CN110923285B - 牛骨肽及其制备工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种牛骨肽及其制备工艺，采用牛骨为原料，通过牛骨清洗、冷冻、蒸煮除脂、粉碎干燥、酶解、脱色、浓缩干燥的一系列步骤制备牛骨肽，本发明制备工艺脱色过程中，脱色率高，肽损失率低，制备的牛骨肽肽含量高，平均分子量主要分布在180‑1000道尔顿之间，水溶性好，易被人体吸收利用，且无不良气味，具有抗氧化、提高免疫力等保健功能。
Description
技术领域
本发明涉及营养制品领域，具体地说，涉及一种牛骨肽及其制备工艺。
背景技术
胶原蛋白是动物的皮、腱、软骨等的主要蛋白成分，占哺乳动物所有蛋白质的25-30％。胶原多肽是胶原蛋白或明胶经蛋白酶等降解处理后制得的低分子量产物，其分子量约为几千到几万道尔顿，它不仅具有很好的消化吸收特性，还具有比胶原蛋白更有效的生理功能作用。骨胶原多肽是从动物四只股中提取的活性多肽物质，具有非常重要的作用。牛骨肽是极其容易被人体吸收的小分子胶原蛋白肽。据研究人员的发现，从牛骨骼、肌腱中提取的活性肽更加具有安全绿色的属性，因此牛骨肽被冠名为绿色肽，而且营养更加丰富，非常的适合人体的使用，增加人体的活性度。经过研究证实:牛骨肽具有和人体内存在的活性机构类似，对人体也具有很多不同的生理功能，如抗病毒、抗癌、抗血栓、抗高血压、免疫、调节、激素调节、抑菌、降胆固醇等有着巨大作用。
蛋白在被蛋白酶酶解转化为氨基酸的过程中，往往伴随着大量色素物质的形成，这些色素物质往往会带来一些不良气味，因此需要被脱除。活性炭能够吸附蛋白酶解液中的色素和腥味，但是酶解液脱色也存在蛋白损失率高等问题。
发明内容
针对现有技术中存在的问题，本发明所要解决的技术问题之一提供一种牛骨肽制备工艺，包括以下步骤：
S1牛骨清洗；
S2冷冻；
S3蒸煮除脂、粉碎干燥；
S4酶解；
S5脱色；
S6浓缩干燥。
作为其中一种优选方案，牛骨肽的制备工艺，包括以下步骤：
S1牛骨清洗：取新鲜牛骨冷水浸泡、清洗除血污；
S2冷冻：清洗后牛骨于-20℃至-10℃下冷冻24-48h，然后切割成粒度为1-10cm；
S3蒸煮除脂、粉碎干燥：将冷冻切碎的牛骨于0.1-0.5kPa、100-125℃下高温蒸煮60-120min，离心除脂得牛骨，牛骨用水漂洗后低温烘干，粉碎过筛得骨粉；
S4酶解：骨粉与水按质量比1:1-1:50混合得骨粉液，调节pH为4.0-7.0，然后加入复合酶和酶解助剂，复合酶的添加量为500-700U/mL骨粉液，于30-55℃下酶解4-8h，酶解结束后高温灭酶，离心取上清液，即得酶解液；
S5脱色：向酶解液中加入脱色剂，于pH4.0-7.0、35-50℃下脱色30-80min，脱色结束后离心取上清液即得牛骨多肽液；
S6浓缩干燥：牛骨多肽液真空浓缩至含水量70-80％后，喷雾干燥得牛骨肽。
优选地，所述复合酶为中性蛋白酶、胃蛋白酶、风味蛋白酶的一种或两种。
优选地，所述酶解助剂的用量为复合酶质量的0.5％-5％。
优选地，所述酶解助剂为元宝枫叶提取物或爬山虎提取物的一种或两种。
进一步优选地，所述酶解助剂为元宝枫叶提取物和爬山虎提取物按照质量比(1-3)：(1-3)混合而成。
优选地，所述脱色剂的质量与酶解液的体积的比值为0.1％-0.5％(g/ml)。
进一步优选地，所述脱色剂为改性丝瓜络活性炭。其制备方法为：
