CN108796017A - 牛骨肽及其酶解提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种牛骨肽及其酶解提取方法。该牛骨肽的酶解提取方法包含以下步骤：破碎→压榨除脂→酶解→浓缩干燥。本发明采用的酶解提取技术实现了对牛骨的深度提取，充分释放了牛骨中的胶原蛋白并转化为牛骨肽，极大的提升了提取效果。与现有技术相比，本发明的牛骨肽的酶解提取方法通过将微生物菌种引入，以牛骨浆液为原料，经过微生物繁殖产生的胶原蛋白酶对牛骨中的胶原蛋白进行酶解制备牛骨肽。本发明的牛骨肽的多肽含量高、分子量小，具备优异的抗氧化、淬灭自由基、螯合金属离子、促进钙吸收及降低血压、降低血脂及降低血糖的功能。
Description
技术领域
本发明属于营养制品领域，尤其涉及一种牛骨肽及其酶解提取方法。
背景技术
我国是一个畜牧业大国，随着我国畜禽养殖业的发展，畜禽屠宰所产的副产物则不容忽视。如国家统计局报道的2006年、2007年、2008年的肉类总量分别为:8051万吨，6865.7万吨，7279万吨。如果按副产物含量约30％计算，可获得的副产物分别约为：2415万吨，824万吨，2184万吨。在副产物中每年我国约有近1000万吨的畜禽骨骼产生。如典型的畜禽骨所占各自总体重的比例是：猪12％～20％，牛15％～20％，羊8％～17％。对于畜禽骨资源综合开发直接影响着畜禽养殖的经济效益；对骨进行加工利用，将会产生极大的经济效益和社会效益，具有极大地开发前景。同时能减少资源浪费，促进产业持续、快速、健康、稳定地发展。因此，如何发展更多具有科技含量高、附加值高的畜禽骨产品利用项目，已成为畜禽副产品中研究、开发的重点之一。
骨胶原多肽：由数个至数十个氨基酸，通过肽键连接而成的低分子聚合物称之为肽。其中仅含2～3个残基的肽一般被称作小肽。生物活性肽是指组成的氨基酸数目少于50，分子量小于6000Da，在构象上较松散，具有某些特殊生理功能和生物活性的那些肽类，即就是对生物机体的生命活动有裨益或具有生理作用的肽类。这些作用包括有激素作用、免疫调节作用、抗菌作用、抗肿瘤作用以及具有与矿物质结合的特性等。胶原多肽是由胶原或明胶经蛋白酶等降解处理后制得的低分子量3000Da-20000Da，与明胶相比具有较强的水溶性，易被人体吸收的一类多肽混合物。
因此，本发明提供一种牛骨肽酶解提取技术实现了对牛骨的深度提取，充分释放了牛骨中的胶原蛋白并转化为牛骨肽，极大的提升了提取效果。本发明的牛骨肽的多肽含量高、分子量小，具备优异的抗氧化、淬灭自由基、螯合金属离子、促进钙吸收及降低血压、降低血脂及降低血糖的功能。
发明内容
为实现上述目的，本发明提供了一种牛骨肽的酶解提取方法，包括下述步骤：破碎→压榨除脂→酶解→浓缩干燥。
作为其中一种优选方案，牛骨肽的酶解提取方法，包括下述步骤：
S1破碎：将新鲜牛骨洗净后破碎至1～8cm；
S2压榨除脂：将破碎后的牛骨与水按质量比1：(1～2)混合后煮沸5～15min，滤出牛骨，将牛骨破碎至2～4cm，压榨；接着用压榨后牛骨重量1～2倍的温度为70～90℃的水搅拌漂洗1～3次，自然晾干后粉碎至20～100目，得到骨粉；将骨粉与水按质量比1:5～1:12混合，在105～120℃、0.17～0.19MPa下保温1.5～3h，冷却至15～35℃，得到浆液；
