者体积比为(亚硒酸钠溶液：多肽复合物溶液＝)4：5，调节pH值至8。混合液在微波反应器中持续3min，微波功率为400W，接着放入90℃的水浴锅中加热30min，反应后冷却，将所得螯合溶液浓缩至原体积1/5，加入5倍体积95％乙醇，低温静置8-10h。待絮状物完全析出，离心(8000r/min，5min)，去除上清液，即得乳清蛋白肽-硒螯合物。
步骤(4)中，螯合反应结束后，将乳清蛋白肽-硒螯合物放置在-80℃的冰箱中预冷2h后，在真空冷冻干燥机中冻干24h，制成粉末。
实施例3
步骤(1)中，天平准确称取12.5g乳清蛋白粉于500mL蓝盖瓶中，加入250mL蒸馏水，充分溶解，配制成质量体积浓度为5.0％的乳清蛋白溶液。用1mol/L的NaOH溶液调节乳清蛋白溶液pH至10.5，称取0.800g复合蛋白酶加入溶液中，迅速混匀，封口。将此溶液至于60℃的恒温水浴震荡器中，180r/min条件下酶解5h。酶解结束后置沸水浴中灭酶10min。4℃、4000r/min冷冻离心10min，上清液透析后冻干，于-20℃的干燥装置中贮存，待用。
步骤(1)中所述酶采用复合蛋白酶，碱性蛋白酶：中性蛋白酶(质量比)＝1：1。
步骤(2)中，将300mg混合多肽组分加入到6mL蒸馏水中并充分混和。将多肽溶液通过0.22μm过滤膜过滤。将获得的混合物放入超滤装置，控制操作参数。过滤过程中用高纯氮加压，压力为0.03-0.05MPa，用磁力搅拌器连续低速搅拌。使用3、5、10kDa的一次性超滤膜截留，得到四个截留组分：＜3、3-5、5-10和＞10kDa。将所得多肽组分保存在-4℃的干燥装置中备用。
步骤(2)中所述超滤膜的膜材料为亲水性聚醚砜膜，带负电。
步骤(3)中，取步骤(2)得到的的乳清蛋白肽(3-5kDa)溶液20mL，按比例加入0.5mol/mL的亚硒酸钠溶液，二者体积比为(亚硒酸钠溶液：多肽复合物溶液＝)4：5，调节pH值至8。混合液在微波反应器中持续3min，微波功率为400W，接着放入90℃的水浴锅中加热30min，反应后冷却，将所得螯合溶液浓缩至原体积1/5，加入5倍体积95％乙醇，低温静置8h。待絮状物完全析出，离心(8000r/min,5min)，去除上清液，即得乳清蛋白肽-硒螯合物。步骤(4)中，螯合反应结束后，将乳清蛋白肽-硒螯合物放置在-80℃的冰箱中预冷2h后，在真空冷冻干燥机中冻干24h，制成粉末。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受所述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (9)
1.一种具有抗氧化活性的乳清蛋白肽-硒螯合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)采用蛋白酶对乳清蛋白进行酶解，酶解结束后灭酶，冷冻离心，上清液透析后冻干得到乳清蛋白肽复合物；所述蛋白酶为碱性蛋白酶；
(2)步骤(1)得到的乳清蛋白肽复合物通过超滤膜分离出不同分子量的肽段，进而筛选出分子量为3-5kDa的肽段作为抗氧化活性较高的肽段；
(3)采用微波辅助螯合法使无机物亚硒酸钠中的硒与乳清蛋白肽进行螯合，制备乳清蛋白肽-硒螯合物；
(4)将乳清蛋白肽-硒螯合物进行冷冻干燥。
2.根据权利要求1所述的具有抗氧化活性的乳清蛋白肽-硒螯合物的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述酶解，具体为：
将乳清蛋白溶解在蒸馏水中使质量浓度达1.0-5.0％，用NaOH溶液调节pH至7.0-11.0，称取0.750-0.850g蛋白酶加入250mL乳清蛋白溶液中，混匀后封口，置于40-60℃的恒温水浴震荡器中，搅拌条件下酶解3-5h。
3.根据权利要求1所述的具有抗氧化活性的乳清蛋白肽-硒螯合物的制备方法，其特征在于，所述灭酶，具体为：
置沸水浴中灭酶10-15min。
4.根据权利要求1所述的具有抗氧化活性的乳清蛋白肽-硒螯合物的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述步骤(1)得到的乳清蛋白肽复合物通过超滤膜分离出不同分子量的肽段，进而筛选出分子量为3-5kDa的肽段作为抗氧化活性较高的肽段，具体为：将步骤(1)的得到的乳清蛋白肽复合物加入到蒸馏水中并充分混和，得到多肽溶液；将多肽溶液通过0.22μm过滤膜过滤；将获得的混合物放入超滤装置，过滤过程中用高纯氮加压，压力为0.03-0.05MPa，使用超滤膜截留，得到分子量3-5kDa的乳清蛋白肽，作为抗氧化活性较高的肽段；所述超滤膜的膜材料为亲水性聚醚砜膜，带负电。
5.根据权利要求1所述的具有抗氧化活性的乳清蛋白肽-硒螯合物的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述的采用微波辅助螯合法使无机物亚硒酸钠中的硒与乳清蛋白肽进行螯合，制备乳清蛋白肽-硒螯合物，具体为：
将步骤(2)得到的乳清蛋白肽复合物与0.5mol/mL的亚硒酸钠溶液按体积比1：2-4：5混合，调节pH值至7-8，在微波反应器中持续反应3-4min，接着放入90-95℃的水浴锅中加热20-30min，反应后冷却，将所得螯合溶液浓缩至原体积1/3-1/5，加入5-8倍体积95％乙醇，静置8-10h，待絮状物完全析出，离心，去除上清液，即得乳清蛋白肽-硒螯合物。
6.根据权利要求1或5所述的具有抗氧化活性的乳清蛋白肽-硒螯合物的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述微波辅助螯合法中的微波功率为400-700W。