(1)将晒干的丝瓜络去掉种子，然后粉碎至粒径为1-5mm；
(2)取蛋白胨2-5重量份、酵母粉1-2重量份、碳酸钙1-3重量份、氯化钠1-5重量份、葡萄糖0.1-1重量份，溶于1重量份水中得培养基，向培养基中接种培养基体积5％-7％的复合菌，于50-60℃下培养2-3天得复合菌液；将粉碎的丝瓜络加入复合菌液中于50-60℃下发酵2-4天，丝瓜络质量占复合菌液质量的1-5％，然后过滤得滤渣，将滤渣烘干，粉碎过10-150目筛，得改性丝瓜络粉末；
(3)将改性丝瓜络粉末与NaOH溶液混合，于常压下回流煮沸2-3h，NaOH溶液的浓度为0.5-2mol/L，过滤得滤渣，将滤渣用60-100℃水反复冲洗至中性后，于100-120℃下烘干12-14h得碱化的改性丝瓜络粉末；
(4)将碱化的改性丝瓜络粉移至马弗炉中，以10-12℃/min的升温速率升温至400-500℃，焙烧2-3h，冷却至室温即得改性丝瓜络活性炭。
进一步优选地，所述改性丝瓜络活性炭的制备方法中，复合菌由地衣芽孢杆菌、北城假单胞菌、假单胞菌中的一种或多种组成。
本发明所要解决的技术问题之二提供一种牛骨肽，采用上述牛骨肽制备工艺制备而成。
本发明制备工艺脱色过程中，脱色率高，肽损失率低，制备的牛骨肽肽含量高，平均分子量主要分布在180-1000道尔顿之间，水溶性好，易被人体吸收利用，且无不良气味，具有抗氧化、提高免疫力等保健功能。
具体实施方式
下面结合实施例和对比例对本发明做进一步说明，以下实施例仅是对本发明的较佳实施例而已，并非对本发明做其他形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用下述揭示的技术内容加以变更为同等变化的等效实施例。在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
实施例1
一种牛骨肽及其制备工艺，包括以下步骤：
S1牛骨清洗：取新鲜牛骨冷水浸泡、清洗除血污；
S2冷冻：清洗后牛骨于-15℃下冷冻24h，然后切割成粒度为5cm；
S3蒸煮除脂、粉碎干燥：将冷冻切碎的牛骨于0.3kPa、110℃下高温蒸煮80min，离心除脂得牛骨，牛骨用水漂洗后低温烘干，粉碎过筛得骨粉；
S4酶解：骨粉与水按质量比1:30混合得骨粉液，调节pH为6.0，然后加入复合酶和酶解助剂，复合酶的添加量为600U/mL骨粉液，于50℃下酶解6h，酶解结束后高温灭酶，离心取上清液，即得酶解液；所述复合酶由中性蛋白酶、胃蛋白酶按质量比1:1.5混合而成；所述酶解助剂的用量为复合酶质量的2.5％；所述酶解助剂由元宝枫叶提取物和爬山虎提取物按照质量比1:1混合而成。
元宝枫叶提取物的制备方法为：将元宝枫叶粉碎过80目筛，得元宝枫叶粉末；将元宝枫叶粉末与体积分数为70％的乙醇溶液混合，料液比为1:15(g/mL)，浸泡12h，然后在超声功率200W、超声频率40kHz、50℃的条件下超声1h，再在微波功率400W的条件下微波辐射10min，微波结束后冷却至室温，于6000r/min的转速下离心10min，去除沉淀，取上层清液在绝对压强为0.08MPa、温度为70℃下进行减压浓缩，浓缩至密度为相对密度为1.12(25℃)，即得元宝枫叶提取物。