S3酶解：向浆液中添加浆液重量0.5～2％的蛋白酶，在45～65℃下酶解3～6h，酶解结束后高温灭酶，得到酶解液；
S4浓缩干燥：将上述酶解液离心分离，脱色，减压浓缩至原体积的1/10～1/5，真空冷冻干燥后得到牛骨肽酶解提取物。
本发明还提供了另一种优选方案，牛骨肽的酶解提取方法，包括下述步骤：
S1破碎：将新鲜牛骨洗净后破碎至1～8cm；
S2压榨除脂：将破碎后的牛骨与水按质量比1：(1～2)混合后煮沸5～15min，滤出牛骨，将牛骨破碎至2～4cm，压榨；接着用压榨后牛骨重量1～2倍的温度为70～90℃的水搅拌漂洗1～3次，自然晾干后粉碎至20～100目，得到骨粉；将骨粉与水按质量比1:5～1:12混合，在105～120℃、0.17～0.19MPa下保温1.5～3h，冷却至15～35℃，得到浆液；
S3发酵酶解：向浆液中加入浆液重量0.02～0.05倍的蔗糖和浆液重量0.002～0.01倍的益菌剂，调节pH至7.2～7.4，得到培养液；然后接种发酵菌，接种完成后在20～35℃、100～200转/分的条件下摇床发酵培养20～50h，高温灭菌，得到酶解液；所述发酵菌的接种量为2～5wt％；
可选的，所述发酵菌为地衣芽孢杆菌和/或高加索酸奶乳杆菌；
进一优选的，所述发酵菌为地衣芽孢杆菌和高加索酸奶乳杆菌按质量比为(1～3):(1～3)混合而得；
可选的，所述益菌剂为鲤鱼皮提取物和/或桑叶提取物；
进一步优选的，所述益菌剂为鲤鱼皮提取物和桑叶提取物按质量比(1～3)：1混合而成；
S4浓缩干燥：将上述酶解液离心分离，脱色，减压浓缩至原体积的1/10～1/5，真空冷冻干燥后得到牛骨肽酶解提取物。
益菌剂，本发明的益菌剂是指能够促进细菌快速增殖的物质。试验发现本发明添加的鲤鱼皮提取物和桑叶提取物能够显著的促进本发明的地衣芽孢杆菌和高加索酸奶乳杆菌的快速生长、增殖。
优选的，所述压榨为10～20MPa下保压20～30min。
优选的，所述蛋白酶为木瓜蛋白酶和/或中性蛋白酶。
进一步优选的，所述蛋白酶为木瓜蛋白酶和中性蛋白酶按质量比(1～2)：(1～2)混合得到。
优选的，所述高温灭酶为在80～100℃保温10～20min。
优选的，所述离心分离的转速为5000～8000转/分，离心时间为10～20min。
优选的，所述脱色为加入待脱色液体0.4～2wt％的活性炭在50～80℃搅拌20～50min后在3000～5000转下离心5～10min。
加入活性炭可以更有效的去掉杂质，提高牛骨肽的澄明度。
优选的，所述减压浓缩的条件为绝对压强0.08MPa～0.09MPa、温度40～60℃。
优选的，所述高温灭菌为在125～140℃保温3～10s。
一种牛骨肽，采用上述酶解提取方法制备得到。
本发明的有益效果是：
(1)本发明采用的酶解提取技术实现了对牛骨的进行了深度提取，充分释放了牛骨中的胶原蛋白并转化为牛骨肽，极大的提升了提取效果。
(2)本发明的牛骨肽的多肽含量高、分子量小，具备优异的抗氧化、淬灭自由基、螯合金属离子、促进钙吸收及降低血压、降低血脂及降低血糖的功能。
具体实施方式
实施例中各原料来源：
新鲜牛骨：来自巴山牛。
木瓜蛋白酶：酶活6万U/g，河北百味生物科技有限公司。
中性蛋白酶：酶活20万U/g，山东玖胜生物科技有限公司。
地衣芽孢杆菌：Bacillus licheniformis，CGMCC菌种编号：1.265，购于中国普通微生物菌种保藏管理中心，活菌个数：6×108cfu/mL。
