CN101473886A - 用动物骨骼制备骨胶原多肽的方法 - Google Patents

用动物骨骼制备骨胶原多肽的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种用动物骨骼制备骨胶原多肽的方法，包括以下步骤：取动物骨骼洗净，初碎后用沸水蒸煮，去除蒸煮液表层油脂后将骨块沥干并干燥；再将骨块进行粗粉碎、超微粉碎制成骨粉，加水将骨粉配制成骨泥液，高温灭菌后冷却并添加Protamex复合蛋白酶进行酶解，灭酶；过滤后取过滤液真空浓缩并冷冻干燥，得到骨胶原多肽。本发明的工艺简单，原材料来源广泛且价格低廉，制备过程中反应条件易于控制，大大提高了动物骨骼的附加利用价值。

Description

用动物骨骼制备骨胶原多肽的方法
技术领域
本发明涉及一种多肽的制备方法，尤其涉及一种骨胶原多肽的制备方法。
背景技术
近年来的科学研究认为，人体吸收蛋白质主要是以肽的形式吸收，而肽是由氨基酸组成的分子，有多肽、寡肽、微肽、小肽等多种分类。多肽存在于生物体内，所有的细胞都能合成多肽，但又都受多肽调节，多肽具有极强的活性和多样性，能用肽营养的生理功能和生物活性，调节人体内各系统和细胞的生理功能，激活体内有关酶素。因此，多肽成为人体健康的重要物质。
目前，以生物酶催化、合成生物活性肽的技术已在广泛开展，其基本方法是将动物鲜骨在高温、高压下进行蒸煮，用碱或酸调节pH值后，加入蛋白酶将蛋白质酶解，酶解后可得到小分子的胶原多肽。然而，现有工艺中尚未有文献记载利用Protamex复合蛋白酶酶解动物骨骼制备骨胶原多肽的制备方法。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种工艺简单、原料来源广泛、成本低廉、产品性能优越的用动物骨骼制备骨胶原多肽的方法。
为解决上述技术问题，本发明提出的技术方案为一种用动物骨骼(优选鲜猪骨)制备骨胶原多肽的方法，包括以下步骤：取动物骨骼洗净，初碎后用沸水蒸煮，去除蒸煮液表层油脂后将骨块沥干并干燥；再将骨块进行粗粉碎、超微粉碎制成骨粉，加水将骨粉配制成骨泥液，高温灭菌后冷却并添加Protamex复合蛋白酶进行酶解，灭酶；过滤后取过滤液真空浓缩并冷冻干燥，得到骨胶原多肽。
上述技术方案中，沸水蒸煮时骨块与水的质量比为1∶1～1∶2，蒸煮时的温度控制在110～120℃，蒸煮时的压强控制在143～198kPa。沸水蒸煮的时间一般控制在30～60min。
上述技术方案中，对骨块进行干燥时的温度控制在80～85℃，且干燥至含水量小于5％。
上述技术方案中，在对骨块进行粗碎、超微粉碎时，所述骨块粉碎成骨粉的粒度小于160目。
上述技术方案中，所述骨泥液中骨粉的质量浓度为10～15％。
上述技术方案中，所述高温灭菌过程是指在85℃温度下灭菌15min，高温灭菌后的冷却是指自然冷却至50℃以下。
上述技术方案中，所述Protamex复合蛋白酶的添加量为酶解底物骨粉质量的2～2.5‰。Protamex复合蛋白酶酶解时的pH值为7.5，温度控制在55℃，酶解时间为10～15h。
与现有技术相比，本发明的优点在于：本发明的工艺简单，原材料来源广泛且价格低廉，制备过程中反应条件易于控制，制备出的骨胶原多肽作为一种营养物质对血管紧张素转换酶(ACE)具有抑制作用，具有降血压的功能，同时具有抗氧化活性和促进益生菌增殖等功效，能够大大提高肉类副产物——骨的附加值。
具体实施方式
实施例1：
取鲜猪骨洗净后初步破碎，将破碎后的骨块放入蒸煮容器中，往容器中添加与骨块等质量的水，在110℃温度、143kPa压强下蒸煮50min，然后去除上层油脂，沥干，斩碎得到3～4cm的骨块，85℃温度下干燥7h，干燥后将骨块经粉碎机粗粉碎，再经超微粉碎机进行超微粉碎，将超微粉碎后的骨粉过160目筛；将过筛后的骨粉加水配制成10％质量浓度的骨泥液装入容器内，在85℃水浴中灭菌15min，再冷却至40℃以下，调节pH值至7.5，然后加入酶解底物骨粉质量2‰的Protamex复合蛋白酶(丹麦诺维信公司生产，标注活力为1.5AU/g(安森单位/克))，在温度为55℃、pH值7.5的条件下酶解10h，然后在85℃水浴中灭酶15min，过滤收集酶解液。使用旋转蒸发浓缩仪将收集的酶解液浓缩至原体积的1/4，然后将浓缩液置于-30℃冰箱中冻结，再经冷冻干燥24h，收集多肽粉保存于-24℃冰箱中。
按以上工艺制得的骨胶原多肽粉，经取样、分析测试(依据多肽含量检测分析通则)后，该骨胶原多肽粉中的骨胶原多肽含量为720mg/g。
实施例2：
取鲜猪骨洗净后初步破碎，将破碎后的骨块放入蒸煮容器中，往容器中添加与骨块等质量的水，在115℃温度、169kPa压强下蒸煮40min，然后去除上层油脂，沥干，斩碎得到3～4cm的骨块，85℃温度下干燥7h，干燥后将骨块经粉碎机粗粉碎，再经超微粉碎机进行超微粉碎，将超微粉碎后的骨粉过160目筛；将过筛后的骨粉配制成12％质量浓度的骨泥液装入一容器内，在85℃水浴中处理15min杀菌，冷却至40℃以下，调节至pH值至7.5，然后加入酶解底物骨粉质量2.2‰的Protamex复合蛋白酶，在温度为55℃、pH值为7.5的条件下酶解12h，酶解完成后在85℃水浴中灭酶15min，过滤收集酶解液。使用旋转蒸发浓缩仪将收集的酶解液浓缩至原体积的1/4左右，然后将浓缩液置于-30℃冰箱中冻结，再经冷冻干燥24h，收集多肽粉保存于-24℃冰箱中。
按以上工艺制得的骨胶原多肽粉，经取样、分析测试(依据多肽含量检测分析通则)后，该骨胶原多肽粉中的骨胶原多肽含量为760mg/g。
实施例3：
取鲜猪骨洗净后初步破碎，将破碎后的骨块放入蒸煮容器中，往容器中添加与骨块等质量的水，在120℃温度、198kPa压强下蒸煮30min，然后去除上层油脂，沥干，斩碎得到3～4cm的骨块，85℃温度下干燥7h，干燥后将骨块经粉碎机粗粉碎，再经超微粉碎机进行超微粉碎，将超微粉碎后的骨粉过160目筛；将过筛后的骨粉配制成15％质量浓度的骨泥液装入一容器内，在85℃水浴中灭菌15min，冷却至50℃以下，调节至pH值为7.5，然后加入酶解底物骨粉质量2.4‰的Protamex复合蛋白酶，在温度为55℃、pH值为7.5的条件下酶解14h，酶解完成后通过85℃水浴15min将酶灭活，过滤收集酶解液。使用旋转蒸发浓缩仪将收集的多肽酶解液浓缩至原体积的1/4，然后将浓缩液置于-30℃冰箱中冻结，再经冷冻干燥24h，收集多肽粉保存于-24℃冰箱。
按以上工艺制得的骨胶原多肽粉，经取样、分析测试(依据多肽含量检测分析通则)后，该骨胶原多肽粉中的骨胶原多肽含量为810mg/g。
以上产品依据GB/T5009.11、GB/T5009.12、GB/T5009.17、GB4789.2-15中规定的方法进行食品卫生检验，结果显示：无机砷(以AS计，mg/kg)0.22，铅(以Pb计，mg/kg)0.39，汞(以Hg计，mg/kg)≤0.3，菌落总数(cfu/g)1.2×103，大肠菌群(MPN/100g)≤40，霉菌(cfu/g)≤10，酵母(cfu/g)≤10，致病菌未检出。符合GB16740-1997保健(功能)食品通用标准。