爬山虎提取物的制备方法为：将爬山虎根皮分离后，均切碎至大小约0.5cm×0.5cm左右，然后于烘箱中在60℃下烘干至干脆；再与水和纤维素酶混合，料液比为1:15(g/mL)，纤维素酶用量为每毫升水加0.08g，于40℃下酶解2h，酶解结束后加入与水等体积的无水乙醇，静置浸取24h，然后于5000r/min的转速下离心20min，去除沉淀，取上层清液在绝对压强为0.05MPa、温度为60℃下进行减压浓缩，浓缩至密度为相对密度为1.09(25℃)，即得爬山虎提取物。
S5脱色：向酶解液中加入脱色剂，于pH5.0、40℃下脱色60min，脱色结束后离心取上清液即得牛骨多肽液；所述脱色剂的质量与酶解液的体积的比值为0.3％(g/ml)；所述脱色剂为改性丝瓜络活性炭。其制备方法为：
(1)将晒干的丝瓜络去掉种子，然后粉碎至粒径为3mm；
(2)取蛋白胨3重量份、酵母粉1重量份、碳酸钙2重量份、氯化钠1重量份、葡萄糖0.5重量份，溶于1重量份水中得培养基，向培养基中接种培养基体积6％的复合菌，于55℃下培养2天得复合菌液；将粉碎的丝瓜络加入复合菌液中于55℃下发酵3天，丝瓜络质量占复合菌液质量的3％，然后过滤得滤渣，将滤渣烘干，粉碎过100目筛，得改性丝瓜络粉末；所述复合菌由地衣芽孢杆菌、北城假单胞菌、假单胞菌按照质量比1:1:1混合而成；
(3)将改性丝瓜络粉末与NaOH溶液混合，于常压下回流煮沸3h，NaOH溶液的浓度为1mol/L，过滤得滤渣，将滤渣用80℃水反复冲洗至中性后，于110℃下烘干12h得碱化的改性丝瓜络粉末；
(4)将碱化的改性丝瓜络粉移至马弗炉中，以11℃/min的升温速率升温至450℃，焙烧2.5h，冷却至室温即得改性丝瓜络活性炭。
S6浓缩干燥：牛骨多肽液真空浓缩至含水量70％后，喷雾干燥得牛骨肽。
实施例2
一种牛骨肽及其制备工艺，包括以下步骤：
S1牛骨清洗：取新鲜牛骨冷水浸泡、清洗除血污；
S2冷冻：清洗后牛骨于-15℃下冷冻24h，然后切割成粒度为5cm；
S3蒸煮除脂、粉碎干燥：将冷冻切碎的牛骨于0.3kPa、110℃下高温蒸煮80min，离心除脂得牛骨，牛骨用水漂洗后低温烘干，粉碎过筛得骨粉；
S4酶解：骨粉与水按质量比1:30混合得骨粉液，调节pH为6.0，然后加入复合酶和酶解助剂，复合酶的添加量为600U/mL骨粉液，于50℃下酶解6h，酶解结束后高温灭酶，离心取上清液，即得酶解液；所述复合酶由中性蛋白酶、胃蛋白酶按质量比1:1.5混合而成；所述酶解助剂的用量为复合酶质量的2.5％；所述酶解助剂为元宝枫叶提取物。
元宝枫叶提取物的制备方法为：将元宝枫叶粉碎过80目筛，得元宝枫叶粉末；将元宝枫叶粉末与体积分数为70％的乙醇溶液混合，料液比为1:15(g/mL)，浸泡12h，然后在超声功率200W、超声频率40kHz、50℃的条件下超声1h，再在微波功率400W的条件下微波辐射10min，微波结束后冷却至室温，于6000r/min的转速下离心10min，去除沉淀，取上层清液在绝对压强为0.08MPa、温度为70℃下进行减压浓缩，浓缩至密度为相对密度为1.12(25℃)，即得元宝枫叶提取物。
S5脱色：向酶解液中加入脱色剂，于pH5.0、40℃下脱色60min，脱色结束后离心取上清液即得牛骨多肽液；所述脱色剂的质量与酶解液的体积的比值为0.3％(g/ml)；所述脱色剂为改性丝瓜络活性炭。其制备方法为：
(1)将晒干的丝瓜络去掉种子，然后粉碎至粒径为3mm；