高加索酸奶乳杆菌：Lactobacillus kefiri，CGMCC菌种编号：1.3399，购于中国普通微生物菌种保藏管理中心，活菌个数：6×108cfu/mL。
实施例中所述鲤鱼皮提取物的制备方法为：将鲤鱼皮用鱼皮粉碎机粉碎至大小约为0.2cm×0.2cm的鲤鱼皮粒，取5g鲤鱼皮粒加入10mL水中，用1mol/L NaOH水溶液调节pH至8，在200转/分、100℃下保温10min，冷却至60℃，加入鲤鱼皮粒质量0.02倍的Prote AX复合蛋白酶，在200转/分、60℃下酶解100min，酶解完毕后在煮沸10min灭酶，然后在8000转/分的条件下离心，取上清液，真空冷冻干燥得到鲤鱼皮提取物。所述Prote AX复合蛋白酶活为24000U/g，购自日本天野酶制品株式会社。
实施例中所述桑叶提取物的制备方法为：将桑叶粉碎，过16目筛，得到桑叶粉末；将桑叶粉末与水以固液质量比1：20混合均匀；在超声功率150W、超声频率40kHz的条件下于60℃超声提取2小时，以转速为5000转/分进行离心20min，取上层清液在绝对压强为0.08MPa、温度为70℃下进行减压浓缩，浓缩至密度为相对密度为1.12(25℃)，得到桑叶提取物。桑叶为市售中药材。
活性炭：200目，深圳市兴万邦活性炭有限公司。
实施例1
一种牛骨肽，由酶解提取方法制备得到。
具体地，包括下述步骤：
S1破碎：将新鲜牛骨洗净后破碎至5～6cm；
S2压榨除脂：将破碎后的牛骨与水按质量比1：2混合后煮沸10min，滤出牛骨，将牛骨破碎至2～4cm，在15MPa下保压压榨30min，得到压榨后牛骨；接着用压榨后牛骨重量2倍的温度为90℃的水将压榨后牛骨搅拌漂洗1次，自然晾干后用骨头粉碎机(型号15B，江阴市杰顺机械有限公司)粉碎至50目，得到骨粉；将骨粉与水按质量比1:10混合，在110℃、0.18MPa下保温2h，冷却至25℃，得到浆液；
S3酶解：向浆液中添加浆液重量1％的蛋白酶，1mol/L NaOH水溶液或者1mol/LH3PO4水溶液调节pH至7，在50℃下酶解5h，酶解结束后在90℃下保温15min灭酶，得到酶解液；所述蛋白酶为木瓜蛋白酶和中性蛋白酶按质量比1:1混合而成；
S4浓缩干燥：将上述酶解液在6000转/分的转速下离心10min，取上清液，加入上清液0.8wt％的活性炭在60℃下以200转/分的条件搅拌30min，在4000转下离心分离10min，得到的液体在绝对压强0.08MPa、50℃下减压浓缩至原体积的1/8，接着真空冷冻干燥后得到牛骨肽酶解提取物；所述真空冷冻干燥的条件是控制物料厚度8mm，设定预冻温度为-20℃，当样品温度降到-20℃后保持1.5h，设定升华温度为12℃，解析温度为34℃，绝对压强25Pa。
实施例2
一种牛骨肽，由酶解提取方法制备得到。
具体地，包括下述步骤：
S1破碎：将新鲜牛骨洗净后破碎至5～6cm；
S2压榨除脂：将破碎后的牛骨与水按质量比1：2混合后煮沸10min，滤出牛骨，将牛骨破碎至2～4cm，在15MPa下保压压榨30min压榨；接着用压榨后牛骨重量2倍的温度为90℃的水将压榨后牛骨搅拌漂洗1次，自然晾干后用骨头粉碎机(型号15B，江阴市杰顺机械有限公司)粉碎至50目，得到骨粉；将骨粉与水按质量比1:10混合，在110℃、0.18MPa下保温2h，冷却至25℃，得到浆液；