Claims (10)

1、一种用动物骨骼制备骨胶原多肽的方法，包括以下步骤：取动物骨骼洗净，初碎后用沸水蒸煮，去除蒸煮液表层油脂后将骨块沥干并干燥；再将骨块进行粗粉碎、超微粉碎制成骨粉，加水将骨粉配制成骨泥液，高温灭菌后冷却并添加Protamex复合蛋白酶进行酶解，灭酶；过滤后取过滤液真空浓缩并冷冻干燥，得到骨胶原多肽。
2、根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述动物骨骼为鲜猪骨。
3、根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述沸水蒸煮时的温度控制在110～120℃，沸水蒸煮时的压强控制在143～198kPa。
4、根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述沸水蒸煮时，骨块与水的质量比为1:1～1:2。
5、根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述沸水蒸煮的时间控制在30～60min。
6、根据权利要求1所述的方法，其特征在于：对骨块进行干燥时的温度控制在80～85℃，且干燥至含水量小于5％。
7、根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述骨泥液中骨粉的质量浓度为10～15％。
8、根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述高温灭菌过程是指在85℃温度下灭菌15min，高温灭菌后的冷却是指自然冷却至50℃以下。
9、根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述Protamex复合蛋白酶的添加量为酶解底物骨粉质量的2～2.5‰。
10、根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述Protamex复合蛋白酶酶解时的pH值为7.5，温度控制在55℃，酶解时间为10～15h。
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