(2)取蛋白胨3重量份、酵母粉1重量份、碳酸钙2重量份、氯化钠1重量份、葡萄糖0.5重量份，溶于1重量份水中得培养基，向培养基中接种培养基体积6％的复合菌，于55℃下培养2天得复合菌液；将粉碎的丝瓜络加入复合菌液中于55℃下发酵3天，丝瓜络质量占复合菌液质量的3％，然后过滤得滤渣，将滤渣烘干，粉碎过100目筛，得改性丝瓜络粉末；所述复合菌由地衣芽孢杆菌、北城假单胞菌、假单胞菌按照质量比1:1:1混合而成；
(3)将改性丝瓜络粉末与NaOH溶液混合，于常压下回流煮沸3h，NaOH溶液的浓度为1mol/L，过滤得滤渣，将滤渣用80℃水反复冲洗至中性后，于110℃下烘干12h得碱化的改性丝瓜络粉末；
(4)将碱化的改性丝瓜络粉移至马弗炉中，以11℃/min的升温速率升温至450℃，焙烧2.5h，冷却至室温即得改性丝瓜络活性炭。
S6浓缩干燥：牛骨多肽液真空浓缩至含水量70％后，喷雾干燥得牛骨肽。
实施例3
一种牛骨肽及其制备工艺，包括以下步骤：
S1牛骨清洗：取新鲜牛骨冷水浸泡、清洗除血污；
S2冷冻：清洗后牛骨于-15℃下冷冻24h，然后切割成粒度为5cm；
S3蒸煮除脂、粉碎干燥：将冷冻切碎的牛骨于0.3kPa、110℃下高温蒸煮80min，离心除脂得牛骨，牛骨用水漂洗后低温烘干，粉碎过筛得骨粉；
S4酶解：骨粉与水按质量比1:30混合得骨粉液，调节pH为6.0，然后加入复合酶和酶解助剂，复合酶的添加量为600U/mL骨粉液，于50℃下酶解6h，酶解结束后高温灭酶，离心取上清液，即得酶解液；所述复合酶由中性蛋白酶、胃蛋白酶按质量比1:1.5混合而成；所述酶解助剂的用量为复合酶质量的2.5％；所述酶解助剂为爬山虎提取物。
爬山虎提取物的制备方法为：将爬山虎根皮分离后，均切碎至大小约0.5cm×0.5cm左右，然后于烘箱中在60℃下烘干至干脆；再与水和纤维素酶混合，料液比为1:15(g/mL)，纤维素酶用量为每毫升水加0.08g，于40℃下酶解2h，酶解结束后加入与水等体积的无水乙醇，静置浸取24h，然后于5000r/min的转速下离心20min，去除沉淀，取上层清液在绝对压强为0.05MPa、温度为60℃下进行减压浓缩，浓缩至密度为相对密度为1.09(25℃)，即得爬山虎提取物。
S5脱色：向酶解液中加入脱色剂，于pH5.0、40℃下脱色60min，脱色结束后离心取上清液即得牛骨多肽液；所述脱色剂的质量与酶解液的体积的比值为0.3％(g/ml)；所述脱色剂为改性丝瓜络活性炭。其制备方法为：
(1)将晒干的丝瓜络去掉种子，然后粉碎至粒径为3mm；
(2)取蛋白胨3重量份、酵母粉1重量份、碳酸钙2重量份、氯化钠1重量份、葡萄糖0.5重量份，溶于1重量份水中得培养基，向培养基中接种培养基体积6％的复合菌，于55℃下培养2天得复合菌液；将粉碎的丝瓜络加入复合菌液中于55℃下发酵3天，丝瓜络质量占复合菌液质量的3％，然后过滤得滤渣，将滤渣烘干，粉碎过100目筛，得改性丝瓜络粉末；所述复合菌由地衣芽孢杆菌、北城假单胞菌、假单胞菌按照质量比1:1:1混合而成；
(3)将改性丝瓜络粉末与NaOH溶液混合，于常压下回流煮沸3h，NaOH溶液的浓度为1mol/L，过滤得滤渣，将滤渣用80℃水反复冲洗至中性后，于110℃下烘干12h得碱化的改性丝瓜络粉末；
(4)将碱化的改性丝瓜络粉移至马弗炉中，以11℃/min的升温速率升温至450℃，焙烧2.5h，冷却至室温即得改性丝瓜络活性炭。