S3发酵酶解：向浆液中加入浆液重量0.05倍的蔗糖和浆液重量0.008倍的益菌剂，用1mol/L NaOH水溶液或者1mol/L H3PO4水溶液调节pH至7.2，得到培养液；然后接种发酵菌，接种完成后在25℃、200转/分的条件下摇床发酵培养48h，发酵完毕后在130℃下保温8s高温灭菌，得到发酵酶解液；所述发酵菌的接种量为4wt％；所述发酵菌为地衣芽孢杆菌；所述益菌剂为桑叶提取物；
S4浓缩干燥：将上述发酵酶解液在6000转/分的转速下离心10min，取上清液，加入上清液0.8wt％的活性炭在60℃下以200转/分的条件搅拌30min，抽滤，得到的液体在绝对压强0.08MPa、50℃下减压浓缩至原体积的1/8，接着真空冷冻干燥后得到牛骨肽酶解提取物；所述真空冷冻干燥的条件是控制物料厚度8mm，设定预冻温度为-20℃，当样品温度降到-20℃后保持1.5h，设定升华温度为12℃，解析温度为34℃，绝对压强25Pa。
实施例3
一种牛骨肽，由酶解提取方法制备得到。
具体地，包括下述步骤：
S1破碎：将新鲜牛骨洗净后破碎至5～6cm；
S2压榨除脂：将破碎后的牛骨与水按质量比1：2混合后煮沸10min，滤出牛骨，将牛骨破碎至2～4cm，在15MPa下保压压榨30min压榨；接着用压榨后牛骨重量2倍的温度为90℃的水将压榨后牛骨搅拌漂洗1次，自然晾干后用骨头粉碎机(型号15B，江阴市杰顺机械有限公司)粉碎至50目，得到骨粉；将骨粉与水按质量比1:10混合，在110℃、0.18MPa下保温2h，冷却至25℃，得到浆液；
S3发酵酶解：向浆液中加入浆液重量0.05倍的蔗糖和浆液重量0.008倍的益菌剂，用1mol/L NaOH水溶液或者1mol/L H3PO4水溶液调节pH至7.2，得到培养液；然后接种发酵菌，接种完成后在25℃、200转/分的条件下摇床发酵培养48h，发酵完毕后在130℃下保温8s高温灭菌，得到发酵酶解液；所述发酵菌的接种量为4wt％；所述发酵菌为高加索酸奶乳杆菌；所述益菌剂为桑叶提取物；
S4浓缩干燥：将上述发酵酶解液在6000转/分的转速下离心10min，取上清液，加入上清液0.8wt％的活性炭在60℃下以200转/分的条件搅拌30min，抽滤，得到的液体在绝对压强0.08MPa、50℃下减压浓缩至原体积的1/8，接着真空冷冻干燥后得到牛骨肽酶解提取物；所述真空冷冻干燥的条件是控制物料厚度8mm，设定预冻温度为-20℃，当样品温度降到-20℃后保持1.5h，设定升华温度为12℃，解析温度为34℃，绝对压强25Pa。
实施例4
一种牛骨肽，由酶解提取方法制备得到。
具体地，包括下述步骤：
S1破碎：将新鲜牛骨洗净后破碎至5～6cm；
S2压榨除脂：将破碎后的牛骨与水按质量比1：2混合后煮沸10min，滤出牛骨，将牛骨破碎至2～4cm，在15MPa下保压压榨30min压榨；接着用压榨后牛骨重量2倍的温度为90℃的水将压榨后牛骨搅拌漂洗1次，自然晾干后用骨头粉碎机(型号15B，江阴市杰顺机械有限公司)粉碎至50目，得到骨粉；将骨粉与水按质量比1:10混合，在110℃、0.18MPa下保温2h，冷却至25℃，得到浆液；