7.根据权利要求1所述的具有抗氧化活性的乳清蛋白肽-硒螯合物的制备方法，其特征在于，步骤(4)所述将乳清蛋白肽-硒螯合物进行冷冻干燥，具体为：
将乳清蛋白肽-硒螯合物放置在-80℃的冰箱中预冷2-4h后，在真空冷冻干燥机中冻干24-48h，制成粉末。
8.权利要求1～7任一项所述的具有抗氧化活性的乳清蛋白肽-硒螯合物的制备方法制备得到的乳清蛋白肽-硒螯合物。
9.权利要求8所述的具有抗氧化活性的乳清蛋白肽-硒螯合物用于制备营养保健品或药品。
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Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2000001500A (ja) * | 1998-06-11 | 2000-01-07 | Morinaga Milk Ind Co Ltd | ホエータンパクペプチド、このホエータンパクペプチド の製造法、並びにこのホエータンパクペプチドを含有す る栄養組成物 |
| KR20090095902A (ko) * | 2008-03-06 | 2009-09-10 | 건국대학교 산학협력단 | 항산화 활성을 가지는 유청 단백질 가수분해물, 그의제조방법 및 그의 식품에 사용하는 용도 |
| CN103230062A (zh) * | 2013-05-08 | 2013-08-07 | 盘锐伦 | 一种复合功能饮料及其制备方法和应用 |
| CN104738384A (zh) * | 2014-08-27 | 2015-07-01 | 何定 | 一种水解蛋白肽制品制作法 |
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| CN106306159A (zh) * | 2015-06-29 | 2017-01-11 | 毕辉琴 | 一种富维生素果酸茶羹 |
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Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2000001500A (ja) * | 1998-06-11 | 2000-01-07 | Morinaga Milk Ind Co Ltd | ホエータンパクペプチド、このホエータンパクペプチド の製造法、並びにこのホエータンパクペプチドを含有す る栄養組成物 |
| KR20090095902A (ko) * | 2008-03-06 | 2009-09-10 | 건국대학교 산학협력단 | 항산화 활성을 가지는 유청 단백질 가수분해물, 그의제조방법 및 그의 식품에 사용하는 용도 |
| CN103230062A (zh) * | 2013-05-08 | 2013-08-07 | 盘锐伦 | 一种复合功能饮料及其制备方法和应用 |
| CN104738384A (zh) * | 2014-08-27 | 2015-07-01 | 何定 | 一种水解蛋白肽制品制作法 |
| CN106306159A (zh) * | 2015-06-29 | 2017-01-11 | 毕辉琴 | 一种富维生素果酸茶羹 |
| CN106720918A (zh) * | 2015-11-22 | 2017-05-31 | 重庆都好生物科技有限公司 | 一种富硒蛋白肽的制备工艺 |
| CN105506044A (zh) * | 2015-12-28 | 2016-04-20 | 桐城市雨润生物科技有限公司 | 一种血球蛋白肽螯合钙微胶囊制剂的制备方法 |
Non-Patent Citations (7)
| Title |
|---|
| "Antioxidant Activity of Proteins and Peptides";Ryan J. Elias 等;《Critical Reviews in Food Science and Nutrition》;20080502;第48卷(第5期);第430-441页 * |
| "Selenium modification of β-lactoglobulin (β-Lg) and its biological activity ";GuoQiang Zheng 等;《food chem》;20160107;第204卷;第246-251页 * |
| "乳清蛋白抗氧化肽的制备及其活性研究";沈浥;《中国优秀硕士学位论文全文数据库 (工程科技Ⅰ辑)》;20111215(第S2期);B018-76 * |
| "乳清蛋白的干燥加热硒酸化及其功能特性的研究";张小梅;《中国优秀硕士学位论文全文数据库 (工程科技Ⅰ辑)》;20121215(第12期);B018-34 * |
| "乳清蛋白肽抗氧化活性的研究进展";刘晶 等;《中国乳品工业》;20110430;第39卷(第4期);第31-35页 * |
| "水解乳清蛋白对辐射损伤大鼠蛋白质营养状态及抗氧化能力的影响";孙海岚;《中国优秀硕士学位论文全文数据库 (医药卫生科技辑)》;20140115(第1期);E055-53 * |
| "硒-乳蛋白活性肽开发及应用前景";徐明芳 等;《中国乳业》;20100930(第9期);第60-62页 * |
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