S6浓缩干燥：牛骨多肽液真空浓缩至含水量70％后，喷雾干燥得牛骨肽。
实施例4
一种牛骨肽及其制备工艺，包括以下步骤：
S1牛骨清洗：取新鲜牛骨冷水浸泡、清洗除血污；
S2冷冻：清洗后牛骨于-15℃下冷冻24h，然后切割成粒度为5cm；
S3蒸煮除脂、粉碎干燥：将冷冻切碎的牛骨于0.3kPa、110℃下高温蒸煮80min，离心除脂得牛骨，牛骨用水漂洗后低温烘干，粉碎过筛得骨粉；
S4酶解：骨粉与水按质量比1:30混合得骨粉液，调节pH为6.0，然后加入复合酶和酶解助剂，复合酶的添加量为600U/mL骨粉液，于50℃下酶解6h，酶解结束后高温灭酶，离心取上清液，即得酶解液；所述复合酶由中性蛋白酶、胃蛋白酶按质量比1:1.5混合而成；所述酶解助剂的用量为复合酶质量的2.5％；所述酶解助剂由元宝枫叶提取物和爬山虎提取物按照质量比1:1混合而成。
元宝枫叶提取物的制备方法为：将元宝枫叶粉碎过80目筛，得元宝枫叶粉末；将元宝枫叶粉末与体积分数为70％的乙醇溶液混合，料液比为1:15(g/mL)，浸泡12h，然后在超声功率200W、超声频率40kHz、50℃的条件下超声1h，再在微波功率400W的条件下微波辐射10min，微波结束后冷却至室温，于6000r/min的转速下离心10min，去除沉淀，取上层清液在绝对压强为0.08MPa、温度为70℃下进行减压浓缩，浓缩至密度为相对密度为1.12(25℃)，即得元宝枫叶提取物。
爬山虎提取物的制备方法为：将爬山虎根皮分离后，均切碎至大小约0.5cm×0.5cm左右，然后于烘箱中在60℃下烘干至干脆；再与水和纤维素酶混合，料液比为1:15(g/mL)，纤维素酶用量为每毫升水加0.08g，于40℃下酶解2h，酶解结束后加入与水等体积的无水乙醇，静置浸取24h，然后于5000r/min的转速下离心20min，去除沉淀，取上层清液在绝对压强为0.05MPa、温度为60℃下进行减压浓缩，浓缩至密度为相对密度为1.09(25℃)，即得爬山虎提取物。
S5脱色：向酶解液中加入脱色剂，于pH5.0、40℃下脱色60min，脱色结束后离心取上清液即得牛骨多肽液；所述脱色剂的质量与酶解液的体积的比值为0.3％(g/ml)；所述脱色剂为改性丝瓜络活性炭。其制备方法为：
(1)将晒干的丝瓜络去掉种子，然后粉碎过100目筛，得丝瓜络粉末；
(2)将丝瓜络粉末与NaOH溶液混合，于常压下回流煮沸3h，NaOH溶液的浓度为1mol/L，过滤得滤渣，将滤渣用80℃水反复冲洗至中性后，于110℃下烘干12h得碱化的丝瓜络粉末；
(4)将碱化的丝瓜络粉移至马弗炉中，以11℃/min的升温速率升温至450℃，焙烧2.5h，冷却至室温即得改性丝瓜络活性炭。
S6浓缩干燥：牛骨多肽液真空浓缩至含水量70％后，喷雾干燥得牛骨肽。
实施例5
一种牛骨肽及其制备工艺，包括以下步骤：
S1牛骨清洗：取新鲜牛骨冷水浸泡、清洗除血污；
S2冷冻：清洗后牛骨于-15℃下冷冻24h，然后切割成粒度为5cm；
S3蒸煮除脂、粉碎干燥：将冷冻切碎的牛骨于0.3kPa、110℃下高温蒸煮80min，离心除脂得牛骨，牛骨用水漂洗后低温烘干，粉碎过筛得骨粉；