S3发酵酶解：向浆液中加入浆液重量0.05倍的蔗糖和浆液重量0.008倍的益菌剂，1mol/L NaOH水溶液或者1mol/L H3PO4水溶液调节pH至7.2，得到培养液；然后接种发酵菌，接种完成后在25℃、200转/分的条件下摇床发酵培养48h，发酵完毕后在130℃下保温8s高温灭菌，得到发酵酶解液；所述发酵菌的接种量为4wt％；所述发酵菌为地衣芽孢杆菌和高加索酸奶乳杆菌按质量比为1:1混合而得；所述益菌剂为桑叶提取物；
S4浓缩干燥：将上述发酵酶解液在6000转/分的转速下离心10min，取上清液，加入上清液0.8wt％的活性炭在60℃下以200转/分的条件搅拌30min，抽滤，得到的液体在绝对压强0.08MPa、50℃下减压浓缩至原体积的1/8，接着真空冷冻干燥后得到牛骨肽酶解提取物；所述真空冷冻干燥的条件是控制物料厚度8mm，设定预冻温度为-20℃，当样品温度降到-20℃后保持1.5h，设定升华温度为12℃，解析温度为34℃，绝对压强25Pa。
实施例5
一种牛骨肽，由酶解提取方法制备得到。
具体地，包括下述步骤：
S1破碎：将新鲜牛骨洗净后破碎至5～6cm；
S2压榨除脂：将破碎后的牛骨与水按质量比1：2混合后煮沸10min，滤出牛骨，将牛骨破碎至2～4cm，在15MPa下保压压榨30min压榨；接着用压榨后牛骨重量2倍的温度为90℃的水将压榨后牛骨搅拌漂洗1次，自然晾干后用骨头粉碎机(型号15B，江阴市杰顺机械有限公司)粉碎至50目，得到骨粉；将骨粉与水按质量比1:10混合，在110℃、0.18MPa下保温2h，冷却至25℃，得到浆液；
S3发酵酶解：向浆液中加入浆液重量0.05倍的蔗糖和浆液重量0.008倍的益菌剂，1mol/L NaOH水溶液或者1mol/L H3PO4水溶液调节pH至7.2，得到培养液；然后接种发酵菌，接种完成后在25℃、200转/分的条件下摇床发酵培养48h，发酵完毕后在130℃下保温8s高温灭菌，得到发酵酶解液；所述发酵菌的接种量为4wt％；所述发酵菌为地衣芽孢杆菌和高加索酸奶乳杆菌按质量比为1:1混合而得；所述益菌剂为鲤鱼皮提取物；
S4浓缩干燥：将上述发酵酶解液在6000转/分的转速下离心10min，取上清液，加入上清液0.8wt％的活性炭在60℃下以200转/分的条件搅拌30min，抽滤，得到的液体在绝对压强0.08MPa、50℃下减压浓缩至原体积的1/8，接着真空冷冻干燥后得到牛骨肽酶解提取物；所述真空冷冻干燥的条件是控制物料厚度8mm，设定预冻温度为-20℃，当样品温度降到-20℃后保持1.5h，设定升华温度为12℃，解析温度为34℃，绝对压强25Pa。
实施例6
一种牛骨肽，由酶解提取方法制备得到。
具体地，包括下述步骤：
S1破碎：将新鲜牛骨洗净后破碎至5～6cm；
S2压榨除脂：将破碎后的牛骨与水按质量比1：2混合后煮沸10min，滤出牛骨，将牛骨破碎至2～4cm，在15MPa下保压压榨30min压榨；接着用压榨后牛骨重量2倍的温度为90℃的水将压榨后牛骨搅拌漂洗1次，自然晾干后用骨头粉碎机(型号15B，江阴市杰顺机械有限公司)粉碎至50目，得到骨粉；将骨粉与水按质量比1:10混合，在110℃、0.18MPa下保温2h，冷却至25℃，得到浆液；