S4酶解：骨粉与水按质量比1:30混合得骨粉液，调节pH为6.0，然后加入复合酶和酶解助剂，复合酶的添加量为600U/mL骨粉液，于50℃下酶解6h，酶解结束后高温灭酶，离心取上清液，即得酶解液；所述复合酶由中性蛋白酶、胃蛋白酶按质量比1:1.5混合而成；所述酶解助剂的用量为复合酶质量的2.5％；所述酶解助剂由元宝枫叶提取物和爬山虎提取物按照质量比1:1混合而成。
元宝枫叶提取物的制备方法为：将元宝枫叶粉碎过80目筛，得元宝枫叶粉末；将元宝枫叶粉末与体积分数为70％的乙醇溶液混合，料液比为1:15(g/mL)，浸泡12h，然后在超声功率200W、超声频率40kHz、50℃的条件下超声1h，再在微波功率400W的条件下微波辐射10min，微波结束后冷却至室温，于6000r/min的转速下离心10min，去除沉淀，取上层清液在绝对压强为0.08MPa、温度为70℃下进行减压浓缩，浓缩至密度为相对密度为1.12(25℃)，即得元宝枫叶提取物。
爬山虎提取物的制备方法为：将爬山虎根皮分离后，均切碎至大小约0.5cm×0.5cm左右，然后于烘箱中在60℃下烘干至干脆；再与水和纤维素酶混合，料液比为1:15(g/mL)，纤维素酶用量为每毫升水加0.08g，于40℃下酶解2h，酶解结束后加入与水等体积的无水乙醇，静置浸取24h，然后于5000r/min的转速下离心20min，去除沉淀，取上层清液在绝对压强为0.05MPa、温度为60℃下进行减压浓缩，浓缩至密度为相对密度为1.09(25℃)，即得爬山虎提取物。
S5脱色：向酶解液中加入脱色剂，于pH5.0、40℃下脱色60min，脱色结束后离心取上清液即得牛骨多肽液；所述脱色剂的质量与酶解液的体积的比值为0.3％(g/ml)；所述脱色剂为丝瓜络粉末，其制备方法为：将晒干的丝瓜络去掉种子，然后粉碎过100目筛，得丝瓜络粉末；
S6浓缩干燥：牛骨多肽液真空浓缩至含水量70％后，喷雾干燥得牛骨肽。
测试例1
分子量测试：采用GB/T 22729-2008对本发明实施例1制得的牛骨肽的分子量进行测试，具体结果如表1：
表1牛骨肽的分子量分布表
由表1可知，本发明实施例1所制备的牛骨肽平均分子量主要分布在180-1000道尔顿之间，该分子量区间的小分子牛骨肽水溶性好，易被人体吸收利用。
测试例2
参考文献《刘文颖,徐亚光,任玮,金振涛,易维学,蔡木易.三文鱼皮胶原肽体外抗氧化活性研究[J].食品科技,2010,35(12):86-89.》对实施例1-3制备的的牛骨肽进行DPPH自由基清除能力测试：以无水乙醇为溶剂分别将实施例1-3制备的牛骨肽配制为浓度为10mg/mL的牛骨肽样品溶液；准确称取20mg DPPH，用体积分数95％乙醇溶解，并定溶于250mL容量瓶中，配制成0.2mmol/L的DPPH溶液。在具塞试管中分别加入1.5mL各组别的待测牛骨肽样品溶液及1.5mL0.2mmol/L的DPPH溶液，摇匀，避光反应30min，然后以体积分数95％乙醇做参比，在517nm下测定其吸光度Ai，同时测定1.5mL 0.2mmol/L的DPPH溶液与1.5mL体积分数95％乙醇混合液的吸光度Ac，以及1.5mL待测牛骨肽样品溶液与1.5mL体积分数95％乙醇混合液的吸光度Aj。
清除率(RSA％)＝[1-(Ai-Aj)/Ac]×100。
每组别测试重复三次，取平均值为最终结果，测试结果如表2：
表2 DPPH自由基清除率
| 组别 | DPPH自由基清除率(RSA％) |
| 实施例1 | 68.7 |
| 实施例2 | 51.2 |
| 实施例3 | 55.4 |
测试例3