S3发酵酶解：向浆液中加入浆液重量0.05倍的蔗糖和浆液重量0.008倍的益菌剂，1mol/L NaOH水溶液或者1mol/L H3PO4水溶液调节pH至7.2，得到培养液；然后接种发酵菌，接种完成后在25℃、200转/分的条件下摇床发酵培养48h，发酵完毕后在130℃下保温8s高温灭菌，得到发酵酶解液；所述发酵菌的接种量为4wt％；所述发酵菌为地衣芽孢杆菌和高加索酸奶乳杆菌按质量比为1:1混合而得；所述益菌剂为鲤鱼皮提取物和桑叶提取物按质量比2.5：1混合而成；
S4浓缩干燥：将上述发酵酶解液在6000转/分的转速下离心10min，取上清液，加入上清液0.8wt％的活性炭在60℃下以200转/分的条件搅拌30min，抽滤，得到的液体在绝对压强0.08MPa、50℃下减压浓缩至原体积的1/8，接着真空冷冻干燥后得到牛骨肽酶解提取物；所述真空冷冻干燥的条件是控制物料厚度8mm，设定预冻温度为-20℃，当样品温度降到-20℃后保持1.5h，设定升华温度为12℃，解析温度为34℃，绝对压强25Pa。
益菌剂，本发明的益菌剂是指能够促进细菌快速增殖的物质。试验发现本发明添加的鲤鱼皮提取物和桑叶提取物能够显著的促进本发明的地衣芽孢杆菌和高加索酸奶乳杆菌的快速生长、增殖。
加入活性炭可以更有效的去掉杂质，提高牛骨肽的澄明度。
测试例1
抗氧化性测试：
对实施例1～6的牛骨肽清除DPPH自由基的能力进行测试。以无水乙醇为溶剂配制浓度为0.5mg/mL的牛骨肽样品溶液；向1cm的石英比色皿中加入样品溶液2.0mL和2.0mL摩尔浓度为1.0×104mol/L的DPPH溶液，混合均匀后暗处放置30分钟；以体积分数为95％的乙醇水溶液作为参比溶液，测定517nm处的吸光值A；同样方法测定样品溶液2.0mL和2.0mL体积分数为95％的乙醇水溶液混合液在517nm处的吸光值Ao；再测定2.0mL摩尔浓度为1.0×104mol/L的DPPH溶液与2.0mL体积分数为95％的乙醇水溶液混合液在517nm处的吸光值A1，按下列公式计算抑制率：
清除率(％)＝[1-(A-Ao)/A1]×100。
表1 DPPH自由基清除率
| DPPH自由基清除率(％) | |
| 实施例1 | 38.7 |
| 实施例2 | 54.3 |
| 实施例3 | 52.8 |
| 实施例4 | 59.2 |
| 实施例5 | 61.7 |
| 实施例6 | 72.8 |
测试例2
降血脂性能测试：分别称取实施例1～6中的骨多肽1g加入到30mL纯净水中搅拌溶解，得到骨多肽溶液。将210只SD大鼠分为7组，每组30只，每组雌雄各半，大鼠的体重为150±3g，设置一组对照组和六组实验组，按照剂量为3g/Kg对空腹12h的实验组大鼠进行灌胃骨多肽溶液，连续灌胃30天后空腹采尾血，测定血清中胆固醇和甘油三酯含量，实验组除了灌胃外其他饲养条件正常，大鼠自由摄取水和食物。对照组正常饲养。与对照组相比较降低幅度，降低幅度＝[(对照组含量-实验组含量)]/对照组含量×100％。测试结果见表2。
表2：骨多肽降血脂性能测试
从测试结果可以看出，本发明的牛骨肽具备良好的清除DPPH自由基的效果，即具备良好的抗氧化性。不仅如此，本发明的牛骨肽具备良好的降血脂功效。在保健食品、化妆品等领域具备广阔的应用前景。
以上对本发明进行了详细介绍，本文中应用了具体个例对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想；同时，对于本领域的一般技术人员，依据本发明的思想，在具体实施方式及应用范围上均会有改变之处，综上所述，本说明书内容不应理解为对本发明的限制。
Claims (10)
1.一种牛骨肽的酶解提取方法，其特征在于，包括下述步骤：破碎→压榨除脂→酶解→浓缩干燥。
2.如权利要求1所述的牛骨肽的酶解提取方法，其特征在于，包括下述步骤：
S1破碎：将新鲜牛骨洗净后破碎至1～8cm；
S2压榨除脂：将破碎后的牛骨与水按质量比1：(1～2)混合后煮沸5～15min，滤出牛骨，将牛骨破碎至2～4cm，压榨；接着用压榨后牛骨重量1～2倍的温度为70～90℃的水搅拌漂洗1～3次，自然晾干后粉碎至20～100目，得到骨粉；将骨粉与水按质量比1:5～1:12混合，在105～120℃、0.17～0.19MPa下保温1.5～3h，冷却至15～35℃，得到浆液；
S3酶解：向浆液中添加浆液重量0.5～2％的蛋白酶，在45～65℃下酶解3～6h，酶解结束后高温灭酶，得到酶解液；
S4浓缩干燥：将上述酶解液离心分离，脱色，减压浓缩至原体积的1/10～1/5，真空冷冻干燥后得到牛骨肽酶解提取物。
3.如权利要求1所述的牛骨肽的酶解提取方法，其特征在于：包括下述步骤：
S1破碎：将新鲜牛骨洗净后破碎至1～8cm；
S2压榨除脂：将破碎后的牛骨与水按质量比1：(1～2)混合后煮沸5～15min，滤出牛骨，将牛骨破碎至2～4cm，压榨；接着用压榨后牛骨重量1～2倍的温度为70～90℃的水搅拌漂洗1～3次，自然晾干后粉碎至20～100目，得到骨粉；将骨粉与水按质量比1:5～1:12混合，在105～120℃、0.17～0.19MPa下保温1.5～3h，冷却至15～35℃，得到浆液；
S3发酵酶解：向浆液中加入浆液重量0.02～0.05倍的蔗糖和浆液重量0.002～0.01倍的益菌剂，调节pH至7.2～7.4，得到培养液；然后接种发酵菌，接种完成后在20～35℃、100～200转/分的条件下摇床发酵培养20～50h，高温灭菌，得到酶解液；所述发酵菌的接种量为2～5wt％；所述发酵菌为地衣芽孢杆菌和/或高加索酸奶乳杆菌；所述益菌剂为鲤鱼皮提取物和/或桑叶提取物；
S4浓缩干燥：将上述酶解液离心分离，脱色，减压浓缩至原体积的1/10～1/5，真空冷冻干燥后得到牛骨肽酶解提取物。
4.如权利要求2或3所述的牛骨肽的酶解提取方法，其特征在于：所述压榨为10～20MPa下保压20～30min。
5.如权利要求2所述的牛骨肽的酶解提取方法，其特征在于：所述蛋白酶为木瓜蛋白酶和/或中性蛋白酶。
6.如权利要求2所述的牛骨肽的酶解提取方法，其特征在于：所述高温灭酶为在80～100℃保温10～20min。
7.如权利要求2或3所述的牛骨肽的酶解提取方法，其特征在于：所述离心分离的转速为5000～8000转/分，离心时间为10～20min。
8.如权利要求2或3所述的牛骨肽的酶解提取方法，其特征在于：所述脱色为加入待脱色液体0.4～2wt％的活性炭在50～80℃搅拌20～50min后在3000～5000转下离心5～10min。
9.如权利要求2或3所述的牛骨肽的酶解提取方法，其特征在于：所述减压浓缩的条件为绝对压强0.08MPa～0.09MPa、温度40～60℃。
10.一种牛骨肽，由如权利要求1～9任一项所述的牛骨肽的酶解提取方法制备而得。
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