参考文献《张毅,华欲飞,孔祥珍,张彩猛.活性炭对大豆多肽脱色效果的研究[J].粮食与饲料工业,2010(08):31-33.》以及GB/T 5009.5-2010方法，对实施例1、实施例4、实施例5中不同脱色剂的脱色效果进行测试：测定酶解液在360nm处的吸光度值为A1，测定脱色后得到的牛骨多肽液在360nm处的吸光度为A2，测定酶解液每毫升蛋白质含量为W1，测定脱色后得到的牛骨多肽液每毫升蛋白质含量为W2：
脱色率＝(1-A2/A1)×100％
肽损失率＝(1-W2/W1)×100％
具体测试结果如下表3：
表3脱色效果测试
| 组别 | 脱色率(％) | 肽损失率(％) |
| 实施例1 | 97.51 | 6.54 |
| 实施例4 | 82.12 | 13.11 |
| 实施例5 | 65.70 | 19.89 |
测试例4
参考GB 5009.5-2010对本发明实施例1-5制得的牛骨肽，进行肽含量、酸溶蛋白含量、总氮含量和干燥失重进行检测，具体结果如下表4：表4牛骨肽中各参数检测结果
Claims (1)
1.一种牛骨肽的制备工艺，其特征在于，包括以下步骤：
S1牛骨清洗：取新鲜牛骨冷水浸泡、清洗除血污；
S2冷冻：清洗后牛骨于-20℃至-10℃下冷冻24-48h，然后切割成粒度为1-10cm；
S3蒸煮除脂、粉碎干燥：将冷冻切碎的牛骨于0.1-0.5kPa、100-125℃下高温蒸煮60-120min，离心除脂得牛骨，牛骨用水漂洗后低温烘干，粉碎过筛得骨粉；
S4酶解：骨粉与水按质量比1:1-1:50混合得骨粉液，调节pH为4.0-7.0，然后加入复合酶和酶解助剂，复合酶的添加量为500-700U/mL骨粉液，于30-55℃下酶解4-8h，酶解结束后高温灭酶，离心取上清液，即得酶解液；
所述复合酶由中性蛋白酶、胃蛋白酶按质量比1:1.5混合而成；
S5脱色：向酶解液中加入脱色剂，于pH4.0-7.0、35-50℃下脱色30-80min，脱色结束后离心取上清液即得牛骨多肽液；
S6浓缩干燥：牛骨多肽液真空浓缩至含水量70-80％后，喷雾干燥得牛骨肽；
所述脱色剂为改性丝瓜络活性炭；所述改性丝瓜络活性炭的制备方法为：
(1)将晒干的丝瓜络去掉种子，然后粉碎至粒径为1-5mm；
(2)取蛋白胨2-5重量份、酵母粉1-2重量份、碳酸钙1-3重量份、氯化钠1-5重量份、葡萄糖0.1-1重量份，溶于1000重量份水中得培养基，向培养基中接种培养基体积5％-7％的复合菌，于50-60℃下培养2-3天得复合菌液；将粉碎的丝瓜络加入复合菌液中于50-60℃下发酵2-4天，丝瓜络质量占复合菌液质量的1-5％，然后过滤得滤渣，将滤渣烘干，粉碎过10-150目筛，得改性丝瓜络粉末；
所述复合菌由地衣芽孢杆菌、北城假单胞菌、假单胞菌按照质量比1:1:1混合而成；
(3)将改性丝瓜络粉末与NaOH溶液混合，于常压下回流煮沸2-3h，NaOH溶液的浓度为0.5-2mol/L，过滤得滤渣，将滤渣用60-100℃水反复冲洗至中性后，于100-120℃下烘干12-14h得碱化的改性丝瓜络粉末；
(4)将碱化的改性丝瓜络粉移至马弗炉中，以10-12℃/min的升温速率升温至400-500℃，焙烧2-3h，冷却至室温即得改性丝瓜络活性炭。
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